重组酶聚合酶扩增技术快速检测鲤春病毒血症病毒(SVCV)方法的建立 被引量：10

1

作者 梁君妮 尹伟力 +3 位作者 谢爽 刘宁 段效辉 林森 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1037-1040,共4页

为建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)的快速检测方法,本研究根据SVCV的G基因保守序列设计特异性引物,通过条件优化初步建立了基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的SVCV检测方法。该RPA方法最优扩增温度为30℃,恒温反应20 min内即可完成。特异性试... 为建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)的快速检测方法,本研究根据SVCV的G基因保守序列设计特异性引物,通过条件优化初步建立了基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的SVCV检测方法。该RPA方法最优扩增温度为30℃,恒温反应20 min内即可完成。特异性试验结果显示,该方法与其它常见鱼类感染病毒无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对SVCV质粒标准品的最低检出限为89.2拷贝/μL,高于传统的RT-PCR方法;利用已建立的RPA方法和RT-PCR方法对市场购买的80份临床样品进行检测,结果显示,RPA方法与RT-PCR方法检测结果一致,且RPA方法能够有效检出RT-PCR方法的弱阳性样品,表明RPA方法可以用于临床检测。本研究建立的检测SVCV的RPA方法具有快速、简便、特异性强、灵敏度高的特点,适合基层实验室及现地检测。 展开更多

关键词 重组酶聚合酶扩增技术 快速检测 鲤春病毒血症病毒

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牡蛎疱疹病毒魁蚶株交叉引物等温扩增检测方法的建立及初步应用 被引量：8

2

作者 赵小金 张盛静 +5 位作者 白昌明 岳志芹 王崇明 尹伟力 蔡生力 黄倢 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期580-588,共9页

为建立牡蛎疱疹病毒魁蚶株快速、灵敏、准确和操作简便的检测方法,实验根据已测序完成的Os HV-1-SB全基因组序列,选择其保守区域,建立了交叉引物等温扩增检测方法,并对反应温度、d NTPs、Mg2+浓度和反应时间进行了优化。结果显示,最佳... 为建立牡蛎疱疹病毒魁蚶株快速、灵敏、准确和操作简便的检测方法,实验根据已测序完成的Os HV-1-SB全基因组序列,选择其保守区域,建立了交叉引物等温扩增检测方法,并对反应温度、d NTPs、Mg2+浓度和反应时间进行了优化。结果显示,最佳温度为63℃,反应时间为60 min,d NTPs浓度为1.4 mmol/L,Mg2+浓度为6 mmol/L。该方法检测灵敏度为30拷贝的质粒DNA,并且特异性较强,与贝类常见病原急性病毒性坏死病毒、鲍鱼疱疹病毒、派琴虫、包纳米虫、马尔泰虫以及对虾白斑综合征病毒和副溶血弧菌均无交叉反应。使用实验建立的CPA检测方法对2012年分别采自韩国庆尚南道、山东长岛、辽宁大连共计22份Os HV-1-SB感染情况未知的魁蚶样品进行了检测。研究表明,实验所建立的Os HV-1-SB的CPA检测方法简单、快速、灵敏且特异性强。由于其检测结果可通过简单离心或者向反应管中加入核酸荧光染料Gene FinderTM进行肉眼观察,所以可以在沿海贝类养殖厂及条件简陋的实验室使用,具有较好的应用前景。 展开更多

关键词 魁蚶 牡蛎疱疹病毒魁蚶株 交叉引物等温扩增 检测

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煤电合作理论研究 被引量：2

3

作者 尹伟力 《中国煤炭》 北大核心 2006年第6期12-14,共3页

提出了煤电合作模式的概念模型,该概念模型包括理论依据和描述方式。

关键词 网络 模式 概念模型 煤电合作

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鳕鱼物种特异性鉴定的PCR方法研究 被引量：7

4

作者 尹伟力 方绍庆 +2 位作者 耿金培 许红岩 栾晶 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第2期19-24,共6页

