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第三代慢病毒高效率包装系统的建立 被引量：21
1
作者 张磊 刘庆友 +4 位作者 胡天 张晓溪 崔奎青 陆凤花 石德顺 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期326-330,共5页
慢病毒介导法是最有前途的转基因动物生产方法之一,高滴度慢病毒颗粒的包装是慢病毒转基因动物技术的关键。本研究应用含有增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP)的第3代慢病毒载体系统,用脂质体转染法将慢病毒系统4质粒共转染293T包装细胞,培... 慢病毒介导法是最有前途的转基因动物生产方法之一,高滴度慢病毒颗粒的包装是慢病毒转基因动物技术的关键。本研究应用含有增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP)的第3代慢病毒载体系统,用脂质体转染法将慢病毒系统4质粒共转染293T包装细胞,培养48～72h收集病毒上清液,通过超速离心进行浓缩,采用批量快速测定法(LaSRT)测定病毒滴度。结果显示,用脂质体转染法包装的慢病毒能成功地感染293T细胞,经检测病毒滴度达到5×108IU/mL以上,初步建成了高滴度慢病毒包装平台,为慢病毒介导制作转基因动物奠定了良好的研究基础。 展开更多
关键词 慢病毒 病毒包装 转基因动物
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沼泽型水牛CYP19A1基因克隆、序列分析及组织表达研究 被引量：13
2
作者 苏节 刘庆友 +3 位作者 朱鹏 沈开元 石德顺 崔奎青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期514-521,共8页
旨在对沼泽型水牛CYP19A1基因进行克隆、生物信息学分析及对其在水牛组织的表达规律进行系统的探索。根据GenBank已公布的牛CYP19A1基因序列,设计特异性引物应用RT-PCR方法扩增克隆获得目的基因片段;应用生物信息学方法,分析和预测了水... 旨在对沼泽型水牛CYP19A1基因进行克隆、生物信息学分析及对其在水牛组织的表达规律进行系统的探索。根据GenBank已公布的牛CYP19A1基因序列,设计特异性引物应用RT-PCR方法扩增克隆获得目的基因片段;应用生物信息学方法,分析和预测了水牛CYP19A1的理化性质、蛋白质二级及三级结构;应用QRT-PCR技术对CYP19A1在水牛组织的表达进行了差异分析。测序结果表明:水牛CYP19A1基因的编码区全长1 512bp,共编码503个氨基酸。多重序列比较分析显示水牛CYP19A1核苷酸序列与牛、绵羊、猪、人、马相应序列相似性分别为99%、98%、91%、86%和84%,结合系统进化树分析结果推测,CYP19A1基因在不同物种以及进化的过程中具有高度保守性。定量分析结果显示:水牛CYP19A1在水牛垂体、大脑、肝脏、骨骼、卵巢、肌肉和心脏组织具有不同程度的表达,其中垂体和大脑表达量最高,骨骼和卵巢次之,肌肉表达最低。本研究成功地克隆了沼泽型水牛CYP19A1基因并研究了其在不同水牛组织中的表达规律,为阐明其在水牛性腺中参与的激素合成转化规律等研究奠定了理论基础。 展开更多
关键词 水牛 CYP19A1 克隆分析 表达模式
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线粒体DNA在家畜遗传多样性研究中的应用 被引量：9
3
作者 崔奎青 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第6期59-63,共5页
近年来动物线粒体DNA在遗传进化学方面的研究成为分子进化遗传学领域的研究热点,线粒体基因组已成为分子遗传学和系统进化的一个重要模式。作者就动物线粒体DNA的研究及其在家畜遗传多样性研究中的应用作一简要综述。
关键词 线粒体DNA 多态性 进化
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卵泡液外泌体miRNA对颗粒细胞糖酵解途径介导多囊卵巢综合征患者卵泡发育的影响及其作用机制
4
作者 曹建平 张家宁 +3 位作者 单会荃 刘宣 苏杰 崔奎青 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第2期160-165,171,共7页
