当归对体内外血吸虫卵肉芽肿反应抑制作用的实验研究 被引量：14

1

作者 谢可鸣 居颂光 +1 位作者 顾永平 胡玉敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期1122-1125,共4页

目的 :验证中药当归制剂对虫卵诱发的肉芽肿反应有无直接抑制作用。方法 :将曰本血吸虫活卵悬液经尾静脉给致敏的ICR小鼠定量注入 ,在小鼠肺部建立体内肉芽肿反应模型 ,再经腹腔给用药组小鼠注射当归制剂 ;另取肺模型鼠及曰本血吸虫急... 目的 :验证中药当归制剂对虫卵诱发的肉芽肿反应有无直接抑制作用。方法 :将曰本血吸虫活卵悬液经尾静脉给致敏的ICR小鼠定量注入 ,在小鼠肺部建立体内肉芽肿反应模型 ,再经腹腔给用药组小鼠注射当归制剂 ;另取肺模型鼠及曰本血吸虫急性感染鼠脾细胞进行体外培养 ,在培养系统中加入曰本血吸虫干卵 ,从而建立围绕虫卵的体外肉芽肿反应模型 ,根据围绕虫卵反应的细胞数确定反应强度 (反应指数 ,RI)。测定肺单卵肉芽肿直径及观察培养液中加入当归制剂对反应强度的影响等。结果 :体内用药后 ,给药组小鼠肺肉芽肿平均直径显著小于对照组 (P <0 0 5 ) ,肉芽肿反应增长比显著低于对照组 (P <0 0 1) ;给药组小鼠脾细胞在体外围绕虫卵的反应在加卵后第 5d起明显弱于对照组 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ;在培养液中加入当归制剂后可使感染鼠脾细胞的RI显著下降 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ,并有一定的剂量效应。结论 :中药当归制剂在体内外模型中给药均可明显抑制由虫卵诱发的肉芽肿性炎症反应。 展开更多

关键词 实验研究 当归 肉芽肿 日本血吸虫 中药 药理

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鼠抗人CD28分子单克隆抗体的研制及生物学特性研究 被引量：22

2

作者 邱玉华 张学光 +2 位作者 季玉红 居颂光 王廷 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期368-370,共3页

目的制备鼠抗人CD28分子的单克隆抗体(mAb)，研究其在T细胞的活化、增殖及信号传导中的作用。方法以小鼠淋巴瘤细胞转染人CD28基因的细胞株(CD28-T)为免疫原，采用B淋巴细胞杂交瘤技术，获取分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株。以体内诱生法... 目的制备鼠抗人CD28分子的单克隆抗体(mAb)，研究其在T细胞的活化、增殖及信号传导中的作用。方法以小鼠淋巴瘤细胞转染人CD28基因的细胞株(CD28-T)为免疫原，采用B淋巴细胞杂交瘤技术，获取分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株。以体内诱生法生产腹水，并以免疫亲和层析法对其纯化。以快速定性试纸法鉴定mAb的Ig亚类，竞争抑制法分析mAb识别的抗原表位，3H-TdR掺入法研究mAb对T细胞的刺激效应。结果成功地获得了5株分泌特异性抗人CD28 mAb的杂交瘤细胞株，鉴定的1株(克隆18G8)属IgG2a，腹水效价(流式细胞仪分析)达1:2 400以上。该mAb能60％阻断标准鼠抗人CD28抗体与相应抗原的结合，提示其识别的抗原表位与标准mAb不完全相同。mAb 18G8可取代B7-1分子介导的协同刺激信号，促进人外周血T细胞增殖(SI=7)。结论18G8是1株功能性mAb，具有重要的研究和应用价值。 展开更多

关键词 CD28分子 协同刺激信号 杂交瘤 单克隆抗体 增殖效应

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鼠抗人CD28功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定 被引量：5

3

作者 居颂文 刘琳 +4 位作者 居颂光 於葛华 潘建忠 邱玉华 张学光 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期318-320,共3页

