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用基因捕获法制作鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因“敲出”小鼠 被引量：5
1
作者 刘湘 汤华 +2 位作者 唐任宽 荒木喜美 山村研一 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期10-12,共3页
目的分析鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在小鼠生长发育过程中的功能。方法用特殊的捕获载体导入小鼠ES细胞中,5′RACE方法鉴定成功地捕获鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因(Oazin)后,由这种ES制作了Oazin“敲出”小鼠。结果Oazin“敲出”小鼠捕... 目的分析鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在小鼠生长发育过程中的功能。方法用特殊的捕获载体导入小鼠ES细胞中,5′RACE方法鉴定成功地捕获鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因(Oazin)后,由这种ES制作了Oazin“敲出”小鼠。结果Oazin“敲出”小鼠捕获载体位于Oazin基因启动子上游,Qazin基冈的转录被抑制。结论Oazin“敲出”小鼠为分析Oazin基因的功能提供了有用的实验材料。 展开更多
关键词 捕获载体 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子 ES细胞 小鼠 生长发育
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用基因诱捕法制作Ayu17-449基因敲除小鼠模型 被引量：2
2
作者 汤华 唐任宽 +2 位作者 黄爱龙 荒木喜美 山村研一 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期129-132,共4页
为了探明Ayu17449基因在小鼠生长发育过程中的功能,用特殊的诱捕载体(Genetrappingvector)导入小鼠ES细胞中,5′RACE、Southernblot方法鉴定单一捕获Ayu17449基因后,由这种ES制作了Ayu17449敲除小鼠并用Northernblot方法检测该基因在突... 为了探明Ayu17449基因在小鼠生长发育过程中的功能,用特殊的诱捕载体(Genetrappingvector)导入小鼠ES细胞中,5′RACE、Southernblot方法鉴定单一捕获Ayu17449基因后,由这种ES制作了Ayu17449敲除小鼠并用Northernblot方法检测该基因在突变小鼠体内的表达。结果在Ayu17449敲除小鼠体内,诱捕载体位于Ayu17449基因的翻译起始密码上游,Ayu17449基因的转录被抑制。表明Ayu17449敲除小鼠为分析Ayu17449基因的功能提供了可靠的实验材料。 展开更多
关键词 捕获载体 Ayu17-449 ES细胞
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用转基因小鼠作人类疾病的动物模型 被引量：1
3
作者 山村研一 陈泊 《国外医学（遗传学分册）》 1989年第5期263-265,共3页
1980年Gordon用重组DNA技术,将分离的基因注入小鼠的受精卵中,开创了利用转基因小鼠建立人类疾病的动物模型,现将其现状加以综述。一、显性遗传病模型:显性遗传病是由于正常基因变异后,表型异常的一组疾患,其发病的分子学机理有三,1.正... 1980年Gordon用重组DNA技术,将分离的基因注入小鼠的受精卵中,开创了利用转基因小鼠建立人类疾病的动物模型,现将其现状加以综述。一、显性遗传病模型:显性遗传病是由于正常基因变异后,表型异常的一组疾患,其发病的分子学机理有三,1.正常基因产物仅一半,故机能表现出异常;2.变异基因的产物引起异常的生物效应;3.杂合性的丢失。用此原理,引入异常基因而诱发显性遗传病,是建立转基因小鼠模型的基本原则,如家族性淀粉样多发性神经炎(FAP) 展开更多
关键词 重组DNA技术 基因 受精卵 遗传病
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小鼠新基因Ayu17-449的克隆及表达分析(英文)
4
作者 汤华 荒木喜美 山村研一 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第5期413-419,共7页
在利用PU8 捕获载体从小鼠 ES 细胞中寻找有关对发育起重要作用基因时,一阳性ES克隆编号为Ayu17-449 被捕获,经过Southern blotting法证实捕获载体单一整合在Ayu17-449号ES细胞的基因组中。通过用 5′RACE 法得到所捕获基因的一小段cDNA... 在利用PU8 捕获载体从小鼠 ES 细胞中寻找有关对发育起重要作用基因时,一阳性ES克隆编号为Ayu17-449 被捕获,经过Southern blotting法证实捕获载体单一整合在Ayu17-449号ES细胞的基因组中。通过用 5′RACE 法得到所捕获基因的一小段cDNA,在EST数据库中比对,得到一5 523 bp cDNA 序列,在Celera数据库中它包含于两个相邻基因,根据这两个基因的 mRNA 设立了一系列的引物进行 RT-PCR 和测序,用这两个基因的不同片段分别作探针进行 Northern blotting 分析,确定这是一个 RNA 约 9 kb 并编码 1 920 个氨基酸的新基因(定名为 Ayu17-449 基因,其 cDNA 序列和编码蛋白序列发表在NCBI数据库,编号为DQ079067)。Northern blotting揭示Ayu17-449基因高度表达在小鼠的脑、肾脏、心脏、肺、肌肉和胃等组织。PU8 捕获载体具有X-gal报告基因,能从蛋白表达水平揭示它所捕获的基因的表达模式。X-gal染色结果显示,Ayu17-449蛋白高度表达在小鼠的脑、肾脏、心脏等组织,与Northern blotting 法的结果高度一致。X-gal染色切片结果进一步证明 Ayu17-449 蛋白主要表达在脑的神经细胞和肾脏近曲小管细胞中。Ayu17-449 基因的编码蛋白在数据库(Scansite, http://scansite.mit.edu/)做功能基团分析后,揭示其编码蛋白的N末端含有Granin基团,大量文献证实Granin基团具有参与激素的分泌的功能,显示Ayu17-449基因可能与激素的分泌有关。 展开更多
关键词 基因捕获法 Ayu17-449基因 全长CDNA Granin基因
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