成都地区献血人群Kell等9个血型系统抗原基因分型研究 被引量：44

1

作者 洪缨 巩天祥 +3 位作者 周昌华 王乃红 杨群身 王欢 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期763-766,共4页

目的了解成都地区献血人群Kell等血型系统抗原基因的多态性分布。方法采用PCR-SSP方法对332名成都地区汉族献血者的Kell(KEL)、MNS(NMS)、Diego(DI)、Scianna(SC)、Dombrock(DO)、Colton(CO)、Duffy(FY)、Lutheran(LU)、Kidd(JK)等9个... 目的了解成都地区献血人群Kell等血型系统抗原基因的多态性分布。方法采用PCR-SSP方法对332名成都地区汉族献血者的Kell(KEL)、MNS(NMS)、Diego(DI)、Scianna(SC)、Dombrock(DO)、Colton(CO)、Duffy(FY)、Lutheran(LU)、Kidd(JK)等9个血型系统的22个抗原基因分型。结果成都地区汉族献血者Kell、Kidd、Duffy等血型系统抗原基因频率:KEL为K=0.000 0、k=1.000 0;MNS为m=0.575 2、n=0.424 6、S=0.0376、s=0.962 2,单体型MS=0.028 3、Ms=0.546 9、NS=0.009 3、Ns=0.415 3;DI为Dia=0.040 7、Dib=0.959 3;SC为Sc1=1.000 0、Sc2=0.000 0;DO为Doa=0.066 3、Dob=0.933 7;CO为Coa=1.000 0、Cob=0.000 0;FY为Fya=0.951 8、Fyb=0.048 2;LU为Lua=0.000 0、Lub=1.000 0,Aua=0.893 1、Aub=0.106 9;JK为Jka=0.442 8、Jkb=0.557 2。结论成都地区汉族献血人群中MNS、DI、DO、FY、LU和JK基因频率分布具有多态性,KEL、SC和CO基因频率呈单态性分布。 展开更多

关键词 红细胞血型 血型抗原 PCR—SSP 基因分型 基因频率

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不同磷酸化合物扩增外周血γδ T细胞的效率及条件优化 被引量：13

2

作者 习燕 苗天雨 +4 位作者 万浬科 王元虎 冯婷 巩天祥 李明远 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期868-871,共4页

目的研究异戊烯焦磷酸(IPP)与帕米磷酸钠(PAM)体外扩增成人外周血γδT细胞的效率及条件优化。方法梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),分别加入(1.0、5.0、10.0、15.0)μg/mL IPP或(2.0、5.0、8.0、12.0)μg/mL PAM及(100.0、200.... 目的研究异戊烯焦磷酸(IPP)与帕米磷酸钠(PAM)体外扩增成人外周血γδT细胞的效率及条件优化。方法梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),分别加入(1.0、5.0、10.0、15.0)μg/mL IPP或(2.0、5.0、8.0、12.0)μg/mL PAM及(100.0、200.0、500.0)IU/mL IL-2,置于100 mL/L小牛血清的RPMI1640培养体系培养,观察并收集细胞,采用流式细胞仪检测刺激后CD3+TCRδ2+的γδT细胞数量以及比例,并计算其扩增效率。结果经过14 d扩增培养后,IPP组的γδT细胞数量在淋巴细胞中比例可上升为81.3%,PAM组的γδT细胞数量在淋巴细胞中比例上升为78.5%,表明IPP和PAM均能有效刺激扩增γδT细胞,2组的扩增效率无统计学差异(P>0.05)。结论 PAM具有与IPP相似的体外扩增γδT细胞的能力,PAM扩增法可能成为扩增γδT细胞更为经济实用的选择。 展开更多

