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PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：19
1
作者 施开创 王睿敏 +4 位作者 黎宗强 谢守玉 尹彦文 陆文俊 屈素洁 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期595-600,共6页
为建立鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)的方法,本研究分别针对PEDVN基因、TGEVM基因、PDCoVM基因和PRoVVP6基因设计特异性引物和TaqMan探针,经过优化反应条件,... 为建立鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)的方法,本研究分别针对PEDVN基因、TGEVM基因、PDCoVM基因和PRoVVP6基因设计特异性引物和TaqMan探针,经过优化反应条件,建立了同时检测4种病毒的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法仅特异性扩增PEDV、TGEV、PDCoV和PRoV,与猪其它主要病毒无交叉反应,特异性较强;对PEDV、TGEV、PDCoV和PRoV的质粒标准品的最低检出限分别为2.06×10^2拷贝/μL、2.06×10^2拷贝/μL、2.06×10^1拷贝/μL、2.06×10^3拷贝/μL,具有较高敏感性;组内与组间变异系数均小于1.1%,具有良好的重复性。应用该方法和普通多重RT-PCR检测临床采集的243份腹泻病料样品,两者的符合率为96.71%。本研究建立的方法为临床PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的鉴别检测及流行病学调查提供了一种快速、特异、敏感、高效的技术手段。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪德尔塔冠状病毒 猪轮状病毒 荧光定量RT-PCR
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猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒猪Delta冠状病毒和猪轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立 被引量：18
2
作者 王睿敏 施开创 +5 位作者 黎宗强 尹彦文 谢守玉 莫胜兰 陆文俊 屈素洁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期190-198,共9页
针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪Delta冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)基因序列,分别设计特异性引物,扩增PEDV N基因(750 bp)、TGEV M基因(544 bp)、PDCoV N基因(183 bp)和PRoV VP6基因(329 bp)。经过对... 针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪Delta冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)基因序列,分别设计特异性引物,扩增PEDV N基因(750 bp)、TGEV M基因(544 bp)、PDCoV N基因(183 bp)和PRoV VP6基因(329 bp)。经过对引物浓度、退火温度等反应条件的优化及特异性、敏感性、重复性试验,成功建立了快速鉴别检测PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的多重RT-PCR方法。该方法仅对PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV检测为阳性,对口蹄疫病毒(FMDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)等主要病毒的扩增均为阴性。PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV重组质粒标准品的检出下限分别为1.57×10~2、1.57×10~3、1.57×10~2、1.57×10~2copies/L。相同条件下的重复性试验获得均匀一致的结果。应用所建立的方法检测2017—2018年采集自广西各地的270份腹泻病料,结果显示,PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的阳性率分别为15.56%、11.48%、10.74%、1.85%,并且存在混合感染现象。上述结果表明,所建立的多重RT-PCR方法可用于PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的快速鉴别检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪Delta冠状病毒 猪轮状病毒 多重RT-PCR 检测方法
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2015—2017年广西鸡源沙门氏菌耐药性与致病性的相关性分析 被引量：14
3
作者 张珍 施开创 +4 位作者 王孝德 黎宗强 尹彦文 屈素洁 陆文俊 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2350-2358,共9页
