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山东省鸡源沙门氏菌的分离鉴定及毒力基因分析 被引量：17
1
作者 杨文文 李玉保 +7 位作者 路建彪 司振书 张凯悦 管玉堂 庞喆羽 徐欣璐 孟凡达 丁宁宁 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第8期3069-3078,共10页
本研究旨在调查山东地区鸡源沙门氏菌的流行情况及毒力基因分布。在山东地区规模化养鸡场采集病料,利用四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)进行沙门氏菌选择增菌,并对分离菌株进行纯化培养、革兰氏染色、生化试验、培养基菌落形态鉴定,利用沙门... 本研究旨在调查山东地区鸡源沙门氏菌的流行情况及毒力基因分布。在山东地区规模化养鸡场采集病料,利用四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)进行沙门氏菌选择增菌,并对分离菌株进行纯化培养、革兰氏染色、生化试验、培养基菌落形态鉴定,利用沙门氏菌属及血清型特异性引物对分离菌进行PCR扩增鉴定,并利用PCR方法检测分离菌中33种毒力基因分布。结果显示,分离菌在LB固体培养基和麦康凯培养基上呈无色半透明、光滑且边缘整齐的菌落,镜检为革兰氏阴性、两端钝圆的小杆菌。生化试验、培养基菌落形态鉴定、沙门氏菌属及血清型特异性引物PCR扩增结果显示,共分离到25株鸡源沙门氏菌,其中肠炎沙门氏菌9株,鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌各8株。毒力基因检测结果显示,33种毒力基因在25株分离菌中均有检出,其中20种毒力岛基因(invJ、virK、sopA、mogA、hilA、hisJ、ssaB、ssaQ、ssiD、misL、mgtC、orf319、siiE、siiD、bcfA、pipC、sopB、araB、spoB和avrA基因)、肠毒素基因(stn基因)及菌毛毒力基因(fimA基因)检出率均为100%;2种毒力岛基因(sipA和sodC基因)及4种毒力质粒基因(spvA、spvC、spvD和spvR基因)检出率均为96%,spoE基因检出率为68%,fliC基因检出率为36%,gipA与spvB基因检出率均为32%,sseL基因检出率为4%;25株鸡源沙门氏菌中,分别携带31种(8株)、30种(1株)、29种(15株)和24种(1株)毒力基因;毒力基因gipA和spvB只在鼠伤寒沙门氏菌中检出,且在鼠伤寒沙门氏菌中检出率为100%。本研究结果表明,山东地区鸡源沙门氏菌主要为肠炎沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌,分离菌皆携带多种毒力基因,其中gipA和spvB毒力基因只在鼠伤寒沙门氏菌中检出,可作为鼠伤寒沙门氏菌鉴定的备选基因之一。 展开更多
关键词 鸡 沙门氏菌 分离 鉴定 毒力基因
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鸡源大肠杆菌携带毒力基因、血清型及与致病性相关性的研究 被引量：10
2
作者 杨文文 李玉保 +6 位作者 路建彪 司振书 王俊丽 张凯悦 管玉堂 庞喆羽 徐欣璐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1051-1056,共6页
为了解鸡源大肠杆菌携带毒力基因数量、血清型与致病性之间的相关性,本实验收集山东、辽宁、安徽等地区规模化养殖场粪便、垫料、死鸡肝脏等病料样品,分离纯化鸡源大肠杆菌,利用PCR方法进行phoA基因鉴定和18种毒力基因(aatA、papC、tsh... 为了解鸡源大肠杆菌携带毒力基因数量、血清型与致病性之间的相关性,本实验收集山东、辽宁、安徽等地区规模化养殖场粪便、垫料、死鸡肝脏等病料样品,分离纯化鸡源大肠杆菌,利用PCR方法进行phoA基因鉴定和18种毒力基因(aatA、papC、tsh、fimC、mat、ibeB、vat、yijp、ibeA、ompA、neuC、cvaC、iss、iroN、fyuA、iucD、irp2、chuA)检测,随机抽取150株分离菌进行O抗原血清型鉴定。选择携带不同毒力基因、且已鉴定出O抗原血清型的鸡源大肠杆菌32株,进行鸡胚致病性试验,分析其致病性与毒力基因数量间的相关性。结果显示:共分离鉴定鸡源大肠杆菌440株,携带毒力基因0~2种的菌株占35.5%(156/440),携带3种~6种毒力基因的菌株占41.8%(184/440),携带7种及以上毒力基因的菌株占22.7%(100/440);150株分离菌中,131株可以鉴定出O抗原血清型,定性率为87.3%,其中血清型O;和O;检出率最高,分别为16.8%(22/131)和15.3%(20/131);鸡胚感染试验结果显示,鸡源大肠杆菌的致病性与其所携带的毒力基因数量之间呈正相关,同一血清型菌株之间的致病性存在较大差异。本研究明确了鸡源大肠杆菌携带毒力基因的分布情况以及携带毒力基因的数量与其致病性之间的相关性,为致病性大肠杆菌PCR检测方法的开发及致病机理研究提供依据。 展开更多