以天然表达CD28分子的人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞:XG-1为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,CD28转基因细胞株(T-28)及XG-1为抗体筛选阳性细胞株,经免疫荧光标记分析反复筛选和多次的克隆... 以天然表达CD28分子的人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞:XG-1为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,CD28转基因细胞株(T-28)及XG-1为抗体筛选阳性细胞株,经免疫荧光标记分析反复筛选和多次的克隆化培养,最终获得1株持续、稳定分泌鼠抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为10F3。对这株单抗生物学功能的研究结果表明,这株抗体能特异性地识别人CD28分子和介导有效的共刺激信号,激发T细胞的活化和增殖。 展开更多

关键词 CD28 杂交瘤 多发性骨髓瘤 单克隆抗体

原文传递

虚拟实验室在免疫学实验教学中的应用 被引量：10

4

作者 谢炜 居颂光 +1 位作者 葛彦 潘建忠 《中国教育技术装备》 2011年第36期113-115,共3页

虚拟实验室是一个计算机网络化的仿真实验环境,具有沉浸感和交互性的特点。将虚拟实验室引入免疫学实验教学,有助于将抽象的免疫学原理具体化、形象化,并可以拓展免疫学的实验条件,增强学生的学习兴趣,提高免疫学实验教学质量。

关键词 免疫学 实验教学 虚拟实验室

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4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用 被引量：5

5

作者 仇红霞 张学光 +5 位作者 居颂光 居颂文 吴倩妮 刘高勤 周斌 王凤鸣 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期916-918,共3页

目的研究4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用。方法用流式细胞术(FCM)和RT-PCR法检测4-1BBL分子在U937、SHI-1细胞系的表达;将激发型4-1BBL单抗(1F1)与U937、SHI-1细胞系分别进行培养,细胞计数分析2... 目的研究4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用。方法用流式细胞术(FCM)和RT-PCR法检测4-1BBL分子在U937、SHI-1细胞系的表达;将激发型4-1BBL单抗(1F1)与U937、SHI-1细胞系分别进行培养,细胞计数分析2个细胞系的生长情况;收集U937细胞的培养上清,ELISA法检测细胞因子。结果FCM测得U937和SHI-1细胞有4-1BBL分子表达,RT-PCR法测得4-1BBLmRNA;细胞计数表明,1F1明显促U937、SHI-1细胞系生长(P<0·01);ELISA示1F1与U937细胞共培养48h,其上清液中IL-6含量(55·91±10·23)pg/ml,显著高于IgG1同型对照组的(12·14±3·8)pg/ml(P<0·01)。结论U937和SHI-1细胞系组成性表达4-1BBL分子;1F1与U937、SHI-1细胞的4-1BBL分子交联后,可促进U937、SHI-1细胞系生长,诱导U937细胞分泌细胞因子IL-6。 展开更多

关键词 4-1BBL配体 急性单核细胞白血病细胞系 逆向信号

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人M5型白血病-SCID小鼠模型的建立及白血病病理变化的分析 被引量：6

6

作者 周斌 居颂光 +2 位作者 居颂文 谢芳 张学光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期501-503,共3页

目的:建立人M5型白血病细胞系SHI-1/SCID(重症联合免疫缺陷)小鼠模型,探讨白血病细胞的接种密度与SCID小鼠成瘤率及病理变化的关系。方法:将不同密度的人白血病细胞SHI-1注射至SCID小鼠腹腔。定期尾静脉取血并以流式细胞术(FCM)监测肿... 目的:建立人M5型白血病细胞系SHI-1/SCID(重症联合免疫缺陷)小鼠模型,探讨白血病细胞的接种密度与SCID小鼠成瘤率及病理变化的关系。方法:将不同密度的人白血病细胞SHI-1注射至SCID小鼠腹腔。定期尾静脉取血并以流式细胞术(FCM)监测肿瘤细胞表面标志CD14及CD137L的变化。通过病理组织学检查和FCM分析SCID小鼠的骨髓、肝脏、脾脏和肾脏中白血病细胞的浸润及病理变化。结果:将不同密度的SHI-1细胞移植至小鼠腹腔,均可发现瘤块生长。同时中、高剂量组小鼠的主要组织器官呈现不同程度的肿瘤细胞的浸润。最早在移植3周后即可在尾静脉检测到肿瘤细胞,并与注射细胞量相关。结论:建立的SHI-1/SCID小鼠模型为人M5型白血病的研究提供了有价值的动物模型。 展开更多