【目的】明确鸡源致病性沙门氏菌耐药表型与致病性的相关性,为有效防控鸡沙门氏菌病提供科学依据。【方法】采用玻片凝集试验对55株鸡源沙门氏菌广西分离株进行血清型鉴定,以纸片扩散(K-B)法和PCR分别测定其耐药表型及耐药基因,通过小... 【目的】明确鸡源致病性沙门氏菌耐药表型与致病性的相关性,为有效防控鸡沙门氏菌病提供科学依据。【方法】采用玻片凝集试验对55株鸡源沙门氏菌广西分离株进行血清型鉴定,以纸片扩散(K-B)法和PCR分别测定其耐药表型及耐药基因,通过小鼠攻毒试验检测其致病性,并分析鸡源沙门氏菌广西分离株耐药表型与致病性的相关性。【结果】55株沙门氏菌广西分离株以鼠伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌为主,对青霉素G、阿莫西林、苯唑西林、头孢噻吩、红霉素和利福平的耐药率均达100.00%,而对庆大霉素和大观霉素较敏感(耐药率在10.00%以下)。55株沙门氏菌广西分离株中有1株(占1.82%)携带7种耐药基因、6株(占10.91%)携带6种耐药基因、20株(占36.36%)携带5种耐药基因、12株(占21.82%)携带4种耐药基因、13株(占23.64%)携带3种耐药基因、3株(占5.45%)携带2种耐药基因;16种耐药基因中,blaTEM、tetX、sul3和aadA1基因检出率较高,qepA、blaCMY和tetB基因检出率较低,而qnrA、qnrB、Aph(3)-IIa、blaPSE和aadA2基因等未被检出。55株沙门氏菌广西分离株对昆明小白鼠均具有致病性,致死率为20%~100%;随机选取10株分离株对昆明小白鼠的半数致死量(LD50)为4.00×107~3.18×108 CFU/mL。沙门氏菌分离株耐药种类数量与LD50对数值的线性回归方程为y=-0.086x+8.971(R2=0.9329),耐药基因数量与LD50对数值的线性回归方程为y=-0.148x+8.673(R2=0.5748),即沙门氏菌的耐药性与其致病性呈正相关。【结论】2015—2017年从广西发病鸡分离获得的致病性沙门氏菌以鼠伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌为主,普遍存在耐药性,且多重耐药现象严重。鸡源致病性沙门氏菌的耐药表型与其致病性间呈正相关,因此,生产上要加强临床用药管理,加大细菌耐药监测与防范。 展开更多
关键词 鸡 沙门氏菌 耐药表型 耐药基因 致病性 相关性
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2018年广西重要猪源病毒性疫病流行病学调查 被引量：14
4
作者 施开创 尹彦文 +7 位作者 王孝德 谢守玉 石永胜 刘宏梅 陆文俊 屈素洁 冯淑萍 粟艳琼 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第1期174-181,共8页
为了解2018年广西猪群重要疫病流行情况,试验采集广西各地的病死猪组织样品及病猪腹泻拭子,应用多重实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),应用多重实时荧光定量PCR检测猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病... 为了解2018年广西猪群重要疫病流行情况,试验采集广西各地的病死猪组织样品及病猪腹泻拭子,应用多重实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),应用多重实时荧光定量PCR检测猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒1型(PCV1)、猪圆环病毒2型(PCV2)及猪圆环病毒3型(PCV3),应用多重RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PRoV)。结果显示,所检测的694份组织样品中,CSFV、PRRSV、HP-PRRSV、PRV、PCV1、PCV2、PCV3的阳性率分别为11.10%、18.88%、7.20%、5.19%、2.45%、67.00%和5.76%;2种病原混合感染率为41.21%,3种病原混合感染率为4.32%,其中PRRSV和PCV2混合感染率最高。所检测的792份肠内容物及拭子腹泻样品中,PEDV、PDCoV、TGEV、PRoV的阳性率分别为9.72%、5.81%、1.77%和6.31%;2种病原混合感染率为5.30%,其中PEDV和PRoV混合感染率最高。结果表明,当前多种重要病毒性疫病仍在广西猪群发生和流行,并且多重感染普遍存在,应进一步加强监测和防控。 展开更多
关键词 猪 病毒性疫病 流行病学调查 监测
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猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量：13
5
作者 张世亨 黄海鑫 +9 位作者 尹彦文 施开创 郑敏 汪伟 曹亮 赵翠青 刘立明 鲁会军 孙文超 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2288-2292,共5页
猪德尔塔冠状病毒(porcine delta coronavirus,PDCoV)是2012年中国香港首次发现的冠状病毒,能引起感染仔猪水样腹泻,最终脱水死亡。研究根据PDCoV保守的衣壳蛋白基因(N)序列设计特异性引物,建立荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法在6... 猪德尔塔冠状病毒(porcine delta coronavirus,PDCoV)是2012年中国香港首次发现的冠状病毒,能引起感染仔猪水样腹泻,最终脱水死亡。研究根据PDCoV保守的衣壳蛋白基因(N)序列设计特异性引物,建立荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法在6.31×10^6~6.31×10^1copies/μL,Ct与模板浓度之间具有良好的线性关系,斜率为-4.90,相关系数为0.999。所有标准品模板出现唯一熔解峰,敏感性下限为6.31×10^1copies/μL,PEDV和TGEV等均没有检测信号。对60份临床样品检测,PDCoV阳性率为5.0%,表明本研究建立的方法可以快速灵敏地检测PDCoV,从而为PDCoV的预防和疫苗研制奠定基础。 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒 N基因 实时荧光定量PCR