为了建立可对鳕鱼DNA进行特异性检测的PCR方法,应用在出口贸易中的鳕鱼疑似样品和保护执法工作中难以检查辨认的鳕鱼产品的物种鉴定,从GenBank数据库下载7个鳕属及其他5种鱼类的mtDNA细胞氧化酶Ⅱ(COXⅡ)基因序列,并用DNA Star7.0软件... 为了建立可对鳕鱼DNA进行特异性检测的PCR方法,应用在出口贸易中的鳕鱼疑似样品和保护执法工作中难以检查辨认的鳕鱼产品的物种鉴定,从GenBank数据库下载7个鳕属及其他5种鱼类的mtDNA细胞氧化酶Ⅱ(COXⅡ)基因序列,并用DNA Star7.0软件对上述不同鳕鱼的该基因碱基序列进行比较。在此基础上,综合考虑了设计引物的基本原则,选择了鳕鱼与其他鱼类碱基序列上差异位点较多的两个片段,设计出PCR引物。用该引物分别对从7种鳕鱼和5种非鳕鱼的肌肉、脏器组织中提取的DNA进行PCR扩增。结果表明,所设计的引物对鳕鱼DNA具有特异性,从而达到了对该物种进行特异性检测鉴定的目的。 展开更多

关键词 鳕鱼 PCR 物种特异性鉴定

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肝肠胞虫和致AHPND的副溶血弧菌双重荧光PCR方法的建立及在环境DNA样品中的应用

5

作者 李家侨 赵优 +5 位作者 谢艳辉 杨金金 斯泽恩 郑舒尹 尹伟力 张娜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期498-503,共6页

为了快速检测致对虾急性肝胰腺坏死病的副溶血弧菌(VP_(AHPND))和肝肠胞虫(EHP)这2种病原,根据NCBI中副溶血弧菌pirAB^(VP)毒素基因和肝肠胞虫SWP1基因的保守序列设计并合成特异性引物和Taq Man探针,通过优化反应条件,评估方法的特异性... 为了快速检测致对虾急性肝胰腺坏死病的副溶血弧菌(VP_(AHPND))和肝肠胞虫(EHP)这2种病原,根据NCBI中副溶血弧菌pirAB^(VP)毒素基因和肝肠胞虫SWP1基因的保守序列设计并合成特异性引物和Taq Man探针,通过优化反应条件,评估方法的特异性、灵敏度、重复性,并且把该方法应用于环境DNA(eDNA)样品检测。结果显示所建立的双重荧光PCR方法特异性强,仅能扩增出V_(PAHPND)和EHP的阳性核酸,与对虾常见病原白斑综合征病毒、传染性皮下和造血器官坏死病毒、十足目虹彩病毒1等均无交叉反应;VP_(AHPND)和EHP的最低检测限分别为14和1.4 copies/μL;组内和组间重复的变异系数均≤1.9%。从56批e DNA样品检测结果发现,VPAHPND阳性7批(12.5%),EHP阳性4批(7.14%),其中VPAHPND-EHP双重感染2批(3.57%)。这表明基于e DNA识别技术,该VPAHPND和EHP双重荧光PCR可以大大提升临床实验室的对虾疫病诊断速度,为海关等监管部门提供可靠高效的快速检测方法。 展开更多

关键词 急性肝胰腺坏死病 副溶血弧菌 肝肠胞虫 双重荧光PCR 环境DNA 监测

原文传递

液相芯片技术同时检测真鲷虹彩病毒和锦鲤疱疹病毒方法的建立 被引量：6

6

作者 尹伟力 耿金培 +4 位作者 刘宁 岳志芹 郑小龙 刘荭 许红岩 《水产科学》 CAS 北大核心 2014年第3期157-162,共6页

为建立一种同时检测真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中真鲷虹彩病毒的CP基因和锦鲤疱疹病毒的TK基因进行序列分析,设计真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒特异性引物并标记生物素。探针氨基化修饰,... 为建立一种同时检测真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中真鲷虹彩病毒的CP基因和锦鲤疱疹病毒的TK基因进行序列分析,设计真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒特异性引物并标记生物素。探针氨基化修饰,与荧光编码微球偶联后与真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号。试验结果表明,液相芯片检测体系能够正确的检测出真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒。真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒病毒核酸的最低检出量为10pg和100pg,检测特异性高,说明初步建立了同时检测真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒的液相芯片技术,为进一步构建其他水生动物病原体快速高通量检测平台奠定基础。 展开更多