关键词 白血病 急性 SCID小鼠 模型

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人重组IL-17/His蛋白的原核表达、纯化及其生物学活性 被引量：8

7

作者 刘高勤 吴鸿雅 +4 位作者 张光波 马泓冰 马珍妮 居颂光 张学光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期715-718,共4页

目的:研究人IL-17的体外生物学活性。方法:采用RT-PCR的方法克隆得到了hIL-17基因序列。将测序正确的人IL-17基因装入PQE3.0原核表达载体构建重组载体hIL-17/PQE3.0。该重组载体导入宿主菌M15,经异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生IL... 目的:研究人IL-17的体外生物学活性。方法:采用RT-PCR的方法克隆得到了hIL-17基因序列。将测序正确的人IL-17基因装入PQE3.0原核表达载体构建重组载体hIL-17/PQE3.0。该重组载体导入宿主菌M15,经异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生IL-17/His融合蛋白,并经West-ernblot实验确认。结果:原核表达的hIL-17/His重组蛋白经变性、复性后,利用HiTrapTM亲和层析得到纯品蛋白。体外活性实验表明,该融合蛋白具有刺激人宫颈癌细胞株HeLa分泌IL-6和GM-CSF的作用。结论:制备了具有生物学活性的IL-17/His重组蛋白,为进一步研究该分子在自身免疫疾病等方面的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 IL-17 原核表达 复性 纯化

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FL转基因细胞的构建及膜型FL对U937细胞的体外促增殖效应 被引量：1

8

作者 居颂光 居颂文 +8 位作者 傅晋翔 仇红霞 王明元 周斌 王凤鸣 刘彤 刘高勤 邱玉华 张学光 《中国现代医药杂志》 2005年第5期1-4,共4页

目的构建稳定表达人膜型FL分子的转基因细胞株,观察膜型FL和可溶性FL对单核细胞性(M5型)白血病细胞株的体外促增殖效应。方法利用PCR方法克隆人FL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term,转染包装细胞293T,用含有完整重组逆转... 目的构建稳定表达人膜型FL分子的转基因细胞株,观察膜型FL和可溶性FL对单核细胞性(M5型)白血病细胞株的体外促增殖效应。方法利用PCR方法克隆人FL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term,转染包装细胞293T,用含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的转基因细胞。采用RT-PCR和流式细胞仪表型分析等方法进行鉴定。MTT法分析了L929/FL细胞和可溶性FL体外刺激U937细胞的增殖效应。结果成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞L929/FL,膜型FL在体外能够有效促进U937细胞增殖,而可溶性FL并不能有效促进U937细胞的体外增殖。结论成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞,并且提示膜型FL在白血病发病机理中可能具有重要作用。 展开更多

关键词 FL 转基因细胞 白血病 细胞株 U937细胞 转基因细胞 促增殖效应 FL细胞 体外刺激 膜型 逆转录病毒表达载体 白血病细胞株 L929细胞

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4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达 被引量：2

9

作者 仇红霞 居颂光 +2 位作者 居颂文 吴静妮 张学光 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1001-1004,共4页

