贵阳地区351株幽门螺杆菌药物敏感性及pbp1多样性分析 被引量：12

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作者 吴芳草 王琼 +10 位作者 朱键 胡越 潘科 蒋强 雷静静 刘芳 文学琴 糜孟衡 王彩霞 崔古贞 陈峥宏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期587-593,共7页

目的了解贵阳地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)对5种抗生素药物敏感性及阿莫西林耐药菌株pbp1突变特征。方法采用界值法检测351株幽门螺杆菌临床菌株对5种抗菌药物的敏感性,对各药物耐药率以χ^2检验进行比较。选取20株阿... 目的了解贵阳地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)对5种抗生素药物敏感性及阿莫西林耐药菌株pbp1突变特征。方法采用界值法检测351株幽门螺杆菌临床菌株对5种抗菌药物的敏感性,对各药物耐药率以χ^2检验进行比较。选取20株阿莫西林耐药菌株及相等数量的敏感菌株,提取基因组DNA,PCR扩增pbp1基因功能区并测序,采用DNAStar软件将核苷酸序列转换为氨基酸序列后进行比对和分析。结果351株幽门螺杆菌临床菌株对甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林、左氧氟沙星和四环素5种药物的耐药率分别为71.56%、34.60%、13.27%、40.28%、17.06%。20株阿莫西林耐药和20株敏感菌株PBP1氨基酸序列分析结果显示,PBP1多样性复杂,在耐药菌株特有变异位点中,PBP1氨基酸的S543R变异频率最高,为75%,其次是N641D为60%。结论本研究中的幽门螺杆菌对5种抗生素均有不同程度耐药,其中阿莫西林和四环素耐药率较其他地区高,并且双重耐药与多重耐药在总体耐药中所占比例较大;阿莫西林耐药菌株PBP1氨基酸存在多位点多态性,可能与幽门螺杆菌阿莫西林耐药有关。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 耐药性 阿莫西林 青霉素结合蛋白

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胃内尿素酶阳性细菌对幽门螺杆菌感染诊断的影响 被引量：12

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作者 郭长城 熊妍 +8 位作者 吴芳草 潘科 张永宏 刘芳 崔古贞 朱莉 王琼 印琳 陈峥宏 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期127-130,共4页

目的探讨胃内可分解尿素酶菌群对基于尿素酶阳性诊断幽门螺杆菌(Helicobacter.pylori,Hp)感染的影响。方法胃镜下取疑为Hp感染患者的胃黏膜,行快速尿素酶检测(Rapid urease test,RUT)及细菌培养,根据培养物的菌落形态、革兰染色、RUT及H... 目的探讨胃内可分解尿素酶菌群对基于尿素酶阳性诊断幽门螺杆菌(Helicobacter.pylori,Hp)感染的影响。方法胃镜下取疑为Hp感染患者的胃黏膜,行快速尿素酶检测(Rapid urease test,RUT)及细菌培养,根据培养物的菌落形态、革兰染色、RUT及Hp特异性16SrRNA基因片段PCR进行Hp的鉴定;提取胃黏膜组织DNA,通过Hp特异性PCR进行Hp感染快速诊断。对Hp阴性(Hp培养或特异性PCR阴性)而RUT阳性胃黏膜培养的非Hp(nonHp)进行常规尿素酶生化试验,选取20株尿素酶阳性non-Hp利用细菌16SrRNA通用引物进行PCR扩增并测序,利用NCBI系统进行序列比对,鉴定细菌种类。结果 606例患者胃黏膜RUT阳性率为58.4%(354/606),Hp培养阳性率29.7%(180/606)。Hp培养阴性胃黏膜特异性PCR阳性113例,Hp感染率为48.35%(293/606)。胃黏膜RUT阳性率高于胃黏膜Hp感染(χ2=1,2.337,P<0.05)。61例RUT阳性Hp培养或特异性PCR阴性的胃黏膜培养出80株non-Hp,其常规尿素酶生化检查均阳性。对其中20株尿素酶阳性non-Hp进行测序鉴定,均为产尿素酶菌。结论胃内存在除Hp外其他细菌,包括尿素酶阳性non-Hp,可造成RUT阳性,干扰Hp感染的实验诊断。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 非幽门螺杆菌 快速尿素酶试验 胃内菌群

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污水中肺炎克雷伯氏菌噬菌体的分离及其生物学特征、基因组分析

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作者 邵瑞瑞 周青帅 +5 位作者 崔古贞 廖健 程玉梅 官志忠 齐晓岚 洪伟 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期320-331,共12页

