野百合碱诱导大鼠肺动脉高压时对肺血管壁Jagged2/Notch3信号分子表达的影响 被引量：11

1

作者 常成 靳鹏 +4 位作者 郑薇 康华利 邓梦杨 李双菲 武晓静 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期12-17,共6页

目的:观察野百合碱诱导大鼠肺动脉高压时肺血管壁Jagged2/Notch3信号分子表达的变化,探讨Jagged2/Notch3信号在肺动脉高压发生中的作用和意义。方法:45只SD大鼠随机分为正常对照组(C组)、溶剂对照组(S组)和野百合碱模型组(M组),每组15只... 目的:观察野百合碱诱导大鼠肺动脉高压时肺血管壁Jagged2/Notch3信号分子表达的变化,探讨Jagged2/Notch3信号在肺动脉高压发生中的作用和意义。方法:45只SD大鼠随机分为正常对照组(C组)、溶剂对照组(S组)和野百合碱模型组(M组),每组15只,通过一次性腹腔注射野百合碱50 mg/kg建立肺动脉高压模型,溶剂对照组注射相同剂量的溶媒。4周时通过HE染色观察肺血管重构,通过右心导管测定平均肺动脉压(m PAP)和右心室收缩压(RVSP)。采用免疫组化和实时荧光定量PCR等方法检测肺血管壁Jagged2/Notch3/Hes5蛋白和mRNA表达的变化。结果:与正常对照和溶剂对照组相比,4周时野百合碱模型组的血管壁显著增厚,中膜厚度百分比增加(P<0.01);此外野百合碱模型组的m PAP和RVSP显著高于正常对照和溶剂对照组(P<0.01);免疫组化和实时荧光定量PCR结果提示Jagged2主要表达于肺小动脉内膜,Notch3、Hes5主要表达于肺小动脉中层平滑肌,与溶剂对照组以及正常对照组相比,野百合碱模型组肺小动脉的Jagged2、Notch3和Hes5表达显著增高。结论:Jagged2/Notch3信号分子的激活可能在野百合碱诱导肺动脉高压发生中起重要作用。 展开更多

关键词 肺动脉高压 肺血管重构 野百合碱 Jagged2/Notch3信号分子

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双层共培养模型中缝隙连接在内皮细胞调节平滑肌细胞增殖能力中的作用 被引量：7

2

作者 宋明宝 于学军 +5 位作者 朱光旭 赵刚 于世勇 董红梅 康华利 黄岚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期285-289,共5页

目的探讨在双层共培养体系中缝隙连接在血管内皮细胞(endothelial cell,EC)调节血管平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)增殖能力中的作用。方法采用植块法分别培养大鼠主动脉内皮及平滑肌细胞,并将2种细胞分别接种至Transwell insert... 目的探讨在双层共培养体系中缝隙连接在血管内皮细胞(endothelial cell,EC)调节血管平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)增殖能力中的作用。方法采用植块法分别培养大鼠主动脉内皮及平滑肌细胞,并将2种细胞分别接种至Transwell insert膜的两侧以建立内皮细胞与平滑肌细胞双层共培养模型,并用透射电镜观察2种细胞在Tran-swell insert膜两侧生长情况。用3H-TdR掺入法观察双层共培养模型中平滑肌细胞增殖情况,并观察缝隙连接阻断剂18α-甘草次酸(18α-GA)对平滑肌细胞增殖能力的影响。结果在共培养第1天,EC/SMC组与SMC/SMC组的平滑肌细胞3H-TdR掺入率无统计学差异[(10900±1320)cpm/wellvs(10430±1200)cpm/well,P>0.05]。第2天,EC/SMC组中平滑肌细胞3H-TdR的掺入率有低于SMC/SMC组[(17200±1734)cpm/wellvs(20900±1659)cpm/well]的趋势,但两者差异未达到统计学标准。共培养第3天时,EC/SMC组平滑肌细胞3H-TdR掺入率显著低于SMC/SMC组,两者相比有显著性差异[(25800±1984)cpm/wellvs(33070±3569)cpm/well,P<0.05]。在用18α-GA预处理24h后,EC/SMC共培养3d后平滑肌细胞3H-TdR的掺入率明显高于同期未处理EC/SMC组,两者相比有显著性差异[(30500±2650)cpm/wellvs(25800±1984)cpm/well,P<0.05]。结论双层共培养模型中内皮细胞通过缝隙连接可抑制血管平滑肌细胞的增殖能力。 展开更多