关键词 ΓΔT细胞 异戊烯焦磷酸 帕米磷酸钠 体外扩增

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血小板献血者忠诚度调查 被引量：9

3

作者 康建勋 洪缨 +6 位作者 鲁力 巩天祥 李宏 胡萍 肖湘 席光湘 赵玉伟 《中国输血杂志》 CAS 2020年第4期356-359,共4页

目的固定献血者比招募的新献血者更安全,且更具成本效益。我们调查高频献血人群,探讨献血服务质量评估、献血动机、献血满意度与献血忠诚度间的影响关系,以便提高献血者忠诚度。方法研究2016年1—10月捐献单采血小板>10次的献血者,... 目的固定献血者比招募的新献血者更安全,且更具成本效益。我们调查高频献血人群,探讨献血服务质量评估、献血动机、献血满意度与献血忠诚度间的影响关系,以便提高献血者忠诚度。方法研究2016年1—10月捐献单采血小板>10次的献血者,邀请其参加问卷调查。问卷涉及献血动机、献血服务质量评估,献血满意度,献血忠诚度等。结果共有210献血者符合要求(男性90%,女性10%)。26—35岁(39.5%)和自由职业(38.6%)献血者最多,文化程度分布较均匀。发出210份问卷,收回144份。采用结构方程模型和模型整体拟合优度分析,得出模型与数据的拟合程度很好。卡方统计值与自由度之比为1.941,近似均方根误差为0.081,增值拟合指数(IFI)、非规范拟合指数(TLI),拟合度指数(CFI)的值都>0.90,均处于可以接受的范围。各路径中除献血动机到献血忠诚度外,其他都达到显著性水平。质量评估对献血满意度、献血动机、献血忠诚度影响总效果依次为0.692,0.463,0.713。结论总效果影响最大的是献血服务质量评估对献血忠诚度的影响。献血服务质量评估对献血满意度、献血动机、献血忠诚度均有显著的影响。采供血机构应不断提升献血服务质量,这有助于提升献血者忠诚度,将初次献血者转化成固定献血者。 展开更多

关键词 单采血小板 献血忠诚度 献血满意度 献血动机 献血服务质量评估

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血小板抗体筛查及交叉配型的临床应用 被引量：7

4

作者 谭茜茜 魏习薇 +5 位作者 巩天祥 洪缨 李执如 李萌 傅雪梅 李书平 《中国输血杂志》 CAS 2021年第4期382-385,共4页

目的对成都市2019年血小板抗体筛查及交叉配型情况进行分析,进一步完善血小板配型相关检测策略以提升临床输注疗效。方法选择中心2019年进行血小板配型的患者为研究对象,采用固相凝集法进行血小板抗体筛查及交叉配型检测,分析检测量、... 目的对成都市2019年血小板抗体筛查及交叉配型情况进行分析,进一步完善血小板配型相关检测策略以提升临床输注疗效。方法选择中心2019年进行血小板配型的患者为研究对象,采用固相凝集法进行血小板抗体筛查及交叉配型检测,分析检测量、抗筛阳性率、年龄分布、血型占比、季节性变化、医疗机构送检情况、反复配型比例及输注效果。结果 85例患者配型259例次,提供配型血小板321个治疗量,抗筛阳性率87.06%,40岁以上患者占64.71%,配型例次血型占比O型>A型>B型>AB型,各季度配型量逐步增加,送检医院均为三级以上医疗机构,52.94%的患者进行至少两次以上配型,配型血小板输注有效率为63.64%。结论对患者进行血小板抗体筛查及交叉配型,有利于提高血小板输注疗效,避免血小板资源的浪费,应积极推广该项检测的临床应用。 展开更多

关键词 血小板抗体筛查 血小板交叉配型 血小板输注无效

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成都地区献血人群Jk(a-b-)表型的)NA序列分析 被引量：6

5

作者 洪缨 巩天祥 周昌华 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期697-700,共4页

目的调查成都地区献血人群Jk（a—b-）表型的分子遗传特征。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物技术对成都地区8名Jk（a—b-）表型献血者Jg基因第4～11外显子及其侧翼区域进行扩增，并对产物进行测序分析。结果8份样本均为第9外显子C... 目的调查成都地区献血人群Jk（a—b-）表型的分子遗传特征。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物技术对成都地区8名Jk（a—b-）表型献血者Jg基因第4～11外显子及其侧翼区域进行扩增，并对产物进行测序分析。结果8份样本均为第9外显子C．838AA纯合型，含有无效Jk“等位基因。发现4种突变序列：（1）IVS5-IG〉A纯合突变、第7外显子C．588A〉G（P．Pr0196Pro）纯合突变；（2）第9外显子C．896G〉A（p．Gly299Glu）纯合突变、第7外显子C．588A〉G（P．Pr0196Pro）纯合突变；（3）IVS5—1G〉A杂合突变、第5外显子C．222C〉A（P．Asn74Lys）杂合突变、第7外显子C．499A〉G（Metl67Val）杂合突变、第7外显子c．588A〉G（P．Prol96Pro）纯合突变；（4）IVS5—1G〉A杂合突变、第9外显子C．896G〉A（P．Gly299Glu）杂合突变、第7外显子C．588A〉G（P．Pr0196Pro）纯合突变。结论IVS5—1G〉A突变、第5外显子C．222C〉A突变（P．Asn74Lys）和第9外显子C．896G^A突变（P．Gly299Glu）可能是成都地区献血人群Jk（a—b-）表型的分子遗传基础。 展开更多