关键词 真鲷虹彩病毒 锦鲤疱疹病毒 液相芯片 检测

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猪流行性腹泻与猪传染性胃肠炎二重液相芯片检测方法的建立 被引量：6

7

作者 曹丙蕾 张群 +2 位作者 刘敏 王群 尹伟力 《农业技术与装备》 2021年第11期144-145,147,共3页

为了鉴别猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎,研究建立了猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的二重液相芯片检测技术。结果表明,该检测方法特异性好,可同时区分诊断PEDV和TGEV,与荧光RT-PCR检测方法的符合率为100%,可有效区... 为了鉴别猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎,研究建立了猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的二重液相芯片检测技术。结果表明,该检测方法特异性好,可同时区分诊断PEDV和TGEV,与荧光RT-PCR检测方法的符合率为100%,可有效区分诊断2种混合感染的疾病。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻 猪传染性胃肠炎 液相芯片 杂交

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麦类壳多胞斑点病菌的快速检测方法研究

8

作者 李金庆 王英超 +3 位作者 邵秀玲 季蕾 张静 尹伟力 《安徽农业科学》 CAS 2024年第18期118-119,132,共3页

利用麦类壳多胞斑点病菌β-tubulin一段保守基因序列,设计特异性引物进行麦类壳多胞斑点病菌的检测,并进行特异性与灵敏度验证。结果显示,该方法特异性强,灵敏度可达5 pg/μL,适合于麦类壳多胞斑点病菌的快速检测。

关键词 β-tubulin基因 麦类壳多胞斑点病菌 特异性 灵敏度

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不同生长时期凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病的检出与病原鉴定 被引量：1

9

作者 李家侨 谢艳辉 +8 位作者 李献锋 刘骁 唐媛媛 斯泽恩 郑舒尹 刘荭 郑晓聪 张娜 尹伟力 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期69-76,共8页

随着集约化生产、养殖环境恶化,急性肝胰腺坏死病(AHPND)成为了当前制约对虾养殖效益的主要疾病之一。本试验以凡纳滨对虾不同生长时期的亲虾、虾苗、成虾作为研究对象,将对虾的肝胰腺进行初步富集后,采用荧光PCR和普通PCR的方法,检测... 随着集约化生产、养殖环境恶化,急性肝胰腺坏死病(AHPND)成为了当前制约对虾养殖效益的主要疾病之一。本试验以凡纳滨对虾不同生长时期的亲虾、虾苗、成虾作为研究对象,将对虾的肝胰腺进行初步富集后,采用荧光PCR和普通PCR的方法,检测样品中pirA VP和pirB VP毒素基因;对虾苗AHPND的病原进行分离鉴定、药敏试验和动物致病性试验。结果显示,在116份样品中检测到亲虾AHPND阳性3份,虾苗AHPND阳性7份,成虾AHPND阳性9份;从虾苗AHPND样品中分离纯化获得1株弧菌,经生化鉴定为副溶血性弧菌;16S rRNA系统发育树分析显示,该分离株与副溶血性弧菌聚为一类。药敏试验结果显示,该分离株对头孢西叮、头孢呋辛、复方新诺明等11种抗菌药敏感,对头孢噻吩耐药,对阿米卡星中介。动物致病性试验结果显示,健康凡纳滨对虾浸染1.8×10^(8) CFU/mL浓度的副溶血性弧菌菌液后,24 h内全部死亡,对虾的肝胰腺小管上皮细胞出现萎缩、变性、坏死等特征。本试验进一步掌握目前粤西地区不同生长时期凡纳滨对虾中AHPND的流行病学数据和病原特征,为该地区乃至全国的对虾养殖业AHPND的预防和控制提供参考依据。 展开更多