关键词 内皮细胞 平滑肌细胞 缝隙连接 共培养 血管

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随机贴块法培养大鼠主动脉内皮细胞及其鉴定 被引量：4

3

作者 宋明宝 黄岚 +5 位作者 于学军 朱光旭 张坡 于世勇 赵刚 康华利 《重庆医学》 CAS CSCD 2007年第21期2177-2178,F0004,共3页

目的寻找一种培养及鉴定大鼠主动脉内皮细胞的简便方法。方法采用随机贴块法培养大鼠主动脉内皮细胞并用差速消化法加以纯化,观察细胞形态学特性,用抗vwF抗体免疫荧光染色及内皮细胞体外成管试验鉴定。结果培养3d即有细胞生长,1周可融... 目的寻找一种培养及鉴定大鼠主动脉内皮细胞的简便方法。方法采用随机贴块法培养大鼠主动脉内皮细胞并用差速消化法加以纯化,观察细胞形态学特性,用抗vwF抗体免疫荧光染色及内皮细胞体外成管试验鉴定。结果培养3d即有细胞生长,1周可融合成层。抗vwF抗体免疫荧光染色及内皮细胞体外成管试验阳性。结论本方法简便易行,适于推广应用。 展开更多

关键词 大鼠 细胞培养 内皮细胞

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内皮缝隙连接在介导细胞间交联和损伤血管内皮修复中的作用 被引量：4

4

作者 宋明宝 黄岚 +3 位作者 于学军 朱光旭 张坡 康华利 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2007年第10期725-728,共4页

目的探讨内皮缝隙连接在介导细胞间通讯及在损伤血管内皮修复中的作用。方法采用植块法培养大鼠主动脉内皮细胞,细胞免疫荧光染色法检测大鼠主动脉内皮细胞缝隙连接蛋白37、40及47的表达,荧光漂白后恢复技术检测缝隙连接介导的细胞间通... 目的探讨内皮缝隙连接在介导细胞间通讯及在损伤血管内皮修复中的作用。方法采用植块法培养大鼠主动脉内皮细胞,细胞免疫荧光染色法检测大鼠主动脉内皮细胞缝隙连接蛋白37、40及47的表达,荧光漂白后恢复技术检测缝隙连接介导的细胞间通讯。机械划痕建立内皮损伤模型,每24h摄像一次以定量分析内皮损伤修复速度,并观察缝隙连接特异性阻断剂18α-甘草次酸对内皮损伤后修复的影响。结果缝隙连接蛋白37、40及47在内皮细胞中均有表达。荧光物质能够通过缝隙连接在相邻细胞间进行传递,孤立细胞荧光恢复率显著低于相邻细胞(5.70%±0.63%比82.26%±1.68%,P<0.01);而18α-甘草次酸能够抑制缝隙连接介导的细胞间通讯,18α-甘草次酸干预组荧光恢复率显著低于对照组(53.58%±1.73%比82.26%±1.68%,P<0.05)。内皮划痕宽度在对照组与18α-甘草次酸干预组之间无显著性差异(396.57±25.32μm比370.12±19.40μm,P>0.05),内皮损伤24h后,18α-甘草次酸干预组划痕宽度显著大于对照组(237.38±20.40μm比126.29±21.40μm,P<0.05)。18α-甘草次酸干预组内皮损伤完全愈合时间显著多于对照组(4.2±0.2天比2.6±0.3天,P<0.05)。结论内皮细胞间存在缝隙连接介导的细胞间通讯,而18α-甘草次酸能抑制这种细胞间通讯并减慢内皮损伤修复速度及延长其愈合时间,提示内皮细胞缝隙连接在内皮损伤后修复过程中起重要作用。 展开更多

关键词 内科学 内皮缝隙连接 内皮细胞 18α-甘草次酸 荧光恢复率 内皮划痕宽度 大鼠

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BMP7过表达慢病毒载体构建及其对小鼠主动脉平滑肌细胞钙化的影响

