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热休克转录因子1对视网膜色素上皮细胞抗氧化和抗衰老的调控作用
1
作者
蒋明君
尚
国
辉
+4 位作者
张凤妍
殷凡响
薛梦姣
胡延忠
彭旭艳
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第5期417-427,共11页
目的探讨热休克转录因子1(HSF1)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)抗氧化和抗衰老的作用。方法利用成簇规律间隔短回文重复序列及相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术敲除人ARPE-19细胞系中HSF 1基因,构建并获得2种HSF1缺失ARPE细胞株(AR...
目的探讨热休克转录因子1(HSF1)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)抗氧化和抗衰老的作用。方法利用成簇规律间隔短回文重复序列及相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术敲除人ARPE-19细胞系中HSF 1基因,构建并获得2种HSF1缺失ARPE细胞株(ARPE/Hsf1-/-),分别命名为H8、H9细胞株。取野生型、H8和H9细胞株,应用DHE探针染色结合流式分析技术测定细胞内活性氧簇(ROS)含量,应用流式细胞分析方法测定细胞周期;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定不同培养时间点细胞活力值;采用结晶紫染色实验测定细胞相对存活率;采用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色实验检测衰老细胞比率;采用Western blot法检测各细胞株中热休克蛋白(HSP)70、HSP27、聚集素(CLU)、p53、p21和白细胞介素(IL)-1β蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR法测定各细胞株中p53、p21、IL-6、IL-8、IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)mRNA表达水平。比较各细胞株在不同热休克处理条件下和HSP90抑制剂IPI504处理下热休克反应相关蛋白相对表达量,比较各细胞株不同浓度H_(2)O_(2)处理后相对存活率,比较各细胞株经或未经ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理后p21蛋白相对表达量。结果基因测序显示H8和H9细胞株成功携带突变基因,Western blot检测结果显示H8、H9细胞株不表达HSF1蛋白,HSF1在ARPE-19细胞中被成功敲除。与野生型细胞株相比,H8、H9细胞株中的HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);各细胞株HSP90蛋白相对表达水平总体比较,差异无统计学意义(F=0.29,P>0.05)。在不同热休克刺激和IPI504诱导下野生型细胞株中HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与野生型细胞株相比,H8和H9细胞株的HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著低于相应处理的野生型细胞,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与野生
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关键词
热休克转录因子1
年龄相关性黄斑变性
细胞衰老
视网膜色素上皮
衰老治疗
氧化应激
下载PDF
职称材料
试论企业生产现场定置管理
2
作者
尚
国
辉
《魅力中国》
2009年第7期144-144,148,共2页
本文论述了生产现场定置管理的作用,存在的不足以及进一步深化企业现场管理的方法。
关键词
企业
生产现场
定置管理
下载PDF
职称材料
合理评价企业用电 促进节电技术改造
3
作者
尚
国
辉
《资源与发展》
1994年第3期32-33,共2页
关键词
企业用电
节能
技术改造
下载PDF
职称材料
NC-SST-I分解炉锥部结皮的处理
4
作者
赵来山
倪宏山
尚
国
辉
《水泥》
CAS
2006年第1期53-53,共1页
关键词
分解炉
结皮
熟料生产线
设计生产能力
出口压力
系统风量
质量波动
管道式
SST
窑炉
下载PDF
职称材料
题名
热休克转录因子1对视网膜色素上皮细胞抗氧化和抗衰老的调控作用
1
作者
蒋明君
尚
国
辉
张凤妍
殷凡响
薛梦姣
胡延忠
彭旭艳
机构
郑州大学第一附属医院
郑州大学基础医学院医学遗传与细胞生物学系
郑州大学第一附属医院转化医学中心
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第5期417-427,共11页
基金
国家自然科学基金(U1604171、31802314、81970785)
河南省医学科技攻关项目(SBGJ202102157、SBGJ202103068)
河南省科技攻关项目(222102310467)。
文摘
