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题名弓形虫主要表面抗原1截短型片段的纯化与鉴定
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作者
杨盛清
陈海明
颜棠
尹乐图
袁仕善
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机构
湖南师范大学医学院生物化学教研室
湖南师范大学医学院
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出处
《湖南师范大学学报（医学版）》
2007年第1期23-25,共3页
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基金
湖南省卫生厅科研基金资助项目(B2005109)
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文摘
目的:表达和纯化弓形虫SAG1,分析其免疫原性。方法:将诱导表达SAG1后菌体裂解,离心,分别收集其上清和沉淀;亲和层析分离纯化裂解上清液中的SAG1,SDS-PAGE和Western blot鉴定SAG1纯度和免疫原性。结果:诱导后重组体pGEX-SAG1/Bl21超声裂解上清液、8M脲溶解沉淀的上清中都含有融合蛋白GST-SAG1,从超声裂解上清液中纯化获得融合蛋白GST-SAG1。结论:亲和层析获得具有免疫原性的SAG1。
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关键词
弓形虫
SAG1
纯化
免疫原性
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Keywords
Toxoplasma gondii
major surface antigen 1
purification
immunogenicity
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分类号
R392
[医药卫生—免疫学]
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题名弓形虫主要表面抗原1截短型片段的克隆与表达
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作者
杨盛清
唐小异
袁仕善
陈海明
尹乐图
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机构
湖南师范大学医学院生物化学教研室
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出处
《怀化学院学报》
2007年第5期63-65,共3页
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基金
湖南省卫生厅科研基金资助项目
项目编号:B2005109
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文摘
为构建弓形虫主要表面抗原1(SAG1)的原核重组表达质粒并获得重组表达蛋白,采用聚合酶链反应(PCR)从弓形虫RH株基因组DNA中扩增SAG1基因,经克隆和测序后,亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,PCR和双酶切鉴定阳性菌株,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定观察其诱导的抗体应答.结果表明,PCR扩增出SAG1基因的特异片段,获得的阳性克隆序列与GenBank中的SAG1基因序列一致,SAG1基因被亚克隆到表达载体pGEX-4T-1,在BL21中表达了SAG1,表达的蛋白能被弓形虫感染兔血清识别.以上结果说明,已成功构建了弓形虫SAG1的重组表达质粒,在大肠杆菌中表达的SAG1具有良好的免疫学活性.
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关键词
弓形虫
主要表面抗原1
克隆
表达
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Keywords
toxoplasma gondii
major surface antigen 1
cloning
expression
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分类号
Q591.2
[生物学—生物化学]
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