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鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒及番鸭呼肠孤病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与临床应用 被引量：11
6
作者 谢守玉 刘惠心 +7 位作者 尹彦文 施开创 屈素洁 陆文俊 黄小武 廖东安 王露霞 吴双燕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期952-958,共7页
为建立鉴别检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)及番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的方法,本研究分别针对DTMUV E基因与NDRV、MDRV S3基因,设计特异性引物和Taq Man探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时检测DTMUV、NDRV及MDRV的... 为建立鉴别检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)及番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的方法,本研究分别针对DTMUV E基因与NDRV、MDRV S3基因,设计特异性引物和Taq Man探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时检测DTMUV、NDRV及MDRV的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法仅能扩增DTMUV、NDRV及MDRV,与禽呼肠孤病毒(ARV)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、鸭瘟病毒(DEV)等主要禽源病毒均无交叉反应,特异性强;对DTMUV、NDRV及MDRV质粒标准品的检测下限均为7.5×10^(1)拷贝/μL,敏感性高;组内与组间重复性试验变异系数均小于2.5%,重复性好。利用该方法与已报道的坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法及NDRV与MDRV双重RTPCR方法同时检测82份临床疑似患病鸭的肝脾组织样品,结果检出阳性样品22份,其中,DTMUV阳性检出率为10.98%(9/82),NDRV阳性检出率为2.44%(2/82),MDRV阳性检出率为13.41%(11/82),检出阴性样品60份。与参考方法的检测结果一致,三者的符合率达100%。本研究建立的方法为临床DTMUV、NDRV及MDRV鉴别检测和流行病学调查提供了特异、敏感、高效的技术支撑。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 新型鸭呼肠孤病毒 番鸭呼肠孤病毒 荧光定量RT-PCR 临床应用
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PEDV、TGEV和PRoV多重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：9
7
作者 龙飞翔 施开创 +3 位作者 张珍 尹彦文 陈汉忠 莫胜兰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第10期2518-2526,共9页
为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)及猪轮状病毒(PRoV)的快速鉴别检测方法,本试验针对PEDV、TGEV、PRoV的基因组序列设计3对特异性引物PEDV-N、TGEV-M和PRoV-VP6,分别扩增PEDV N基因、TGEV M基因和PRoV VP6基因... 为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)及猪轮状病毒(PRoV)的快速鉴别检测方法,本试验针对PEDV、TGEV、PRoV的基因组序列设计3对特异性引物PEDV-N、TGEV-M和PRoV-VP6,分别扩增PEDV N基因、TGEV M基因和PRoV VP6基因。经优化反应条件,成功建立了能同时检测并区分PEDV、TGEV、PRoV的多重RT-PCR方法。该方法可特异扩增PEDV、TGEV、PRoV相应的基因片段,而与猪瘟病毒(CSFV)、猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应;对PEDV、TGEV、PRoV基因重组质粒标准品的检出限分别为1.41×103、1.41×102和1.41×103拷贝/μL;在相同条件下重复试验可获得一致的结果。应用该方法对临床采集的190份腹泻病料进行检测,结果PEDV阳性42份,阳性率22.11%;TGEV阳性58份,阳性率30.53%;PRoV阳性34份,阳性率17.89%,且存在不同病毒混合感染的现象。结果表明,所建立的多重RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的优点,可用于PEDV、TGEV和PRoV的临床检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 多重RT-PCR 检测方法
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鹅细小病毒、番鸭细小病毒及鸭圆环病毒多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用 被引量：5
