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4种血清型登革病毒多表位重组抗原的表达及血清学初步评价 被引量：4
1
作者 易方浩 张俊爱 +8 位作者 黎四平 贾岩 陈晨 余诗炎 王鑫 代友超 庄泽岗 郑碧英 徐军发 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期32-37,共6页
目的在原核表达系统中对登革病毒包膜蛋白(E蛋白)和非结构蛋白1(NS1)融合的B细胞抗原表位进行表达、纯化及血清学评价。方法将B细胞抗原表位用形成α螺旋的连接肽(EAAAK)2作为接头,串联合成1条全新的多表位融合重组基因rE,将其克隆到原... 目的在原核表达系统中对登革病毒包膜蛋白(E蛋白)和非结构蛋白1(NS1)融合的B细胞抗原表位进行表达、纯化及血清学评价。方法将B细胞抗原表位用形成α螺旋的连接肽(EAAAK)2作为接头,串联合成1条全新的多表位融合重组基因rE,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达融合蛋白,用镍柱对重组蛋白纯化,并用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达产物。以融合蛋白为抗原,用间接ELISA检测登革热病人血清IgM抗体。结果重组表达载体pET28a-rE构建成功,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达。融合蛋白主要以包涵体形式存在,用镍柱纯化获得高纯度的目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测结果显示蛋白分子量大小与预期结果相符,建立的间接ELISA具有较高的准确性。结论原核表达的登革病毒多表位融合蛋白具有良好的血清学检测价值。 展开更多
关键词 登革病毒 抗原蛋白 原核表达 血清学评价
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检测人IL-37双抗夹心ELISA方法的建立 被引量：2
2
作者 贾岩 高宇驰 +7 位作者 黎四平 王鑫 陈晨 余诗炎 庄泽岗 张俊爱 陈章权 徐军发 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1346-1349,1354,共5页
目的:建立定量检测人血清IL-37的双抗夹心ELISA。方法:以鼠抗人IL-37单抗作为捕获抗体,制备的兔抗人IL-37多抗作为检测抗体,HRP标记山羊抗兔Ig G为二抗,重组人IL-37蛋白为标准品,建立检测人IL-37的双抗夹心ELISA方法。并对该方法的工作... 目的:建立定量检测人血清IL-37的双抗夹心ELISA。方法:以鼠抗人IL-37单抗作为捕获抗体,制备的兔抗人IL-37多抗作为检测抗体,HRP标记山羊抗兔Ig G为二抗,重组人IL-37蛋白为标准品,建立检测人IL-37的双抗夹心ELISA方法。并对该方法的工作条件进行优化,对其灵敏度、线性范围、重复性和对登革热非结构蛋白NS1阳性患者血清IL-37的检测效果进行评价。结果:重组IL-37蛋白为标准品建立的双抗夹心ELISA法检测灵敏度为1.465μg/L,线性范围为1.465~46.875μg/L,批内和批间变异系数分别为6.6%和11.7%。采用此方法对诊断为登革热的患者血清进行检测,结果显示非结构蛋白NS1阳性患者IL-37水平显著高于健康人对照组。结论:成功建立了双抗夹心ELISA检测方法,可用于人血清中IL-37的检测。 展开更多
关键词 IL-37 双抗夹心法 ELISA 登革热
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活动性肺结核患者外周血产IL-37b淋巴细胞比例增加及其临床意义 被引量：1
3
作者 刘淦斌 张俊爱 +4 位作者 代友超 庄泽岗 陈晨 易来龙 徐军发 《检验医学》 CAS 2017年第5期394-398,共5页
目的检测活动性肺结核(ATB)患者外周血产白细胞介素37b(IL-37b)淋巴细胞比例,探讨其临床意义。方法采用流式细胞术对42例ATB患者外周血产IL-37b淋巴细胞进行检测,并对8例患者进行治疗后跟踪检测,以10名健康志愿者作为对照组。结果 ATB... 目的检测活动性肺结核(ATB)患者外周血产白细胞介素37b(IL-37b)淋巴细胞比例,探讨其临床意义。方法采用流式细胞术对42例ATB患者外周血产IL-37b淋巴细胞进行检测,并对8例患者进行治疗后跟踪检测,以10名健康志愿者作为对照组。结果 ATB患者外周血产IL-37b淋巴细胞比例明显高于对照组,8例跟踪患者治疗后产IL-37b淋巴细胞比例显著下降;结核抗体阳性患者外周血产IL-37b淋巴细胞比例高于结核抗体阴性患者;痰涂片阳性患者产IL-37b淋巴细胞比例显著高于痰涂片阴性患者;复治ATB患者产IL-37b淋巴细胞比例显著高于初治患者。体外卡介苗刺激可致人外周血单个核细胞(PBMC)中产IL-37b淋巴细胞比例显著增加,且在ATB组增加更显著。结论 ATB患者外周血中产IL-37b淋巴细胞比例增加与ATB的严重程度及预后相关,检测外周血产IL-37b淋巴细胞比例有可能成为ATB疗效评估的指标。 展开更多
关键词 白细胞介素37b 淋巴细胞 流式细胞术 活动性肺结核
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