关键词 KIDD血型 Jk(a—b-)表型 基因型

原文传递

采用熔解曲线分析法检测红细胞Duffy血型抗原Fy-a/b基因型 被引量：4

6

作者 陈雪 周昌华 +1 位作者 洪缨 巩天祥 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1482-1485,共4页

本研究建立用于红细胞Duffy血型抗原Fy-a/b基因分型的熔解曲线分析方法。根据β-actin和Fy-a/bmRNA序列设计并合成引物,建立实时荧光多重PCR-熔解曲线分析法,并用该方法与常规PCR-SSP法同时检测中国成都地区198名献血者Duffy血型抗原Fy-... 本研究建立用于红细胞Duffy血型抗原Fy-a/b基因分型的熔解曲线分析方法。根据β-actin和Fy-a/bmRNA序列设计并合成引物,建立实时荧光多重PCR-熔解曲线分析法,并用该方法与常规PCR-SSP法同时检测中国成都地区198名献血者Duffy血型抗原Fy-a/b的基因型。结果表明,熔解曲线分析法和常规PCR-SSP法的基因分型结果完全一致。198名中国成都地区献血者中Fya(+)178例(89.9%),Fya(+)Fyb(+)杂合子19例(9.6%),Fyb(+)1例(0.5%),Fya基因频率0.947,Fyb基因频率0.053,符合中国人Duffy血型分布特点。结论:本研究成功建立了红细胞Duffy血型抗原Fy-a/b基因分型的熔解曲线分析方法,该方法适用于大规模Duffy血型基因分型。中国成都地区的献血者Duffy血型基因以Fya为主。 展开更多

关键词 熔解曲线 DUFFY血型 Fy-a基因 Fy-b基因

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缺氧对脑脊液-视神经屏障中脑膜上皮细胞ATP水平和细胞色素C表达的影响 被引量：5

7

作者 辛晓蓉 巩天祥 +1 位作者 赵莉 李新章 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期28-31,共4页

背景脑膜上皮细胞（MECs）是构成脑脊液-视神经屏障的主要细胞成分。脑脊液-视神经屏障的损害可能会导致脑脊液组分的失衡，使视神经受到各种致病因素的攻击。目前对于MECs在视神经疾病中的病理作用研究甚少，机制尚不明确。目的探讨缺... 背景脑膜上皮细胞（MECs）是构成脑脊液-视神经屏障的主要细胞成分。脑脊液-视神经屏障的损害可能会导致脑脊液组分的失衡，使视神经受到各种致病因素的攻击。目前对于MECs在视神经疾病中的病理作用研究甚少，机制尚不明确。目的探讨缺氧条件下人MECs的功能变化，为视神经疾病发病机制的研究提供新的线索。方法将培养的人MECs株分别制备成密度为2．5×10^3个／孔、5．0×10^3个／孔和1×10^4个／孔的细胞悬液，各取100μl分别接种于96孔板中，分别在常规培养基及体积分数21％O2（常氧组）和1％O2（缺氧组）环境下孵育2d，采用MTS法测定和比较不同氧环境下人MECs的吸光度（A490）值；采用CASY1法检测和比较不同氧环境下细胞体积及直径的变化；采用光度计测定MECs暴露不同氧环境下1d、2d后线粒体产生ATP量的变化；采用免疫荧光技术测定不同氧环境下细胞内细胞色素C的表达和定位。结果缺氧组2．5×10^3个／孔、5．0×10^3个／孔、1×10^4个／孔细胞密度组MECs的增生值（A490）分别为0．399±0．009、0．393±0．009和0．496±0．026，分别较相应的常氧组的0．424±0．131、0．413±0．111和0．537±0．021明显下降，差异均有统计学意义（t=3．777，P=0．004；t=3．251，P=0．009；t=3．037，P=0．013）。与常氧组细胞比较，缺氧组细胞的直径和体积均明显增加[（20．970±0．127）μm vs．（21．198±0．048）μm，t=-3．762，P=0．006；（5805±73）fl vs．（6026±106）fl，t=-4．124，P=0．002）]。缺氧组和缺氧＋底物组细胞分别培养2d后，细胞中ATP产生量分别为（0．900±0．225）mmol／（L·g）、（0．952±0．075）mmol／（L·g），均明显低于常氧组的（1．389±0．145）mmol／（L·g）和常氧＋底物组的（1．401±0．122）mmol／（L·g），差异均有统计学意义（P=0．001、0．002、0．001）。常氧组细胞中细� 展开更多