关键词 凡纳滨对虾 急性肝胰腺坏死病 病原 药敏

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食品中沙门氏菌的NASBA快速检测技术 被引量：5

10

作者 钟响 刘宁 +3 位作者 尹伟力 耿金培 粟智平 段效辉 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2013年第23期45-47,64,共4页

根据NCBI沙门氏菌属invA基因保守序列设计引物,建立NASBA检测方法,进行特异性试验和灵敏度试验,并采用人工添加菌株污染样品进行方法验证。结果表明,引物SM-F/SM-R特异性强,能够从污染样品中扩增出277 bp的特异性片段,试验中未出现假阳... 根据NCBI沙门氏菌属invA基因保守序列设计引物,建立NASBA检测方法,进行特异性试验和灵敏度试验,并采用人工添加菌株污染样品进行方法验证。结果表明,引物SM-F/SM-R特异性强,能够从污染样品中扩增出277 bp的特异性片段,试验中未出现假阳性和假阴性结果;灵敏度高,对目标菌检出限达到5.5 pg/μL总RNA;检测周期短,NASBA反应在42℃90 min即可进行有效扩增,24 h内可完成样品中目标菌的筛选。NASBA技术适用于基层检验机构和现场快速检测食源性致病菌。 展开更多

关键词 沙门氏菌 食品 检测

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基于eDNA技术富集水体中急性肝胰腺坏死病副溶血性弧菌的初步研究 被引量：1

11

作者 李家侨 谢艳辉 +5 位作者 张娜 郑枢 廖金湾 郑晓聪 刘荭 尹伟力 《中国口岸科学技术》 2023年第4期60-68,共9页

环境DNA(Environmental DNA,eDNA)的丰度往往较低,不容易被检测到。为加强养殖海水中急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)副溶血性弧菌(Vibrio Parahaemolyticus,VpAHPND)的监测,对疫病进行早期预警,需要... 环境DNA(Environmental DNA,eDNA)的丰度往往较低,不容易被检测到。为加强养殖海水中急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)副溶血性弧菌(Vibrio Parahaemolyticus,VpAHPND)的监测,对疫病进行早期预警,需要对大容量的水体进行富集。采用滤膜法浓缩水体,探究不同体积养殖海水、不同材质不同孔径的滤膜、不同核酸抽提试剂盒,对水体中VpAHPND富集效果的影响。结果表明,采集500 mL养殖海水,用0.45μm硝酸纤维素膜富集水体,经过天根海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒提取滤膜核酸,荧光定量PCR结果显示富集后的水体中VpAHPND的拷贝数放大了1000倍以上。同时,采用滤膜法对17批进口亲虾携带水和13批广东湛江凡纳滨对虾虾苗养殖海水进行eDNA检测,从虾苗场检出3批VpAHPND阳性,经富集后水体中eDNA检测结果与虾苗组织检测结果一致。因此,基于0.45μm硝酸纤维素膜的滤膜法可以高效富集水体的VpAHPND。该研究结果可为进口亲虾携带水、对虾养殖海水等环境水中VpAHPND疫病预警、科学监测、风险评估等提供全新的快速、可靠、高效的监测方法。 展开更多

关键词 VpAHPND 环境DNA 富集 监测 风险评估

原文传递

企业信息化失败原因探析——从交易成本视角分析ERP项目的超期、超预算问题 被引量：1

12

作者 尹伟力 《计算机与信息技术》 2006年第9期90-94,共5页

国外研究机构对ERP的应用绩效进行了大量研究,并且针对ERP实施的成功与否给出了严格的界定,如果按照这一要求,全世界ERP项目的实施成功率是非常低的。针对这一普遍存在的现象,本文从交易成本的视角进行系统分析,得出了"重复谈判&qu... 国外研究机构对ERP的应用绩效进行了大量研究,并且针对ERP实施的成功与否给出了严格的界定,如果按照这一要求,全世界ERP项目的实施成功率是非常低的。针对这一普遍存在的现象,本文从交易成本的视角进行系统分析,得出了"重复谈判"过程是造成ERP项目超期、超预算主要原因的结论。另外,ERP项目实施一旦超期、超预算,笔者推断,交易双方之间的合作会转变成对企业有限资源的竞争,最终终止合作,并且运用"学习竞争"方程对这一推断进行了模拟,得出了有意义的结果。 展开更多

