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枯草芽孢杆菌Bs-916的抑菌活性及其抑菌物质初探 被引量：29
1
作者 刘永锋 陈志谊 +4 位作者 周明国 张杰 宋福平 刘邮洲 罗楚平 《农药学学报》 CAS CSCD 2007年第1期92-95,共4页
为了揭示从土壤中分离出的拮抗菌—枯草芽孢杆菌Bs-916的抑菌作用和抑菌机理,采用管蝶法、平板涂抹法及孢子盟发法测定了Bs-916及其代谢液对水稻纹枯病菌、蚕豆枯萎病菌等8种病原菌的抑菌活性,结果表明其对供试的大多数病原菌均具有较... 为了揭示从土壤中分离出的拮抗菌—枯草芽孢杆菌Bs-916的抑菌作用和抑菌机理,采用管蝶法、平板涂抹法及孢子盟发法测定了Bs-916及其代谢液对水稻纹枯病菌、蚕豆枯萎病菌等8种病原菌的抑菌活性,结果表明其对供试的大多数病原菌均具有较强的抑菌活性,如Bs-916及其代谢液对水稻纹枯病菌的抑制率分别为95.4%和70.7%,对水稻稻曲病菌的抑制率均为100%。为了探索Bs-916胞外物质的种类及特性,分别采用丙酮沉淀、PEG沉淀、等电点沉淀和超微浓缩等方法从Bs-916代谢液中获得了沉淀物或截留物,它们均具有抑菌活性。沉淀物经蛋白酶K处理后,活性减弱,说明Bs-916胞外抗菌物质具有蛋白质的性质。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 Bs-916 代谢液 抗菌物质 抑菌活性
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对鞘翅目害虫高毒力Bt基因cry3Aa7的分离克隆及表达研究 被引量：25
2
作者 张杰 宋福平 +3 位作者 李长友 陈中义 檀建新 黄大昉 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期650-653,共4页
从国内分离的对鞘翅目叶甲科害虫高毒力的Bt菌株中克隆了 3.0kbcry3Aa基因大片段 ,完成了该片段的亚克隆和全序列测定。该基因编码区为 1932bps,编码的蛋白质由 6 4 4个氨基酸残基组成 ,分子量 73.1ku ,等电点为 pH5 .16 5 ,为弱酸性蛋... 从国内分离的对鞘翅目叶甲科害虫高毒力的Bt菌株中克隆了 3.0kbcry3Aa基因大片段 ,完成了该片段的亚克隆和全序列测定。该基因编码区为 1932bps,编码的蛋白质由 6 4 4个氨基酸残基组成 ,分子量 73.1ku ,等电点为 pH5 .16 5 ,为弱酸性蛋白。该蛋白中Ser、Leu、Thr含量最高 ,分别为 8.2 2 %、8.0 7%和 7.76 %。通过穿梭载体将该基因导入Bt无晶体突变株中 ,获得工程菌Biot2 0 5。cry3Aa7基因在其中能正常表达 ,并形成扁方形晶体。工程菌Biot2 0 5对榆蓝叶甲 (Pyrrhaltaaenescens)校正死亡率为 86 .2 1%。该基因序列已在EMBL、GenBank中登记 ,并被国际Bt δ 内毒素基因命名委员会正式命名为cry3Aa7。 展开更多
关键词 鞘翅目害虫 高毒力Bt基因 cry3Aα7 分离 克隆 表达 杀虫活性
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31株苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因型鉴定及表达产物研究 被引量：14
3
作者 张杰 宋福平 +2 位作者 左雅慧 戴莲韵 黄大昉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期372-378,共7页
利用已建立的苏云金芽孢杆菌cry基因的PCR RFLP鉴定体系 ,鉴定了 31株Bt菌株的cry基因类型 ,并进行了SDS PAGE分析和杀虫生物活性测定。研究表明 :2 5株含cry1基因 ,表达蛋白 1 30～ 1 50kD ;其中 1 6株含有对鞘翅目和鳞翅目害虫皆有活... 利用已建立的苏云金芽孢杆菌cry基因的PCR RFLP鉴定体系 ,鉴定了 31株Bt菌株的cry基因类型 ,并进行了SDS PAGE分析和杀虫生物活性测定。研究表明 :2 5株含cry1基因 ,表达蛋白 1 30～ 1 50kD ;其中 1 6株含有对鞘翅目和鳞翅目害虫皆有活性的cry1I基因 ,其表达蛋白为 81kD ;1 5株同时含有cry1和cry2基因 ( 1 3株表达蛋白约为 60kD) ;1 0株含有未知待定基因 ;6株不含所鉴定的cry基因 (其中 2株有表达产物 )。室内生物测定表明 :cry1、cry2基因表达的菌株对鳞翅目害虫具有高杀虫活性 ,7株对舞毒蛾和膜翅目———杨叶蜂幼虫具有较高杀虫活性 ;含有cry1Aa、cry1Ac、cry2或cry1Ab、cry1Ac、cry2基因组合的菌株对棉铃虫幼虫均显示杀虫活性 ,其中 6、1 2、30号菌株毒力最强。不含上述cry基因的菌株均无杀虫活性。以上结果证明 ,通过cry基因类型鉴定和表达产物的SDS PAGE分析可以预测菌株的杀虫活性。 展开更多