目的探讨热休克转录因子1(HSF1)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)抗氧化和抗衰老的作用。方法利用成簇规律间隔短回文重复序列及相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术敲除人ARPE-19细胞系中HSF 1基因,构建并获得2种HSF1缺失ARPE细胞株(ARPE/Hsf1-/-),分别命名为H8、H9细胞株。取野生型、H8和H9细胞株,应用DHE探针染色结合流式分析技术测定细胞内活性氧簇(ROS)含量,应用流式细胞分析方法测定细胞周期;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定不同培养时间点细胞活力值;采用结晶紫染色实验测定细胞相对存活率;采用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色实验检测衰老细胞比率;采用Western blot法检测各细胞株中热休克蛋白(HSP)70、HSP27、聚集素(CLU)、p53、p21和白细胞介素(IL)-1β蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR法测定各细胞株中p53、p21、IL-6、IL-8、IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)mRNA表达水平。比较各细胞株在不同热休克处理条件下和HSP90抑制剂IPI504处理下热休克反应相关蛋白相对表达量,比较各细胞株不同浓度H_(2)O_(2)处理后相对存活率,比较各细胞株经或未经ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理后p21蛋白相对表达量。结果基因测序显示H8和H9细胞株成功携带突变基因,Western blot检测结果显示H8、H9细胞株不表达HSF1蛋白,HSF1在ARPE-19细胞中被成功敲除。与野生型细胞株相比,H8、H9细胞株中的HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);各细胞株HSP90蛋白相对表达水平总体比较,差异无统计学意义(F=0.29,P>0.05)。在不同热休克刺激和IPI504诱导下野生型细胞株中HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与野生型细胞株相比,H8和H9细胞株的HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著低于相应处理的野生型细胞,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与野生
关键词
热休克转录因子1
年龄相关性黄斑变性
细胞衰老
视网膜色素上皮
衰老治疗
氧化应激
Keywords
Heat shock transcription factor 1
Age-related macular degeneration
Cellular senescence
Retinal pigment epithelium
Senotherapy
Oxidative stress
分类号
R774.1 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
试论企业生产现场定置管理
2
作者
尚
国
辉
机构
贵州大学机械工程学院
出处
《魅力中国》
2009年第7期144-144,148,共2页
文摘
本文论述了生产现场定置管理的作用,存在的不足以及进一步深化企业现场管理的方法。
关键词
企业
生产现场
定置管理
分类号
F273 [经济管理—企业管理]
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职称材料
题名
合理评价企业用电 促进节电技术改造
3
作者
尚
国
辉
出处
《资源与发展》
1994年第3期32-33,共2页
关键词
企业用电
节能
技术改造
分类号
TM92 [电气工程—电力电子与电力传动]
下载PDF
职称材料
题名
NC-SST-I分解炉锥部结皮的处理
4
作者
赵来山
倪宏山
尚
国
辉
机构
中宁赛马水泥有限公司
出处
《水泥》
CAS
2006年第1期53-53,共1页
关键词
分解炉
结皮
熟料生产线
设计生产能力
出口压力
系统风量
质量波动
管道式
SST
窑炉
分类号
TQ172.622 [化学工程—水泥工业]
TQ172.6 [化学工程—硅酸盐工业]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
热休克转录因子1对视网膜色素上皮细胞抗氧化和抗衰老的调控作用
蒋明君
尚
国
辉
张凤妍
殷凡响
薛梦姣
胡延忠
彭旭艳
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
下载PDF
职称材料
2
试论企业生产现场定置管理
尚
国
辉
《魅力中国》
2009
0
下载PDF
职称材料
3
合理评价企业用电 促进节电技术改造
尚
国
辉
《资源与发展》
1994
0
下载PDF
职称材料
4
NC-SST-I分解炉锥部结皮的处理
赵来山
倪宏山
尚
国
辉
《水泥》
CAS
2006
0
下载PDF
职称材料
已选择
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