关键词 ERP超期、超预算 交易成本 重复谈判 竞争方程

原文传递

高通量测序在动物检疫中的应用进展 被引量：4

13

作者 孙涛 李明哲 +1 位作者 崔淑华 尹伟力 《食品安全质量检测学报》 CAS 2017年第5期1693-1697,共5页

面对无法预测、爆发突然及传播迅速的疫情,快速获知病原信息并真实地反映样品及环境中病原的多样性资料是各国卫生部门及口岸预警的核心工作之一。应用高通量测序技术全面监控研究复杂病原样品,是协助寻找传染溯源、防控动物疫病可行性... 面对无法预测、爆发突然及传播迅速的疫情,快速获知病原信息并真实地反映样品及环境中病原的多样性资料是各国卫生部门及口岸预警的核心工作之一。应用高通量测序技术全面监控研究复杂病原样品,是协助寻找传染溯源、防控动物疫病可行性的一条重要思路。目前,高通量测序在动物检疫上的应用与传统的病原研究方式最大的区别在于把病原微生物看成一个整体,摆脱了对单一病原分离培养的步骤,直接对样品基质中所有病原进行研究。随着测序技术和数据处理分析能力的飞速发展,以高通量测序为基础的宏基因组学研究已渗透到各个领域,在畜产品、养殖环境等样本检测方面显示了重要价值。本文对高通量测序的研究方法及在检验检疫上的应用趋势进行了综述。 展开更多

关键词 宏基因组学 高通量测序 动物检疫

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肽核酸探针在微生物快速检测中的应用 被引量：4

14

作者 刘鹏 刘宁 +2 位作者 王云霞 段效辉 尹伟力 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第4期1363-1368,共6页

致病性微生物引起的食源性疾病在突发事件数和患者数方面占比最多。如何对食源性致病微生物进行快速、准确的检测,已成为食品安全应急处理亟待解决的问题。第3代反义核酸-肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)探针由于不带电荷的结构特点,... 致病性微生物引起的食源性疾病在突发事件数和患者数方面占比最多。如何对食源性致病微生物进行快速、准确的检测,已成为食品安全应急处理亟待解决的问题。第3代反义核酸-肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)探针由于不带电荷的结构特点,其稳定性、特异性、亲和性和膜通透性均优于DNA探针。近年来PNA在微生物快速检测中得到越来越广泛的应用,如用于荧光原位杂交、PCR扩增、生物传感器、基因芯片以及Southern印迹等。本文介绍了PNA探针的结构和特点、杂交方式以及PNA探针的设计原则,对其在微生物快速筛选方面的应用进展进行了综述,在此基础上分析了PNA探针的优缺点,并对未来发展趋势进行了展望。 展开更多

关键词 肽核酸 探针 微生物 快速检测

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重组酶快速检测十足目虹彩病毒1方法的建立 被引量：4

15

作者 尹伟力 吴葳 +4 位作者 刘晓静 马晓玲 韩伟 吴宁宁 陈燕平 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期267-272,共6页