目的:研究共刺激分子4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达及其生物学意义。方法:流式细胞仪检测4-1BBL分子在不同的人恶性血液病细胞系的表达;用可介导4-1BBL逆向信号的鼠抗人4-1BBL单抗(mAb1F1)作用于8个不同的人恶性血液病细胞系,... 目的:研究共刺激分子4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达及其生物学意义。方法:流式细胞仪检测4-1BBL分子在不同的人恶性血液病细胞系的表达;用可介导4-1BBL逆向信号的鼠抗人4-1BBL单抗(mAb1F1)作用于8个不同的人恶性血液病细胞系,细胞计数法和3H-TdR掺入法评价细胞系的体外生长和增殖。结果:FACS结果显示4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系上有不同程度的表达,其中髓性白血病细胞系U937、HL60及B淋巴瘤细胞系Raji、Daudi上呈现较高水平的表达。细胞计数和3H-TdR掺入实验结果表明mAb1F1对髓性白血病细胞系U937和HL60,具有较强的促增殖效应。结论:共刺激分子4-1BBL分子在髓性白血病细胞系和B淋巴瘤细胞系上表达率较高;4-1BBL分子可通过介导逆向信号促进髓性白血病细胞系U937和HL60的生长和增殖。 展开更多

关键词 4-1BBL 逆向信号 人恶性血液病细胞系

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人PD-L1基因转染细胞株的构建及其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响 被引量：3

10

作者 宋莉 葛彦 +5 位作者 曹莎莎 徐永芳 潘建忠 谢炜 居颂文 居颂光 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2015年第2期123-127,共5页

目的:构建稳定表达人PD-L1分子的基因转染细胞株,观察其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响。方法:将编码人PD-L1分子的全长c DNA重组入反转录病毒表达载体p EGZ-Term-R,将重组载体p EGZ-Term-R/PD-L1和辅助病毒载体用脂质体法共转染2... 目的:构建稳定表达人PD-L1分子的基因转染细胞株,观察其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响。方法:将编码人PD-L1分子的全长c DNA重组入反转录病毒表达载体p EGZ-Term-R,将重组载体p EGZ-Term-R/PD-L1和辅助病毒载体用脂质体法共转染293T细胞,包装具有感染能力的完整病毒;收集含有完整重组反转录病毒的293T细胞培养上清,感染L929细胞,筛选并获得G418抗性的基因转染细胞。采用流式细胞术检测表达PDL1的基因转染细胞,命名为L929/PD-L1。采用PHA活化T细胞系来源的细胞株Jurkat,并将其与丝裂霉素预处理的L929/PD-L1细胞共培养,用细胞计数法观察L929/PD-L1细胞株对活化的Jurkat细胞增殖能力的影响,并检测其凋亡情况。结果:成功获得了稳定表达人PD-L1基因的转染细胞株L929/PD-L1。PHA可诱导Jurkat细胞活化并表达PD-1分子;L929/PD-L1与PHA刺激后的Jurkat细胞共培养,可抑制Jurkat细胞增殖,促进其凋亡。结论:成功构建了稳定表达人PD-L1的细胞株,PD-L1分子抑制活化的Jurkat细胞增殖,促进其凋亡。 展开更多

关键词 PD-L1 基因转染细胞株 JURKAT细胞

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对高校“学生评教”利弊的思考 被引量：5

11

作者 居颂光 《中国临床研究》 CAS 2011年第9期861-862,共2页

高校学生评教制度是学校教学管理部门组织学生定期对教师教学做出评估的一种制度[1]。“学生评教”作为一种制度被确立，是高校教学管理体系中的一个重要环节。在每个学期期中或期末组织大学生对任课教师进行评价。有些高校主要根据“... 高校学生评教制度是学校教学管理部门组织学生定期对教师教学做出评估的一种制度[1]。“学生评教”作为一种制度被确立，是高校教学管理体系中的一个重要环节。在每个学期期中或期末组织大学生对任课教师进行评价。有些高校主要根据“学生评教”的结果对教师的教学水平进行评价，甚至作为年终考核和职称评聘的依据[2]。然而在具体执行过程中，教师和学生对此制度反应不一，“学生评教”常起不到预期效果， 展开更多