目的 评价卵泡液(follicular fluid,FF)外泌体miRNA对颗粒细胞(granulosa cells,GCs)糖酵解途径介导的多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者卵泡发育的影响,并探讨其作用机制。方法 招募3名PCOS不孕患者和3名非PCOS不孕... 目的 评价卵泡液(follicular fluid,FF)外泌体miRNA对颗粒细胞(granulosa cells,GCs)糖酵解途径介导的多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者卵泡发育的影响,并探讨其作用机制。方法 招募3名PCOS不孕患者和3名非PCOS不孕患者,测定2组患者在促排卵前的基线激素水平,通过短效长方案促排卵并穿刺取双侧FF,超速离心法收集外泌体,采用透射电镜进行鉴定。Trizol法提取外泌体总RNA,构建文库,进行miRNA测序及质控处理后,与参考基因组GRCh38进行比对。利用聚类Profiler R包进行差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)的GO注释分析和KEGG通路分析。应用Omnipath数据库对miRNA进行互作分析。随机抽取16个miRNA,通过qPCR检测,验证miRNA测序结果的准确性。结果 与非PCOS组比较,PCOS组的黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、抗缪勒管激素(anti-Mullerian hormone,AMH)、睾酮(testosterone)、窦卵泡数显著高于非PCOS组(t=2.479~9.163,P均<0.05)。2组FF外泌体边缘均清晰,中央淡染的杯口状囊泡,直径为100~150 nm,结构完整,外泌体浓度约为8×10^(10)particles/mL。miRNA测序共检测到928个miRNA,与非PCOS组比较,POCS组外泌体中共筛选出59个差异miRNA(DEmiRNA),其中31个上调,28个下调,且qPCR法检测的基因表达差异趋势与miRNA测序结果高度相似。在PCOS患者FF外泌体中,通过miRNA调控mRNA,可显著改变GCs糖酵解效率和细胞凋亡状态。PKM、PFKL、HK2是miRNA调节GCs糖酵解的关键靶基因,SLC2A1是miRNA调节GCs凋亡的关键靶基因。结论 PCOS患者FF外泌体miRNA可使GCs糖酵解减弱,并加速其凋亡,从而减少ATP及乳酸的产生,导致卵泡发育障碍。 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征 卵泡液 外泌体 MIRNA 颗粒细胞 糖酵解途径
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水牛BMP1基因对颗粒细胞增殖与凋亡的功能研究 被引量：6
5
作者 雷小灿 张海航 +3 位作者 崔奎青 刘福航 刘庆友 石德顺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1766-1774,共9页
本研究旨在探讨BMP1基因对体外培养水牛颗粒细胞增殖与凋亡的影响,采用qRT-PCR检测体外培养0、24、48、72和96h水牛颗粒细胞中BMP1基因的表达规律,通过在水牛颗粒细胞培养液中添加BMP1基因重组蛋白和抗BMP1抗体,观察其对体外培养水牛颗... 本研究旨在探讨BMP1基因对体外培养水牛颗粒细胞增殖与凋亡的影响,采用qRT-PCR检测体外培养0、24、48、72和96h水牛颗粒细胞中BMP1基因的表达规律,通过在水牛颗粒细胞培养液中添加BMP1基因重组蛋白和抗BMP1抗体,观察其对体外培养水牛颗粒细胞增殖变化的影响,并应用qRT-PCR和Western blotting方法检测与细胞增殖和细胞凋亡相关因子表达的变化规律。结果显示,随着颗粒细胞体外培养时间的延长,BMP1基因的相对表达量显著上调(P<0.05),96h培养组BMP1表达最高。添加BMP1重组蛋白可显著促进水牛颗粒细胞的体外增殖(P<0.05),并能够显著上调细胞周期关键蛋白Cyclin D1、Cyclin D2和PCNA mRNA表达水平(P<0.05),同时显著抑制了细胞凋亡信号通路中促凋亡相关因子(Fas、FasL、TNFR1、TNF-α、Cytochrome C、Apaf1、Chop、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9)mRNA表达(P<0.05)。