为探究噬菌体作为治疗肺炎克雷伯菌感染的新型潜在疗法的可能性,本研究采用双层平板法将医院周边污水中3株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行分离纯化,透射电镜观察噬菌体形态结构,并进一步分析噬菌体裂解谱、最佳感染复数、生长曲线和酸碱... 为探究噬菌体作为治疗肺炎克雷伯菌感染的新型潜在疗法的可能性,本研究采用双层平板法将医院周边污水中3株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行分离纯化,透射电镜观察噬菌体形态结构,并进一步分析噬菌体裂解谱、最佳感染复数、生长曲线和酸碱耐受性等生物学特征,同时通过测序技术获得噬菌体全基因组信息并注释分析.实验结果表明,KP-ZS3为肌尾科噬菌体,KP-ZS4为短尾科噬菌体,KP-ZS6为长尾科噬菌体,且KP-ZS4的感染潜伏期稍长,KP-ZS3耐酸碱能力较强,KP-ZS6的裂解能力为3株噬菌体中最强、裂解谱较宽.3株噬菌体的外壳蛋白组分大小均在33~55 kD之间.此外全基因组分析发现KP-ZS3、KP-ZS62株噬菌体的基因组大小均在100 kb以上,噬菌体KP-ZS4的基因组相对较小(40608 bp).共线性分析显示噬菌体KP-ZS3与phiEap-3、Kp15高度相似;KP-ZS6与0507KN21、vB_EcoM_KWBSE43-6高度相似.KP-ZS4与Tyrion、TL-2011b相似度相对较低,序列一致性为76.77%、76.89%.以上结果表明,这3株噬菌体具有独特的生物学特性和基因组特征,它们在肺炎克雷伯菌感染治疗方面展现出不同的潜力和优势,特别是KP-ZS6因其裂解能力强和广泛的裂解谱,以及KPZS3因其强耐酸碱性,可能成为未来抗菌治疗的备用资源,这些发现为开发新型抗菌策略和治疗肺炎克雷伯菌感染提供了新的信息基础. 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 噬菌体 生物学特征 基因组分析 耐药菌治疗

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fliL基因显著影响艰难拟梭菌运动功能及产孢能力 被引量：2

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作者 鲍江舰 杨君仪 +8 位作者 邵瑞瑞 张婷 廖健 程玉梅 官志忠 齐晓岚 陈峥宏 洪伟 崔古贞 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1578-1595,共18页

鞭毛基底体相关FliL家族蛋白(flagellar basal body-associated FliL family protein,fliL)基因编码FliL蛋白,FliL是一种与鞭毛基体相结合的单跨膜蛋白。为研究艰难拟梭菌fliL基因功能,使用非等长同源臂偶联等位交换(allele-coupled exc... 鞭毛基底体相关FliL家族蛋白(flagellar basal body-associated FliL family protein,fliL)基因编码FliL蛋白,FliL是一种与鞭毛基体相结合的单跨膜蛋白。为研究艰难拟梭菌fliL基因功能,使用非等长同源臂偶联等位交换(allele-coupled exchange,ACE)方法成功构建了fliL基因缺失(ΔfliL)和回补(::fliL)突变株,研究突变菌株与野生型菌株(CD630)生长曲线、抗生素敏感性、pH耐受性、运动能力及产孢能力等表型的差异。结果显示,菌株ΔfliL生长速率及最大生物量均小于菌株CD630,::fliL回补菌株生长情况回复至野生型。与CD630菌株相比,ΔfliL对阿莫西林、氨苄青霉素、诺氟沙星的敏感性提高,对卡那霉素、四环素敏感性降低,::fliL抗生素敏感性部分回复至野生型水平。与CD630菌株相比,ΔfliL游泳运动能力显著降低,::fliL运动能力超越野生型菌株CD630。相比菌株CD630,菌株ΔfliL在pH值为5时耐受能力显著提高,在pH值为9时,耐受能力显著降低。除此之外,ΔfliL产孢能力较CD630显著降低,::fliL产孢能力部分恢复。以上结果表明,艰难拟梭菌fliL基因与其运动能力、抗生素敏感性、环境耐受能力和产孢能力密切相关,可能进一步影响艰难拟梭菌菌株的致病力。 展开更多

关键词 艰难拟梭菌 非等长同源臂偶联等位交换 鞭毛 fliL 突变株表型

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典型产纤维小体梭菌的遗传改造及其在纤维素乙醇中的应用研究进展 被引量：3

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作者 刘亚君 崔古贞 +2 位作者 洪伟 张杰 崔球 《生物加工过程》 CAS CSCD 2014年第1期55-62,共8页

以解纤维梭菌(Clostridium cellulolyticum)和热纤梭菌(Clostridium thermocellum)为代表的产纤维小体梭菌可以直接完成从木质纤维素原料到乙醇的生物转化,是用于通过整合生物加工技术生产纤维素乙醇的优良候选菌株。然而,这些产纤维小... 以解纤维梭菌(Clostridium cellulolyticum)和热纤梭菌(Clostridium thermocellum)为代表的产纤维小体梭菌可以直接完成从木质纤维素原料到乙醇的生物转化,是用于通过整合生物加工技术生产纤维素乙醇的优良候选菌株。然而,这些产纤维小体梭菌的纤维素降解效率及乙醇产量尚不能满足工业化生产的要求,其遗传改造技术的不成熟严重制约了通过定向代谢工程改造提高生产性能的进程。针对这些典型的产纤维小体菌株,各国科学家近年来在基于二类内含子的嗜中温及嗜高温遗传改造平台建立方面取得了较大突破,并通过靶向代谢工程改造,显著提高纤维素乙醇的产量。笔者对这些前期研究工作以及国内外相关研究成果进行系统的总结,并对构建的遗传改造工具的应用前景进行展望。 展开更多

