3ds max在动物解剖学中的应用 被引量：12

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作者 李方正 刘春英 +2 位作者 姜忠玲 尹洪仙 宋学雄 《农业网络信息》 2007年第2期26-28,共3页

动物解剖学是形态学科学,用三维模型、动画的方式将动物器官呈现给学生,不仅可以提高学生学习的主动性,更能加深其对动物器官结构的理解,激发学习的兴趣。本文结合在制作多媒体课件中的体会探讨了3ds max在动物解剖学教学中的应用。

关键词 3ds MAX 解剖学 动画制作

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猪DFAT细胞成脂再分化过程中KLF2和PPARγ的表达 被引量：11

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作者 高霞 李方正 +5 位作者 郇延军 刘志敏 李秀 姜忠玲 牛德勋 宋学雄 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期68-74,共7页

旨在探讨猪去分化脂肪细胞(DFAT)再分化过程中Krüppel样因子2(KLF2)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达模式,为揭示猪DFAT细胞再分化机制奠定基础。采集猪成熟脂肪细胞,经"天花板"培养法获得DFAT细胞,用流式... 旨在探讨猪去分化脂肪细胞(DFAT)再分化过程中Krüppel样因子2(KLF2)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达模式,为揭示猪DFAT细胞再分化机制奠定基础。采集猪成熟脂肪细胞,经"天花板"培养法获得DFAT细胞,用流式细胞仪检测表面抗原,形态学和油红O染色提取法检测成脂分化程度,Real-time PCR检测KLF2和PPARγmRNA的表达。结果表明,猪成熟脂肪细胞接种第3天,可见明显的去分化迹象,即细胞形成犄角状突起,大脂滴分解成小脂滴并向细胞外排出脂滴,接种至第9天脂滴基本排出完毕,接种至第12天原代细胞长满底壁;间充质干细胞表面抗原CD29、CD44和CD105的阳性表达率分别达到99.0%、97.8%和99.5%,而造血干细胞表面抗原CD45和CD34的表达仅为3.55%和4.55%;将F3代细胞成脂诱导3d,胞质中出现脂滴,并随诱导时间增加,脂滴数量增多,体积增大,诱导至12d诱导率达80%以上;成脂诱导2、5、10和15d时,KLF2mRNA的相对表达量分别为0.47±0.02、0.35±0.07、0.31±0.09和0.11±0.07,PPARγmRNA的相对表达量分别为1.62±0.01、2.03±0.04、3.22±0.04和3.49±0.06。本研究成功获得高纯度的DFAT细胞,具有间充质干细胞特性和成脂再分化能力;KLF2 mRNA的表达在成脂分化过程中随诱导时间的增加而减少,而PPARγmRNA的表达量随诱导时间的延长逐步增加;表明KLF2在DFAT细胞的成脂再分化过程中可能发挥抑制作用,而PPARγ可能会发挥促进作用。 展开更多

关键词 猪 成熟脂肪细胞 去分化 再分化 KLF2 PPARΓ

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姜黄素对猪骨髓间充质干细胞增殖和成脂分化的影响 被引量：10

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作者 张庆美 李方正 +3 位作者 姜忠玲 孙东兴 李东建 宋学雄 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期793-799,共7页

目的探讨姜黄素(curcumin)对猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成脂分化的影响及机制。方法用含不同浓度姜黄素的细胞培养液和诱导分化液,培养和诱导分化猪BMSCs,用MTT比色法检测对BMSCs增殖的影响,用形态学和油红O染色提取法检测对成脂... 目的探讨姜黄素(curcumin)对猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成脂分化的影响及机制。方法用含不同浓度姜黄素的细胞培养液和诱导分化液,培养和诱导分化猪BMSCs,用MTT比色法检测对BMSCs增殖的影响,用形态学和油红O染色提取法检测对成脂分化的影响,用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测对成脂分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ2)和脂蛋白脂肪酶(LPL)mRNA表达的影响。结果当姜黄素用于猪BMSCs的培养,1μmol/L浓度在培养第3天、第5天和10μmol/L浓度在培养第5天开始能够显著促进细胞增殖(P<0.05),但高于15μmol/L则具有显著的抑制作用(P<0.05);当姜黄素用于猪BMSCs的成脂诱导分化,所用不同浓度的姜黄素都能显著抑制成脂分化(P<0.05),用0.5μmol/L获得28.3%的抑制率,而用20μmol/L获得71.24%的高抑制率;当用20μmol/L姜黄素处理和分别诱导分化5、10和15d,PPARγ2 mRNA表达的抑制率分别达到19.11%、49.52%和76.76%,LPL mRNA表达的抑制率分别达到37.58%、49.32%和74.70%。结论适当浓度姜黄素具有促进猪BMSCs增殖和抑制猪BMSCs向脂肪细胞分化的作用,对脂肪细胞的分化发挥了重要调控作用。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 姜黄素 增殖 成脂分化 实时定量聚合酶链反应 猪