Western blotting检测结果表明,BMP1重组蛋白能够抑制Fas、Bax和Caspase-9蛋白表达,蛋白与mRNA表达一致。而添加抗BMP1抗体的试验则得出相反的结果。综上表明,BMP1基因能通过调控相关基因的表达促进体外培养水牛颗粒细胞的增殖并抑制其凋亡,在水牛卵泡发生过程中具有重要的调控功能,为阐明BMP1基因参与家畜卵泡发生的分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 BMP1基因 水牛 颗粒细胞 增殖 凋亡
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沼泽型水牛NANOG基因5′调控序列克隆与功能分析 被引量：6
6
作者 崔奎青 张会娜 +4 位作者 刘帅 刘晓华 杨素芳 刘庆友 石德顺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期387-394,共8页
为探讨沼泽型水牛NANOG基因的表达调控模式,本研究扩增克隆了广西本地沼泽型水牛NANOG基因的5′调控序列片段,设计了-1 213、-745、-425和-312bp 4个缺失体片段,分别构建成EGFP报告载体。应用显微注射报告载体生产转基因水牛和猪胚胎,... 为探讨沼泽型水牛NANOG基因的表达调控模式,本研究扩增克隆了广西本地沼泽型水牛NANOG基因的5′调控序列片段,设计了-1 213、-745、-425和-312bp 4个缺失体片段,分别构建成EGFP报告载体。应用显微注射报告载体生产转基因水牛和猪胚胎,并转染水牛胎儿成纤维细胞。结果发现,EGFP的表达仅限于水牛囊胚内细胞团。各缺失体在猪4.5d胚胎中均能启动下游EGFP的表达,转录活性两两之间差异均极显著,按活性从大到小依次为-745、-425、-1 213和-312bp。各缺失体报告载体转染水牛成纤维细胞48h后均可见少数细胞发光,其中-425bp活性极显著高于其他缺失体,-1 213与-745bp之间无显著差异,二者均极显著高于-312bp。以上结果说明,水牛NANOG基因翻译起始位点上游-1 213bp在水牛囊胚中可以调控NANOG在内细胞团中的特异性表达;-1 213～-745bp含有多能细胞特异性的抑制子元件;-745～-425bp含有多能性细胞特异性的增强子元件;-425～-312bp含有非多能细胞特异性的增强子元件。 展开更多
关键词 沼泽型水牛 NANOG 调控序列 克隆
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微卫星标记分析广西水牛遗传多样性 被引量：3
7
作者 崔奎青 刘庆友 +4 位作者 李秀林 黄银花 王志强 石德顺 李宁 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2008年第1期1-6,共6页
为研究广西沼泽型水牛(Bubalus bubalis)核基因组的多态性,采用23对荧光标记微卫星引物,对随机抽取的60个广西本地水牛样本进行了PCR检测。结果表明,23对引物中,有19对可以获得特异性产物且存在多态,平均有效等位基因数为4.0189,基因座I... 为研究广西沼泽型水牛(Bubalus bubalis)核基因组的多态性,采用23对荧光标记微卫星引物,对随机抽取的60个广西本地水牛样本进行了PCR检测。结果表明,23对引物中,有19对可以获得特异性产物且存在多态,平均有效等位基因数为4.0189,基因座ILSTS086含有13个等位基因;各微卫星基因座的平均杂合度变化范围为0.1852~0.4722,ILSTS019基因座平均杂合度最高(0.4722),而ILSTS017平均杂合度最低(0.1852);群体基因平均多态信息含量(PIC)为0.6639,19个标记中有18个PIC大于0.5,属高度多态位点。 展开更多
关键词 微卫星 水牛 遗传多样性
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水牛抑制素α亚基基因的克隆与原核表达 被引量：4
8
作者 谢体三 农微 +3 位作者 张新民 黄雅琼 崔奎青 石德顺 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第8期14-17,共4页