关键词 纤维小体 纤维素降解 乙醇 代谢工程 二类内含子

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HMG-CoA还原酶催化机理与特性分析 被引量：3

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作者 崔古贞 贲亚琍 +1 位作者 李娜 刘德立 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期542-545,共4页

HMG-CoA还原酶是甲羟戊酸生物合成的限速酶。系统进化分析表明生物界存在两类HMG-CoA还原酶,Ⅰ类主要存在于真核生物和部分古细菌中,Ⅱ类主要存在于原核生物和少数古细菌中。它汀类药物抑制HMG-CoA还原酶活性,是HMG-CoA还原酶的良好竞... HMG-CoA还原酶是甲羟戊酸生物合成的限速酶。系统进化分析表明生物界存在两类HMG-CoA还原酶,Ⅰ类主要存在于真核生物和部分古细菌中,Ⅱ类主要存在于原核生物和少数古细菌中。它汀类药物抑制HMG-CoA还原酶活性,是HMG-CoA还原酶的良好竞争性抑制剂。文章阐述了HMG-CoA还原酶的催化机理及系统进化特征与分类,并比较了两类HMG-CoA还原酶催化特性的差异。 展开更多

关键词 HMG—CoA还原酶 甲羟戊酸 它汀类药物

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CD630_27900基因缺失显著降低艰难拟梭菌自溶速率、毒力及对酸和抗生素的耐受性

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作者 杨君仪 鲍江舰 +8 位作者 邵瑞瑞 张婷 廖健 程玉梅 官志忠 齐晓岚 陈峥宏 崔古贞 洪伟 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2440-2455,共16页

艰难拟梭菌(Clostridioidesdifficile)CD630_27900基因位于slpA-cwp66基因座上,CD630_27900基因属于假定的Lmbe家族的酶,但基因功能尚未明确。【目的】本研究通过构建艰难拟梭菌CD630_27900基因敲除菌株,比较野生型菌株(CD630)与突变株... 艰难拟梭菌(Clostridioidesdifficile)CD630_27900基因位于slpA-cwp66基因座上,CD630_27900基因属于假定的Lmbe家族的酶,但基因功能尚未明确。【目的】本研究通过构建艰难拟梭菌CD630_27900基因敲除菌株,比较野生型菌株(CD630)与突变株表型差异,探讨CD630_27900基因对艰难拟梭菌感染的影响。【方法】用非等长同源臂偶联等位交换(allele-coupled exchange, ACE)构建CD630_27900基因缺失菌株与回补菌株。比较它们在生长曲线、自溶素(cwp19,Acd)基因表达、细胞毒力、主要毒素基因表达、抗生素及pH敏感性差异,以研究CD630_27900基因的功能。【结果】成功构建△CD630_27900突变菌株和::CD630_27900回补菌株。菌株△CD630_27900在衰亡期自溶速率显著低于菌株CD630,::CD630_27900自溶速率恢复。实时荧光定量聚合酶链反应(real-timefluorescencequantitative polymerasechainreaction,RT-qPCR)结果显示,缺失CD630_27900基因,自溶素cwp19、Acd基因表达量降低,::CD630_27900自溶素基因表达增强。相较于CD630,△CD630_27900菌株细胞毒力、毒素基因tcdA、tcdB表达量降低。相较于CD630,△CD630_27900对氨苄青霉素、甲硝唑、阿莫西林、万古霉素、诺氟沙星、头孢西丁、卡那霉素更加敏感,::CD630_27900对以上抗生素敏感性恢复。此外,△CD630_27900对酸比CD630敏感,对碱敏感性未发生变化。::CD630_27900对酸敏感性恢复至野生型水平。【结论】敲除CD630_27900基因,艰难拟梭菌自溶速率变慢、自溶素cwp19、Acd基因表达量降低、细胞毒力、毒素基因tcd A和tcd B降低,说明CD630_27900基因影响菌株自溶以及毒力释放。菌株△CD630_27900对临床上常见的抗生素及酸性环境更加敏感,且这些变化均可通过基因回补恢复。提示该基因可作为联合抗生素治疗艰难梭菌感染(Clostridioides difficile infection, CDI)的潜在靶点。 展开更多

关键词 艰难拟梭菌 CD630_27900基因 肽聚糖脱乙酰化 非等长同源臂偶联等位交换 突变表型

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鱼腥草共附生细菌组成及其对小鼠肠道菌群的影响

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作者 陆秋丹 徐芳 +3 位作者 崔古贞 刘翔 张峥嵘 陈峥宏 《贵州农业科学》 CAS 2023年第8期85-92,共8页