关键词 苏云金孢杆菌 CRY基因 基因型鉴定 SDS-PAGE
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对小地老虎具有杀虫毒力的苏云金芽孢杆菌菌株的分离及鉴定 被引量：20
4
作者 束长龙 谷少华 +5 位作者 窦黎明 陆琼 张杰 张永军 赵虎基 宋福平 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期41-44,共4页
从我国3种典型植被覆盖的6个地区的土壤样品分离得到了348株苏云金芽孢杆菌菌株,采用杀虫活性测定方法从中获得了32株对小地老虎具有高毒力的菌株。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE蛋白分析法,研究了这32株苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋... 从我国3种典型植被覆盖的6个地区的土壤样品分离得到了348株苏云金芽孢杆菌菌株,采用杀虫活性测定方法从中获得了32株对小地老虎具有高毒力的菌株。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE蛋白分析法,研究了这32株苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白基因类型和晶体蛋白表达情况,对小菜蛾、二化螟、棉铃虫的杀虫活性测定也证明了苏云金芽孢杆菌cry基因类型、表达蛋白及杀虫活性间的相关性。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 PCR-RFLP 小地老虎 棉铃虫
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苏云金芽孢杆菌cry基因芯片检测方法的研究 被引量：10
5
作者 刘旭光 宋福平 +3 位作者 文思远 王升启 黄大昉 张杰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期987-992,共6页
建立了一种不经PCR扩增而直接应用寡核苷酸芯片从苏云金芽孢杆菌总DNA中检测cry基因的方法。对探针长度、浓度、总DNA含量、标记方法以及灵敏度等条件进行了研究。结果表明,用高浓度Klenow酶随机标记高浓度的总DNA与寡核苷酸探针(40～50... 建立了一种不经PCR扩增而直接应用寡核苷酸芯片从苏云金芽孢杆菌总DNA中检测cry基因的方法。对探针长度、浓度、总DNA含量、标记方法以及灵敏度等条件进行了研究。结果表明,用高浓度Klenow酶随机标记高浓度的总DNA与寡核苷酸探针(40～50mer、40μmol·L-1)杂交可用于检测Bt菌株中含有的cry基因;不同长度探针之间对杂交信号的影响存在显著性差异(P<0.01),而不同浓度的探针之间没有显著性差异。此方法的其它条件为杂交温度42℃、时间3h;检测的样品总DNA的灵敏度约为2.5μg;标记产物杂交用量(0.625～20μg)的对数值与信号值的对数值之间存在明显的线性关系(r2=0.985～0.989)。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 CRY基因 基因芯片 检测方法 杀虫晶体蛋白 生物防治
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苏云金芽孢杆菌B-Pr-88菌株中cry2Ab4基因的表达和杀虫活性研究 被引量：18
6
作者 李长友 张杰 +3 位作者 宋福平 韩岚岚 李国勋 黄大昉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期634-638,共5页
以我室自行分离的对鳞翅目夜蛾科害虫具有高毒力的Bt菌株B-Pr-88为材料,用PCR-RFLP方法从其质粒DNA文库中筛选到含cry2Ab基因的一个阳性克隆pZF858,序列测定发现,该片段含有cry2Ab全长基因,开放读码框为1902bps,编码由633个氨基酸组成的... 以我室自行分离的对鳞翅目夜蛾科害虫具有高毒力的Bt菌株B-Pr-88为材料,用PCR-RFLP方法从其质粒DNA文库中筛选到含cry2Ab基因的一个阳性克隆pZF858,序列测定发现,该片段含有cry2Ab全长基因,开放读码框为1902bps,编码由633个氨基酸组成的70.7kD蛋白,氨基酸同源性与已公布的cry2Ab基因同源性均为99.8%,经Bt基因国际命名委员会正式命名为cry2Ab4。