采用RT-PCR方法从水牛卵巢总RNA中扩增抑制素α亚基基因,并克隆入pMD18-T载体,进行PCR、双酶切及测序鉴定。序列分析结果表明:水牛抑制素α亚基基因编码序列长为1083 bp,编码360个氨基酸,与牛、人、猪抑制素α亚基基因CDS成熟蛋白氨基... 采用RT-PCR方法从水牛卵巢总RNA中扩增抑制素α亚基基因,并克隆入pMD18-T载体,进行PCR、双酶切及测序鉴定。序列分析结果表明:水牛抑制素α亚基基因编码序列长为1083 bp,编码360个氨基酸,与牛、人、猪抑制素α亚基基因CDS成熟蛋白氨基酸的同源性分别为96%、80%、87%,表明抑制素α亚基是一组在进化上高度保守的蛋白质。将水牛抑制素α亚基基因CDS克隆到pET-30a表达载体中,转化宿主菌BL21(DE3)进行原核表达。在1 mmol/L IPTG中,37℃诱导表达4 h后抑制素α亚基基因重组蛋白可成功获得表达。将表达产物进行SDS-PAGE分析,结果表达产物主要以包涵体形式存在,分子质量约为40 ku。 展开更多
关键词 抑制素α亚基 水牛 原核表达
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关中奶山羊PIS区域序列多态性分析 被引量：5
9
作者 侯策 粟小平 +3 位作者 王起恬 崔奎青 石德顺 刘庆友 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第12期3554-3562,共9页
山羊无角性状是畜牧业生产中重要的经济性状,报道显示山羊无角间性综合征(polled intersex syndrome,PIS)控制着山羊的无角和间性性状。山羊PIS序列定位于1号染色体约11.7kb的序列上,试验旨在研究这段序列对关中奶山羊(3只有角山羊、3... 山羊无角性状是畜牧业生产中重要的经济性状,报道显示山羊无角间性综合征(polled intersex syndrome,PIS)控制着山羊的无角和间性性状。山羊PIS序列定位于1号染色体约11.7kb的序列上,试验旨在研究这段序列对关中奶山羊(3只有角山羊、3只无角山羊)无角性状的影响。选用4对引物(PIS1-1、PIS1-2、PIS2、PIS3)扩增关中奶山羊的PIS序列,第5对引物(PIS whole)用于检测PIS序列的完全缺失,对测序结果进行拼接、多态性分析,并对序列进行基因注释。结果发现,试验成功扩增出山羊PIS的全长序列(12.814kb),BLAST比对结果正确。PIS whole引物没有扩增出任何条带,说明关中奶山羊中不存在11.7kb的完全缺失。经SeqMan软件分析拼接序列发现30个多态性位点,这些多态性位点可能与关中奶山羊有角/无角性状相关。对拼接序列进行基因注释,发现存在1个tRNA编码位点、2个微卫星、3个microRNA编码位点及L1-EN、RT-nLTR-like样保守结构域,并发现1个CpG岛、1对反向重复序列和2段串联重复序列。本试验结果对关中奶山羊无角性状的分子机理研究具有重要的参考价值。 展开更多
关键词 关中奶山羊 无角性状 无角间性综合征(PIS) 多态性 序列注释
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水牛黑色素皮质素1受体基因克隆、生物信息学分析及表达模式研究 被引量：5
10
作者 林宇纾 蒋恒洁 +3 位作者 杨丰硕 崔奎青 石德顺 刘庆友 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期2529-2537,共9页
本试验旨在对水牛黑色素皮质素1受体(MC1R)基因进行克隆、生物信息学分析及表达模式研究。参考牛MC1R基因(GenBank登录号:JN123363.1)序列设计引物,以本地沼泽水牛、白沼泽水牛、摩拉水牛和黄牛基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增克隆MC1... 本试验旨在对水牛黑色素皮质素1受体(MC1R)基因进行克隆、生物信息学分析及表达模式研究。参考牛MC1R基因(GenBank登录号:JN123363.1)序列设计引物,以本地沼泽水牛、白沼泽水牛、摩拉水牛和黄牛基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增克隆MC1R基因片段并进行测序分析。运用QRT-PCR方法检测摩拉水牛、沼泽水牛、白沼泽水牛和黄牛皮肤组织中MC1R基因的表达模式,并通过Western blotting方法检测沼泽水牛和白沼泽水牛MC1R基因的蛋白表达差异。