【目的】了解鱼腥草共附生细菌的组成,以及小鼠食用新鲜鱼腥草对其肠道菌群的影响,为探明鱼腥草的药用价值及其相关机制提供参考。【方法】采用高通量测序技术对鱼腥草进行共附生细菌16S rRNA基因测序;试验组和对照组小鼠分别用鱼腥草(... 【目的】了解鱼腥草共附生细菌的组成,以及小鼠食用新鲜鱼腥草对其肠道菌群的影响,为探明鱼腥草的药用价值及其相关机制提供参考。【方法】采用高通量测序技术对鱼腥草进行共附生细菌16S rRNA基因测序;试验组和对照组小鼠分别用鱼腥草(试验组)和生理盐水(对照组)连续灌胃20 d,在灌胃前和停止灌胃7 d后分别采集试验组与对照组小鼠粪便进行细菌16S rRNA基因高通量测序分析。【结果】鱼腥草共附生细菌的优势菌门为变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和放线菌门(Actinobacteria),其相对丰度分别为85.45%、10.52%和1.63%。试验组中,灌胃后与灌胃前相比,小鼠粪便菌群中变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和放线菌门(Actinobacteria)的相对丰度并未增加;菌群多样性的Shannon指数显著增高。灌胃后,试验组较对照组小鼠粪便菌群结构有显著差异,在门分类水平上,试验组厚壁菌门/拟杆菌门(Firmicutes/Bacteroidetes)显著高于对照组。【结论】新鲜鱼腥草能增加小鼠肠道菌群的多样性以及调节小鼠肠道菌群结构;鱼腥草对小鼠肠道菌群的调节作用主要是通过调节厚壁菌门/拟杆菌门(Firmicutes/Bacteroidetes)的比值实现。 展开更多

关键词 鱼腥草 共附生细菌 肠道菌群 高通量测序 厚壁菌门 拟杆菌门

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幽门螺杆菌四环素耐药与16SrDNA突变的关系 被引量：4

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作者 文学琴 吴芳草 +10 位作者 刘芳 朱键 胡越 雷静静 王彩霞 陈相好 崔古贞 王琼 印琳 陈峥宏 谷俊莹 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第4期433-438,共6页

目的了解贵州地区近年来人感染幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对四环素的耐药性及其16SrRNA基因突变情况,分析两者的相关性。方法采用琼脂稀释法对194株临床Hp菌株进行四环素药物敏感性试验;分析儿童感染株及成人感染株四环素耐药... 目的了解贵州地区近年来人感染幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对四环素的耐药性及其16SrRNA基因突变情况,分析两者的相关性。方法采用琼脂稀释法对194株临床Hp菌株进行四环素药物敏感性试验;分析儿童感染株及成人感染株四环素耐药性差异;选取14株Hp四环素耐药株和14株四环素敏感株及质控株Hp26695进行16SrRNA基因片段PCR扩增与测序,与GenBank中Hp相关序列进行比对分析;选取四环素耐药株H64 PCR扩增16SrRNA基因后自然转化入受体菌Hp 26695,并用四环素药物平板(2μg/ml)筛选耐药克隆,对耐药的单克隆菌株进行16SrRNA基因片段PCR扩增与测序,并与供体菌、受体菌、GenBank中Hp ATCC26695的16SrRNA基因进行比对分析。结果 194株Hp中四环素耐药菌株32株,耐药率为16.49%。其中儿童分离菌株四环素耐药率为18.75%(6/32),成人分离株四环素耐药为16.05%(26/162),两组耐药率比较差异无统计学意义(χ~2=0.141,P>0.05)。对随机选择的14株耐药菌、14株敏感菌及质控株Hp26695进行16SrRNA基因片段测序分析,耐药株和敏感株共有突变位点有6个,分别为T809C、811+C、872+C、C989T、T1082C、T1103C;有3株耐药株存在与四环素耐药相关的A926C或A926G单碱基突变。经过自然转化,共培养出9个四环素耐药单克隆。将各单克隆转化菌和供体菌H64及受体菌26695的16SrRNA基因序列与GenBank中Hp ATCC26695比对,9株单克隆转化菌和供体菌H64一致,均存在A926G、T1082C、T1103C突变。此外,受体菌26695、供体菌H64及转化菌株均存在T809C、811+C、872+C碱基突变,有4株转化菌分别存在与供体菌H64不一致T1103C和C724T自发突变。结论本实验分离的贵州地区人感染Hp对四环素的耐药率较全国Hp四环素平均耐药率(8.8%)偏高;贵州地区四环素耐药菌株和敏感菌株16SrDNA均存在突变;T809C、811+C、872+C、T1082C、T1103C为贵州地区Hp常见的自发突变,与四环素耐药无关,而A926G突� 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 四环素 耐药性 基因突变 自然转化