根据cry2Ab4基因开放阅读框架(ORF)两端序列,设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3,PCR扩增获得cry2Ab4完整ORF,与大肠杆菌表达载体pET-21b连接,构建了重组表达质粒pET-2Ab4,质粒导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳证实该基因表达了60kD的蛋白,生物测定表明,Cry2Ab4对棉铃虫和大豆食心虫具有高毒力,同时对小菜蛾和二化螟有一定的杀虫活性,而对亚洲玉米螟和甜菜夜蛾没有杀虫活性。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry2Ab4基因 基因克隆 蛋白表达 杀虫活性
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绿色荧光蛋白及其应用 被引量：20
7
作者 邓超 黄大昉 宋福平 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期96-102,共7页
随着对绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)研究的不断深入,人们对其结构、荧光产生机理等已有较为全面的认识。近年来利用GFP及其它荧光蛋白(FPs)发展了诸如荧光互补技术(FC)、荧光共振能量转移技术(FRET)和超分辨成像(super-... 随着对绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)研究的不断深入,人们对其结构、荧光产生机理等已有较为全面的认识。近年来利用GFP及其它荧光蛋白(FPs)发展了诸如荧光互补技术(FC)、荧光共振能量转移技术(FRET)和超分辨成像(super-resolution imaging)等一系列新技术,极大地促进了生物学、医药科学的研究。主要介绍了荧光蛋白的结构,荧光产生的机理,不同类型的荧光蛋白和基于荧光蛋白产生的新技术等方面的最新研究进展。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白(GFP) 生色团 荧光产生机理 荧光蛋白的应用
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苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白基因vip3A的研究 被引量：18
8
作者 刘荣梅 张杰 +1 位作者 高继国 宋福平 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第9期39-42,共4页
根据已知vip3A基因序列设计一对特异性引物VIP3／VIP5，对218株Bt菌株进行PCR鉴定，有51株含有vip3A类基因，其中12株为不同亚种的标准菌株，有4株标准菌株不含有该基因。从Bt C9菌株中分离克隆了vip—C9基因，并插入表达载体pET—21b... 根据已知vip3A基因序列设计一对特异性引物VIP3／VIP5，对218株Bt菌株进行PCR鉴定，有51株含有vip3A类基因，其中12株为不同亚种的标准菌株，有4株标准菌株不含有该基因。从Bt C9菌株中分离克隆了vip—C9基因，并插入表达载体pET—21b，转化大肠杆菌BL21，诱导表达出分子量88．6kDa的可溶性蛋白，表达产物对甜菜夜蛾和棉铃虫具有较高的杀虫活性，LC50分别为0．42ng／mg和25．95ng／mg，对小菜蛾活性较低。构建了缺失蛋白Vip—C9—N(N端去除39个氨基酸组成的信号肽序列)，杀虫活性测定结果表明其对甜菜夜蛾的活性显著降低，说明N端39个氨基酸对甜菜夜蛾的活性是必需的。 展开更多
关键词 甜菜夜蛾 苏云金芽孢杆菌 杀虫活性 营养期杀虫蛋白 BT菌株 棉铃虫 小菜蛾 基因 IP3 标准菌株
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铜绿丽金龟的室内人工饲养 被引量：17
9
作者 王容燕 王金耀 +5 位作者 宋健 曹伟平 杜立新 冯书亮 宋福平 张杰 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期20-24,共5页
对室内饲养铜绿丽金龟AnomalacorpulentaMotschulsky的方法和主要影响因子进行了研究。结果表明:室内饲养的铜绿丽金龟种群完成一个世代平均为272·3天,3龄幼虫期比田间种群缩短了103·8天。在饲养过程中,幼虫的生长容易受到土... 对室内饲养铜绿丽金龟AnomalacorpulentaMotschulsky的方法和主要影响因子进行了研究。结果表明:室内饲养的铜绿丽金龟种群完成一个世代平均为272·3天,3龄幼虫期比田间种群缩短了103·8天。在饲养过程中,幼虫的生长容易受到土壤湿度、食料、病原微生物的影响。卵的孵化率为86·0%,1龄、2龄和3龄幼虫的存活率分别为82·0%、76·0%和60·0%。10和15日龄幼虫在含有马铃薯的土壤中饲养14天后的死亡率分别为8·8%±1·6%和4·0%±1·6%,明显低于初孵幼虫及5日龄幼虫的死亡率,可以作为生物测定的最佳供试幼虫。紫外线处理的壤土和沙壤土中铜绿丽金龟幼虫可以正常生长,死亡率较低。 展开更多