结果表明,应用PCR方法成功克隆了水牛MC1R基因,其编码区全长954bp,共编码317个氨基酸。测序分析后发现沼泽水牛、白沼泽水牛、摩拉水牛和黄牛MC1R基因的核苷酸序列和氨基酸序列相似性很高。沼泽水牛与白沼泽水牛在476、618、881、930和931bp位点上分别发生T→C、G→C、G→A、G→A和A→G突变,导致了沼泽水牛和白沼泽水牛第159位氨基酸由丝氨酸变成苯丙氨酸,第310位氨基酸由谷氨酸变成丙氨酸,第294位氨基酸由天冬氨酸变成丙氨酸,发生了非同义突变。QRT-PCR结果发现,MC1R基因在摩拉水牛、沼泽水牛和黄牛皮肤组织中的相对表达量均显著高于白沼泽水牛(P<0.05);Western blotting分析结果显示,沼泽水牛皮肤组织中MC1R蛋白的表达量高于白沼泽水牛。综上所述,白沼泽水牛MC1R基因的编码区发生氨基酸位点突变,且相对表达量和蛋白表达量均低于沼泽水牛,推测此为白沼泽水牛体内合成的黑色素缺失而导致毛色白化的主因。 展开更多
关键词 水牛 MC1R基因 毛色 克隆 表达模式
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肉牛智慧养殖技术研究进展
11
作者 罗西尔 卢小龙 +1 位作者 刘庆友 崔奎青 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期661-671,共11页
肉牛智慧养殖技术是肉牛养殖业由粗放型向集约型转型升级的关键技术,在提升养殖效益及管理效率上发挥越来越重要的作用。国内肉牛养殖业面临着智能化设备利用率低、养殖场管理效率低、养殖成本偏高等产业突出问题。本文从肉牛个体识别... 肉牛智慧养殖技术是肉牛养殖业由粗放型向集约型转型升级的关键技术,在提升养殖效益及管理效率上发挥越来越重要的作用。国内肉牛养殖业面临着智能化设备利用率低、养殖场管理效率低、养殖成本偏高等产业突出问题。本文从肉牛个体识别技术、智慧表型采集技术、智慧发情鉴定技术、自动化饲喂技术、疾病检测技术、以及牛舍环境监测与清洁等6个方面概述了当前肉牛智慧养殖技术的研究进展和现状,阐述了关键技术的应用和原理,并对今后肉牛智慧养殖技术的发展进行了展望,以期为我国肉牛养殖智慧化发展提供参考。 展开更多
关键词 智慧养殖 肉牛 个体识别 行为监测 环境监测
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水牛卵泡不同发育阶段差异表达基因分析
12
作者 徐晓晛 蒋晗偲 +4 位作者 李志鹏 崔奎青 罗西尔 杨春艳 刘庆友 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期853-863,共11页
本研究旨在利用转录组测序技术探究摩拉水牛(Bubalus bubalis)发情期不同大小卵泡的基因表达谱,并进一步了解其对卵泡发育过程中相关激素的影响。通过对摩拉水牛进行Ovsynch法同期发情处理,B超检测卵泡大小并按照大、中、小3种类型(>... 本研究旨在利用转录组测序技术探究摩拉水牛(Bubalus bubalis)发情期不同大小卵泡的基因表达谱,并进一步了解其对卵泡发育过程中相关激素的影响。通过对摩拉水牛进行Ovsynch法同期发情处理,B超检测卵泡大小并按照大、中、小3种类型(>8 mm、4~7 mm、0~3 mm)区分,活体采集卵泡液后提取RNA送单细胞转录组测序。将获得的数据进行组间两两比较,以|log2fold change|≥1且P<0.05为标准筛选差异转录本,并取各组差异表达转录本并集共1473个转录本做表达趋势筛选,其中587个转录本符合牛卵泡发育过程中的转录调控规律,通过GO和KEGG富集分析并筛选得到了33条通路,各通路主要与细胞间相互作用、类固醇生成和激素产生、细胞分化和发育、细胞运动、代谢调节、生理适应性等过程相关。通过对通路上的基因进行蛋白质互作网络分析,进一步获得了可能影响水牛卵泡发育过程中激素调节的关键基因,如BAMBI、FST、INHA、INHBA、INHBB、GATA6和GFAP。综上,该研究结果为进一步探究水牛卵泡发育过程中的关键基因及可能的分子调控机制提供了参考。 展开更多
关键词 水牛(Bubalus bubalis) 卵泡大小 卵母细胞 激素调节 转录组测序
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影响兔胚胎细胞核移植效率的因素 被引量：3
13
作者 崔奎青 刘庆友 +2 位作者 谢英 韦精卫 石德顺 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1255-1259,共5页