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肺炎链球菌HMGS基因克隆及同源模建 被引量：2

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作者 贲亚琍 崔古贞 +1 位作者 张青叶 刘德立 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第1期82-83,共2页

目的构建肺炎链球菌HMGS同源模建。方法采用基因工程技术克隆肺炎链球菌HMG-CoA合成酶(HMGS)基因,测序获得HMGS基因序列,以粪肠球菌HMGS(IX9E)为模板,通过SYBYL7.0软件构建同源模建。结果成功地构建了肺炎链球菌HMGS同源模建。结论获得... 目的构建肺炎链球菌HMGS同源模建。方法采用基因工程技术克隆肺炎链球菌HMG-CoA合成酶(HMGS)基因,测序获得HMGS基因序列,以粪肠球菌HMGS(IX9E)为模板,通过SYBYL7.0软件构建同源模建。结果成功地构建了肺炎链球菌HMGS同源模建。结论获得的肺炎链球菌HMGS基因序列与IX9E的基因有53%同源序列;可以为根据肺炎链球菌HMGS同源模建寻找结构类似物来开发新药奠定基础。 展开更多

关键词 肺炎链球菌 HMGS 克隆 同源模建

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大肠杆菌fliC基因失活突变株的构建及其特征 被引量：2

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作者 赵行行 程玉梅 +3 位作者 陈娴 崔古贞 齐晓岚 洪伟 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期27-32,56,共7页

构建编码大肠杆菌鞭毛蛋白基因(fliC)失活突变株,并探究其生物被膜形成改变后在应激状态下的生物学特征。使用Thermotargetron靶向基因失活系统,构建fliC基因失活突变株(ΔfliC420s),测定ΔfliC420s与野生型菌株的生长速率、运动能力、... 构建编码大肠杆菌鞭毛蛋白基因(fliC)失活突变株,并探究其生物被膜形成改变后在应激状态下的生物学特征。使用Thermotargetron靶向基因失活系统,构建fliC基因失活突变株(ΔfliC420s),测定ΔfliC420s与野生型菌株的生长速率、运动能力、生物被膜形成能力、自溶速率、pH敏感性及对抗生素耐受性的变化。ΔfliC420s相比野生型菌株,生长速率未受影响,在半固体培养基中运动能力缺失,生物被膜形成能力明显降低,菌体自溶速率加快,pH敏感性增强,以及对D-环丝氨酸、红霉素、诺氟沙星的耐受性降低。大肠杆菌fliC基因在细菌生物被膜形成和对外界压力的抵抗中具有重要作用。 展开更多

关键词 大肠杆菌 fliC基因 生物被膜 基因失活 Thermotargetron

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艰难梭菌中粪肠球菌污染的去除方法 被引量：3

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作者 饶凤琴 程玉梅 +4 位作者 张婷 周青帅 崔古贞 齐晓岚 洪伟 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第10期1122-1127,1133,共7页

目的:建立从粪肠球菌-艰难梭菌混合培养物中分离艰难梭菌的方法。方法:取不同厂家脑心浸出液(BHI)培养基、不同抗生素和是否添加羊血(或血清)3种组分进行组合,加入粪肠球菌-艰难梭菌混合物进行培养;显微镜观察不同组分培养基中细菌形态... 目的:建立从粪肠球菌-艰难梭菌混合培养物中分离艰难梭菌的方法。方法:取不同厂家脑心浸出液(BHI)培养基、不同抗生素和是否添加羊血(或血清)3种组分进行组合,加入粪肠球菌-艰难梭菌混合物进行培养;显微镜观察不同组分培养基中细菌形态,将不同组分培养基中获得的混合培养物划线固体平板培养基并培养、观察菌落形态及菌落气味,采用16SrDNA测序技术评价不同组合培养基对艰难梭菌的纯化效果。结果:艰难梭菌抗生素抗性实验结果显示,艰难梭菌对氯霉素、克拉霉素和氨苄青霉素敏感,对四环素、D-环丝氨酸和头孢西丁具有抗性;在相同艰难梭菌接种量条件下,不同生产厂家BHI-酵母粉培养基(BHIS)均有艰难梭菌典型的沉淀生成,并伴有浓烈臭鸡蛋气味;显微镜观察发现纯化前艰难梭菌与粪肠球菌共培养物有大量球菌和链球菌、少量杆菌;BHIS-BDC培养基所有视野中无球菌,仅见杆状细菌;BHIS培养基上艰难梭菌仅在平板边缘形成零星菌落,BHIS-BDC培养基表面形成典型艰难梭菌菌落;16SrDNA测序结果表明1~2mm菌落为粪肠球菌,3~5mm菌落为艰难梭菌。结论:不同生产厂家的BHIS培养基对艰难梭菌中粪肠球菌的去除没有明显差异,BHIS培养基中添加羊血、D-环丝氨酸与头孢西丁复合抗生素可去除艰难梭菌中粪肠球菌污染。 展开更多