8
作者 谢守玉 刘惠心 +11 位作者 熊陈勇 郑敏 施开创 韦显凯 冯淑萍 龙凤 梁凤 吕思明 屈素洁 陆文俊 尹彦文 李军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期38-44,共7页
为建立鉴别检测鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)及鸭圆环病毒(DuCV)的方法,本研究分别针对GPV、MDPV NS基因与DuCV Rep基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时鉴别检测GPV、MDPV及DuCV的TaqMan荧光... 为建立鉴别检测鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)及鸭圆环病毒(DuCV)的方法,本研究分别针对GPV、MDPV NS基因与DuCV Rep基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时鉴别检测GPV、MDPV及DuCV的TaqMan荧光定量PCR方法。利用该方法检测GPV、MDPV、DuCV及禽流感病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒、减蛋综合征病毒、鸭坦布苏病毒、番鸭呼肠孤病毒等主要水禽源病毒,结果显示,该方法仅能扩增出GPV、MDPV及DuCV,与其他主要水禽源病毒均无交叉反应,特异性强;利用该方法检测等体积混合后的GPV、MDPV及DuCV质粒标准品混合物,结果显示,该方法对3种质粒标准品的检测限均为7.5×10^(1)拷贝/μL,普通单一PCR对上述3种质粒标准品混合物的检测限均为7.5×10^(3)拷贝/μL,表明本研究建立方法的敏感性高于普通PCR;该方法组内与组间重复性试验的变异系数均小于2.0%,重复性好。利用该方法与MDPV和GPV双重荧光定量PCR方法及DuCV荧光定量PCR方法同时检测96份临床发病鸭的组织样品,该方法检测结果显示,共检出58份阳性样品,其中GPV检出率为18.75%(18/96),MDPV检出率为4.17%(4/96),DuCV检出率为37.50%(36/96),GPV与DuCV混合感染率为8.33%(8/96),阴性样品38份。与GPV和MDPV双重荧光定量PCR及DuCV荧光定量PCR方法的检测结果均一致,三者的符合率达100%。本研究建立的GPV、MDPV及DuCV多重TaqMan荧光定量PCR方法为临床鉴别检测该3种病原及其流行病学调查提供了特异、敏感、高效的技术手段。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 番鸭细小病毒 鸭圆环病毒 荧光定量PCR 临床应用
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黏菌素耐药基因mcr-1 TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：8
9
作者 施开创 尹彦文 +3 位作者 温丽霞 屈素洁 王海清 胡杰 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1447-1452,共6页
【目的】建立针对黏菌素耐药基因mcr-1的Taq Man-MGB荧光定量PCR检测方法,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。【方法】针对mcr-1基因保守序列设计特异性引物和MGB探针,构建重组质粒作为阳性标准品,优化引物、探针浓度及Rox参比染料... 【目的】建立针对黏菌素耐药基因mcr-1的Taq Man-MGB荧光定量PCR检测方法,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。【方法】针对mcr-1基因保守序列设计特异性引物和MGB探针,构建重组质粒作为阳性标准品,优化引物、探针浓度及Rox参比染料用量、退火温度等反应条件,建立针对mcr-1基因的Taq Man-MGB荧光定量PCR检测方法,并通过特异性、敏感性、重复性试验及临床应用验证其实用性。【结果】Taq Man-MGB荧光定量PCR最佳反应体系20.00μL:Premix Ex Taq^(TM)10.00μL,Rox参比染料(50×)0.25μL,引物MCR-1F/MCR-1R(10μmol/L)各0.50μL,MCR-1-P探针(10μmol/L)0.50μL,重组质粒pMCR-1(模板)2.00μL,灭菌双蒸水6.25μL。扩增程序:95℃预变性20 s;95℃10 s,60℃20 s,进行40个循环。该检测方法能特异性扩增出mcr-1基因,其检测敏感性为2.85拷贝/μL,是常规PCR的100倍,组内和组间重复性试验的变异系数为0.37%~1.18%,均小于1.20%。采用建立的Taq Man-MGB荧光定量PCR对82株广西鸡源致病性沙门氏菌分离株进行检测,结果未发现有携带mcr-1基因的菌株。【结论】针对mcr-1基因建立的Taq Man-MGB荧光定量PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于临床筛查mcr-1基因,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。 展开更多
关键词 黏菌素 mcr-1基因 TAQMAN-MGB探针 荧光定量PCR
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鸡源致病性沙门菌耐药表型与耐药基因、血清群的相关性研究 被引量：7
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作者 黎宗强 施开创 +3 位作者 李凤梅 王海清 张珍 尹彦文 《动物医学进展》 北大核心 2016年第3期25-32,共8页