5

作者 付仕林 易雪娇 +3 位作者 潘文旭 尹纯 康华利 钱德慧 《局解手术学杂志》 2024年第2期95-99,共5页

目的构建骨形态发生蛋白7(BMP7)过表达慢病毒载体,分析BMP7过表达对小鼠主动脉内皮细胞Jagged1表达的影响及其对共培养血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响。方法根据目的基因信息Mouse-BMP7(NM_007557.3)和质粒信息pLVX-zsGreen-C1进行基... 目的构建骨形态发生蛋白7(BMP7)过表达慢病毒载体,分析BMP7过表达对小鼠主动脉内皮细胞Jagged1表达的影响及其对共培养血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响。方法根据目的基因信息Mouse-BMP7(NM_007557.3)和质粒信息pLVX-zsGreen-C1进行基因序列合成,构建BMP7过表达慢病毒。qPCR检测BMP7过表达慢病毒感染效率;Western blot检测其感染的小鼠主动脉内皮细胞Jagged1蛋白表达。将过表达BMP7慢病毒感染的内皮细胞与VSMCs共培养,茜素红染色观察共培养后VSMCs钙化情况。结果成功构建BMP7过表达慢病毒载体并转染至小鼠主动脉内皮细胞。qPCR检测结果提示,与正常对照组比较,BMP7过表达组的BMP7 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01),空载体对照组BMP7 mRNA无显著变化(P>0.05)。Western blot结果显示,BMP7过表达组内皮细胞Jagged1蛋白表达水平较正常对照组显著降低(P<0.01),而空载体对照组内皮细胞Jagged1蛋白水平较正常对照组无显著改变(P>0.05)。茜素红染色结果提示,与感染过表达BMP7慢病毒的内皮细胞共培养后,VSMCs的钙化程度明显增加。结论成功构建小鼠BMP7过表达慢病毒载体,并发现过表达BMP7可以降低小鼠主动脉内皮细胞Jagged1表达,并促进共培养的VSMCs钙化。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白7 慢病毒载体构建 JAGGED1 血管钙化

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骨髓源性内皮祖细胞与内皮细胞共培养促进其向成熟内皮细胞分化的研究 被引量：2

6

作者 朱光旭 宋明宝 +4 位作者 潘兴华 黄岚 吕燕波 庞荣清 康华利 《心肺血管病杂志》 CAS 2013年第5期641-645,共5页

目的:探讨共培养的内皮细胞对内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化的影响。方法:分离1～2个月龄,SD大鼠股骨髓,个核细胞(MNCs),MNCs,Dil-ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染鉴定内皮细胞的特性。应用贴块法培养大鼠腹主动脉的内皮细胞,vWF免疫组化染... 目的:探讨共培养的内皮细胞对内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化的影响。方法:分离1～2个月龄,SD大鼠股骨髓,个核细胞(MNCs),MNCs,Dil-ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染鉴定内皮细胞的特性。应用贴块法培养大鼠腹主动脉的内皮细胞,vWF免疫组化染色进行鉴定。采用Transwell培养板,上、下室分别加入内皮祖细胞和内皮细胞,15%胎牛血清的NO.2 DMEM/F12培养液培养14 d,倒置相差显微镜观察培养内皮祖细胞的形态。RT-PCR检测eNOS、vWF mRNA,流式细胞术检测CD31及KDR的表达。结果:荧光双染显示培养的单个核细胞具有内皮祖细胞特性;共培养的内皮祖细胞呈短梭型、铺路石状,培养至4 w时有复杂的网状结构形成。RT-PCR检测显示,eNOS及vWF mRNA表达均较对照组显著增加(P<0.05)。流式细胞术分析表明,共培养组的内皮祖细胞CD31及KDR的表达,也显著高于对照组(分别为P<0.05及P<0.01)。结论:与内皮细胞共培养可促进内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化。 展开更多

关键词 内皮细胞 内皮祖细胞 骨髓 细胞分化

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LXRs激动剂T0901317通过PI3K/Akt增强人脐静脉内皮细胞的增殖能力 被引量：2

7

作者 王强 余洁 +4 位作者 王航 卢巍 邓梦杨 康华利 黄岚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期481-484,共4页