关键词 鸡源大肠杆菌 血清型 毒力基因 致病性试验
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1株鸭疫里默氏杆菌的全基因组测序及耐药性与遗传进化分析 被引量：3
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作者 祝希辉 李艳兰 +7 位作者 王志伟 庞喆羽 李玉保 刘成 司振书 路建彪 曹胜亮 薛希娟 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1140-1149,共10页
【目的】了解鸭疫里默氏杆菌的耐药性、基因组结构与遗传变异程度,为鸭疫里默氏杆菌耐药性与基因组研究提供参考。【方法】本研究对1株从病死鸭脑组织分离的鸭疫里默氏杆菌疑似菌株进行了PCR鉴定、耐药性检测及全基因组框架图测序,并基... 【目的】了解鸭疫里默氏杆菌的耐药性、基因组结构与遗传变异程度,为鸭疫里默氏杆菌耐药性与基因组研究提供参考。【方法】本研究对1株从病死鸭脑组织分离的鸭疫里默氏杆菌疑似菌株进行了PCR鉴定、耐药性检测及全基因组框架图测序,并基于16S rDNA与管家基因对其进行了遗传进化分析。【结果】测序数据经过质控与过滤后成功组装为1个包含38个contigs的基因组框架,使用Abricate软件、CARD在线数据库共检测出6种不同的耐药基因,其中4种与耐药表型符合;将基因序列提交至MLST数据库,发现了一种新ST型,定为ST93。构建的16S rDNA和管家基因进化树结果表明,分离菌株与2株鸭疫里默氏杆菌具有较近的亲缘关系。【结论】分离鉴定得到1株鸭疫里默氏杆菌,该菌株为多药耐药菌株,其基因组中携带多个耐药基因;鸭疫里默氏杆菌的基因变异程度较大,且存在跨区域流行传播风险。在临床用药时应注意合理用药,及时监控抗性基因的水平转移,防止鸭疫里默氏杆菌跨区域流行。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏杆菌 耐药性 耐药基因 基因组 生物信息学
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致病性大肠杆菌携带原噬菌体的预测及耐药性与毒力研究 被引量：6
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作者 祝希辉 庞喆羽 +4 位作者 王志伟 裴兰英 曹胜亮 薛希娟 李玉保 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第3期1126-1134,共9页
【目的】研究致病性大肠杆菌携带原噬菌体的比例、原噬菌体携带毒力基因及耐药基因的情况,了解致病性大肠杆菌中原噬菌体对菌株的耐药性与毒力的影响,保证噬菌体生产菌的生物安全性,为大肠杆菌噬菌体的基础研究与应用提供借鉴。【方法】... 【目的】研究致病性大肠杆菌携带原噬菌体的比例、原噬菌体携带毒力基因及耐药基因的情况,了解致病性大肠杆菌中原噬菌体对菌株的耐药性与毒力的影响,保证噬菌体生产菌的生物安全性,为大肠杆菌噬菌体的基础研究与应用提供借鉴。【方法】从NCBI中下载大肠杆菌全基因组信息,通过在线网站预测大肠杆菌中携带的原噬菌体数目,并分析原噬菌体的GC含量、基因组大小、占细菌基因组比例等基因组特征及完整型原噬菌体的类型,对原噬菌体做初步分类,统计分析完整型原噬菌体中携带耐药基因数目、耐药表型、耐药机制与毒力基因数目、毒力基因家族分布等。【结果】112株大肠杆菌携带完整型原噬菌体1024个,疑似型原噬菌体287个,缺陷型原噬菌体505个。1024个完整型原噬菌体中,多数与长尾噬菌体相似,占70.21%(719/1024);共有63种噬菌体类型,其中BP4795(登录号:NC_004813.1)类型的占比最高,达到19.24%(197/1024),其次是DE3(登录号:NC_042057.1),占比11.72%(120/1024)。大肠杆菌携带原噬菌体的GC含量在38%~57%之间,基因组大小为3.1~152.6 kb,其中80 kb以内的原噬菌体占97.03%(1762/1816)。1024个完整型原噬菌体中携带耐药基因占比为6.35%(65/1024),共携带耐药基因253个,分别来自11个抗生素耐药基因家族;携带一个或多个毒力基因的完整性原噬菌体占42.78%(438/1024),共携带毒力基因1274个,分别来自9个不同毒力因子家族,平均每个完整型原噬菌体携带毒力基因2.9个。【结论】大肠杆菌普遍携带原噬菌体,原噬菌体中部分携带耐药基因与毒力基因,在实际应用中应充分评估其风险,防止原噬菌体造成的耐药基因与毒力基因在菌株之间的转移。 展开更多
关键词 大肠杆菌 原噬菌体 耐药基因 毒力基因
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鸡马立克病肺组织肿瘤病变与热休克蛋白表达的相关性分析
5
作者 李艳兰 祝希辉 +2 位作者 王志伟 庞喆羽 李玉保 《山东农业科学》 北大核心 2023年第12期150-155,共6页