关键词 缺氧 脑膜上皮细胞 线粒体 细胞色素C 脑脊液-视神经屏障

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早产儿脐血中γδ T淋巴细胞功能变化特征的研究 被引量：3

8

作者 王清 冯婷 +3 位作者 吴啓洪 林芳 杨川 巩天祥 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期795-799,828,共6页

目的检测分析早产儿和足月儿脐带血中γδT细胞的数量、比例及相关功能变化特征,探讨早产儿人群的γδT细胞功能变化对其抵抗病毒感染的意义。方法采用流式细胞术检测脐带血单个核细胞(cord blood mononuclear cell,CBMC)中γδT细胞的... 目的检测分析早产儿和足月儿脐带血中γδT细胞的数量、比例及相关功能变化特征,探讨早产儿人群的γδT细胞功能变化对其抵抗病毒感染的意义。方法采用流式细胞术检测脐带血单个核细胞(cord blood mononuclear cell,CBMC)中γδT细胞的数量比例;流感病毒感染刺激早产儿和足月儿CBMC 24 h,流式细胞术测定γδT细胞中细胞因子Perforin、IFN-γ和TNF-α的表达情况;采用异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)联合IL-2刺激扩增CBMC中γδT细胞,比较早产儿和足月儿γδT细胞的扩增效率。结果早产儿γδT细胞在CBMC中的数量及比例较足月儿明显减少;流感病毒刺激后,早产儿和足月儿γδT细胞的Perforin、IFN-γ和TNF-α的表达都有显著升高,但早产儿倍增幅度明显不及足月儿;经IPP和IL-2联合刺激后,脐带血中γδT细胞都有所增殖,但早产儿的扩增效率明显低于足月儿。结论早产儿γδT细胞存在数量及功能的不足,这可能是造成早产儿更易患感染性疾病的重要因素之一。 展开更多

关键词 脐带血 ΓΔT细胞 细胞因子 增殖

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成都地区无偿献血者HCV基因型分布 被引量：3

9

作者 万浬科 赵欣 +4 位作者 洪缨 李书平 傅雪梅 王天霜 巩天祥 《中国输血杂志》 CAS 北大核心 2016年第12期1380-1384,共5页

目的研究成都地区献血者人群HCV感染的基因型分布。方法从血液筛查出的抗-HCV反应性血清标本中提取HCV RNA,RT-PCR获得HCV核酸C区及NS5B区序列片段,用MEGA软件构建序列进化树,分析HCV的亚型分布特征及可能的原因。结果对313例HCV RNA阳... 目的研究成都地区献血者人群HCV感染的基因型分布。方法从血液筛查出的抗-HCV反应性血清标本中提取HCV RNA,RT-PCR获得HCV核酸C区及NS5B区序列片段,用MEGA软件构建序列进化树,分析HCV的亚型分布特征及可能的原因。结果对313例HCV RNA阳性标本分型结果如下,1b亚型283例,2a亚型14例,3b亚型7例,3a亚型3例,6a亚型5例,6u亚型1例;4和5基因型没有发现。结论在成都地区献血者人群感染的HCV中共有6个亚型分布。其中1b是绝对优势亚型,占90.41%(283/313);6u亚型在成都地区首次被检测到。 展开更多

关键词 HCV 基因型 分布

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保存期内红细胞内皮型一氧化氮合成酶mRNA表达的变化 被引量：3

10

作者 陈雪 周昌华 +1 位作者 洪缨 巩天祥 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期481-483,共3页

本研究鉴定红细胞中有无内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)mRNA,探讨在4℃保存条件下红细胞中的eNOS mRNA随保存时间变化的规律。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和基因测序方法检测库存红细胞中有无eNOS mRNA的表达,采用实时荧光定量-聚合酶... 本研究鉴定红细胞中有无内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)mRNA,探讨在4℃保存条件下红细胞中的eNOS mRNA随保存时间变化的规律。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和基因测序方法检测库存红细胞中有无eNOS mRNA的表达,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(real time PCR)检测库存红细胞中eNOS mRNA的表达随时间变化的规律。结果表明:红细胞中eNOS mRNA检测结果呈阳性;保存1周的红细胞中eNOS mRNA含量为新鲜红细胞的0.868±0.119,保存2周为0.379±0.289,3周为0.108±0.134,4周为0.141±0.141,5周为0.125±0.12。结论:在红细胞中检测到eNOS mRNA;随着保存时间延长红细胞中eNOS mRNA含量逐渐下降,保存3周后eNOS mRNA表达量维持在一个低浓度水平。 展开更多