目的观察肝X受体(liver X receptors,LXRs)激动剂T0901317对人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cell,HUVEC)增殖活性的影响。方法体外分离和培养原代HUVEC,不同浓度的T0901317(0、0.5、2、5μmol/L)干预HUVEC 48 h后,采... 目的观察肝X受体(liver X receptors,LXRs)激动剂T0901317对人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cell,HUVEC)增殖活性的影响。方法体外分离和培养原代HUVEC,不同浓度的T0901317(0、0.5、2、5μmol/L)干预HUVEC 48 h后,采用MTS法检测HUVEC增殖情况;Western blot检测磷酸化Akt(Ser473)及总Akt的表达。结果T0901317(0～5μmol/L)呈浓度依赖性的促进HUVEC的增殖(P<0.01)和上调HUVEC中p-Akt-Ser473的表达(P<0.01),PI3K抑制剂LY294002(10μmol/L)和基因转录抑制剂放线菌素-D(actinomycin D,Act-D,5μg/ml)可以阻断T0901317(5μmol/L)上调p-Akt-Ser473的作用(P<0.01),提示T0901317通过基因转录调节的方式激活PI3K/Akt信号,此外,PI3K抑制剂LY294002(10μmol/L)预处理可以逆转T0901317(5μmol/L)促HUVEC增殖作用(P<0.01)。结论 LXRs激动剂T0901317可通过激活PI3K/Akt信号通路增强HUVEC的增殖能力。 展开更多

关键词 肝X受体 人脐静脉内皮细胞 细胞增殖 PI3K/AKT信号通路

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非小细胞肺癌生物标志物血小板及来源外泌体研究进展

8

作者 康华利 张继航 《中华肺部疾病杂志（电子版）》 2023年第5期731-733,共3页

WHO2020年全球癌症统计报告(Globolan 2020)中国肺癌发病率和病死率居恶性肿瘤第一,分别为17.9%和23.8%,高于世界平均水平(11.4%;18%)[1]。肺癌占癌症相关伤残调整生命年25.4%,成为伤残调整寿命年负担主要原因[2]。非小细胞肺癌(non-sma... WHO2020年全球癌症统计报告(Globolan 2020)中国肺癌发病率和病死率居恶性肿瘤第一,分别为17.9%和23.8%,高于世界平均水平(11.4%;18%)[1]。肺癌占癌症相关伤残调整生命年25.4%,成为伤残调整寿命年负担主要原因[2]。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是最常见肺癌类型,约占85%,多数由于早期症状隐匿确诊时为晚期,预后不佳[3-4]。组织活检对诊断和后续治疗至关重要,有时肿瘤组织不足以进行分子分析,缺乏足够肿瘤组织情况下,外周血液体是癌症生物标记物检测的另一来源[5]。 展开更多

关键词 血小板 外泌体 非小细胞肺癌 生物标志物

原文传递

肝细胞生长因子基因转染后对内皮祖细胞增殖、迁移、分泌一氧化氮及血管再生的影响 被引量：1

9

作者 宋明宝 黄岚 +4 位作者 于学军 朱光旭 张坡 康华利 邓梦阳 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2007年第6期468-472,共5页

目的:本研究拟用肝细胞生长因子(HGF)基因修饰内皮祖细胞(EPCs),以观察其对 EPCs 增殖、迁移、分泌一氧化氮(NO)及生血管能力的影响。方法:采用梯度离心法分离并培养大鼠骨髓 EPCs,荧光 DiI 标记乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)摄取和异... 目的:本研究拟用肝细胞生长因子(HGF)基因修饰内皮祖细胞(EPCs),以观察其对 EPCs 增殖、迁移、分泌一氧化氮(NO)及生血管能力的影响。方法:采用梯度离心法分离并培养大鼠骨髓 EPCs,荧光 DiI 标记乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)摄取和异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-I)结合荧光双染法鉴定大鼠 EPCs。细胞分为 HGF 转染组、阴性对照组及空白对照组,HGF 组用脂质体介导法导入 pIRES2-EGFP-HGF 质粒,阴性对照组导入 pIRES2-EGFP 质粒,空白对照组不导入质粒,然后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的合成及逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测细胞 HGF mRNA 的表达来鉴定转染的 EPCs。用四唑盐(MTF)法、改良的 Bodyen 小室及硝酸盐还原法观察细胞增殖、移行及分泌 NO 能力;体外成管试验用于分析细胞生血管的能力。结果:原代细胞培养4天后发现可成梭形贴壁细胞,7天后细胞成集落状,原代细胞培养21大左右接近融合并呈典型的鹅卵石样排列,细胞 DiI-LDL 摄取试验阳性,FITC-UEA-I 染色阳性。转染18h 后 HGF 转染组及阴性对照组细胞绿色荧光蛋白检测呈阳性,转染率为40%,而空白组则呈阴性。RT-PCR 结果显示,HGF 转染组细胞内 mRNA 的表达显著高于对照组,而空白对照及阴性对照组 HGF mRNA 表达无显著性差异。HGF 转染组细胞增殖、移行能力及分泌 NO 量均显著高于对照组。在 ECMatrix 培养基上培养12h,HGF 转染组体外成管评分显著高于对照组。结论:HGF 基因修饰能够显著提高 EPCs 增殖、移行、分泌 NO 及生血管能力,改善 EPCs 的生物学功能。 展开更多