关键词 铜绿丽金龟 室内饲养 生活史 饲养条件
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双价杀虫蛋白基因在荧光假单胞菌中的表达及增效 被引量：11
10
作者 丁之铨 张杰 +2 位作者 宋福平 黄大昉 李季伦 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期573-578,共6页
利用广宿主质粒载体 pJMS6α lac将苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)杀虫晶体蛋白基因cry1Ac和cry2Aa基因分别及一起进行克隆 ,将重组质粒导入能在多种作物上定殖、对植物病菌有良好抑菌和防治作用的荧光假单胞菌 (Pseudomonasfl... 利用广宿主质粒载体 pJMS6α lac将苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)杀虫晶体蛋白基因cry1Ac和cry2Aa基因分别及一起进行克隆 ,将重组质粒导入能在多种作物上定殖、对植物病菌有良好抑菌和防治作用的荧光假单胞菌 (Pseudomonasfluorescens)P30 3菌株 ,分别得到工程菌株IPP1 0 1、IPP2 0 1和IPP2 0 2。PCR RFLP和Southernblot检测均证明目的基因已经导入了工程菌。SDS PAGE电泳显示工程菌中存在明显的Cry1Ac蛋白带 ;透射电镜观察发现含cry1Ac基因的两个菌株IPP1 0 1和IPP2 0 2中杀虫蛋白形成了典型的菱形晶体和蛋白包含体 ,而在野生P30 3菌株中均无这些结构。这些结果说明 ,工程菌中cry1Ac基因得到了很好表达。室内杀虫试验表明 :工程菌对棉铃虫初孵幼虫的致死中浓度 (LC50 ) ,只含cry1Ac的IPP1 0 1为 0 0 0 81 2mL/g饲料 ,只含cry2Aa的IPP2 0 1为 0 0 2 60 4mL/g饲料 ,含双基因的IPP2 0 2为 0 0 0 1 86mL/g饲料 ;HD73为 0 0 0 1 70mL/g饲料。cry1Ac和cry2Aa双基因表达产物具有显著增效作用 ,共毒系数达 332 8。 展开更多
关键词 荧光假单胞菌 杀虫晶体蛋白基因 表达
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苏云金芽胞杆菌内生质粒提取方法的改进 被引量：14
11
作者 刘晶晶 束长龙 +2 位作者 张杰 宋福平 黄大昉 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第6期120-123,共4页
改进了苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)内生质粒提取技术,提取了Bt库斯塔克亚种、以色利亚种和一株对鳞翅目害虫有活性的野生菌株的质粒,利用琼脂糖凝胶电泳分析了质粒图谱,进一步检测了质粒的浓度与纯度。实验结果表明,该... 改进了苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)内生质粒提取技术,提取了Bt库斯塔克亚种、以色利亚种和一株对鳞翅目害虫有活性的野生菌株的质粒,利用琼脂糖凝胶电泳分析了质粒图谱,进一步检测了质粒的浓度与纯度。实验结果表明,该方法与传统技术相比,操作简单、耗时短,提取的质粒纯度高、条带清晰,染色体DNA污染较少。为Bt杀虫基因克隆、质粒特性分析等研究创造了有利条件。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 内生质粒 提取 质粒图谱
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ARDRA方法在荧光假单胞菌分离鉴定中的应用 被引量：14
12
作者 年洪娟 张杰 +3 位作者 樊利强 刘朔 宋福平 黄大昉 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期92-98,共7页