关键词 红细胞 一氧化氮合成酶 一氧化氮合成酶mRNA

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青海省同德县莱姆病血清流行病学调查分析 被引量：4

11

作者 姜双应 易虎 +3 位作者 巩天祥 杨维成 李红 贾月萍 《青海医药杂志》 2001年第12期51-52,共2页

关键词 莱姆病 血清流行病学调查 同德

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小鼠β防御素2、3融合基因载体构建及其抗流感病毒作用 被引量：2

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作者 张强 李明远 +6 位作者 丰锋 巩天祥 李婉宜 刘冯欢 冯艳 邝玉 王保宁 《西部医学》 2010年第3期396-399,共4页

目的构建mBD2与mBD3融合基因的真核表达载体,检测其在MDCK细胞中的表达情况,并探讨其抗病毒特性。方法利用PCR方法分别扩增mBD2与mBD3基因片段,通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将mBD2与mBD3通过一段多肽接头Gly4Ser连接为融合基因mBD2与m... 目的构建mBD2与mBD3融合基因的真核表达载体,检测其在MDCK细胞中的表达情况,并探讨其抗病毒特性。方法利用PCR方法分别扩增mBD2与mBD3基因片段,通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将mBD2与mBD3通过一段多肽接头Gly4Ser连接为融合基因mBD2与mBD3。将该融合基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+)获得重组质粒pcDNA3.1(+)/mBD2-mBD3,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,用脂质体转染MDCK细胞,通过免疫荧光检测融合蛋白表达情况,最后采用CCID50测定并分析抗流感病毒作用。结果经鉴定后证实,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2-mBD3正确,该重组质粒能在MDCK细胞中稳定表达,CCID50实验结果说明有较好的抗流感活性。结论本研究成功构建mBD2-mBD3融合基因的真核表达质粒,并证实其融合蛋白能在MDCK细胞中稳定表达,该结果为进一步研究防御素抗病毒机制奠定了坚实的基础。 展开更多

关键词 Β防御素 甲型流感病毒 融合基因 重叠延伸PCR 免疫荧光

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成都地区女性献血者HLA抗体分布 被引量：2

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作者 徐研 洪缨 +6 位作者 万浬科 巩天祥 黄锦江 胥天宇 陈伯仁 刘胡敏 马婧 《中国输血杂志》 CSCD 北大核心 2014年第9期943-945,共3页

目的筛查女性献血者HLA-Ⅰ/Ⅱ抗体,了解成都地区女性献血者HLA抗体阳性率。方法 2013年2月～2014年1月随机选取女性献血者298名献血者标本,采用HLA抗体筛查试剂盒,检测HLAⅠ/Ⅱ抗体。结果筛查出阳性献血者74名（24.83%）,其中HLA-Ⅰ单... 目的筛查女性献血者HLA-Ⅰ/Ⅱ抗体,了解成都地区女性献血者HLA抗体阳性率。方法 2013年2月～2014年1月随机选取女性献血者298名献血者标本,采用HLA抗体筛查试剂盒,检测HLAⅠ/Ⅱ抗体。结果筛查出阳性献血者74名（24.83%）,其中HLA-Ⅰ单阳58人（19.46%）,HLA-Ⅱ单阳7人（2.35%）,双阳9人（3.02%）。电话回访65名献血者,均有妊娠史,怀孕1次7人,2次21人,3次及以上36人,其中3人有输血史。结论成都地区女性献血者HLA阳性率与部分地区报道一致,HLA抗体阳性构成比随怀孕次数增加而呈上升趋势。筛查有妊娠史女性单采血小板献血者HLA抗体十分必要。 展开更多

关键词 HLA抗体 TRALI

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青海省2005年-2006年度流感监测分析 被引量：2

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作者 巩天祥 李红 卢囡囡 《青海医药杂志》 2007年第12期65-66,共2页

目的:掌握我省每年流感活动的规律。方法:采用全球流感监测网络实验室通用方法。主要的研究内容为流感样病例的监测、病毒分离。结果:从采集的732份咽拭子标本中分离到流感病毒45株,其中甲1型8株,甲3型17株,乙型Victoria系20株。结论:... 目的:掌握我省每年流感活动的规律。方法:采用全球流感监测网络实验室通用方法。主要的研究内容为流感样病例的监测、病毒分离。结果:从采集的732份咽拭子标本中分离到流感病毒45株,其中甲1型8株,甲3型17株,乙型Victoria系20株。结论:每年都有程度不等的流感流行,2005年—2006年我省流行的优势毒株为乙型Vic-toria系B/浙江/2/2002类似株。不同年份流感流行的病毒亚型不同,人群流感抗体水平与上一年度流感流行的病毒亚型及强度密切相关,型别转换后易发生局部暴发流行。 展开更多

