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日本对虾c型溶菌酶的高效重组表达及产物分析 被引量：7
1
作者 杨杰 丛丽娜 +2 位作者 夏涛 常艺海 栾桂花 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期99-105,共7页
从日本对虾(Marsupenaeus japonicus)血液中提取总RNA,根据GenBank已登录的该cDNA序列(AB080238),通过RT-PCR技术扩增出日本对虾溶菌酶(MjLys)成熟肽基因。该基因完整的开放阅读框为477 bp,编码158个氨基酸(aa),前18 aa为信号肽,成熟肽... 从日本对虾(Marsupenaeus japonicus)血液中提取总RNA,根据GenBank已登录的该cDNA序列(AB080238),通过RT-PCR技术扩增出日本对虾溶菌酶(MjLys)成熟肽基因。该基因完整的开放阅读框为477 bp,编码158个氨基酸(aa),前18 aa为信号肽,成熟肽由140 aa组成,分子量为16.4 kD,理论等电点(pI)为8.80。经分析表明,该基因含有一个完整的c型溶菌酶结构域(1-130 aa),包括c型溶菌酶特有的两个活性中心Glu33和Asp50,以及8个保守结构Cys残基。将MjLys成熟肽基因亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌细胞BL21(DE3)pLysS中诱导发酵,实现了重组MjLys蛋白的高效表达,并测定了该重组蛋白对几种细菌的抑菌活性。结果表明,重组日本对虾溶菌酶对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和溶壁微球菌均有显著的溶菌活性。 展开更多
关键词 甲壳纲动物 日本对虾 c型溶菌酶 重组表达
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重组海参溶菌酶基因工程菌的构建及原核表达 被引量：5
2
作者 常艺海 丛丽娜 卢冬 《大连工业大学学报》 CAS 北大核心 2012年第6期391-394,共4页
根据GenBank中海刺参溶菌酶的cDNA序列(Accession no.EF036468),利用RT-PCR技术扩增出海刺参溶菌酶的基因片段(SL),将其克隆到原核表达载体pET-32a(+),得到重组质粒pET-32a(+)-SL,再转化至E.coil Rosetta(DE3)pLysS。利用IPTG诱导表达,... 根据GenBank中海刺参溶菌酶的cDNA序列(Accession no.EF036468),利用RT-PCR技术扩增出海刺参溶菌酶的基因片段(SL),将其克隆到原核表达载体pET-32a(+),得到重组质粒pET-32a(+)-SL,再转化至E.coil Rosetta(DE3)pLysS。利用IPTG诱导表达,重组蛋白经SDS-PAGE分析,得到一条分子质量约为31ku的特异条带。经过Western blotting分析鉴定,结果显示重组海参溶菌酶成功在大肠杆菌中表达,并且有部分可溶性蛋白,占总菌体蛋白约10%。这些结果为进一步研究海参溶菌酶的作用机理奠定基础。 展开更多
关键词 溶菌酶 原核表达 克隆 海参
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重组海参溶菌酶N端可溶性表达与抑菌分析
3
作者 常艺海 丛丽娜 +3 位作者 栾桂花 刘志文 杨杰 钱斯日古楞 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2013年第15期78-82,共5页
通过对海参(Stichopus japonicus)溶菌酶(SjLys)cDNA(Genbank accession no:EF036468)片段的分析,结果发现N端基因区域所对应的蛋白质序列中含有糖苷酶活性。因此利用RT-PCR技术以其为模板,扩增出长度为174 bp的溶菌酶N端(SjLys-N)基因... 通过对海参(Stichopus japonicus)溶菌酶(SjLys)cDNA(Genbank accession no:EF036468)片段的分析,结果发现N端基因区域所对应的蛋白质序列中含有糖苷酶活性。因此利用RT-PCR技术以其为模板,扩增出长度为174 bp的溶菌酶N端(SjLys-N)基因,将其亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a(+)-SjLys-N,再转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)pLysS,成功地构建了重组SjLys-N的基因工程菌。该工程菌在改造的LB培养基和最适的发酵条件下经IPTG诱导后,表达约23 kD的重组SjLys-N蛋白。此外,它还能以可溶性的形式表达,占总菌体蛋白约46%。经过Western blotting分析,重组SjLys-N在23 kD左右能够与penta-his抗体发生特异性免疫反应,结果表明重组SjLys-N得到正确的表达。最后对纯化后的重组SjLys-N进行了抑菌特性的分析,结果发现它对溶壁微球菌和副溶血弧菌有较高的抑菌活性。上述结果将为进一步研究海参溶菌酶的基因结构与功能之间的关系提高参考。 展开更多
关键词 重组海参溶菌酶 可溶性表达 抑菌活性
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一株产抗菌肽芽孢杆菌的筛选、鉴定及其发酵条件优化研究 被引量：3
4
作者 常艺海 王文龙 +3 位作者 牛俊轲 李高强 张桂山 刘永立 《饲料研究》 CAS 北大核心 2022年第20期65-69,共5页
研究旨在筛选、鉴定一株产抗菌肽的芽孢杆菌,优化芽孢杆菌的发酵条件。试验选取对病原细菌抑制效果最佳的菌株CGMCC 24209,经形态特征观察、生理生化鉴定以及16S rDNA测序分析鉴定,确定该菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。... 研究旨在筛选、鉴定一株产抗菌肽的芽孢杆菌,优化芽孢杆菌的发酵条件。试验选取对病原细菌抑制效果最佳的菌株CGMCC 24209,经形态特征观察、生理生化鉴定以及16S rDNA测序分析鉴定,确定该菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。通过摇瓶单因素试验,优化菌株CGMCC 24209的发酵时间、温度、接种量、转速、初始pH值等条件。结果显示:菌株CGMCC 24209的最适发酵条件为:初始pH值7.0、装液量150 m L/500 mL、接种量7%,于30℃、220 r/min摇床培养48 h。研究表明,此条件下的发酵液杀菌效价最高,为158573 IU/mL。 展开更多
关键词 抗菌肽 地衣芽孢杆菌 鉴定 条件优化
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富硒益生菌在动物养殖中的应用研究进展 被引量：1
5
作者 常艺海 牛俊轲 +4 位作者 秦立群 张桂山 王文龙 段丹霞 刘永立 《饲料研究》 CAS 北大核心 2022年第23期154-156,共3页
富硒益生菌具有硒元素和益生菌的双重功效。硒元素具有提高动物机体免疫力、延缓衰老、抗氧化、抗癌的作用。益生菌具有富集微量元素的特性,可将无机硒生物转化为有机硒,不仅可以降低硒的毒性,还能够增强益生菌本身的益生性能。文章主... 富硒益生菌具有硒元素和益生菌的双重功效。硒元素具有提高动物机体免疫力、延缓衰老、抗氧化、抗癌的作用。益生菌具有富集微量元素的特性,可将无机硒生物转化为有机硒,不仅可以降低硒的毒性,还能够增强益生菌本身的益生性能。文章主要综述富硒益生菌作为饲料添加剂在猪、家禽和反刍动物生产中的应用进展,探讨其在动物养殖过程中对生长性能、抗应激能力和肉质等的影响,为富硒益生菌的开发应用提供参考。 展开更多
关键词 有机硒 富硒益生菌 生物学功能 动物养殖
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