为建立十足目虹彩病毒1的快速检测方法,根据十足目虹彩病毒1的ATP酶基因(ORF114R)保守序列设计特异性引物,通过条件优化,建立基于重组酶聚合酶扩增技术的十足目虹彩病毒1检测方法。重组酶聚合酶扩增技术的最优扩增温度为30 ℃,恒温反应2... 为建立十足目虹彩病毒1的快速检测方法,根据十足目虹彩病毒1的ATP酶基因(ORF114R)保守序列设计特异性引物,通过条件优化,建立基于重组酶聚合酶扩增技术的十足目虹彩病毒1检测方法。重组酶聚合酶扩增技术的最优扩增温度为30 ℃,恒温反应20 min内即可完成。特异性试验结果显示,该方法与其他常见虾类感染病毒无交叉反应。敏感性试验结果显示,该方法对十足目虹彩病毒1的最低检出限为7 拷贝/μL,低于传统的巢式PCR方法。利用已建立的重组酶聚合酶扩增技术方法和PCR方法对采集的509批临床样品进行检测,试验结果表明,重组酶聚合酶扩增技术能够有效检出PCR方法的弱阳性样品,表明重组酶聚合酶扩增技术可以用于临床检测。笔者建立的检测十足目虹彩病毒1的重组酶聚合酶扩增技术具有快速、简便、特异性强、灵敏度高的特点,适合基层实验室及现场检测。 展开更多

关键词 十足目虹彩病毒1 重组酶聚合酶扩增技术 快速检测

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广西狂犬病病毒L基因聚合酶活性部位的多态性分析 被引量：2

16

作者 陆专灵 尹伟力 +5 位作者 宋宏立 甘浪帆 张红云 邓先明 梁燕 罗廷荣 《广西农业科学》 CAS CSCD 2008年第3期368-373,共6页

对广西流行狂犬病病毒的L基因聚合酶活性部位进行克隆和测序，并与国外固定毒株和类狂犬病毒株进行比较分析。结果显示，广西流行毒株之间的核苷酸和推定的氨基酸同源性较高，分别为88、7％～99．8％和96．5％～100％，与国外固定毒株... 对广西流行狂犬病病毒的L基因聚合酶活性部位进行克隆和测序，并与国外固定毒株和类狂犬病毒株进行比较分析。结果显示，广西流行毒株之间的核苷酸和推定的氨基酸同源性较高，分别为88、7％～99．8％和96．5％～100％，与国外固定毒株的核苷酸和推定的氨基酸同源性分别为84．8％～87．5％和94．5％～99.0％，与类狂犬病病毒株的核苷酸和推定的氨基酸同源性分别为75．5％～79．2％和93．5％～97．0％；通过比较推定的氨基酸序列发现，第660位为广西Ⅱ群毒株的特异性变异1660V，第771位为广西Ⅰ群毒株的特异性变异S771A，第745位点广西毒株全部为精氨酸，而国外参考毒株为丝氨酸、亮氨酸或组氨酸；4个基序高度保守，基序A保持不变，基序B、C、D只有少数氨基酸发生变异，基序C中的核心序列GDNQ在各毒株中都不变。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 L基因聚合酶 多态性分析

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鲤春病毒血症病毒焦磷酸测序检测技术的建立 被引量：3

17

作者 刘瑶 尹伟力 +2 位作者 张四化 岳志芹 孙涛 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期449-455,共7页

通过收集鲤春病毒血症病毒基因序列,设计了鲤春病毒血症病毒最为保守的指纹序列,以及测序引物,建立了鲤春病毒血症病毒焦磷酸测序检测方法。对所构建的鲤春病毒血症病毒焦磷酸检测方法进行特异性试验和灵敏度检测,试验结果表明所建立的... 通过收集鲤春病毒血症病毒基因序列,设计了鲤春病毒血症病毒最为保守的指纹序列,以及测序引物,建立了鲤春病毒血症病毒焦磷酸测序检测方法。对所构建的鲤春病毒血症病毒焦磷酸检测方法进行特异性试验和灵敏度检测,试验结果表明所建立的方法特异性好,在8种鱼类病毒中能够特异性检测出目的病毒,检测方法灵敏度高,最低检出核酸量为10pg/μL。对建立的焦磷酸测序检测方法进行了实际应用研究,选取国内采集与进口的鱼类样本共计80批次进行鲤春病毒血症病毒检测。结果显示,焦磷酸测序检测方法可以有效的检出常规RT-PCR不能检出的假阴性样本和弱阳性样本,该方法的灵敏度和特异性可以满足水生动物疫病检测的需要。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒 焦磷酸测序 检测