为研究沙门菌分离株耐药表型与耐药基因和血清群之间的关系,对血清型鉴定为B群和D群的29株鸡源致病性沙门菌,采用ATB VET药敏试剂条法对19种抗菌药物进行敏感性测定,应用PCR对这些抗菌药物19种相关耐药基因进行检测。结果表明,29株沙门... 为研究沙门菌分离株耐药表型与耐药基因和血清群之间的关系,对血清型鉴定为B群和D群的29株鸡源致病性沙门菌,采用ATB VET药敏试剂条法对19种抗菌药物进行敏感性测定,应用PCR对这些抗菌药物19种相关耐药基因进行检测。结果表明,29株沙门菌分离株中,青霉素、苯唑西林的耐药率最高（100%）,耐药率超过50%的还有磺胺甲恶唑（82.76%）、链霉素（75.86%）、恶喹酸（75.86%）、氟甲喹（65.52%）、恩诺沙星（55.17%）、四环素（55.17%）、阿莫西林（51.72%）,而对大观霉素、庆大霉素、安普霉素、多黏菌素E没有出现耐药性。所有29个分离株至少对6种抗菌药物具有耐药性,以6重~7重耐药为主（占51.73%）,最高可达14重耐药（占3.45%）。所检测的19种耐药基因中,共检测到14种耐药基因,其中blaTEM检出率最高（100%）,检出率超过40%的还有aadA1（62.07%）、Sul2（62.07%）、Sul3（51.72%）、tetA（48.28%）、qnrA（44.83%）,而blaPSE、aadA2、tetG、tetM、tetX未能检出。所有29个分离株至少携带2种耐药基因,以携带4种~6种耐药基因为主（占79.31%）,最多者携带10种耐药基因（占3.45%）。B血清群和D血清群的耐药表型和耐药基因携带率没有明显差异。结果表明,广西鸡源致病性沙门菌耐药性及多重耐药性非常普遍,耐药表型与相关耐药基因检出率呈正相关,而与血清群之间无明显的相关性。 展开更多
关键词 沙门菌 鸡 耐药表型 耐药基因 血清群 相关性
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鸡源沙门氏菌(Salmonella)致病基因与致病性的相关性研究 被引量：7
11
作者 施开创 黎宗强 +3 位作者 屈素洁 张珍 尹彦文 陆文俊 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期2513-2520,共8页
为分析沙门氏菌分离株致病基因与致病性之间的关系,采集经分离鉴定的55株鸡源沙门氏菌,应用PCR方法检测毒力基因,通过小鼠致病试验检测致病性。结果显示,所检测的质粒毒力基因spvR、spvA、spvB、spvC、spvD,检出率均在60%以上;所检测的... 为分析沙门氏菌分离株致病基因与致病性之间的关系,采集经分离鉴定的55株鸡源沙门氏菌,应用PCR方法检测毒力基因,通过小鼠致病试验检测致病性。结果显示,所检测的质粒毒力基因spvR、spvA、spvB、spvC、spvD,检出率均在60%以上;所检测的毒力岛毒力基因invH、sipA、sipB、sopA、sopD、avrA、hilA、iacP、prgK、ssaB、ssaQ、sifA、sseL、ssrA、ttrB、mgtC、misL、rmbA、rhuM、sugR、orf319、siiD、siiE、spi4H、sopB和pipC中,ttrB检出率最高,为92.73%,sifA检出率最低,为5.45%。55株分离株对小鼠均具有致病性,致死率为20%~100%;随机测定其中10株的半数致死量(LD50),为4×107~3.18×108CFU/mL,毒力基因检出数量越多的分离株,其LD50值越小,毒力越强。本研究结果揭示,鸡源致病性沙门氏菌分离株普遍携带毒力基因,其毒力基因与致病性之间呈现正相关,为深入研究沙门氏菌的致病机理提供基础数据。 展开更多
关键词 鸡 沙门氏菌 致病基因 致病性 相关性
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2017-2019年广西猪重要病毒性腹泻病原流行病学调查 被引量：7
12
作者 严瑾 施开创 +4 位作者 刘宏梅 谢守玉 覃勇 黎宗强 尹彦文 《广西农学报》 2020年第4期20-25,共6页
【目的】为掌握2017-2019年广西重要病毒性腹泻病原的流行情况。【方法】采集来自广西各地病死猪的肠组织和内容物以及腹泻病猪的肛门拭子,应用多重RT-PCR检测猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TG... 【目的】为掌握2017-2019年广西重要病毒性腹泻病原的流行情况。【方法】采集来自广西各地病死猪的肠组织和内容物以及腹泻病猪的肛门拭子,应用多重RT-PCR检测猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PRoV)。【结果】所检测的1463份样品中,PDCoV、PEDV、TGEV和PRoV的阳性率分别为5.67%(83/1463)、10.12%(148/1463)、1.30%(19/1463)和5.95%(87/1463);2种病原混合感染的阳性率为5.26%(77/1463),3种病原混合感染的阳性率为1.64%(24/1463);其中PDCoV和PEDV的混合感染率最高,达2.32%(34/1463)。【结论】当前广西猪群普遍感染PDCoV、PEDV、TGEV和PRoV等腹泻病毒,并且混合感染严重,应进一步加强病原监测和做好综合防控。 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 流行病学调查
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2016-2021年广西H9亚型禽流感病毒HA和NA基因遗传进化动态分析 被引量：2
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作者 龙凤 谢守玉 +8 位作者 崔鹏飞 施开创 韦显凯 冯淑萍 屈素洁 陆文俊 李剑锋 尹彦文 邓国华 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1947-1958,共12页