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猪脂肪源间充质干细胞诱导成脂分化及Krüppel样因子2的表达 被引量：6

4

作者 刘京霞 李方正 +2 位作者 朴英姬 姜忠玲 宋学雄 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期616-622,共7页

目的旨在阐明猪脂肪源间充质干细胞(AMSCs)在诱导成脂分化过程中Krüppel样因子2(KLF2)的表达模式。方法采用I型胶原酶消化法处理猪脂肪组织,经原代和传代培养分离、纯化和扩增AMSCs,用流式细胞仪检测AMSCs纯度,在倒置显微镜下用形... 目的旨在阐明猪脂肪源间充质干细胞(AMSCs)在诱导成脂分化过程中Krüppel样因子2(KLF2)的表达模式。方法采用I型胶原酶消化法处理猪脂肪组织,经原代和传代培养分离、纯化和扩增AMSCs,用流式细胞仪检测AMSCs纯度,在倒置显微镜下用形态学和油红O染色法检测AMSCs的成脂分化,用实时定量PCR检测KLF2的表达模式,并与过氧化物酶体增殖物激活受体2(PPARγ2)的表达进行了比较。结果分离、纯化的AMSCs,其间充质干细胞表面抗原CD29、CD44和CD105表达量分别为91.7%、95.1%和95.6%,而造血干细胞表面抗原CD34表达量仅为3.39%;在诱导分化2d后,个别细胞质中出现小脂滴,且含脂滴的细胞数量和脂滴量随诱导时间的延长而增加,在诱导分化第18天成脂分化率达48.2%;在诱导分化第2天、第8天和第16天,KLF2的表达量分别为1.84±0.206、1.07±0.072和0.83±0.095,而PPARγ2 mRNA的表达量分别为3.06±0.542、13.22±0.5736和15.11±1.073。结论获得纯度较高的AMSCs,具有良好的成脂分化潜能,KLF2的表达量在成脂分化早期的前脂肪细胞阶段增加,成脂分化开始后逐步减少,KLF2作为脂肪分化负调控转录因子而发挥作用。 展开更多

关键词 脂肪间充质干细胞 表面鉴定 诱导 分化 Krüppel样因子2 实时定量PCR 猪

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姜黄素对猪脂肪间充质干细胞成脂分化及Krüppel样因子2表达的影响 被引量：6

5

作者 刘京霞 李方正 +2 位作者 郇延军 姜忠玲 宋学雄 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期675-681,共7页

目的探讨姜黄素对猪脂肪间充质干细胞(AMSCs)成脂分化的影响,及姜黄素调控成脂分化的机制。方法用不同浓度姜黄素处理猪AMSCs,用MTT比色法检测姜黄素对猪AMSCs增殖的影响,用油红O染色提取法检测对成脂分化的程度,用实时定量聚合酶链反应... 目的探讨姜黄素对猪脂肪间充质干细胞(AMSCs)成脂分化的影响,及姜黄素调控成脂分化的机制。方法用不同浓度姜黄素处理猪AMSCs,用MTT比色法检测姜黄素对猪AMSCs增殖的影响,用油红O染色提取法检测对成脂分化的程度,用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测对Krüppel样因子(KLF2)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)2 mRNA表达的影响。结果当姜黄素浓度为1、5、10μmol/L用于猪AMSCs时对,AMSCs增殖无明显影响,但高于15μmol/L时,则具有显著的抑制作用(P<0.05);当姜黄素用于猪AMSCs的成脂诱导分化时,1~30μmol/L的浓度即能显著抑制成脂分化(P<0.05),其中25μmol/L浓度获得68.19%的高抑制率;当25μmol/L姜黄素用于检测KLF2和PPARγ2 mRNA的表达,诱导分化2、8和16d的KLF2 mRNA的表达上调率分别达到48.37%、20.56%和9.64%,而PPARγ2 mRNA的表达下调率分别达到16.01%、35.93%和27.27%。结论姜黄素具有抑制猪AMSCs增殖和成脂分化作用,该抑制作用与姜黄素促进KLF2 mRNA的表达和抑制PPARγ2 mRNA的表达相关。 展开更多