关键词 肠球菌 粪 梭菌感染 培养基 重症监护病房 结肠炎 细菌 厌氧

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敲除PaLoc毒力岛的无毒性艰难梭菌菌株的构建 被引量：3

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作者 饶凤琴 程玉梅 +4 位作者 吴昌学 王义 崔古贞 齐晓岚 洪伟 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第10期1128-1133,共6页

目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株。方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLo... 目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株。方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLoc敲除突变株,测序验证设计位点是否发生等位双交换。结果:PCR结果显示,获得的16株转化子中有8株为敲除PaLoc突变株,阳性率为50%;测序结果显示,获得的8株敲除PaLoc突变株均在设计位点发生了等位双交换。结论:成功构建艰难梭菌毒性毒力岛敲除PaLoc突变株。 展开更多

关键词 艰难梭菌 CRISPR-Cpf1系统 PaLoc毒力岛 基因敲除 活菌疫苗 毒性基因 梭菌感染 载体 质粒

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艰难梭菌基因编辑技术研究进展 被引量：3

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作者 洪伟 万雯 +3 位作者 崔古贞 官志忠 齐晓岚 禹文峰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期210-225,共16页

艰难梭菌Clostridioesdifficile是一种革兰氏阳性、产芽孢、专性厌氧细菌,是医院相关性腹泻的主要病原体。近年来,随着强毒株的出现(如核糖体027型),其流行性与致死率逐年上升,因此对艰难梭菌生理、生化特征及致病机制的研究受到广泛重... 艰难梭菌Clostridioesdifficile是一种革兰氏阳性、产芽孢、专性厌氧细菌,是医院相关性腹泻的主要病原体。近年来,随着强毒株的出现(如核糖体027型),其流行性与致死率逐年上升,因此对艰难梭菌生理、生化特征及致病机制的研究受到广泛重视。艰难梭菌生理、生化特征及致病机制研究又以建立其稳定、高效的基因编辑方法为必要前提。借助基因编辑工具,研究者可以扰动艰难梭菌核心生物学过程,在分子水平研究其分子致病机制。如Clos Tron技术在艰难梭菌毒素A (Toxin A)和毒素B (Toxin B)与其致病力关系的研究中起到了关键作用。文中以时间为主线综述了艰难梭菌基因编辑技术的发展历程和最新进展,并对艰难梭菌基因编辑技术未来的研究方向进行展望。 展开更多

关键词 艰难梭菌 艰难梭菌感染 基因编辑 基因功能研究 致病机制

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以Real-time PCR方法检测耐药幽门螺杆菌中HefABC基因的表达 被引量：2

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作者 王琼 吴芳草 +10 位作者 郭长城 刘芳 崔古贞 潘科 许良碧 张永宏 熊妍 印琳 吴晓娟 张峥嵘 陈峥宏 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1797-1803,共7页

为了探讨耐药幽门螺杆菌(Helicobacter. pylori)主动外排系统hefA、hefB、hefC基因表达与菌株克拉霉素耐药、阿莫西林耐药以及多重耐药的关系,随机选择H. pylori克拉霉素耐药株、阿莫西林耐药株、敏感株、多重耐药株各10株,利用Real-tim... 为了探讨耐药幽门螺杆菌(Helicobacter. pylori)主动外排系统hefA、hefB、hefC基因表达与菌株克拉霉素耐药、阿莫西林耐药以及多重耐药的关系,随机选择H. pylori克拉霉素耐药株、阿莫西林耐药株、敏感株、多重耐药株各10株,利用Real-time PCR方法检测HefABC系统的表达,以成组t检验法对敏感株与各耐药株之间mRNA表达水平进行比较。结果显示,hefA在敏感组、克拉霉素耐药组、阿莫西林耐药组、多重耐药组中的mRNA表达量以2-ΔΔCt表示,分别为0.903 9±0.154 07、1.482 2±0.378 5、1.278 0±0.206 2、2.255 7±0.289 2,克拉霉素耐药组与敏感组比较:t=4.489,p<0.05;阿莫西林耐药组与敏感组比较:t=4.631,p<0.05;多重耐药组与敏感组比较:t=13.11,p<0.05。hefB在敏感组、克拉霉素耐药组、阿莫西林耐药组、多重耐药组中的m RNA表达量以2-ΔΔCt表示,分别为0.075 9±0.015 7、0.636 1±0.162 3、0.906 4±0.127 6、1.149 2±0.305 8,克拉霉素耐药组与敏感组比较:t=10.86,p<0.05;阿莫西林耐药组与敏感组比较:t=20.42,p<0.05;多重耐药组与敏感组比较:t=11.09,p<0.05。hefC在敏感组、克拉霉素耐药组、阿莫西林耐药组、多重耐药组中的m RNA表达量以2-ΔΔCt表示,分别为0.128 2±0.054 5、1.319 4±0.272 4、0.683 0±0.185 0、3.480 2±0.932 6;克拉霉素耐药组与敏感组比较:t=13.56,p<0.05;阿莫西林耐药组与敏感组比较:t=9.096,p<0.05;多重耐药组与敏感组比较:t=11.35,p<0.05。研究结果证实,H. pylori中外排系统hefA、hefB、hefC的高表达与菌株对克拉霉素耐药、阿莫西林耐药及多重耐药均有关。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 阿莫西林 克拉霉素 耐药性 外排泵