【目的】研究H9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)广西毒株的遗传进化动态,以期掌握其地域流行新特点,为及时优化调整有效防控措施提供数据支持。【方法】采集2016-2021年广西各地的家禽喉头、泄殖腔及环境拭子样品3600份,接种... 【目的】研究H9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)广西毒株的遗传进化动态,以期掌握其地域流行新特点,为及时优化调整有效防控措施提供数据支持。【方法】采集2016-2021年广西各地的家禽喉头、泄殖腔及环境拭子样品3600份,接种9~11日龄SPF鸡胚分离病毒,并结合血凝和血凝抑制试验及实时荧光定量RT-PCR方法鉴定AIV亚型,根据毒株检测年限和来源地选取部分H9亚型AIV核酸阳性样品进行HA、NA基因扩增、测序及进化动态分析。【结果】共获得46株H9亚型AIV广西毒株的HA、NA基因序列,其中HA基因全长1683 bp,编码560个氨基酸;4株NA基因全长1410 bp,编码469个氨基酸,42株缺失3个氨基酸,编码466个氨基酸。BLAST分析结果显示,越南及国内多个省份的毒株与本研究获得的广西毒株HA、NA基因相似性最高,分别为97.62%~99.88%和93.13%~99.79%,宿主源也不尽相同,表现遗传多样性特征。广西毒株之间HA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为93.0%~99.1%和94.6%~99.1%,NA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为83.9%~98.2%和86.1%~98.2%,表明HA基因较NA基因更为保守;与同期的参考毒株相似性高于早期,表明毒株存在持续进化。遗传进化分析结果显示,广西毒株的HA、NA基因属于当前优势流行的G57基因型分支,与疫苗株遗传关系较远。进化速率估算结果显示,HA、NA基因的平均进化速率分别为3.99×10^(-3)和4.59×10^(-3)替换/位点/年,最近共同祖先估算时间(tMRCA)分别为66.77和58.24年,表明HA基因比NA基因进化缓慢。重组分析结果显示,从鸡、鸭及环境中各分离到的毒株HA基因存在重组现象,主要亲本和次要亲本毒株均为人源的A/Beijing/1/2017株和禽源的A/quail/Hainan/250/2012株。【结论】当前H9亚型AIV广西流行毒株HA、NA基因与越南及国内省份的毒株相似性较高,具有遗传多样性特征,进化趋势以G57为优势基因型,与人源流感毒株发 展开更多
关键词 H9亚型禽流感病毒 遗传变异 进化动态
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2017—2019年猪流行性腹泻病毒广西流行毒株遗传多样性分析 被引量：6
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作者 王睿敏 施开创 +5 位作者 严瑾 谢守玉 黎宗强 尹彦文 陆文俊 屈素洁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期189-198,共10页
为掌握广西猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株的遗传变异情况,本研究对2017-2019年从广西各地采集的腹泻样品,应用RT-PCR方法进行检测,并随机选取部分PEDV阳性样品进行S、M、N基因的扩增、测序和分析。结果显示,共获得PEDV S基因序列23株... 为掌握广西猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株的遗传变异情况,本研究对2017-2019年从广西各地采集的腹泻样品,应用RT-PCR方法进行检测,并随机选取部分PEDV阳性样品进行S、M、N基因的扩增、测序和分析。结果显示,共获得PEDV S基因序列23株、M基因和N基因序列各25株。同源性分析显示,广西流行毒株间核苷酸和氨基酸序列同源性在S基因为90.6%~100%和89.6%~100%,在M基因为97.0%~100%和96.9%~100%,在N基因为95.9%~100%和95.9%~100%。序列比对显示,广西流行毒株S1基因的氨基酸序列存在缺失、突变和插入现象,且各毒株之间存在差异。基于S、M、N基因绘制遗传进化树,获得相似的拓扑结构图,广西流行毒株主要分布在S基因的GⅠb、GⅡa亚群,M基因的GⅡa、GⅡb亚群,N基因的GⅢ亚群。遗传进化速率测算显示,广西流行毒株及国内外参考毒株S、M、N基因的平均进化速率分别为7.39×10-4、1.43×10-4和2.96×10-4substitutions/site/year,S基因的变异速度最快。表明PEDV广西流行毒株存在遗传多样性,应加强病原监测和流行病学调查,为有效防控PED提供基础数据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 M基因 N基因 遗传多样性
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2019—2022年广西鸭圆环病毒分子流行病学研究
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作者 熊陈勇 曾素先 +11 位作者 刘惠心 赵康 施开创 施喻文 谢守玉 韦显凯 龙凤 冯淑萍 屈素洁 王露霞 林昌华 尹彦文 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期373-381,共9页
