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稳定转染HSP72奶牛乳腺上皮细胞系建立与表达鉴定
被引量：
1
1
作者
于文慧
展
西
振
+4 位作者
丰艳妮
曹荣峰
姜忠玲
李华涛
田文儒
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2018年第6期103-107,共5页
为了构建HSP72慢病毒表达载体,建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系。以牛HSP72基因序列为模板,设计并合成引物,PCR扩增目的基因,连接到慢病毒表达质粒中,用包装获得的慢病毒感染牛乳腺上皮细胞,经一定浓度的嘌呤霉素筛选,Hochest3334...
为了构建HSP72慢病毒表达载体,建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系。以牛HSP72基因序列为模板,设计并合成引物,PCR扩增目的基因,连接到慢病毒表达质粒中,用包装获得的慢病毒感染牛乳腺上皮细胞,经一定浓度的嘌呤霉素筛选,Hochest33342法对细胞核定位,倒置荧光显微镜下观察转染效率,用免疫组化和Western Blot方法验证感染细胞是否稳定表达HSP72。结果显示,携带HSP72基因的慢病毒滴度约为1. 0×109TU/m L;确定嘌呤霉素的最佳筛选浓度为2μg/m L;牛HSP72慢病毒感染细胞表达HSP72,感染的奶牛乳腺上皮细胞在倒置荧光显微镜下可看到绿色荧光,转染效率可达90%以上;免疫组化结果表明,正常细胞和空载体感染细胞,HSP72呈现低表达,转染携带HSP72目的基因载体细胞,HSP72高表达,呈现颜色较深的棕色; Western Blot方法检测证实与正常转染细胞相比,慢病毒空载体转染的奶牛乳腺上皮细胞HSP72表达稍有降低,但无统计学差异,而携带HSP72基因的慢病毒载体转染的细胞HSP72呈现高表达,且差异极显著(P <0. 01),与慢病毒空载体转染的奶牛乳腺上皮细胞相比,携带HSP72基因的慢病毒载体转染的细胞HSP72呈现高表达,且差异极显著(P <0. 01)。成功建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系,可为研究奶牛乳腺炎分子调控机制以及抗性分子药物筛选提供新的理论依据和工作基础。
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关键词
HSP72
稳定转染
慢病毒载体
奶牛乳腺上皮细胞
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职称材料
猪PCK1基因SNPs检测及其与生长育肥性状的关联分析
2
作者
展
西
振
刘军
+4 位作者
彭雅鑫
秦亮
吕威
阮兴友
左波
《中国畜牧杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第11期106-111,118,共7页
本实验旨在研究猪磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(Phosphoenolpyruvate Carboxykinase 1,PCK1)基因SNPs及其与生长育肥性状之间的关系,为猪育种提供新的标记资源。本研究以美系大白猪为研究对象,采用直接测序的方法检测PCK1基因内部的多态性位点...
本实验旨在研究猪磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(Phosphoenolpyruvate Carboxykinase 1,PCK1)基因SNPs及其与生长育肥性状之间的关系,为猪育种提供新的标记资源。本研究以美系大白猪为研究对象,采用直接测序的方法检测PCK1基因内部的多态性位点,并与生长育肥性状进行关联分析。结果发现在美系大白猪中共检测到PCK1基因11个SNPs,关联分析结果显示,PCK1基因多态性位点rs713611695与初生重、达100 kg体重日龄极显著相关,与眼肌面积显著相关;多态性位点rs324442589与达100 kg体重日龄和体长性状显著相关、与眼肌面积极显著关联;多态性位点rs699149356与活体背膘厚极显著相关;多态性位点rs321585061与初生重极显著关联;多态性位点rs331839879与初生重极显著关联、与左乳头数显著关联;多态性位点rs335103760与初生重和眼肌面积极显著关联;多态性位点rs341303544与初生重极显著关联、与体长显著关联。连锁不平衡分析结果显示,多态性位点rs321585061与rs702046790、rs321585061与rs335103760、rs702046790与rs335103760、rs331839879与rs323291342、rs713611695与rs323291342、rs713611695与rs331839879处于强连锁不平衡(D’>0.8,r^(2)>0.33)。单倍型组合分析发现,单倍型组合H2-H5、H3-H3达100kg体重日龄极显著高于H1-H1、H1-H2、H1-H3、H2-H4;单倍型组合H1-H3、H1-H4、H3-H3活体背膘厚性状极显著高于H3-H4;单倍型组合H2-H5初生重极显著高于H2-H2;单倍型组合H1-H2、H1-H3、H2-H3眼肌面积极显著高于H2-H5;单倍型组合H1-H3体长极显著高于H3-H3,H1-H3是改良猪眼肌面积和体长性状的优势单倍型组合。以上结果表明PCK1基因可以作为猪遗传改良的候选基因,也为深入研究该基因功能提供了一定的参考。
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关键词
PCK1
猪
SNP
生长育肥
关联分析
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职称材料
题名
稳定转染HSP72奶牛乳腺上皮细胞系建立与表达鉴定
被引量：
1
1
作者
于文慧
展
西
振
丰艳妮
曹荣峰
姜忠玲
李华涛
田文儒
机构
青岛农业大学动物医学院
