以苹果叶片总RNA为模板,通过克隆获得抗苹果斑点落叶病基因Mal d 1。Mal d 1开放阅读框长度为480 bp,编码159个氨基酸残基,包含2个外显子和1个内含子。蛋白结构分析显示,Mal d 1蛋白包含bet v 1-like结构域。荧光定量PCR分析结果表明,Ma...以苹果叶片总RNA为模板,通过克隆获得抗苹果斑点落叶病基因Mal d 1。Mal d 1开放阅读框长度为480 bp,编码159个氨基酸残基,包含2个外显子和1个内含子。蛋白结构分析显示,Mal d 1蛋白包含bet v 1-like结构域。荧光定量PCR分析结果表明,Mal d 1在苹果叶、花、果皮、果肉中均有表达,但各器官中表达水平存在差异;在不同发育时期的果皮中都有表达,表达水平随时间呈现先上升后下降的趋势;在抗性品种叶片中表达水平较高;在叶片人工接种病菌条件下表达量随时间的延长明显高于对照组。利用PRI101-AN载体和农杆菌介导的遗传转化方法转化苹果愈伤组织,转基因愈伤组织的抗病鉴定结果显示,Mal d 1过量表达增强愈伤组织对苹果斑点落叶病的抗性。展开更多
以"王林"苹果为试材,采用RT-PCR的方法克隆获得Mal d 1基因,并将该基因连接到原核表达载体pColdⅡ上,经测序确定所构建的重组载体pCold-Mal d 1开放阅读框正确。将获得的重组质粒pCold-Mal d 1转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IP...以"王林"苹果为试材,采用RT-PCR的方法克隆获得Mal d 1基因,并将该基因连接到原核表达载体pColdⅡ上,经测序确定所构建的重组载体pCold-Mal d 1开放阅读框正确。将获得的重组质粒pCold-Mal d 1转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG 0.1mmol·L^(-1),15℃,24h冷诱导表达,SDS-PAGE电泳检测,证明Mal d 1蛋白获得了稳定而高效的表达,所表达蛋白是大小约为22.4kD的融合蛋白。经镍柱纯化后获得相对单一的蛋白,可用于免疫组织化学,蛋白印记检测等。展开更多
文摘以苹果叶片总RNA为模板,通过克隆获得抗苹果斑点落叶病基因Mal d 1。Mal d 1开放阅读框长度为480 bp,编码159个氨基酸残基,包含2个外显子和1个内含子。蛋白结构分析显示,Mal d 1蛋白包含bet v 1-like结构域。荧光定量PCR分析结果表明,Mal d 1在苹果叶、花、果皮、果肉中均有表达,但各器官中表达水平存在差异;在不同发育时期的果皮中都有表达,表达水平随时间呈现先上升后下降的趋势;在抗性品种叶片中表达水平较高;在叶片人工接种病菌条件下表达量随时间的延长明显高于对照组。利用PRI101-AN载体和农杆菌介导的遗传转化方法转化苹果愈伤组织,转基因愈伤组织的抗病鉴定结果显示,Mal d 1过量表达增强愈伤组织对苹果斑点落叶病的抗性。
文摘以"王林"苹果为试材,采用RT-PCR的方法克隆获得Mal d 1基因,并将该基因连接到原核表达载体pColdⅡ上,经测序确定所构建的重组载体pCold-Mal d 1开放阅读框正确。将获得的重组质粒pCold-Mal d 1转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG 0.1mmol·L^(-1),15℃,24h冷诱导表达,SDS-PAGE电泳检测,证明Mal d 1蛋白获得了稳定而高效的表达,所表达蛋白是大小约为22.4kD的融合蛋白。经镍柱纯化后获得相对单一的蛋白,可用于免疫组织化学,蛋白印记检测等。