【目的】探索荧光假单胞菌的分类方法,分离筛选拮抗性较强的荧光假单胞菌。【方法】利用紫外下产生荧光的特性,采用梯度稀释及鞭毛染色的方法,对采自云南、海南、山东和新疆的488份植物根际土壤进行分离筛选,分离菌株进行ARDRA分析,采... 【目的】探索荧光假单胞菌的分类方法,分离筛选拮抗性较强的荧光假单胞菌。【方法】利用紫外下产生荧光的特性,采用梯度稀释及鞭毛染色的方法,对采自云南、海南、山东和新疆的488份植物根际土壤进行分离筛选,分离菌株进行ARDRA分析,采用室内平板对峙法筛选对植物病原真菌具有较强拮抗作用的菌株,并对其进行生理生化分析和分子鉴定。【结果】分离筛选到102株紫外下产生荧光的杆状单极生鞭毛菌株。ARDRA分析产生荧光假单胞菌类型、恶臭假单胞菌类型以及一个未知的谱带类型。以油菜立枯病菌作为靶标菌,筛选到25株具有拮抗作用的菌株,其中TC222产生的抑菌圈最大,进一步的生测结果表明该菌株对9种重要的植物病原真菌如番茄灰霉病菌等具有很强的拮抗活性。TC222的16SrDNA核苷酸序列与荧光假单胞菌PfO-1同源性达到99%,其最终鉴定为荧光假单胞菌。【结论】ARDRA方法在分子水平上为荧光假单胞菌的分离鉴定探索了一条新途径;TC222菌株具有拮抗多种植物病原真菌的能力,显示了良好的应用前景。 展开更多
关键词 荧光假单胞菌 分离鉴定 ARDRA分析 拮抗作用
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饲喂玉米秸秆的白星花金龟幼虫肠道细菌多样性 被引量：15
13
作者 田小燕 宋福平 +4 位作者 张杰 刘荣梅 张兴鹏 段江燕 束长龙 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期632-641,共10页
【目的】分析比较饲喂玉米Zea mays L.秸秆的白星花金龟Protaetia brevitarsis幼虫中肠、后肠中细菌群落结构,挖掘肠道细菌在白星花金龟消化秸秆中的功能。【方法】分别提取健康白星花金龟3龄幼虫10个样品(5个中肠内含物、5个后肠内含物... 【目的】分析比较饲喂玉米Zea mays L.秸秆的白星花金龟Protaetia brevitarsis幼虫中肠、后肠中细菌群落结构,挖掘肠道细菌在白星花金龟消化秸秆中的功能。【方法】分别提取健康白星花金龟3龄幼虫10个样品(5个中肠内含物、5个后肠内含物)肠道细菌总DNA,利用Illumina HiSeq技术对白星花金龟幼虫中肠和后肠细菌的16S rDNA V4区序列进行测序,统计样品操作分类单元(operational taxonomic units,OTUs)数量,分析物种丰度、α多样性和β多样性,并将细菌群落信息映射到KEGG基因组数据库,进行细菌群落功能挖掘。【结果】共获得白星花金龟3龄幼虫肠道细菌1 062 897高质量reads,聚类为2 441个OTUs,总共注释到27个门,51个纲,77目,168科,326属。在属的分类阶元上,中肠中以假单胞菌属Pseudomonas为最优势属,后肠中以脱硫弧菌属Desulfovibrio为最优势属。α多样性分析表明,后肠群落多样性更丰富;β多样性分析结果显示,后肠微生物群落更稳定。细菌群落功能分析结果显示,中肠、后肠细菌群落都含有降解秸秆相关的酶系,其中,中肠降解木质素相关的通路更丰富,后肠降解纤维素的酶更多。【结论】采用Illumina HiSeq测序技术明确了饲喂玉米秸秆的白星花金龟幼虫中肠、后肠细菌群落结构与特点,进一步发现了肠道细菌在白星花金龟秸秆消化过程中发挥的作用,相关研究结果将为白星花金龟消化秸秆的机制深入研究提供参考,为我国秸秆资源化利用提供新思路。 展开更多
关键词 白星花金龟 肠道细菌 16S RDNA V4区 细菌群落 群落多样性 功能分析
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转双价抗真菌病害基因大豆对根际土壤微生物群落结构的影响 被引量：13
14
作者 周琳 束长龙 +3 位作者 黄文坤 朱延明 宋福平 张杰 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期509-514,共6页
采用传统的平板计数法和变性梯度凝胶电泳技术,对转chi＋rip（几丁质酶和核糖体失活蛋白）双价抗真菌基因大豆转基因G0431以及其亲本非转基因大豆黑农35种植后的根部土壤可培养细菌（含芽胞杆菌、产荧光假单胞菌）、真菌、放线菌进行平... 采用传统的平板计数法和变性梯度凝胶电泳技术,对转chi＋rip（几丁质酶和核糖体失活蛋白）双价抗真菌基因大豆转基因G0431以及其亲本非转基因大豆黑农35种植后的根部土壤可培养细菌（含芽胞杆菌、产荧光假单胞菌）、真菌、放线菌进行平板计数及细菌和真菌的群落结构分析.结果表明,二者根部土壤可培养细菌（含芽胞杆菌和产荧光假单胞）、真菌和放线菌的数量并无显著差异;此外,变性梯度凝胶电泳图谱的聚类分析结果显示,时间变化是造成根部土壤细菌和真菌群落结构变化的主要因素,而同一时间内转基因G0431和黑农35根部土壤的细菌和真菌群落结构之间并无显著不同.在大豆的整个生长期内,根部土壤细菌群落多样性指数为5.32～5.37,群落分布均匀度指数为0.91~0.95;根部土壤真菌群落多样性指数为4.78～4.91,群落分布均匀度指数为0.81～0.89.以上结果说明,几丁质酶和核糖体失活蛋白双价基因的导入并没有对大豆根际可培养细菌（含芽胞杆菌和产荧光假单胞）、真菌和放线菌的数量以及细菌和真菌的群落结构产生显著影响. 展开更多