关键词 流感监测 病毒分离 流感样病例

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谷氨酸对视神经脑膜上皮细胞的兴奋性毒性作用及其氧化应激机制 被引量：3

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作者 辛晓蓉 巩天祥 +1 位作者 洪缨 党鸿 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期432-437,共6页

背景作为脑脊液－视神经屏障的主要细胞成分，视神经脑膜上皮细胞（MECs）直接与脑脊液相接触，脑脊液中的组分改变可影响MECs的功能，进而对视神经的功能产生不利影响。 目的探讨脑脊液中兴奋性神经递质谷氨酸对MECs功能的影响，为视... 背景作为脑脊液－视神经屏障的主要细胞成分，视神经脑膜上皮细胞（MECs）直接与脑脊液相接触，脑脊液中的组分改变可影响MECs的功能，进而对视神经的功能产生不利影响。 目的探讨脑脊液中兴奋性神经递质谷氨酸对MECs功能的影响，为视神经疾病发病机制的研究提供新的线索。方法将培养的人MECs株制备成悬液并接种于96孔培养板中，密度为1×104/孔，分别在培养液中用添加100、200、400、600、800和1 000 μmol/L谷氨酸孵育12、24、36、48和72 h，未添加谷氨酸者作为正常对照组，采用MTS法测定各组MECs的增生率（吸光度A490）值。采用600 μmol/L谷氨酸分别孵育MECs 24 h和48 h，未添加谷氨酸者作为正常对照组，采用实时定量PCR法检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）mRNA和热休克蛋白90（HSP90）mRNA的相对表达量；采用ELISA法检测细胞的总抗氧化能力（T-AOC），并通过荧光探针DCFH-DA观察细胞活性氧（ROS）的荧光强度。结果培养MECs生长良好，培养后72 h约80%细胞达到融合。不同浓度谷氨酸培养组随着谷氨酸浓度的增加及作用时间的延长细胞增生率逐渐下降，总体比较差异均有统计学意义（F浓度＝52.501，P〈0.001；F时间＝8.505，P〈0.001）。实验后24 h和48 h谷氨酸处理组细胞中SOD mRNA相对表达量均明显低于同时间点正常对照组，差异均有统计学意义（t＝20.278、t＝16.724，均P〈0.001）；谷氨酸作用MECs后24 h细胞中HSP90 mRNA相对表达量明显高于正常对照组，差异有统计学意义（t＝5.065，P＝0.002）。实验后24 h谷氨酸处理组细胞中T-AOC活性为（30.835±2.094）nmol/（min·L），低于正常对照组的（32.873±2.317）nmol/（min·L），但差异无统计学意义（t＝1.599，P＝1.414）；实验后48 h谷氨酸处理组细胞中T-AOC活性为（29.561±1.831）nmol/（min·L），低于正常对照组的（33.680±2.039）nmol/（min·L 展开更多

关键词 谷氨酸 脑膜上皮细胞 视神经 氧化应激反应 兴奋性氨基酸/毒性作用 细胞增生/药物作用 人 培养细胞

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缺氧对脑脊液-视神经屏障中脑膜上皮细胞内质网和线粒体膜电位的影响 被引量：3

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作者 辛晓蓉 巩天祥 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第11期1009-1012,共4页

目的探讨脑膜上皮细胞(meningothelial cells,MECs)参与视神经疾病的发病机理,研究缺氧对MECs功能变化的影响。方法将培养的MECs分别在体积分数21%O2(对照组)和体积分数1%O2(缺氧组)环境下孵育1 d和2 d,采用酶联免疫吸附实验测定和比较M... 目的探讨脑膜上皮细胞(meningothelial cells,MECs)参与视神经疾病的发病机理,研究缺氧对MECs功能变化的影响。方法将培养的MECs分别在体积分数21%O2(对照组)和体积分数1%O2(缺氧组)环境下孵育1 d和2 d,采用酶联免疫吸附实验测定和比较MECs的总抗氧化能力(total anti-oxidative capacity,T-AOC);采用MitoTracker Red检测和比较MECs在正常氧和缺氧环境下作用2 d的线粒体膜电位的变化;通过测定钙联蛋白的荧光染色,以评价MECs暴露于氧化应激环境后对内质网功能的影响。结果与对照组相比,缺氧组的氧化应激能力降低,结果显示T-AOC下降。对照组和缺氧组细胞分别培养1 d后,细胞中T-AOC分别为(0.012 4+0.001 1)U·L-1和(0.011 9+0.009 0)U·L-1,差异无统计学意义(t=0.915、P=0.382)。分别培养2 d后,缺氧组细胞中T-AOC(0.010 7+0.008 3)U·L-1低于对照组(0.012 9+0.008 7)U·L-1,差异有统计学意义(t=4.616、P=0.001)。不同氧环境作用于细胞2 d后,采用共焦显微镜荧光探针方法分析作用于对照组和缺氧组的MECs线粒体膜电位的变化,结果发现缺氧组细胞荧光强度与对照组相比明显减低;同时通过荧光显微镜观察发现,缺氧组MECs钙联蛋白绿色荧光强度较对照组明显增强。结论缺氧通过影响MECs内质网及线粒体功能而影响其氧化应激能力。 展开更多