关键词 内皮祖细胞 肝细胞生长因子 基因转染 大鼠

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自体间充质干细胞植入促进大鼠衰竭心肌生长因子表达、改善心室重构和心功能 被引量：2

10

作者 陶则伟 李隆贵 +6 位作者 耿召华 宋明宝 郑嘉荣 于世勇 党涛 康华利 祝善俊 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期495-500,共6页

目的动物实验与临床应用显示，间充质干细胞（MSCs）改善心室重构和心功能，但MSCs这种作用的机制还不清楚。方法从大鼠自体股骨骨髓抽取并培养MSCs，用灼伤大鼠心室游离壁的方法制作慢性心力衰竭（CHF）模型，心肌损伤坏死5d后分别在... 目的动物实验与临床应用显示，间充质干细胞（MSCs）改善心室重构和心功能，但MSCs这种作用的机制还不清楚。方法从大鼠自体股骨骨髓抽取并培养MSCs，用灼伤大鼠心室游离壁的方法制作慢性心力衰竭（CHF）模型，心肌损伤坏死5d后分别在坏死边缘区和远隔区植人自体MSCs。结果10周后与假手术组相比，CHF组大鼠在瘢痕边缘区心肌细胞核分裂指数、毛细血管密度及胰岛素样生长因子1（IGF-1）、肝细胞生长因子（HGF）和血管内皮生长因子A（VEGF-A）的表达显著增加（P〈0．01）；而在远隔区，以上指标显著下降（P〈0．05或P〈0．01）。与CHF组相比，自体MSCs植入（CHF＋MSCs组）显著增加了远隔区IGF-1、HGF及VEGF-A的表达，进一步增加了边缘区以上因子的表达（P〈0．05或P〈0．01），同时这两区的心肌细胞核分裂指数及毛细血管密度显著增加（P〈0．05或P〈0．01）。自体MSCs植入使CHF瘢痕边缘区胶原纤维百分比显著减少而心肌纤维百分比显著增加，心室重构和心功能显著改善。结论自体MSCs植入促进大鼠衰竭心肌生长因子表达，这种作用部分地促进了心肌和血管的再生，因此改善了心室重构和心功能。 展开更多

关键词 干细胞 心肌 心室重构

原文传递

褪黑素抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖 被引量：3

11

作者 唐杨 刘川 +1 位作者 康华利 晋军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第17期1619-1626,共8页