原文传递

ICU患者粪便样品艰难梭菌分离及抗生素耐药性检测 被引量：2

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作者 洪伟 程玉梅 +5 位作者 周青帅 赵行行 饶凤琴 崔古贞 齐晓岚 官志忠 《重庆医学》 CAS 2020年第12期1911-1918,共8页

目的探索贵州地区典型重症监护科(ICU)艰难梭菌感染及抗生素耐药性状况。方法采用肛门拭子法采集ICU患者粪便标本;扩增16S rDNA对菌株进行分类鉴定;使用MEGA6.0软件构建系统发育进化树;使用梯度稀释法测定分离的艰难梭菌菌株对16种常用... 目的探索贵州地区典型重症监护科(ICU)艰难梭菌感染及抗生素耐药性状况。方法采用肛门拭子法采集ICU患者粪便标本;扩增16S rDNA对菌株进行分类鉴定;使用MEGA6.0软件构建系统发育进化树;使用梯度稀释法测定分离的艰难梭菌菌株对16种常用抗生素的耐药性。结果从ICU 200份粪便样本中分离到12株艰难梭菌(阳性率6%)。所有菌株对氯霉素、甲砜霉素、甲硝唑、利福平和阿莫西林敏感。12株艰难梭菌均对氨苄青霉素、卡那霉素和D-环丝氨酸具有抗性。对克拉霉素、四环素、链霉素、红霉素、头孢西丁、诺氟沙星、克林霉素、万古霉素的耐药率分别为20%、58%、75%、50%、17%、42%、8%和8%。结论12株艰难梭菌具有独特的抗生素耐药谱,如对克林霉素、四环素、利福平的耐药性与其他地区具有明显差异,提示分离菌株可能具有独特特征。 展开更多

关键词 艰难梭菌 贵州省 重症监护科 抗生素 耐药性

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温度诱导Targetron系统用于大肠杆菌高效基因失活 被引量：2

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作者 赵行行 程玉梅 +6 位作者 吴昌学 任玮 饶凤琴 周倩 崔古贞 齐晓岚 洪伟 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1659-1671,共13页

构建基于Te I3c/4c嗜热二型内含子的温度诱导Targetron基因失活系统(Thermotargetron),并应用于中温微生物基因编辑。在大肠杆菌HMS174(DE3)基因组中,选择Subunitofflagellum基因(fliC)和C4dicarboxylate orotate:H+symporter基因(dctA... 构建基于Te I3c/4c嗜热二型内含子的温度诱导Targetron基因失活系统(Thermotargetron),并应用于中温微生物基因编辑。在大肠杆菌HMS174(DE3)基因组中,选择Subunitofflagellum基因(fliC)和C4dicarboxylate orotate:H+symporter基因(dctA)为靶基因。根据Te I3c/4c DNA识别规则,在fliC和dctA基因中选择fliC489a、fliC828s、fliC1038s和dctA2a位点为基因打靶位点。使用重叠延伸PCR方法,基于pHK-TT1A质粒构建打靶载体。打靶载体转化HMS174菌株,对数期转化子培养液48℃热激1h后涂布于氯霉素抗性LB平板上。使用菌落PCR和DNA测序检测突变株并计算基因失活效率。获得突变株后,通过琼脂穿刺和碳源代谢实验,鉴定ΔfliC、ΔdctA突变株表型变化。菌落PCR测序结果表明,Te I3c/4c插入到fliC和dctA基因设计位点,且打靶效率高达100%。突变株表型验证实验表明,ΔfliC突变株运动能力显著下降,ΔdctA突变株苹果酸代谢能力缺失。综上所述,文中建立了一套适用于嗜中温微生物的温度诱导型、高效基因失活系统,该系统可通过控制宿主菌在48℃保温时间实现高效、靶向、精准基因失活。 展开更多

关键词 嗜热targetron Ⅱ型内含子 温度诱导 基因失活 大肠杆菌 FLIC dctA

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肺炎链球菌HMGS和HMGR有利于寻找抑制先导化合物

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作者 贲亚琍 崔古贞 刘德立 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第11期1134-1137,共4页