关键词 缺氧 脑膜上皮细胞 内质网 线粒体膜电位 钙联蛋白 脑脊液-视神经屏障

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一例稀有血型JK(a-b-)表型家系调查分析 被引量：1

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作者 巩天祥 洪缨 周昌华 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期1005-1009,共5页

本研究旨在检测Kidd血型系统的稀有JK(a-b-)表型的先证者及其家系中其他个体的表型及基因型,探讨本例JK(a-b-)表型的分子机理,分析遗传背景,为稀有血型个体输血治疗寻找相合供者提供科学依据。采用4 mol/L尿素溶血试验,筛选JK(a-b-)表... 本研究旨在检测Kidd血型系统的稀有JK(a-b-)表型的先证者及其家系中其他个体的表型及基因型,探讨本例JK(a-b-)表型的分子机理,分析遗传背景,为稀有血型个体输血治疗寻找相合供者提供科学依据。采用4 mol/L尿素溶血试验,筛选JK(a-b-)表型先证者,并对其进行家系调查。用血清学方法确认表型;用PCR-SSP方法检测基因型,并对JK基因外显子4-11及其侧翼的区域扩增后测序,分析序列信息。结果表明,先证者及其哥哥具有相同的表型JK(a-b-)和基因型Jkb/Jkb;其父母的表型为JK(a+b-),基因型为Jka/Jkb;妹妹的表型和基因型分别为JK(a+b-)和Jka/Jka。对外显子及其侧翼测序发现,先证者及其哥哥的内含子5的3'端拼接接受位点碱基g>a突变,其父母的该位点均为a/g杂合,其妹妹的该位点没有突变;内含子3(外显子4侧翼)nt-99位的碱基为g,其父母的该位点均为g/a杂合,其妹妹的该位点是a。结论:先证者及其哥哥具有相同的表型JK(a-b-)和基因型Jkb/Jkb,JK基因内含子5的3'端拼接接受位点的g>a突变可能是造成其JK(a-b-)表型的原因之一;家系中内含子3的nt-99位的碱基也具有多态性(ncbi:rs8090908),该位点多态性是否与JK(a-b-)表型相关值得进一步研究。本例家系Kidd血型系统符合显性遗传规律。对于稀有JK(a-b-)表型个体的家系,尤其是同胞兄妹进行血型调查,发现表型和基因型均相同的个体可能性大。 展开更多

关键词 JK(a—b-)表型 基因型 家系调查

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小鼠阴道疱疹感染与Fas蛋白粘膜上皮细胞中的表达 被引量：1

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作者 巩天祥 尹少甫 《医学动物防制》 2005年第2期83-86,共4页

目的　探讨HSV 2小鼠阴道粘膜面感染后的病理变化和诱导粘膜上皮细胞凋亡的表现,以及Fas蛋白的表达与细胞凋亡的相关关系,有助于阐明HSV 2感染后病毒与细胞相互作用的分子机理,为HSV 2病毒 感染疾病的诊断、治疗提供一定的实验和理论... 目的　探讨HSV 2小鼠阴道粘膜面感染后的病理变化和诱导粘膜上皮细胞凋亡的表现,以及Fas蛋白的表达与细胞凋亡的相关关系,有助于阐明HSV 2感染后病毒与细胞相互作用的分子机理,为HSV 2病毒 感染疾病的诊断、治疗提供一定的实验和理论依据。方法将HSV 2接种于小鼠阴道,建立HSV 2阴道粘膜面直接感染动物模型,分不同天数处死,取其阴道固定于10%福尔马林。用HE染色、TUNEL染色研究HSV 2小鼠阴 道粘膜面感染后的病理变化和诱导粘膜上皮细胞凋亡的表现,用免疫组化法研究Fas蛋白分子在阴道上皮细胞中 的表达水平,分析与细胞凋亡的相关关系。结果小鼠阴道HSV 2感染后的粘膜上皮细胞病理学改变为:22份标本 中同时伴有细胞坏死、炎症浸润及凋亡细胞阳性表达,标本中可达粘膜上皮的1/4区域。这些形态改变从实验感 染的第1天至第11天均可见到。小鼠阴道感染HSV 2后,Fas蛋白从感染第3天起可见到表达(22/24)。凋亡细 胞指数与Fas阳性细胞指数呈正相关(r=0.9660,P<0.05)。结论HSV 2直接感染小鼠阴道后可同时引起炎症、 细胞溶解性坏死及诱导阴道上皮细胞凋亡。HSV 2感染小鼠阴道后阴道上皮细胞Fas分子呈高表达,与凋亡细胞 指数呈正相关,提示Fas对HSV 2诱导的粘膜细胞凋亡起上调作用;可进一步研究作为阴? 展开更多