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2018年第6期103-107,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31502138
31572590
+3 种基金
31772815)
山东省高校科技计划项目(J15LF03)
青岛农业大学研究生创新计划项目(QYC201710)
山东省现代农业产业技术体系创新团队项目(SDAIT-09-03)
文摘
为了构建HSP72慢病毒表达载体,建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系。以牛HSP72基因序列为模板,设计并合成引物,PCR扩增目的基因,连接到慢病毒表达质粒中,用包装获得的慢病毒感染牛乳腺上皮细胞,经一定浓度的嘌呤霉素筛选,Hochest33342法对细胞核定位,倒置荧光显微镜下观察转染效率,用免疫组化和Western Blot方法验证感染细胞是否稳定表达HSP72。结果显示,携带HSP72基因的慢病毒滴度约为1. 0×109TU/m L;确定嘌呤霉素的最佳筛选浓度为2μg/m L;牛HSP72慢病毒感染细胞表达HSP72,感染的奶牛乳腺上皮细胞在倒置荧光显微镜下可看到绿色荧光,转染效率可达90%以上;免疫组化结果表明,正常细胞和空载体感染细胞,HSP72呈现低表达,转染携带HSP72目的基因载体细胞,HSP72高表达,呈现颜色较深的棕色; Western Blot方法检测证实与正常转染细胞相比,慢病毒空载体转染的奶牛乳腺上皮细胞HSP72表达稍有降低,但无统计学差异,而携带HSP72基因的慢病毒载体转染的细胞HSP72呈现高表达,且差异极显著(P <0. 01),与慢病毒空载体转染的奶牛乳腺上皮细胞相比,携带HSP72基因的慢病毒载体转染的细胞HSP72呈现高表达,且差异极显著(P <0. 01)。成功建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系,可为研究奶牛乳腺炎分子调控机制以及抗性分子药物筛选提供新的理论依据和工作基础。
关键词
HSP72
稳定转染
慢病毒载体
奶牛乳腺上皮细胞
Keywords
HSP72
Stable transfection
Lentivirus vector
Mammary epithelial cells of dairy cows
分类号
S823.03 [农业科学—畜牧学]
Q78 [农业科学—畜牧兽医]
下载PDF
职称材料
题名
猪PCK1基因SNPs检测及其与生长育肥性状的关联分析
2
作者
展
西
振
刘军
彭雅鑫
秦亮
吕威
阮兴友
左波
机构
华中农业大学动物科技学院
农业农村部猪遗传育种重点实验室
农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室
济南市章丘区畜牧兽医事业发展中心
出处
《中国畜牧杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第11期106-111,118,共7页
基金
农业农村部核心攻关项目(NK2022110404)
湖北省重大科技专项(2021ABA016)
湖北省自然科学基金(2021CFA018)。
文摘
本实验旨在研究猪磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(Phosphoenolpyruvate Carboxykinase 1,PCK1)基因SNPs及其与生长育肥性状之间的关系,为猪育种提供新的标记资源。本研究以美系大白猪为研究对象,采用直接测序的方法检测PCK1基因内部的多态性位点,并与生长育肥性状进行关联分析。结果发现在美系大白猪中共检测到PCK1基因11个SNPs,关联分析结果显示,PCK1基因多态性位点rs713611695与初生重、达100 kg体重日龄极显著相关,与眼肌面积显著相关;多态性位点rs324442589与达100 kg体重日龄和体长性状显著相关、与眼肌面积极显著关联;多态性位点rs699149356与活体背膘厚极显著相关;多态性位点rs321585061与初生重极显著关联;多态性位点rs331839879与初生重极显著关联、与左乳头数显著关联;多态性位点rs335103760与初生重和眼肌面积极显著关联;多态性位点rs341303544与初生重极显著关联、与体长显著关联。连锁不平衡分析结果显示,多态性位点rs321585061与rs702046790、rs321585061与rs335103760、rs702046790与rs335103760、rs331839879与rs323291342、rs713611695与rs323291342、rs713611695与rs331839879处于强连锁不平衡(D’>0.8,r^(2)>0.33)。单倍型组合分析发现,单倍型组合H2-H5、H3-H3达100kg体重日龄极显著高于H1-H1、H1-H2、H1-H3、H2-H4;单倍型组合H1-H3、H1-H4、H3-H3活体背膘厚性状极显著高于H3-H4;单倍型组合H2-H5初生重极显著高于H2-H2;单倍型组合H1-H2、H1-H3、H2-H3眼肌面积极显著高于H2-H5;单倍型组合H1-H3体长极显著高于H3-H3,H1-H3是改良猪眼肌面积和体长性状的优势单倍型组合。以上结果表明PCK1基因可以作为猪遗传改良的候选基因,也为深入研究该基因功能提供了一定的参考。
关键词
PCK1
猪
SNP
生长育肥
关联分析
分类号
S828.2 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
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操作
1
稳定转染HSP72奶牛乳腺上皮细胞系建立与表达鉴定
于文慧
展
西
振
丰艳妮
曹荣峰
姜忠玲
李华涛
田文儒
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2018
1
下载PDF
职称材料
2
猪PCK1基因SNPs检测及其与生长育肥性状的关联分析
展
西
振
刘军
彭雅鑫
秦亮
吕威
阮兴友
左波
《中国畜牧杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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