【目的】了解广西鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)的遗传进化特征。【方法】试验于2019—2022年从广西地区采集761份病死鸭临床样本,利用实时荧光定量PCR检测DuCV感染情况。通过PCR扩增DuCV全基因组序列,利用DNAStar分析其与参考毒株... 【目的】了解广西鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)的遗传进化特征。【方法】试验于2019—2022年从广西地区采集761份病死鸭临床样本,利用实时荧光定量PCR检测DuCV感染情况。通过PCR扩增DuCV全基因组序列,利用DNAStar分析其与参考毒株核苷酸和氨基酸序列相似性,使用RDP4和SimPlot 3.5.1软件分析DuCV重组事件,采用Mega 7.0软件构建遗传进化树,应用BioEdit软件分析DuCV Cap蛋白氨基酸变异位点。【结果】DuCV阳性率为22.5%,基因组大小为1988~1996 bp。广西DuCV毒株全基因组、Rep和Cap基因与参考毒株核苷酸序列相似性分别为71.9%~99.6%、83.1%~99.9%和52.8%~99.9%。基因重组分析显示,DuCV-GX13-2019和DuCV-GX14-2020存在重组事件。Cap蛋白共有78个氨基酸位点发生突变,与DuCV-1相比,DuCV-2在第3、12、15、23、31、42、56和64位氨基酸处完全变异。广西毒株为DuCV-1和DuCV-2基因型,DuCV-1为主要优势毒株,且DuCV-1b亚型流行最为广泛。【结论】广西地区DuCV发病较严重,部分毒株存在重组事件,Cap蛋白突变率高,DuCV多种亚型均有流行。研究结果为广西地区DuCV流行病学调查提供基本数据。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒(DuCV) 遗传进化 相似性 流行病学
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2013-2020年广西重点种鸡场禽白血病净化效果分析
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作者 胡杰 尹彦文 +5 位作者 温丽霞 粟艳琼 谢守玉 杨蓉 屈素洁 施开创 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期149-153,共5页
按照检测-淘汰-分群-再检测-再淘汰的原则,建立“生物安全+病原监测+淘汰”模式对2013—2020年广西11家重点种鸡场的种公鸡、种母鸡、育成鸡和雏鸡采集精液、蛋清、泄殖腔拭子、胎粪等样品进行禽白血病病原检测;公鸡和母鸡同时采集血浆... 按照检测-淘汰-分群-再检测-再淘汰的原则,建立“生物安全+病原监测+淘汰”模式对2013—2020年广西11家重点种鸡场的种公鸡、种母鸡、育成鸡和雏鸡采集精液、蛋清、泄殖腔拭子、胎粪等样品进行禽白血病病原检测;公鸡和母鸡同时采集血浆蛋白进行禽白血病病毒(ALV)分离。通过多方式联合净化禽白血病,ALV阳性率逐年下降,净化效果非常显著。其中公鸡精液中ALV阳性率由2013年的7.45%下降到2020年的0.14%,母鸡蛋清样本ALV阳性率由2013年12.32%下降到2020年0.23%,雏鸡胎粪ALV阳性率由2018年3.60%下降到2020年0.47%。公鸡血浆蛋白病毒检出率由2013年的3.46%下降到2020年的0.78%,母鸡血浆蛋白病毒检出率由2013年的2.22%下降到2020年的0.20%。可以看出ALV净化效果非常显著,说明所建立的禽白血病净化方法在广西行之有效。 展开更多
关键词 禽白血病 净化 效果
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A型塞尼卡病毒与O型、亚洲I型、A型口蹄疫病毒多重RT-PCR检测方法的建立 被引量：6
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作者 谢守玉 刘惠心 +7 位作者 施开创 赵晶 屈素洁 尹彦文 王树培 陆文俊 冯淑萍 粟艳琼 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期905-911,共7页
为建立鉴别A型塞尼卡病毒(SVA)与O型、亚洲I型、A型口蹄疫病毒(FMDV)的快速检测方法,本研究分别设计4对特异性引物,用于扩增SVA 3D基因(157 bp)、O型FMDV VP1基因(240 bp)、亚洲I型FMDV VP1基因(460 bp)、A型FMDV VP1基因(320 bp)。经... 为建立鉴别A型塞尼卡病毒(SVA)与O型、亚洲I型、A型口蹄疫病毒(FMDV)的快速检测方法,本研究分别设计4对特异性引物,用于扩增SVA 3D基因(157 bp)、O型FMDV VP1基因(240 bp)、亚洲I型FMDV VP1基因(460 bp)、A型FMDV VP1基因(320 bp)。经优化引物浓度、退火温度等反应条件,初步建立了同时检测SVA与O型、亚洲I型、A型FMDV的多重RT-PCR方法。利用该方法同时检测SVA及O型、亚洲I型、A型FMDV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型(PCV2)、PCV3等主要猪源病毒,结果显示该方法仅对SVA及O型、亚洲I型、A型FMDV检测为阳性,其他均为阴性,特异性较强;SVA、O型、亚洲I型、A型FMDV重组质粒标准品10倍倍比稀释后利用本研究建立的多重RT-PCR方法检测,结果显示同一反应体系中,4种重组质粒标准品的检出下限均为2.5×10^2拷贝/μL,敏感性较高;批内、批间重复性试验结果一致,该方法重复性较好。利用本实验建立的方法对2019年采集自广西30份临床疑似样品进行检测,结果显示,SVA、O型FMDV的阳性检出率分别为16.67%和63.33%;未检出亚洲I型及A型FMDV;同时采用国家标准《口蹄疫诊断技术》(GB/T18935-2003)中RT-PCR方法以及文献报道的SVA套式RTPCR方法对FMDV、SVA检测,结果与本实验建立的多重RT-PCR方法检测结果的符合率为100%。本研究首次建立的多重RT-PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,为鉴别检测SVA与O型、亚洲I型、A型FMDV提供了有效的技术方法。 展开更多
关键词 A型塞尼卡病毒 口蹄疫病毒 多重RT-PCR 检测方法