关键词 HSV-2 小鼠 粘膜上皮细胞 FAS蛋白 阴道粘膜 感染后 阴道上皮细胞 病理变化 诱导 实验感染

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体外扩增的Vγ9Vδ2T细胞抗H1N1流感病毒效应的研究 被引量：1

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作者 冯婷 巩天祥 +3 位作者 吴啟洪 朱婷婷 陶于洪 李虹 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期553-558,共6页

目的探讨帕米磷酸钠（PAM）体外扩增培养的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞对感染流感病毒H1N1的人肺上皮细胞A549的细胞毒效应。方法 PAM和IL-2联合刺激培养健康成人外周血单个核细胞（PBMC）10~14 d,免疫磁珠分选法纯化得到Vγ9Vδ2 T细胞,再... 目的探讨帕米磷酸钠（PAM）体外扩增培养的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞对感染流感病毒H1N1的人肺上皮细胞A549的细胞毒效应。方法 PAM和IL-2联合刺激培养健康成人外周血单个核细胞（PBMC）10~14 d,免疫磁珠分选法纯化得到Vγ9Vδ2 T细胞,再将Vγ9Vδ2 T细胞与感染流感病毒的A549细胞按不同的效靶比（E∶T）接触共育或按E∶T=20∶1非接触共育6 h。流式细胞分析术检测A549的存活率及Vγ9Vδ2 T细胞穿孔素（perforin）的表达情况,收集培养上清检测流感病毒的滴度,提取培养上清及A549细胞的总RNA,实时荧光定量检测流感病毒基质蛋白M1基因的表达情况。结果 PAM在体外能有效活化并扩增Vγ9Vδ2 T细胞。Vγ9Vδ2 T细胞对感染流感病毒的A549细胞具有较强的杀伤作用,且随E∶T的升高而增大,在E∶T=20∶1时,Vγ9Vδ2 T细胞能杀伤60%的感染了流感病毒的A549细胞。接触共育组的A549细胞杀伤率明显高于非接触共育组（P〈0.05）。Vγ9Vδ2 T细胞经流感病毒感染后Perforin的表达明显上调。接触共育组的病毒复制也明显受到抑制（P〈0.05）。结论 PAM刺激扩增的Vγ9Vδ2 T细胞能有效杀伤感染流感病毒的人肺上皮细胞A549,其效应机制依赖于两者细胞间的接触。 展开更多

关键词 Vγ9Vδ2T细胞 帕米磷酸钠 流感病毒 A549细胞

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视神经脑膜上皮细胞研究进展 被引量：1

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作者 辛晓蓉 巩天祥 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第10期984-986,992,共4页

目前视神经疾病基础研究的热点大多侧重于神经胶质细胞、视网膜神经节细胞上,而对于包绕视神经的脑膜以及覆盖视神经脑膜的主要细胞成分——脑膜上皮细胞在视神经疾病中作用的研究甚少。脑膜上皮细胞直接与脑脊液相接触,在脑脊液和视神... 目前视神经疾病基础研究的热点大多侧重于神经胶质细胞、视网膜神经节细胞上,而对于包绕视神经的脑膜以及覆盖视神经脑膜的主要细胞成分——脑膜上皮细胞在视神经疾病中作用的研究甚少。脑膜上皮细胞直接与脑脊液相接触,在脑脊液和视神经之间参与屏障的形成,在保持屏障完整性上发挥重要作用。视神经脑膜上皮细胞在各种应激下可能发生结构和功能变化,从而影响脑脊液和视神经之间屏障的正常生理作用,可能成为导致视神经疾病的机制之一。本文综述了脑膜上皮细胞在维持脑脊液和视神经屏障中作用的最新研究进展,为进一步研究视神经疾病提供理论基础。 展开更多

关键词 视神经 脑膜上皮细胞 脑脊液

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