为探讨马立克病毒(Marek’s disease virus, MDV)与肿瘤发生、发展的关系,本研究建立了鸡马立克病(Marek’s disease, MD)模型,并利用病理组织学、免疫组织化学、荧光定量PCR、酶联免疫吸附(ELISA)等方法测定了肿瘤相关蛋白热休克蛋白60... 为探讨马立克病毒(Marek’s disease virus, MDV)与肿瘤发生、发展的关系,本研究建立了鸡马立克病(Marek’s disease, MD)模型,并利用病理组织学、免疫组织化学、荧光定量PCR、酶联免疫吸附(ELISA)等方法测定了肿瘤相关蛋白热休克蛋白60(heat shock protein 60, HSP60)在鸡肺脏组织内的定位及转录水平和含量的动态变化。结果显示,HSP60在攻毒组鸡肺脏肿瘤细胞的细胞质内强表达,试验周期内攻毒组HSP60 mRNA转录水平极显著高于对照组(P<0.01),总体呈开口向下的抛物线型,即7~28日龄间持续升高,28日龄达到最高值,分别为空白对照组和疫苗对照组的1.39倍和1.44倍,之后降低;HSP60含量7~28日龄攻毒组极显著高于空白对照组(P<0.01),35日龄后两者间差异不显著。该结果为进一步研究HSP60在肿瘤发生过程中的生物学作用奠定了基础。 展开更多
关键词 马立克病 热休克蛋白 病理组织学 免疫组织化学
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噬菌体与动物细胞的相互作用
6
作者 庞喆羽 祝希辉 +3 位作者 李艳兰 王志伟 李玉保 薛希娟 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第20期35-40,共6页
噬菌体是动物体内最丰富的生物群体。噬菌体易获得、宿主特异性强、不易产生耐药性等特点使其在治疗耐药细菌感染方面具有很大优势。随着基因工程和显微镜技术的发展,噬菌体对动物细胞的调节机制逐渐被发现。笔者综述了近年来关于噬菌... 噬菌体是动物体内最丰富的生物群体。噬菌体易获得、宿主特异性强、不易产生耐药性等特点使其在治疗耐药细菌感染方面具有很大优势。随着基因工程和显微镜技术的发展,噬菌体对动物细胞的调节机制逐渐被发现。笔者综述了近年来关于噬菌体进入动物细胞的机制、噬菌体在细胞内的分布及与细胞内受体相互作用的研究进展,强调了噬菌体在协助宿主细胞杀灭细菌过程中的作用,讨论了噬菌体与动物细胞相互作用对噬菌体治疗的意义,旨在为噬菌体治疗耐药细菌的研究提供理论基础。 展开更多
关键词 噬菌体 哺乳动物 细胞 相互作用 治疗
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鸡源大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及组合应用 被引量：1
7
作者 路建彪 王顺山 +8 位作者 王俊丽 李玉保 司振书 杨文文 庞喆羽 徐欣璐 管玉堂 孟凡达 丁宁宁 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第20期61-65,69,154,共7页
为探究大肠杆菌噬菌体的生物学特性及其混合制剂的应用效果,试验从山东地区分离纯化鸡源大肠杆菌及大肠杆菌噬菌体,对噬菌斑形态和大小差异较大的噬菌体进行了生物学特性(噬菌体效价、最适温度、最适pH值、最佳感染复数、一步生长曲线... 为探究大肠杆菌噬菌体的生物学特性及其混合制剂的应用效果,试验从山东地区分离纯化鸡源大肠杆菌及大肠杆菌噬菌体,对噬菌斑形态和大小差异较大的噬菌体进行了生物学特性(噬菌体效价、最适温度、最适pH值、最佳感染复数、一步生长曲线、最佳保存温度)测定,并测定了部分噬菌体的宿主谱,选取裂解率较高的10株噬菌体组合成噬菌体混合制剂,测定其对大肠杆菌(实验室保存的100株大肠杆菌、全国不同地区养鸡场分离的100株大肠杆菌)的裂解率。结果表明:从山东地区分离并纯化鸡源大肠杆菌195株,大肠杆菌噬菌体155株。挑取两株噬菌斑形态和大小差异较大的噬菌体(分别命名为PLCF1和PLCF72)进行了生物学特性测定,噬菌体PLCF1和PLCF72效价分别为4.5×10^(10) pfu/mL、1.5×10^(9) pfu/mL,在温度40℃以内可以保持较高的活性,最佳pH值为6~8,噬菌体PLCF1和PLCF72最佳感染复数分别为0.001,0.01;一步生长曲线显示噬菌体PLCF1的裂解性能强于噬菌体PLCF72;噬菌体适宜保存温度为-20℃或-80℃。选取83株噬菌体对282株大肠杆菌菌株进行裂解,裂解率可达78.01%,混合制剂对实验室保存的100株大肠杆菌的裂解率为62.00%,对全国不同地区采集的100株大肠杆菌的裂解率为41.00%。说明两株噬菌体生物学特性存在一定的差异,噬菌体混合制剂对不同来源的大肠杆菌裂解率不同。 展开更多
关键词 大肠杆菌 噬菌体 生物学特性 噬菌体混合制剂 裂解率
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