目的观察褪黑素(melatonin,Mel)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖功能的影响并探讨其可能的分子机制。方法①选用不同浓度(0、10、20、50、100μg/mL)的ox-LDL诱导VSMCs 48 ... 目的观察褪黑素(melatonin,Mel)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖功能的影响并探讨其可能的分子机制。方法①选用不同浓度(0、10、20、50、100μg/mL)的ox-LDL诱导VSMCs 48 h后检测细胞增殖功能,观察各浓度ox-LDL对VSMCs功能的影响。②选择最佳浓度(50μg/mL)的ox-LDL诱导VSMCs 0、6、12、24、48 h后检测细胞增殖功能,观察各时间点ox-LDL对VSMCs功能的影响。③50μg/mL的ox-LDL诱导VSMCs 24 h后,再用1、1×10^(3)、1×10^(5)、1×10^(6)nmol/L的Mel处理VSMCs 48 h,观察Mel作用不同时间对VSMCs增殖功能的影响。④使用ox-LDL联合Mel处理VSMCs。实验分4组:空白对照组(VSMCs正常培养不进行任何处理),Mel组(1×10^(5)nmol/L Mel处理VSMCs 48 h),ox-LDL组(50μg/mL ox-LDL诱导VSMCs 24 h),ox-LDL+Mel组(使用50μg/mL的ox-LDL诱导VSMCs 24 h后,接着使用1×10^(5)nmol/L的Mel处理VSMCs 48 h)。采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,免疫荧光染色和Western blot检测增殖标记物(PCNA)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞周期素A(Cyclin A)、细胞周期抑制蛋白p21以及细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路相关蛋白表达。结果与空白对照组比较,50μg/mL ox-LDL处理VSMCs 24 h能显著诱导细胞增殖,经ox-LDL(50μg/mL)诱导24 h后,S期与G1期细胞显著增加,G2期细胞显著减少,促进细胞迁移,上调PCNA、α-SMA、Cyclin A、p-ERK1/2蛋白表达,并下调p-p21蛋白水平,差异均具有统计学意义(P<0.01)。1、1×10^(3)、1×10^(5)、1×10^(6)nmol/L Mel均可不同程度抑制ox-LDL诱导的VSMCs增殖,与ox-LDL组比较,ox-LDL(50μg/mL)处理VSMCs 24 h后接着使用Mel(1×10^(5)nmol/L)处理48 h,可使G1期与S期细胞显著减少,G2期细胞显著增加,降低PCNA、α-SMA、Cyclin A、p-ERK1/2蛋白表达,上调p-p21蛋白表达,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论Mel可显著抑制ox-LDL诱导的VSMCs的增殖,其作用机制可能 展开更多

关键词 动脉粥样硬化 血管平滑肌细胞 褪黑素 氧化型低密度脂蛋白 增殖

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过氧化物酶增殖激活受体γ通过上调组织蛋白酶L表达增强内皮祖细胞的侵袭能力

12

作者 王强 余洁 +4 位作者 赵刚 卢巍 邓梦杨 康华利 黄岚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第16期1643-1646,共4页

目的观察过氧化物酶增殖激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ）激活后对内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）侵袭能力的影响并探讨其分子机制。方法分离和培养大鼠骨髓源性EPCs,分别用PPAR... 目的观察过氧化物酶增殖激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ）激活后对内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）侵袭能力的影响并探讨其分子机制。方法分离和培养大鼠骨髓源性EPCs,分别用PPARγ激动剂罗格列酮（0、1、5、10μmol/L）、PPARγ拮抗剂GW9662（5μmol/L）或组织蛋白酶L（cathepsin L）抑制剂Z-FF-FMK（10μmol/L）干预EPCs后,采用基质胶侵袭实验检测EPCs的侵袭能力;半定量RT-PCR、Western blot检测cathepsin L mRNA和蛋白的表达。结果 PPARγ激动剂罗格列酮（1~10μmol/L）呈剂量依赖增强EPCs的侵袭能力、上调EPCs中cathepsin L的mRNA和蛋白表达（P〈0.05,P〈0.01）,而PPARγ拮抗剂GW9662（5μmol/L）可削弱罗格列酮（10μmol/L）上调cathepsin L mRNA和蛋白表达的作用（P〈0.01）;此外,GW9662（5μmol/L）或cathepsin L抑制剂Z-FFFMK（10μmol/L）均可明显减弱罗格列酮（10μmol/L）促进EPCs侵袭的作用（P〈0.01）。结论 PPARγ激活后通过上调cathepsin L表达增强EPCs的侵袭能力。 展开更多

关键词 过氧化物酶增殖激活受体γ 内皮祖细胞 侵袭 归巢 组织蛋白酶L

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过表达Jagged1促老龄大鼠来源内皮祖细胞增殖和迁移

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作者 朱光旭 潘兴华 +4 位作者 宋明宝 黄岚 庞荣清 蔡学敏 康华利 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期391-396,共6页