关键词 转基因大豆 变性梯度凝胶电泳 土壤微生物 群落结构
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光照对芦丁稳定性及抑菌活性的影响 被引量：13
15
作者 杨丹 郝再彬 +2 位作者 胡淑田 张永军 宋福平 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期223-226,共4页
黄酮类化合物具有多羟基结构易被氧化,为了解其羟基被氧化后,是否还具有抑菌、抗癌等多种生物学活性,对芦丁光照处理前后的含量、抗氧化活性(清除DPPH.和还原能力)、分子结构以及抑菌活性进行了比较研究.结果表明,随着光照时间的延长,... 黄酮类化合物具有多羟基结构易被氧化,为了解其羟基被氧化后,是否还具有抑菌、抗癌等多种生物学活性,对芦丁光照处理前后的含量、抗氧化活性(清除DPPH.和还原能力)、分子结构以及抑菌活性进行了比较研究.结果表明,随着光照时间的延长,芦丁含量和抗氧化活性均呈下降趋势,降解反应属于一级反应,半衰期为187.3 d.结构鉴定表明,光照处理芦丁母核结构没有降解,只是A环5、7-OH和B环3′、4′-OH氢解离,芦丁在溶液中以负离子或自由基形式存在.芦丁氧化前后的浓度与抑菌效果均成良好的量效关系,其相关系数分别为0.933 2和0.933 0.但氧化芦丁的EC50值(15.58 g/L)与对照(6.34 g/L)相比差异显著(P<0.01).可见,氧化芦丁的抑菌活性明显降低.这进一步表明,芦丁分子结构的细微改变与体外的抗氧化活性和抑菌活性三者之间的构效关系基本一致. 展开更多
关键词 芦丁 黄酮类化合物 光照 稳定性 抑菌活性
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苏云金芽孢杆菌cry1Ab13基因的克隆及表达研究 被引量：7
16
作者 檀建新 张杰 +3 位作者 宋福平 陈中义 王开梅 黄大昉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期40-44,共5页
BtC0 0 5是我国自行分离的对多种害虫具有毒杀作用的苏云金芽孢杆菌 ,经PCR RFLP系统鉴定 ,它含有cry1Ab基因。Southernblot结果显示 :PstI酶切C0 0 5质粒所得的 8 5kb长的DNA片段为cry1Ab基因的阳性杂交带。以pUCP1 9为载体 ,克隆了该... BtC0 0 5是我国自行分离的对多种害虫具有毒杀作用的苏云金芽孢杆菌 ,经PCR RFLP系统鉴定 ,它含有cry1Ab基因。Southernblot结果显示 :PstI酶切C0 0 5质粒所得的 8 5kb长的DNA片段为cry1Ab基因的阳性杂交带。以pUCP1 9为载体 ,克隆了该片段并证明其含有cry1Ab基因。对其进行亚克隆和测序 ,结果表明该基因编码区为 3 4 6 8bp ,其编码的蛋白含1 1 5 5个氨基酸 ,分子量为 1 3 0 6kD ,等电点为pH4 845。该基因已在GenBank基因库中注册 ,Accessionnumber为AF2 5 4 6 4 0 ,并为国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Ab1 3。将cry1Ab1 3基因在Bt无晶体突变株cryB- 中表达 ,蛋白质电泳结果表明在 1 3 0kD处有表达带 ,并证明CryAb对小菜蛾有较高的杀虫活性。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 crylAb基因 克隆 表达 杀虫活性
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转Bt cry1Ah/cry1Ie双价基因抗虫玉米的研究 被引量：13
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作者 杨召军 郎志宏 +3 位作者 张杰 宋福平 何康来 黄大昉 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期39-45,共7页
