为了解睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonastestosteroni,C.testosteroni)ATCC11996的激素降解原理,研究了睾丸酮丛毛单胞菌中三种调控蛋白LysR familytranscriptionalregulator、LuxR family transcriptional regulator、TetR family transcrip...为了解睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonastestosteroni,C.testosteroni)ATCC11996的激素降解原理,研究了睾丸酮丛毛单胞菌中三种调控蛋白LysR familytranscriptionalregulator、LuxR family transcriptional regulator、TetR family transcriptional regulator(LysR、LuxR、TetR)对短链脱氢酶Short-chain dehydrogenase/reductase(SDRx)的生物学作用。SDRx作为SDR家族中的一员对甾体激素降解具有重要作用,利用基因同源重组及移码突变原理构建SDRx敲除株,并检测其在五种不同甾体激素培养条件下降解量,基因敲除对甾体激素降解能力影响程度为睾丸酮>甲睾酮>孕酮>雌酮>雌二醇;构建SDRx蛋白表达载体并进行原核表达,得到纯化目的蛋白浓度116.66μg/mL;制备特异性小鼠多克隆抗体,ELISA方法测定抗体效价为1∶8000;分别构建了含有三种调控蛋白与SDRx启动子共转化菌株,用ELISA方法检测了其SDRx的表达量,LuxR和TetR调控蛋白在两种激素条件下对SDRx脱氢酶的表达起到促进作用,且睾丸酮诱导条件下的促进作用尤为显著,其中睾丸酮条件下TetR的促进作用更明显大于LuxR。展开更多
文摘为了解睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonastestosteroni,C.testosteroni)ATCC11996的激素降解原理,研究了睾丸酮丛毛单胞菌中三种调控蛋白LysR familytranscriptionalregulator、LuxR family transcriptional regulator、TetR family transcriptional regulator(LysR、LuxR、TetR)对短链脱氢酶Short-chain dehydrogenase/reductase(SDRx)的生物学作用。SDRx作为SDR家族中的一员对甾体激素降解具有重要作用,利用基因同源重组及移码突变原理构建SDRx敲除株,并检测其在五种不同甾体激素培养条件下降解量,基因敲除对甾体激素降解能力影响程度为睾丸酮>甲睾酮>孕酮>雌酮>雌二醇;构建SDRx蛋白表达载体并进行原核表达,得到纯化目的蛋白浓度116.66μg/mL;制备特异性小鼠多克隆抗体,ELISA方法测定抗体效价为1∶8000;分别构建了含有三种调控蛋白与SDRx启动子共转化菌株,用ELISA方法检测了其SDRx的表达量,LuxR和TetR调控蛋白在两种激素条件下对SDRx脱氢酶的表达起到促进作用,且睾丸酮诱导条件下的促进作用尤为显著,其中睾丸酮条件下TetR的促进作用更明显大于LuxR。