对兔胚胎细胞核移植(NT)的有关影响因素进行了系统研究。结果发现电场强度100V·mm-1,脉冲时间15μs,电脉冲3～4次的融合率显著高于其它组(P<0.05);融合前激活卵母细胞,分裂率和囊胚率显著高于融合后激活(P<0.05);当用8～16-... 对兔胚胎细胞核移植(NT)的有关影响因素进行了系统研究。结果发现电场强度100V·mm-1,脉冲时间15μs,电脉冲3～4次的融合率显著高于其它组(P<0.05);融合前激活卵母细胞,分裂率和囊胚率显著高于融合后激活(P<0.05);当用8～16-细胞胚胎的卵裂球作供核时,卵裂率和囊胚率显著高于致密桑椹胚卵裂球为供核组;当重组胚在含3%发情牛血清(OCS)的TCM199中培养48h后,转入含10%FCS的TCM199中继续培养,卵裂率和囊胚率显著高于一直在3%OCS或10%胎犊血清(FCS)中培养的重组胚(P<0.05)。将22枚2～4-细胞期重组胚移入同期发情的受体母兔输卵管内,34d后产下NT仔兔1只。结果表明,电融合参数和供体胚胎的发育阶段以及受体卵母细胞的状态对NT效果有显著影响,在NT胚胎的不同发育阶段采用不同的血清种类和浓度可提高其胚胎发育能力。 展开更多
关键词 兔胚胎 移植效率 胚胎发育能力 卵母细胞 发育阶段 细胞核移植 囊胚率 重组胚 系统研究 电场强度 脉冲时间 同期发情 卵裂球 卵裂率 融合率 电脉冲 桑椹胚 牛血清 FCS OCS 细胞期 NT 电融合 激活 受体 母兔 仔兔 供体
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兔精液冷冻保存的研究 被引量：4
14
作者 陈玉 石德顺 +3 位作者 崔奎青 邹知明 潘红平 杨素芳 《黑龙江动物繁殖》 2007年第3期1-3,共3页
本试验采用不同的稀释液对兔精液进行冷冻保存,并比较了在稀释液中添加不同防冻剂以及平衡时间对兔精液冷冻保存效果的影响。结果表明:稀释液II稀释的精液,解冻后,精子活率明显高于稀释液I稀释的(P<0.01),其复苏率显著高于后者(P<... 本试验采用不同的稀释液对兔精液进行冷冻保存,并比较了在稀释液中添加不同防冻剂以及平衡时间对兔精液冷冻保存效果的影响。结果表明:稀释液II稀释的精液,解冻后,精子活率明显高于稀释液I稀释的(P<0.01),其复苏率显著高于后者(P<0.05)。以稀释液II为基础液,添加不同浓度(27.3%,15%,12%,9%)的DMSO对兔精液冷冻保存,结果解冻后精子活率以15%及12%两组较好,其中添加15%的优于12%的,但差异不显著(P>0.05)。选择不同种类的防冻(剂7%甘油与15%DMSO)比较时,发现7%甘油组解冻后精子活率明显低于15%DMSO组,二者差异极显著(P<0.01),其复苏率显著低于后者(P<0.05)。以15%DMSO作为防冻剂,采用不同的平衡时间在5℃平衡,结果发现平衡30 min和60 min的解冻后精子活率较好,但差异不显(著P>0.05),而90 min和120 min的冷冻效果较差。 展开更多
关键词 兔 精液冷冻 稀释液 抗冻剂 平衡时间
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影响水牛胎儿成纤维细胞转染效率的因素 被引量：4
15
作者 崔奎青 刘庆友 +2 位作者 汤刚彬 谢体三 石德顺 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2008年第19期16-19,共4页
实验对电穿孔法和阳离子脂质体法转染水牛胎儿成纤维细胞的条件进行了系统摸索,获得了较好的DNA转染参数。电穿孔法转染时脉冲时间为15ms,电场强度为40～50V/m时,细胞的死亡率处于20%～50%之间,比较适合外源DNA转入水牛胎儿成纤维细胞... 实验对电穿孔法和阳离子脂质体法转染水牛胎儿成纤维细胞的条件进行了系统摸索,获得了较好的DNA转染参数。电穿孔法转染时脉冲时间为15ms,电场强度为40～50V/m时,细胞的死亡率处于20%～50%之间,比较适合外源DNA转入水牛胎儿成纤维细胞。将脂质体与DNA的比例控制在8μL:2μg,可获得较高的转染率。相同培养条件下,脂质体法比电穿孔能获得更多的转基因抗性细胞集落,转染DNA的纯度和细胞的状态也明显影响脂质体法的转染效率。 展开更多
关键词 转基因 细胞转染 电穿孔法 脂质体法
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水牛卵母细胞和体外受精早期胚胎端粒酶活性测定 被引量：4