关键词 姜黄素 Krüppel样因子2 脂肪间充质干细胞 成脂分化 实时定量聚合酶链反应 猪

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猪卵巢卵母细胞体外成熟及体外受精过程中皮质颗粒变化的研究 被引量：4

6

作者 杨信志 宋学雄 +2 位作者 岳奎忠 谭景和 杨庆章 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2000年第4期355-358,I013,共4页

目的　研究猪皮质颗粒在体外成熟及体外受精过程中的变化 ,以及皮质颗粒与多精受精的关系。　方法　用异硫氰荧光素联接的花生四烯酸 (FITC- PNA)标记体外成熟不同时间及体外受精不同时间皮质颗粒。　结果　皮质颗粒在猪卵母细胞体外成... 目的　研究猪皮质颗粒在体外成熟及体外受精过程中的变化 ,以及皮质颗粒与多精受精的关系。　方法　用异硫氰荧光素联接的花生四烯酸 (FITC- PNA)标记体外成熟不同时间及体外受精不同时间皮质颗粒。　结果　皮质颗粒在猪卵母细胞体外成熟过程中逐渐由皮质部向卵质膜下迁移 ,并在质膜下排布成单层。体外成熟过程中所排出的第 1极体也被 FITC- PNA所标记 ,说明第 1极体中含有皮质颗粒。在对不同体外成熟时间的卵母细胞进行授精时发现 ,皮质颗粒的释放速度与体外成熟时间呈正比例关系。为进一步证实皮质颗粒的排放速度与多精受精之间的关系 ,还进行了精子穿透实验。结果显示 ,体外成熟 48h的卵母细胞其多精受精率为 73% ,比体外成熟36 h(83% )、2 4h(80 % )的卵母细胞要低。并且进入卵子的精子数目 (1.7)比后两者 (分别为 3.1和 2 .9)的少。 展开更多

关键词 体外成熟 体外受精 皮质颗粒 猪 卵巢母细胞

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过表达Fad24对猪DFAT细胞在Dex成脂诱导条件下对胞内受体及辅助分子表达的影响

7

作者 徐琨 袁婷婷 +1 位作者 何西建 宋学雄 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期164-169,共6页

旨在探讨过表达Fad24对猪去分化脂肪细胞(DFAT)在成脂诱导条件下对胞内地塞米松(Dex)受体GR及其高亲和性辅助分子Hsp90和FKBPs表达的影响。用过表达载体pcDNA-Fad24和空载体pcDNA瞬时转染猪DFAT细胞,并在高浓度Dex(1μmol/L)成脂诱导液... 旨在探讨过表达Fad24对猪去分化脂肪细胞(DFAT)在成脂诱导条件下对胞内地塞米松(Dex)受体GR及其高亲和性辅助分子Hsp90和FKBPs表达的影响。用过表达载体pcDNA-Fad24和空载体pcDNA瞬时转染猪DFAT细胞,并在高浓度Dex(1μmol/L)成脂诱导液中诱导成脂分化,然后根据形态学观察检测诱导分化情况,用Real-time PCR和Western blot技术检测对GR及Hsp90和FKBPs表达的影响。结果显示,pcDNA空载体组在诱导5 d时可诱导出成脂细胞,而pcDNA-Fad24过表达组完全抑制成脂分化,细胞积聚形成多个小结节,诱导7 d后形成典型的成骨样结节,茜素红染色证实结节表面有矿化物质沉积。Real-time PCR检测证实,过表达组GRαmRNA的表达量在成脂诱导48 h显著上调(P<0.01),而GRβmRNA的表达量在成脂诱导12 h显著上调(P<0.01);GR的高亲和性辅助分子Hsp90 mRNA的表达量在成脂诱导48 h显著上调(P<0.01);FKBP 51 mRNA的表达量在成脂诱导24 h显著上调(P<0.01),而FKBP 52 mRNA的表达量在成脂诱导48 h显著上调(P<0.01)。Western blot检测证实,上述各因子的蛋白质表达谱与mRNA表达谱基本一致。过表达Fad24对猪DFAT细胞由成脂分化向成骨分化转化作用,与成脂诱导48 h时调控GRα及其Hsp90和FKBP 52表达的上调,以及GRβ和FKBP 51表达下调相关。 展开更多