目的对肺炎链球菌3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶和还原酶(HMGS和HMGR)进行动力学和功能研究。方法克隆表达肺炎链球菌HMGS和HMGR,检测洛伐他汀对它们的抑制作用,分别以HMGS酶促反应的产物和3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)作为底... 目的对肺炎链球菌3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶和还原酶(HMGS和HMGR)进行动力学和功能研究。方法克隆表达肺炎链球菌HMGS和HMGR,检测洛伐他汀对它们的抑制作用,分别以HMGS酶促反应的产物和3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)作为底物检测几种苗头化合物对HMGR的抑制性。结果洛伐他汀对HMGR有抑制作用,对HMGS无抑制作用,HMGS酶促反应的产物和HMG-CoA在HMGR检测苗头化合物抑制性的筛药反应中效果相似。结论 HMGS酶促反应的产物可以代替HMG-CoA进行苗头化合物初筛,可降低筛药成本,利于寻找新型高效抑制先导化合物。 展开更多

关键词 肺炎链球菌 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶 抑制先导化合物

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肺炎链球菌HMG-CoA合成酶基因克隆和表达

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作者 贲亚琍 崔古贞 刘德立 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2010年第5期450-454,共5页

目的克隆、表达肺炎链球菌3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme Asynthase,HMGS)。方法采用基因工程技术克隆肺炎链球菌HMGS基因,对T226进行反突变,构建重组表达载体pET-HMGSm并表达HMGS。结果序列分... 目的克隆、表达肺炎链球菌3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme Asynthase,HMGS)。方法采用基因工程技术克隆肺炎链球菌HMGS基因,对T226进行反突变,构建重组表达载体pET-HMGSm并表达HMGS。结果序列分析表明该基因与文献中报道的肺炎链球菌HMGS基因(No.AF290098)相比较有98.5%的同源性,存在18个核苷酸的差异,其中有2个核苷酸的不同导致编码的氨基酸改变,分别是Asn259→Ser,Ala349→Val,该基因编码蛋白由398个氨基酸组成。结论优化重组HMGS表达条件,在18℃0.4 mmol/L IPTG诱导表达4 h,用Ni-NTA层析柱分离纯化得到46 kDa特异性蛋白。 展开更多

关键词 肺炎链球菌 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶 克隆 表达

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艰难拟梭菌PaLoc致病决定区基因座敲除突变株转录组学分析及其减毒验证

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作者 崔古贞 周青帅 +10 位作者 程钦全 饶凤琴 程玉梅 田艳 张婷 陈峥宏 廖健 官志忠 齐晓岚 吴棋 洪伟 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期601-608,共8页

目的对艰难拟梭菌630(Cd630)菌株和致病决定区基因座(PaLoc)敲除突变株(ΔPaLoc)进行转录组测序和分析,获得Cd630野生型菌株和ΔPaLoc基因的差异性表达谱,并测定野生型Cd630菌株和ΔPaLoc突变株的细胞毒力,为构建艰难拟梭菌全菌减毒疫... 目的对艰难拟梭菌630(Cd630)菌株和致病决定区基因座(PaLoc)敲除突变株(ΔPaLoc)进行转录组测序和分析,获得Cd630野生型菌株和ΔPaLoc基因的差异性表达谱,并测定野生型Cd630菌株和ΔPaLoc突变株的细胞毒力,为构建艰难拟梭菌全菌减毒疫苗奠定基础。方法对Cd630菌株和ΔPaLoc敲除突变株进行转录组测序,接着对差异表达基因进行筛选,随后对差异基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。最后在非洲绿猴肾细胞(Vero)和人克隆结肠腺癌细胞株(Caco-2)中进行Cd630野生型菌株和ΔPaLoc敲除突变菌株的细胞毒性验证实验。结果转录组数据表明ΔPaLoc突变株毒素基因tcdA、tcdB未转录。CD630_36010、CD630_020910、CD630_02080和cel等基因分别上调17.92、11.40、8.93和7.55倍;编码高丝氨酸脱氢酶的hom2基因、孢子形成蛋白基因CD630_15810、锌结合脱氢酶基因CD630_23230、1-磷酸半乳糖醇5-脱氢酶基因CD630_23240分别下调为野生型的0.06、0.075、0.133和0.183倍。GO和KEGG富集分析结果表明,ΔPaLoc突变株差异转录基因主要富集于密度感应系统、ABC运输系统、双组分系统、磷酸转移酶(PTS)系统、糖代谢通路以及万古霉素耐药相关的通路等。细胞毒力实验结果表明野生型Cd630菌株对Vero细胞和Caco-2细胞具有毒力,ΔPaLoc突变株丧失对Vero细胞和Caco-2细胞的毒力。结论通过对Cd630和ΔPaLoc突变株进行转录测序,表明毒素基因未转录,其他差异性基因可为进一步研究ΔPaLoc突变株生理生化特征提供指引。细胞毒力实验表明,ΔPaLoc突变株丧失了对Vero细胞和Caco-2细胞的毒力,ΔPaLoc突变株为艰难拟梭菌全菌减毒疫苗的构建奠定了基础。 展开更多

关键词 基因敲除技术 规律间隔成簇短回文重复序列 细菌毒素 艰难拟梭菌 减毒突变体

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