关键词 高校 教学 学生评教

原文传递

老年慢性支气管哮喘患者血清NGF及CTGF水平的变化 被引量：5

12

作者 王卓 居颂光 《放射免疫学杂志》 CAS 2011年第3期340-341,共2页

支气管哮喘是气道的一种慢性变态反应性炎症性疾病,由肥大细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等多种炎症细胞介导的气道炎症,引起气道高反应性和广泛的、可逆性气阻塞。支气管哮喘的发病原因非常复杂,可能与炎症、免疫学异常、遗传、感染、... 支气管哮喘是气道的一种慢性变态反应性炎症性疾病,由肥大细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等多种炎症细胞介导的气道炎症,引起气道高反应性和广泛的、可逆性气阻塞。支气管哮喘的发病原因非常复杂,可能与炎症、免疫学异常、遗传、感染、环境因素和Thl/Th2细胞亚群失衡等有关。 展开更多

关键词 支气管哮喘 老年慢性 CTGF 哮喘患者 NGF 炎症性疾病 TH2细胞亚群 血清

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疫情背景下留学生“医学免疫学课程”教学模式改革的思考 被引量：6

13

作者 葛彦 居颂光 张学光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第18期2215-2217,共3页

医学免疫学是留学生临床医学专业必修课程,在医学教育具有重要地位。医学免疫学的前沿性、复杂性、抽象性等特点对教学双方提出了高要求。2020年初始发生的新型冠状病毒肺炎疫情严重影响了留学生医学免疫学的“线下”教学。本教学团队... 医学免疫学是留学生临床医学专业必修课程,在医学教育具有重要地位。医学免疫学的前沿性、复杂性、抽象性等特点对教学双方提出了高要求。2020年初始发生的新型冠状病毒肺炎疫情严重影响了留学生医学免疫学的“线下”教学。本教学团队以此为契机,探讨如何创新教学理念、重组教学内容和改革教学模式应对疫情对留学生医学免疫学带来的不利影响,并为疫情平息后提升留学生医学免疫学教学质量奠定基础。 展开更多

关键词 医学免疫学 留学生 教学

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佛波酯对人视网膜神经母细胞瘤Y79细胞株表达CD133的调节作用 被引量：1

14

作者 王明元 居颂光 +6 位作者 居颂文 王凤鸣 周晓华 狄文英 曲静 方振羊 张学光 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期441-443,共3页

目的研究佛波酯(PMA)对人视网膜神经母细胞瘤表达CD133的影响。方法以人视网膜神经母细胞瘤Y79细胞株为研究对象,采用流式细胞术、RT-PCR方法检测PMA刺激后Y79细胞株CD133的表达。结果5ng/ml PMA显著增加CD133的表达,其作用在PMA刺激48... 目的研究佛波酯(PMA)对人视网膜神经母细胞瘤表达CD133的影响。方法以人视网膜神经母细胞瘤Y79细胞株为研究对象,采用流式细胞术、RT-PCR方法检测PMA刺激后Y79细胞株CD133的表达。结果5ng/ml PMA显著增加CD133的表达,其作用在PMA刺激48h后最为明显。但与此同时,CD133mRNA表达较刺激前明显下降。H-7抑制PMA对Y79细胞的作用。结论PMA能够诱导人视网膜神经母细胞瘤Y79细胞株CD133蛋白表达增加。这一作用主要通过活化蛋白激酶C(PKC)通路来实现,而CD133抗原表达可能是转录后进行调节。 展开更多

关键词 视网膜神经母细胞瘤 佛波酯 CD133

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一株抗重组人促红细胞生成素单克隆抗体杂交瘤的研制 被引量：1