关键词 Fad24 猪DFAT细胞 成脂诱导 GR受体 高亲和性辅助分子

原文传递

猪骨髓间充质干细胞分离培养及生物学特性 被引量：5

8

作者 高健 梁桂金 +3 位作者 朴英姬 李方正 张文平 宋学雄 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期788-794,共7页

采集健康猪股骨骨髓,利用percoll梯度离心法分离单个核细胞,进行体外原代和传代培养,并用不同代数细胞进行了细胞生长能力、膜表面抗原(CD105、CD90、CD45)及诱导分化能力的检测。结果显示分离培养的单个核细胞贴壁生长,形态呈成纤维细... 采集健康猪股骨骨髓,利用percoll梯度离心法分离单个核细胞,进行体外原代和传代培养,并用不同代数细胞进行了细胞生长能力、膜表面抗原(CD105、CD90、CD45)及诱导分化能力的检测。结果显示分离培养的单个核细胞贴壁生长,形态呈成纤维细胞样及涡旋状克隆团;细胞传代至第17代生长状况仍然良好;用F 3代细胞进行膜表面抗原标记显示,CD90和CD105阳性表达率分别为(97.4±1.8)%和(99.6±0.9)%,而CD45阳性表达率仅为(1.8±0.55)%,证实这些细胞具有猪骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem Cells,MSCs)表面抗原;经地塞米松、维生素C和β-磷酸甘油等诱导F 3代细胞,21d后出现钙物质沉积细胞群,用茜素红和Von kossa染色呈阳性,证实这些细胞已分化形成成骨细胞;经地塞米松、IBMX、胰岛素及吲哚美辛等诱导F 3代细胞,21d后细胞质出现脂滴样结构,用油红O染色呈阳性,证实已分化形成成脂细胞;冷冻-解冻细胞的膜表面抗原及多能分化能力与未冻存细胞的检测结果基本一致。结果证实,从猪骨髓中分离培养及经传代扩增获得的贴壁细胞是纯化的MSCs。 展开更多

关键词 猪 骨髓间充质干细胞 膜表面抗原 诱导分化

原文传递

猪骨髓间充质干细胞分离培养和诱导分化脂肪细胞 被引量：5

9

作者 张庆美 李方正 +3 位作者 蒋忠玲 孙东兴 李东建 宋学雄 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期91-96,共6页

采用全骨髓培养法分离猪骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)并传代培养;取第4代纯化的MSCs在成脂诱导培养基中诱导分化;分化的成脂细胞用形态学和油红O染色法进行鉴定;用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测成脂分化标志基... 采用全骨髓培养法分离猪骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)并传代培养;取第4代纯化的MSCs在成脂诱导培养基中诱导分化;分化的成脂细胞用形态学和油红O染色法进行鉴定;用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测成脂分化标志基因PPARγ2和LPL mRNA的表达情况。结果显示,分离培养的猪MSCs细胞经连续传代形态上无明显改变;MSCs在成脂分化培养液中诱导分化2d开始有少量脂滴出现,油红O染色成阳性,诱导18d成脂转化率可达59.8%;在诱导分化第5、10、15天时,PPARγ2mRNA相对表达量分别是(5.065±0.159)、(6.268±0.340)、(9.277±0.261),LPL mRNA的相对表达量分别是(10.995±1.473)、(13.130±0.712)、(15.762±0.934)。结果表明,用本诱导条件诱导猪MSCs向脂肪细胞分化,经形态学和油红O染色鉴定,成脂细胞分化率可达60%,且随分化时间的延长,脂肪细胞标志基因表达增加。 展开更多