目的探讨过表达Jagged1对老龄大鼠来源内皮祖细胞增殖和迁移能力的影响。方法 PBS冲洗1～2月龄和19～26月龄SD大鼠股骨和胫骨骨髓,Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞,应用含10%FBS的DMEM/F12培养基差速贴壁法进行体外培养,以Dil-ac-LD... 目的探讨过表达Jagged1对老龄大鼠来源内皮祖细胞增殖和迁移能力的影响。方法 PBS冲洗1～2月龄和19～26月龄SD大鼠股骨和胫骨骨髓,Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞,应用含10%FBS的DMEM/F12培养基差速贴壁法进行体外培养,以Dil-ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染和vWF免疫组织化学染色进行鉴定。实验分为四组:对照组(未进行基因转染的老龄大鼠内皮祖细胞组)、PIRES2-EGFP转染组、PIRES2-EGFP-Jagged1转染组和未转染的年轻大鼠来源内皮祖细胞组。荧光显微镜下计数GFP表达细胞数并计算转染效率;免疫荧光、RT-PCR和Western blot检测Jagged1 mRNA和蛋白表达;Transwell培养和MTT法分别检测细胞迁移和增殖能力。结果免疫组织化学、RT-PCR和Western blot检测均显示转染后Jagged1显著增高,PIRES2-EGFP-Jagged1转染组mRNA和蛋白表达均较对照组显著增强(P<0.01);与对照组相比,过表达Jagged1显著增强老龄大鼠来源内皮祖细胞迁移和增殖能力(P<0.05或P<0.01)。结论过表达Jagged1增强老龄大鼠来源内皮祖细胞增殖和迁移能力。 展开更多

关键词 JAGGED1 内皮祖细胞 细胞增殖 细胞迁移

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miRNA-198靶向调控表皮干细胞内FGFR1表达诱导慢性创面形成的机制研究 被引量：1

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作者 冯欢 刘仕勇 +2 位作者 周燕 康华利 黄小兵 《中国美容医学》 CAS 2019年第5期76-80,共5页

目的:研究miR-198对慢性创面形成的影响,探讨miR-198靶向调控表皮干细胞内成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1表达的可能机制与相关性。方法:所有大鼠以表皮干细胞培养划分为三组,对照组20只,采用基础饲料,40只复制糖尿病模型大鼠组,共32只... 目的:研究miR-198对慢性创面形成的影响,探讨miR-198靶向调控表皮干细胞内成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1表达的可能机制与相关性。方法:所有大鼠以表皮干细胞培养划分为三组,对照组20只,采用基础饲料,40只复制糖尿病模型大鼠组,共32只建糖尿病大鼠慢性创面模型成功,其中16只为慢性创面组,另外16只通过快速尾静脉注射miR-198抑制剂转染系统溶液,命名为转染抑制载体组,通过免疫组织化学检测表皮干细胞表达,计算慢性创面的愈合率。通过细胞生长曲线测试和细胞周期分析miR-198对表皮干细胞的影响,实时定量PCR检测各组表皮干细胞中FGFR1表达。用Western-blot法检测各组细胞中FGFR1及下游Ras和MAPK蛋白的表达。结果:与对照组比较,慢性创面组miR-198表达量明显增高(P<0.01),转染抑制载体miR-198后,表皮干细胞中表达显著性下调(P<0.01),细胞周期分析发现慢性创面组会抑制表皮干细胞增殖,转染抑制载体(Anti-miR-198)阻断miR-198后表皮干细胞增殖得到恢复。免疫组化检测显示,慢性创面培养组FGFR1阳性表达数量增加,随着转染抑制miR-198载体的影响,FGFR1在转染抑制载体组表达增加更明显(P<0.01)。Westernblot检测显示,在慢性创面模型中,转染抑制载体(Anti-miR-198)后,FGFR1的蛋白表达明显增加,转染抑制载体组Ras和MAPK的蛋白表达明显降低。结论:miR-198可能负向调控表皮干细胞FGFR1,抑制miR-198可以增强表皮干细胞FGFR1表达,加快表皮干细胞增殖和分化,从而能促进慢性创面愈合。 展开更多

关键词 miRNA-198 慢性创面 成纤维细胞生长因子受体1 表皮干细胞 愈合 修复

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