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猪圆环病毒三重PCR检测方法的建立及其广西地区流行病学调查 被引量：5
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作者 赵晶 施开创 +5 位作者 刘惠心 尹彦文 龙凤 陆文俊 屈素洁 司红彬 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期413-420,共8页
针对当前我国流行的猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)1型(PCV1)、2型(PCV2)和3型(PCV3),设计3对特异性引物,通过对引物浓度、退火温度和循环次数的优化,建立了鉴别检测PCV1、PCV2和PCV3的三重PCR方法。结果显示,该方法具有良好的特... 针对当前我国流行的猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)1型(PCV1)、2型(PCV2)和3型(PCV3),设计3对特异性引物,通过对引物浓度、退火温度和循环次数的优化,建立了鉴别检测PCV1、PCV2和PCV3的三重PCR方法。结果显示,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,只能检出PCV1、PCV2和PCV3,其他猪病毒均未能扩出;对PCV1、PCV2和PCV3质粒标准品的检测下限分别为3.63×10^(3),3.63×10^(1),3.63×10^(2)拷贝/μL;相同条件下的扩增获得均匀一致的结果。利用所建立的三重PCR方法检测2018—2020年采自广西各地的1308份猪组织病料,结果显示,PCV1、PCV2和PCV3的阳性率分别为2.14%,56.65%,5.58%,并存在混合感染现象;PCV1、PCV2阳性率逐年下降,PCV3阳性率稳定控制,不同地市之间阳性率有所差异。结果表明,本研究成功建立了一种快速、特异、灵敏、经济的三重PCR方法,可用于PCV1、PCV2和PCV3的鉴别检测和流行病学调查;当前广西猪群普遍感染PCV1、PCV2和PCV3,应加强防控。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 三重PCR 流行病学调查
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2006—2016年广西猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株四个基因的进化动态分析 被引量：6
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作者 尹彦文 施开创 +2 位作者 王海清 莫胜兰 屈素洁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期616-624,共9页
为研究广西猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）流行毒株的遗传进化情况,对2006—2016年间,来自广西各地的部分PRRSV阳性病料进行了病毒Nsp2、ORF5、ORF6、ORF7基因的扩增、测序及进化分析。结果,获得的Nsp2-1、Nsp2-2、ORF5、ORF6、ORF7... 为研究广西猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）流行毒株的遗传进化情况,对2006—2016年间,来自广西各地的部分PRRSV阳性病料进行了病毒Nsp2、ORF5、ORF6、ORF7基因的扩增、测序及进化分析。结果,获得的Nsp2-1、Nsp2-2、ORF5、ORF6、ORF7基因的片段长度分别是1 667、1 649、603、525、172 bp,均为美洲型毒株;Nsp2、ORF5、ORF6、ORF7基因核苷酸及其推导的氨基酸序列的同源性分别为86.8%~100%和61.7%~100%、80.8%~100%和80.5%~100%、90.6%~100%和89.9%~100%、85.6%~100%和87.1%~100%;基于Nsp2、ORF5、ORF6及ORF7基因核苷酸序列分别绘制的进化树可将所有毒株分为6个亚群,而广西流行的PRRSV毒株主要分布在以JXA1株为代表的亚群6。Nsp2、ORF5、ORF6和ORF7的平均进化速率分别为1.69×10^-1、1.58×10^-2、9.71×10^-4、1.86×10^-3 substitutions/site/year。Nsp2基因是最容易发生变异的,其次是ORF5基因与ORF7基因,而ORF6基因最稳定。本研究为掌握PRRSV的分子流行病学及遗传进化规律提供了相关的基础数据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因 遗传变异 进化动态
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浅谈上跨既有铁路桥梁施工安全管理对策 被引量：7
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作者 尹彦文 《江西建材》 2016年第2期161-161,165,共2页
近年来中国经济飞速发展,铁路一直在我国交通运输方面承担着特别重要的角色,我国的铁路网建设不断扩大,尤其是高速铁路的建设非常迅猛,现在高速公路网络或高铁建设,不可避免的需要跨越铁路,上跨既有铁路桥梁项目成为首选方案,而如何制... 近年来中国经济飞速发展,铁路一直在我国交通运输方面承担着特别重要的角色,我国的铁路网建设不断扩大,尤其是高速铁路的建设非常迅猛,现在高速公路网络或高铁建设,不可避免的需要跨越铁路,上跨既有铁路桥梁项目成为首选方案,而如何制定项目施工的安全管理,保证该项目施工的安全。本文结合当前上跨既有铁路桥梁施工存在的问题,提出合理的工程施工安全管理对策。 展开更多
关键词 桥梁施工 安全管理对策
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