15

作者 居颂光 朱华亭 +3 位作者 邱玉华 胡云龙 居颂文 张学光 《苏州医学院学报》 2000年第12期1098-1100,共3页

目的　研制特异性识别人促红细胞生成素的单克隆抗体 ,并对其生物学特性作出初步鉴定。方法　采用重组人促红细胞生成素 (rhEPO)为抗原 ,常规免疫BALB/c小鼠 ,经细胞融合、ELISA筛选、有限稀释亚克隆获得抗人EPO杂交瘤 ,以免疫印迹和快... 目的　研制特异性识别人促红细胞生成素的单克隆抗体 ,并对其生物学特性作出初步鉴定。方法　采用重组人促红细胞生成素 (rhEPO)为抗原 ,常规免疫BALB/c小鼠 ,经细胞融合、ELISA筛选、有限稀释亚克隆获得抗人EPO杂交瘤 ,以免疫印迹和快速Ig亚型分类对所获单抗作出初步鉴定。结果　经筛选获得 1株稳定分泌的抗rhEPO单抗的杂交瘤细胞株 (1D1)。亚型鉴定为IgG2b ,轻链为κ链 ,用Westernblot分析证实该单抗对rhEPO特异性识别。结论　成功获得 展开更多

关键词 重组人促红细胞生成素 单克隆抗体 抗贫血药

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激发型4-1BBL单抗在体内对人白血病系胞系SHI-1生物学行为的影响

16

作者 周斌 居颂光 +6 位作者 居颂文 王凤鸣 於葛华 胡玉敏 谢芳 仇红霞 张学光 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期449-452,共4页

通过激发型4-1BBL单抗作用于人M5型白血病-SCID小鼠模型,研究4-1BBL/4-1BB逆向信号在体内对M5型白血病细胞系SHI-1生物学行为的影响。将1×106SHI-1细胞移植至SCID小鼠腹腔,经1F1单抗作用,于移植30 d后小鼠尾静脉取血并采用流式细胞... 通过激发型4-1BBL单抗作用于人M5型白血病-SCID小鼠模型,研究4-1BBL/4-1BB逆向信号在体内对M5型白血病细胞系SHI-1生物学行为的影响。将1×106SHI-1细胞移植至SCID小鼠腹腔,经1F1单抗作用,于移植30 d后小鼠尾静脉取血并采用流式细胞术(FCM)监测4-1BBL阳性细胞表达率。于移植42 d后处死小鼠,通过病理组织学检查和FCM,分析SCID小鼠的骨髓、外周血、肝脏和脾脏中白血病细胞的浸润及病理变化。结果:各组小鼠腹腔均可发现瘤块生长。单抗作用组小鼠肿块出现较早,生长速度较快,其主要组织器官更发现有肿瘤细胞的浸润。1F1单抗在体内可促进SHI-1细胞的增殖与迁移,这为研究M5型白血病的发生与发展提供了理论依据。 展开更多

关键词 4-1BBL 白血病 急性 SCID小鼠

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人CD48基因转染细胞株的构建 被引量：2

17

作者 田辛辛 葛彦 +8 位作者 袁桦 蔡文治 杨鹏 蒋林华 殷丽丽 张弛 孙雪薇 居颂文 居颂光 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第4期527-530,共4页

目的克隆人CD48基因,构建稳定表达CD48分子的基因转染细胞株。方法提取人外周血单个核细胞总RNA,通过RT-PCR克隆获得人CD48基因,将人CD48基因重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染力的完整重组病毒载体,进而感... 目的克隆人CD48基因,构建稳定表达CD48分子的基因转染细胞株。方法提取人外周血单个核细胞总RNA,通过RT-PCR克隆获得人CD48基因,将人CD48基因重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染力的完整重组病毒载体,进而感染L929细胞,构建稳定表达人CD48分子的基因转染细胞株。结果成功克隆人CD48基因和构建PGEZ/CD48逆转录病毒表达载体,进而成功获得稳定表达人CD48的基因转染细胞株L/CD48。结论成功克隆了人CD48基因及其逆转录表达载体,并构建了稳定表达CD48分子的基因转染细胞株,为探讨CD48生物学功能的研究奠定了物质基础。 展开更多

关键词 CD48 逆转录表达载体 基因转染细胞株

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人4-1BBL转基因细胞株的构建及其生物学功能的研究 被引量：1

18

作者 居颂文 居颂光 +5 位作者 仇红霞 胡玉敏 王凤鸣 王明元 王勤 张学光 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第4期539-542,共4页

