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ERIC-PCR在人工混合菌体系中的检出灵敏度 被引量：15
1
作者 李艳琴 孙永艳 +1 位作者 崔丽方 申泉 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期61-64,共4页
提取大肠杆菌DH5α和阴沟肠杆菌 (E 2 6R)的基因组DNA ,进行ERIC PCR ,可以分别得到稳定而独特的DNA指纹图谱 ;模板量的变动范围从 1 0～ 1 0 0ng都不会影响其图谱的稳定性 ;在图谱中DH5α和E 2 6R各自均有一条含量最大的特征带 ,其不... 提取大肠杆菌DH5α和阴沟肠杆菌 (E 2 6R)的基因组DNA ,进行ERIC PCR ,可以分别得到稳定而独特的DNA指纹图谱 ;模板量的变动范围从 1 0～ 1 0 0ng都不会影响其图谱的稳定性 ;在图谱中DH5α和E 2 6R各自均有一条含量最大的特征带 ,其不易受实验环境和实验条件的干扰而发生变化。把DH5α和E 2 6R按比例混合 ,提取混合菌基因组DNA ,进行ERIC PCR ,结果表明 :混合菌的DNA指纹图谱为各纯菌图谱的叠加 ,亦具有稳定性 ;通过对凝胶电泳图谱中特征带的分析 ,可以看出 :当DH5α的菌含量达到总菌量的 0 5 %时 ,可被ERIC PCR方法清楚地检测出来。为ERIC PCR用于土壤微生物和环境微生物的研究 。 展开更多
关键词 ERIC-PCR 指纹图谱 混合菌 检出灵敏度
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壳聚糖的制备及在食品工业中应用的机理 被引量：4
2
作者 崔丽方 石亚伟 《食品与药品》 CAS 2006年第03A期19-22,共4页
综述了利用化学法、酶法和微生物培养法制备壳聚糖的方法,并介绍了壳聚糖在食品中的一些应用机理。
关键词 甲壳素 壳聚糖 食品工业 应用机理
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高效液相色谱法测定环二酰胺酶催化水解马来酰亚胺动力学参数 被引量：2
3
作者 石亚伟 崔丽方 袁静明 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期48-51,共4页
采用高效液相色谱法（HPLC）分析并测定了环二酰胺酶水解马来酰亚胺反应的动力学参数。以Symmetry C18柱（4．6mm×150mm，5μm）为色谱柱，甲醇：10mmol／L K2HPO4～KH2PO4缓冲液（pH6．5）体积比5：95为流动相，检测波长为255nm... 采用高效液相色谱法（HPLC）分析并测定了环二酰胺酶水解马来酰亚胺反应的动力学参数。以Symmetry C18柱（4．6mm×150mm，5μm）为色谱柱，甲醇：10mmol／L K2HPO4～KH2PO4缓冲液（pH6．5）体积比5：95为流动相，检测波长为255nm，流速1．0mL／min等色谱条件，马来酰亚胺与其水解产物马来酰胺酸得到较理想的分离效果。按照Lineveaver-Burk的双倒数作图法求得环二酰胺酶催化马来酰亚胺水解的动力学参数为Km=39．09mmol／L，Vmax=154．02μmol／（min·mg），Vmax／Km=3．94，kcat=28750．4min^-1，kcat／Km=735．5mmol／（L·min）。30min环二酰胺酶催化底物马来酰亚胺转化率达到95％。该方法快速、准确、重复性好。 展开更多
关键词 高效液相色谱 环二酰胺酶 马来酰亚胺 马来酰胺酸 动力学参数
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环酰亚胺水解酶C末端区为该酶活性所必需 被引量：1
4
作者 石亚伟 陈云霞 +1 位作者 崔丽方 袁静明 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期141-146,共6页
为了研究一个新环酰亚胺水解酶（CIH）C端区残基对酶分子构象及酶活性的影响，设计了C末端缺失1～4个氨基酸残基以及C-末端2个Lvs替代为2个Glu或2个Leu的突变酶，以野生型酶基因重组质粒pE—cih293为模板，在相应引物存在下，通过PCR扩... 为了研究一个新环酰亚胺水解酶（CIH）C端区残基对酶分子构象及酶活性的影响，设计了C末端缺失1～4个氨基酸残基以及C-末端2个Lvs替代为2个Glu或2个Leu的突变酶，以野生型酶基因重组质粒pE—cih293为模板，在相应引物存在下，通过PCR扩增获得突变的CIH基因片段．经克隆、表达与纯化，得到不同的突变酶蛋白．酶活性测定、荧光光谱与CD谱分析表明，随着C-末端缺失残基的增多，酶活性丧失也越来越多，但酶分子的聚合状态未发生变化；当CIH的C末端2个Lys替代为2个Glu时，酶活性及分子结构变化均不明显，但当替代为2个Leu时，酶活性丧失殆尽，分子结构变得松散而不再保持寡聚态．pH及热稳定性实验也表明。酶的稳定性与其分子的完整性密切相关．结果证实，CIH的C末端电荷残基对该酶活性与分子状态具有重要作用． 展开更多
关键词 环酰亚胺水解酶 C-末端区 带电荷氨基酸 分子构象 稳定性
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