构建了含有人工改造的抗虫基因Bt cry1Ah、cry1Ie和耐除草剂基因2mG2-epsps的植物表达载体pMUHUESGM,利用基因枪法将表达盒片段转化玉米愈伤组织,以2mG2-epsps基因为筛选标记基因,经草甘膦异丙胺盐筛选获得24株T0代再生植株,其中PCR检... 构建了含有人工改造的抗虫基因Bt cry1Ah、cry1Ie和耐除草剂基因2mG2-epsps的植物表达载体pMUHUESGM,利用基因枪法将表达盒片段转化玉米愈伤组织,以2mG2-epsps基因为筛选标记基因,经草甘膦异丙胺盐筛选获得24株T0代再生植株,其中PCR检测阳性植株有20株。T0和T1代植株的分子检测结果证明了外源基因已经整合到玉米基因组中并能够稳定遗传和表达,转基因株系在田间生物活性检测中表现出较好的抗虫性,这为培育抗虫玉米新品种提供了参考,同时本研究中采用了基因枪片段转化法,提高了转基因的生物安全性。 展开更多
关键词 BT cry1Ah基因 Btcry1Ie基因 2mG2-epsps基因 转基因玉米
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草坪虫害生物防治的研究进展 被引量：12
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作者 吴桂胜 徐尔尼 +1 位作者 宋福平 胡鸢雷 《草业科学》 CAS CSCD 2007年第6期95-100,共6页
草坪害虫对草坪的建植危害很大,特别是地下害虫的危害可造成草坪的大面积死亡。鉴于化学防治存在很多不足之处,因而生物防治技术被日益提上议事日程。为此概述了草坪主要害虫种类及其危害,以及近年来利用微生物、植物等杀虫剂对草坪害... 草坪害虫对草坪的建植危害很大,特别是地下害虫的危害可造成草坪的大面积死亡。鉴于化学防治存在很多不足之处,因而生物防治技术被日益提上议事日程。为此概述了草坪主要害虫种类及其危害,以及近年来利用微生物、植物等杀虫剂对草坪害虫的防治,重点讨论了草坪抗虫基因工程所取得的研究进展。 展开更多
关键词 草坪 生物防治 抗虫基因工程
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Bt分子生物学研究进展 被引量：8
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作者 胡晓婷 宋福平 +2 位作者 冯书亮 杜立新 宋健 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第B10期6-9,共4页
简要描述了苏云金芽孢杆菌近年来分子生物学研究的进展情况,重点阐述了cry基因鉴定方法。另外分析了目前转基因植物与基因工程菌的研究,并对今后的研究进行了展望。
关键词 苏云金芽孢杆菌 分子生物学
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苏云金芽胞杆菌cry2Ad基因的克隆及其表达产物的活性分析 被引量：11
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作者 张静涛 束长龙 +3 位作者 宋福平 刘楠 张杰 黄大昉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期146-150,155,共6页
苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)SBT2是我国新分离出的一株野生菌株。扫描电镜显示该菌株产生双锥体形晶体。琼脂糖凝胶电泳发现其质粒图谱含有5个条带。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示此菌株产生130kD晶体蛋白。利用PCR-RFLP法进... 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)SBT2是我国新分离出的一株野生菌株。扫描电镜显示该菌株产生双锥体形晶体。琼脂糖凝胶电泳发现其质粒图谱含有5个条带。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示此菌株产生130kD晶体蛋白。利用PCR-RFLP法进行杀虫基因类型鉴定,发现其含有cry1Aa、cry1Da、cry1Hb、cry1Jb、cry1Ka、cry1Ib、基因。Cry2Ad蛋白的活性至今未见研究报道,本研究克隆和测序了该基因。并对其进行了表达。生物活性测定结果表明其表达产物对舞毒蛾(Lymant-ria dispar)、棉铃虫(Helicoverpa armigera)、亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)、小菜蛾(Plutella xylostella)有低活性;对大猿叶甲(Colaphellus bowringi)无活性。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 cry2Ad基因 克隆 表达 生物活性
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