16
作者 李秀林 石德顺 +2 位作者 舒金辉 谢体三 崔奎青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期103-107,共5页
为了解水牛卵母细胞和体外受精（IVF）胚胎早期发育过程中端粒酶的活性变化,本研究利用端粒重复序列扩增法（TRAP）进行了水牛未成熟卵母细胞,成熟卵母细胞和2～4细胞,8～16细胞,桑椹胚以及囊胚各阶段的早期胚胎端粒酶活性的测定。依据... 为了解水牛卵母细胞和体外受精（IVF）胚胎早期发育过程中端粒酶的活性变化,本研究利用端粒重复序列扩增法（TRAP）进行了水牛未成熟卵母细胞,成熟卵母细胞和2～4细胞,8～16细胞,桑椹胚以及囊胚各阶段的早期胚胎端粒酶活性的测定。依据电泳条带在成像系统下的光密度值,计算端粒酶的相对活性（RTA）。结果发现,未成熟卵母细胞端粒酶活性比成熟卵母细胞高（P〈0.05）,受精后2～4和8～16细胞胚胎端粒酶活性相对较低,桑椹胚端粒酶活性明显升高（P〈0.05）,囊胚阶段达到最高水平。通过对水牛不同发育阶段胚胎细胞数计数及单细胞相对端粒酶活性的分析比较结果显示,卵母细胞的单细胞端粒酶活性最高,囊胚阶段的最低。单细胞端粒酶活性从未成熟卵母细胞到IVF囊胚阶段呈逐渐降低的趋势。这些结果表明,水牛卵母细胞及早期胚胎的端粒酶活性变化与其成熟、发育阻断及全能性的逐步降低有关。 展开更多
关键词 水牛 卵母细胞 体外受精胚胎 端粒酶活性
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水牛溶菌酶基因家族的鉴定、进化与序列分析
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作者 苏杰 李瑞伽 +4 位作者 高培培 Saif Ur Rehman 刘庆友 李志鹏 崔奎青 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期1-12,共12页
溶菌酶是一种天然的抗菌物质,哺乳动物的乳汁、泪液和唾液等都含有溶菌酶。水牛(Bubalus bubalis)奶比奶牛(Bos taurus)奶含有更多的溶菌酶。水牛溶菌酶基因家族共有16位成员。本研究对水牛溶菌酶基因家族进行了系统分析。结果表明,水... 溶菌酶是一种天然的抗菌物质,哺乳动物的乳汁、泪液和唾液等都含有溶菌酶。水牛(Bubalus bubalis)奶比奶牛(Bos taurus)奶含有更多的溶菌酶。水牛溶菌酶基因家族共有16位成员。本研究对水牛溶菌酶基因家族进行了系统分析。结果表明,水牛的溶菌酶基因与奶牛、山羊(Capra hircus)、绵羊(Ovis aries)的亲缘关系近。水牛溶菌酶理化性质分析表明,水牛溶菌酶大部分是碱性的、稳定的、热稳定性好的和亲水的。单核苷酸多态性分析表明,与奶牛溶菌酶相比,水牛溶菌酶基因编码的蛋白质有氨基酸变异和氨基酸序列插入。这些氨基酸的变异和插入可能是水牛溶菌酶与奶牛溶菌酶在抗菌能力上存在差异的原因。水牛乳腺中表达的溶菌酶基因的转录因子结合位点数高于奶牛的,这也可能是水牛乳腺溶菌酶表达量高于奶牛的重要原因。 展开更多
关键词 溶菌酶 水牛 基因家族 生物信息学分析
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兔卵母细胞去核方法的研究 被引量：3
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作者 崔奎青 石德顺 杨素芳 《中国畜牧兽医》 CAS 2005年第7期32-34,共3页
本研究观察了兔卵母细胞的纺锤体在不同条件下的变化,并对不同去核方法的去核效率进行了比较.结果表明,在卵母细胞去核时应用piezo-driven操作系统,能有效减少去核对卵母细胞的机械挤压损伤,使卵母细胞去核后存活率达98%.卵母细胞中极... 本研究观察了兔卵母细胞的纺锤体在不同条件下的变化,并对不同去核方法的去核效率进行了比较.结果表明,在卵母细胞去核时应用piezo-driven操作系统,能有效减少去核对卵母细胞的机械挤压损伤,使卵母细胞去核后存活率达98%.卵母细胞中极体与核的相对距离随着卵龄的增加而加大,卵龄16h的卵母细胞只有70.4%的核位于极体附近,当卵龄增加到19 h时,这一比例下降到60.5%.用spindle view系统能有效提高去核效率,使去核率从盲吸法的83.8%提高到98.4%,且发现在注射hCG后19 h左右去核较为合适.纺锤体对环境变化敏感,适宜的温度为36～37℃,温度不适容易使纺锤体解聚. 展开更多