关键词 猪 骨髓间充质干细胞 诱导分化 脂肪细胞

原文传递

奶(黄)牛卵母细胞体外受精及体外发育的研究 被引量：4

10

作者 杨庆章 谭景和 +3 位作者 夏平 干日成 宋学雄 秦鹏春 《生物技术》 CAS CSCD 1991年第3期4-10,共7页

自屠宰场获得150头淘汰黑白花奶牛和19头黄牛的卵巢,取得优、良级卵母细胞2060枚,采用两种培养液(A.B.)和三种不同试剂(Aa、Ba、Bb),对解冻牛精子获能(capacitation)。在38.5℃和相对湿度为100％的5％CO_2箱中进行成熟、受精、发育培养... 自屠宰场获得150头淘汰黑白花奶牛和19头黄牛的卵巢,取得优、良级卵母细胞2060枚,采用两种培养液(A.B.)和三种不同试剂(Aa、Ba、Bb),对解冻牛精子获能(capacitation)。在38.5℃和相对湿度为100％的5％CO_2箱中进行成熟、受精、发育培养至196小时,其结果表明A液所获得的效果优于B液,但差异不显著;Aa试剂获能优于Bb,差异显著。共获得桑椹胚和囊胚58枚、非手术移植10头牛16次,三头妊娠,其中二头受体在妊娠二月半月后返情,外阴流血,确认为胚胎早期死亡,一头受体妊娠产犊,于1990年4月10日产公犊1头,体长87公分、身高78公分、体重29公斤、妊娠284天,正常分娩。(移植天为0天)。 展开更多

关键词 奶牛 体外受精 体外发育

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P450芳香化酶活性调控对小鼠睾丸和附睾发育及精子发生的影响 被引量：5

11

作者 楚宁宁 薛青光 +2 位作者 孙旺吾 曹俊新 宋学雄 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第29期14204-14206,共3页

[目的]探索P450芳香化酶抑制剂——来曲唑调控内源性雌激素合成,对小鼠睾丸和附睾发育及精子发生产生的影响。[方法]将SPF级昆明系雄性小鼠随机分为对照组和试验组,试验组分为0.001、0.002、0.004、0.006、0.008、0.010 mg/kg来曲唑剂量... [目的]探索P450芳香化酶抑制剂——来曲唑调控内源性雌激素合成,对小鼠睾丸和附睾发育及精子发生产生的影响。[方法]将SPF级昆明系雄性小鼠随机分为对照组和试验组,试验组分为0.001、0.002、0.004、0.006、0.008、0.010 mg/kg来曲唑剂量组,连续灌服3 d,在停药后的第9、15和30天检测小鼠睾丸和附睾的发育及精子的发生情况。[结果]①各试验组与对照组比较,体重增长率无显著差异;②0.010 mg/kg来曲唑组与对照组比较,在灌服后的第15天睾丸系数显著减少(P<0.05),其他各试验组与对照组比较无显著差异;③各试验组与对照组比较,附睾系数无显著差异;④在第15和30天,0.006～0.010 mg/kg来曲唑组与对照组比较,精子密度显著减少(P<0.05),其他各组与对照组无显著差异。[结论]该研究使用的来曲唑浓度,对小鼠体重增长率及睾丸和附睾的发育率无显著影响或影响很小,但是超过0.006 mg/kg浓度时抑制精子的发生,说明一定程度抑制P450芳香化酶的活性,降低内源性雌激素合成,能够直接影响精子的发生能力。 展开更多

关键词 小鼠 睾丸 附睾 精子发生 P450芳香化酶 来曲唑

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昆明小鼠胚胎成纤维细胞体外培养条件初步研究 被引量：4

12

作者 曹俊新 宋学雄 +1 位作者 孙旺吾 唐元凤 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第10期39-44,共6页