目的为探讨人4-1BBL分子的生物学功能,构建人4-1BBL转基因细胞株。方法利用RT-PCR方法克隆人4-1BBL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term。重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/4-1BBL与两个辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞29... 目的为探讨人4-1BBL分子的生物学功能,构建人4-1BBL转基因细胞株。方法利用RT-PCR方法克隆人4-1BBL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term。重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/4-1BBL与两个辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的转基因细胞。3H-TdR掺入实验分析4-1BBL转基因细胞对T细胞增殖的影响,ELISA法分析细胞因子的分泌。结果流式细胞仪表型分析结果表明,L929/4-1BBL转基因细胞稳定表达人4-1BBL分子。体外实验表明,L929/4-1BBL细胞能够促进T细胞活化、增殖及IL-2、IL-6和IFN-γ的分泌。结论该研究成功克隆了人4-1BBL基因,构建了能稳定表达4-1BBL分子的转基因细胞株L929/4-1BBL,该株转基因细胞能提供有效的4-1BBL共刺激信号,促进T细胞活化、增殖及细胞因子的分泌。 展开更多

关键词 4-1BBL 转基因细胞 T细胞

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AC133-2分子的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建 被引量：1

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作者 王明元 居颂光 +6 位作者 居颂文 狄文英 周晓华 薛群 曲静 方振羊 张学光 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第1期31-33,共3页

目的克隆人AC133-2全长基因,构建PGEZ-Term-AC133—2逆转录病毒表达载体。方法采用分段克隆的方法,通过聚合链式反应从胎肝文库中克隆AC133-2,并构建AC133—2基因的逆转录病毒表达载体。结果成功克隆AC133—2全长基因并构建PGEZ-Term-AC... 目的克隆人AC133-2全长基因,构建PGEZ-Term-AC133—2逆转录病毒表达载体。方法采用分段克隆的方法,通过聚合链式反应从胎肝文库中克隆AC133-2,并构建AC133—2基因的逆转录病毒表达载体。结果成功克隆AC133—2全长基因并构建PGEZ-Term-AC133-2逆转录病毒表达载体。结论AC133-2全长基因克隆及构建逆转录病毒表达载体的成功,为构建AC133-2转基因细胞和制备抗人AC133-2单克隆抗体和研究AC133-2的生物学功能奠定了物质基础。 展开更多

关键词 AC133—2基因 逆转录病毒表达载体

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4-1BBL介导的逆向信号对人外周血T细胞体外活化的调节作用

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作者 居颂文 居颂光 +6 位作者 仇红霞 王凤鸣 王明元 胡玉敏 刘彤 刘高勤 张学光 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期101-104,共4页

目的探讨表达于活化T细胞上的4-1BBL分子对T细胞的调节作用及可能机制。方法鼠抗人4-1BBL单克隆抗体1F1加入CD3单抗联合CD28单抗激发的T细胞培养体系。细胞计数分析T细胞的增殖;PI/AnnexinⅤ双染法分析T细胞的凋亡;ELISA法测定培养上清... 目的探讨表达于活化T细胞上的4-1BBL分子对T细胞的调节作用及可能机制。方法鼠抗人4-1BBL单克隆抗体1F1加入CD3单抗联合CD28单抗激发的T细胞培养体系。细胞计数分析T细胞的增殖;PI/AnnexinⅤ双染法分析T细胞的凋亡;ELISA法测定培养上清中细胞因子的分泌水平;流式细胞仪分析T细胞的表型。结果单抗1F1能够有效地抑制活化T细胞的体外增殖并诱导其凋亡,同时单抗1F1还可抑制活化T细胞分泌IL-2和IFN-γ及上调T细胞表面CD95和PD-1分子的表达。结论在T细胞活化过程中,活化T细胞表达的4-1BBL分子通过逆向信号抑制其细胞因子的分泌和上调负性调控分子,进而抑制T细胞的过度活化和下调T细胞介导的免疫应答。 展开更多

关键词 4-1BBL 逆向信号 共刺激分子 T细胞活化

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