关键词 兔卵母细胞 纺锤体 去核
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新型冠状病毒RBD基因序列特征分析、原核表达及免疫原性研究
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作者 张家宁 韩璐 +4 位作者 胡金玲 羊玉凤 刘庆友 李志鹏 崔奎青 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2023年第7期7-14,129-131,共11页
为了探究新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白用于制备亚单位疫苗的免疫原性,试验对不同国家的15种SARS-CoV-2 RBD序列的同源性和保守域进行联合分析,预测RBD蛋白理化性质和结构特征,构建原核表达载体pET28a-RBD并对其进行PCR和双酶切鉴定... 为了探究新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白用于制备亚单位疫苗的免疫原性,试验对不同国家的15种SARS-CoV-2 RBD序列的同源性和保守域进行联合分析,预测RBD蛋白理化性质和结构特征,构建原核表达载体pET28a-RBD并对其进行PCR和双酶切鉴定,将原核表达载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中并进行诱导表达,对表达的重组蛋白进行纯化和复性,通过SDS-PAGE和Western-blot验证重组蛋白RBD的表达情况,再将小鼠分成单剂组、佐剂组、AL组和PBS组,免疫重组蛋白RBD后采用ELISA法检测血清中特异性抗体效价。结果表明:RBD蛋白在不同毒株间具有高度保守性,该蛋白质性质稳定;成功构建出原核表达载体pET28a-RBD,重组蛋白RBD在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,分子质量约为25 ku。免疫后第1周的单剂组和佐剂组特异性IgG抗体效价(166.70±21.08和116.70±16.67)显著或极显著高于AL组和PBS组(P<0.05或P<0.01);第2周佐剂组的IgG抗体效价(4 800.00±715.50)显著高于单剂组(2 667.00±337.30,P<0.05),单剂组和佐剂组的IgG抗体效价均极显著高于AL组和PBS组(P<0.01);单剂组和佐剂组第1周和第2周的IgM抗体效价(333.30±42.16,466.70±66.67和366.70±33.33,600.00±200.00)均极显著高于AL组和PBS组(P<0.01)。说明重组蛋白RBD有良好的免疫原性,可以作为SARS-CoV-2亚单位疫苗的候选蛋白。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 受体结合域 原核表达 纯化 疫苗 免疫原性
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猪卵丘细胞和胎儿成纤维细胞的分离培养及传代 被引量：4
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作者 黄雅琼 王晓丽 +7 位作者 崔奎青 黄奔 卞桂华 谢体三 苏文昌 陆凤花 谭世俭 石德顺 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期255-259,共5页
对猪卵丘细胞和胎儿成纤维细胞的分离、培养和传代进行了系统研究。结果显示，猪的卵丘细胞生长形成单层需要5～6d；运用组织块法和酶消化法获得胎儿成纤维细胞单层的生长时间分别为10～11d和8～9d。猪的卵丘细胞和胎儿成纤维细胞均可... 对猪卵丘细胞和胎儿成纤维细胞的分离、培养和传代进行了系统研究。结果显示，猪的卵丘细胞生长形成单层需要5～6d；运用组织块法和酶消化法获得胎儿成纤维细胞单层的生长时间分别为10～11d和8～9d。猪的卵丘细胞和胎儿成纤维细胞均可以建立并获得稳定的细胞系，这些方法的应用可为猪体细胞核移植研究提供丰富的供体细胞。 展开更多
关键词 猪 卵丘细胞 胎儿成纤维细胞 分离培养 传代培养
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