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病毒性出血性败血症病毒液相芯片检测技术的建立 被引量：3

18

作者 尹伟力 梁君妮 +3 位作者 林超 张四化 岳志芹 刘荭 《中国动物检疫》 CAS 2015年第6期64-68,共5页

为建立检测病毒性出血性败血症病毒(VHSV)的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中VHSV的G基因进行序列分析,设计VHSV特异性引物并标记生物素。探针氨基化修饰并与荧光编码微球偶联后与VHSV RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪... 为建立检测病毒性出血性败血症病毒(VHSV)的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中VHSV的G基因进行序列分析,设计VHSV特异性引物并标记生物素。探针氨基化修饰并与荧光编码微球偶联后与VHSV RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号。结果表明液相芯片检测体系能够正确检出VHSV。病毒核酸的最低检出量为10pg,检测特异性高,说明初步建立了检测VHSV的液相芯片技术,为VHSV的检测提供了新方法。 展开更多

关键词 病毒性出血性败血症病毒(VHS) 液相芯片 检测

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液相芯片技术同时检测对虾桃拉病毒和虾黄头病毒的研究 被引量：3

19

作者 尹伟力 张四化 +2 位作者 岳志芹 郑小龙 刘荭 《水产科学》 CAS 北大核心 2014年第1期46-51,共6页

为建立一种同时检测对虾桃拉病毒、虾黄头病毒的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中对虾桃拉病毒的CP2基因和虾黄头病毒的N基因进行序列分析,设计对虾桃拉病毒、虾黄头病毒特异性引物并标记生物素。探针氨基化修饰,与荧光... 为建立一种同时检测对虾桃拉病毒、虾黄头病毒的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中对虾桃拉病毒的CP2基因和虾黄头病毒的N基因进行序列分析,设计对虾桃拉病毒、虾黄头病毒特异性引物并标记生物素。探针氨基化修饰,与荧光编码微球偶联后与对虾桃拉病毒、虾黄头病毒病毒RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号。该检测体系对对虾桃拉病毒、虾黄头病毒病毒核酸检测灵敏度高,其最低检测限为100pg,且与白斑病毒、鲤春病毒血症病毒、传染性造血器官坏死病毒核酸等无交叉反应。该方法灵敏度及特异性高,为同时快速检测对虾桃拉病毒、虾黄头病毒提供了简捷快速的技术手段。 展开更多

关键词 对虾桃拉病毒 虾黄头病毒 液相芯片 检测

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检测鱼传染性造血器官坏死病毒重组酶聚合酶扩增方法的建立及初步应用 被引量：3

20

作者 梁君妮 尹伟力 +3 位作者 刘鹏 马晓玲 段效辉 林森 《动物医学进展》 北大核心 2020年第2期14-17,共4页

为建立鱼类传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的快速检测方法,根据IHNV的G基因保守序列设计特异性引物,建立了基于重组酶聚合酶扩增(RPA)的IHNV检测方法。该方法在30℃20min即可完成,对IHNV具有良好的特异性和敏感性,最低检出限为156ng/mL;... 为建立鱼类传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的快速检测方法,根据IHNV的G基因保守序列设计特异性引物,建立了基于重组酶聚合酶扩增(RPA)的IHNV检测方法。该方法在30℃20min即可完成,对IHNV具有良好的特异性和敏感性,最低检出限为156ng/mL;用建立的RPA和RT-PCR对实验室保存的50份样品进行检测,结果显示,RPA的阳性检出率为14.00%,RT-PCR的阳性检出率为12.00%,说明RPA比RT-PCR具有更高的灵敏度。建立的RPA方法为IHNV的实验室检测提供了更多选择。 展开更多

关键词 重组酶聚合酶扩增技术 快速检测 鱼类传染性造血器官坏死病毒

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