本研究旨在探索影响小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)分离培养的因素,建立有效的胚胎成纤维细胞培养体系,为构建饲养层细胞与体细胞核移植技术的细胞核供体建立平台。本研究用组织细胞培养液DMEM作为基础培养液,观... 本研究旨在探索影响小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)分离培养的因素,建立有效的胚胎成纤维细胞培养体系,为构建饲养层细胞与体细胞核移植技术的细胞核供体建立平台。本研究用组织细胞培养液DMEM作为基础培养液,观察了不同胎龄、不同血清浓度及不同胰蛋白酶作用时间等因素对MEF分离培养的影响。结果显示,在所进行的4个胎龄8.5、10.5、12.5、14.5d的比较试验中,原代成纤维细胞分离培养的最适胎龄为12.5d,细胞贴壁迅速,12h已完全贴壁,增殖速度快;在所进行的不同时间5、10、15、30min的胰蛋白酶消化中,最佳时间为5～10min;在所进行的5个血清浓度7%、9%、10%、11%、13%的比较试验中,添加11%胎牛血清浓度培养效果最佳,从3～5代增殖倍数稳定在1.35左右,传代时间也相对较长。以上结果表明,采用12.5d胎鼠,胰蛋白酶消化5～10min,在含有11%血清的DMEM培养液中培养MEF细胞时,原代和传代效果最好,传代至第3～5代时细胞生长增殖最旺盛,处于对数分裂期,适宜作为饲养层细胞与体细胞核移植细胞核供体。 展开更多

关键词 小鼠 胚胎成纤维细胞 分离培养

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产后奶牛子宫内膜的扫描电镜观察 被引量：3

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作者 田文儒 何剑斌 +3 位作者 丛霞 曹荣峰 姜忠玲 宋学雄 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期183-186,共4页

应用扫描电镜观察了 5头奶牛产后不同时期子宫内膜的变化。结果发现 ,分娩后早期 ,奶牛子宫内膜部分破损 ,与破损部位相邻的细胞在产后 1周内相继脱落 ;未破损内膜上皮细胞表面的纤毛和微绒毛形状不整、数量减少。产后2周 ,基底细胞开... 应用扫描电镜观察了 5头奶牛产后不同时期子宫内膜的变化。结果发现 ,分娩后早期 ,奶牛子宫内膜部分破损 ,与破损部位相邻的细胞在产后 1周内相继脱落 ;未破损内膜上皮细胞表面的纤毛和微绒毛形状不整、数量减少。产后2周 ,基底细胞开始生长 ,至产后 4 5 d时生长完成 ;产后 4周 ,内膜破损区域缩小 ,上皮细胞表面纤毛和微绒毛形状规则、数量增加 ;产后 4 5 d,偶见上皮细胞缺失 ;至产后 6 0 d,子宫内膜上皮细胞完整、排列有序、被覆纤毛和微绒毛。上述结果表明 ,奶牛子宫内膜在分娩后 6 0 d内完成修复。 展开更多

关键词 产后奶牛 子宫内膜 扫描电镜 微绒毛

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过表达Fad24使猪DFAT细胞在成脂诱导条件下转向成骨分化

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作者 袁婷婷 徐海翔 +2 位作者 徐琨 何西建 宋学雄 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2576-2582,共7页

旨在探索过表达Fad24基因对猪DFAT细胞诱导成脂分化的影响。根据猪Fad24基因序列设计引物,克隆猪Fad24基因的全长CDS区片段,构建猪Fad24过表达载体,通过测序比对碱基和氨基酸序列,通过脂质体瞬时转染技术,将过表达Fad24载体转染猪DFAT细... 旨在探索过表达Fad24基因对猪DFAT细胞诱导成脂分化的影响。根据猪Fad24基因序列设计引物,克隆猪Fad24基因的全长CDS区片段,构建猪Fad24过表达载体,通过测序比对碱基和氨基酸序列,通过脂质体瞬时转染技术,将过表达Fad24载体转染猪DFAT细胞,从mRNA水平验证了Fad24基因在猪DFAT细胞中的过表达水平,然后将过表达Fad24的猪DFAT细胞在体外诱导成脂分化,从形态学、Fad24、成脂和成骨分化核心转录因子表达水平上进行了检测。结果表明,猪Fad24过表达载体碱基序列一致性高达99.8%,氨基酸序列一致性高达100%;过表达Fad24的猪DFAT细胞Fad24的表达量高出正常猪DFAT细胞表达量约45倍;成脂分化诱导5 d时,与对照组的正常分化比较,过表达Fad24的猪DFAT细胞成脂分化完全被抑制,相反强力转向成骨分化,细胞积聚成许多小结节,诱导7 d时已形成典型的成骨样大结节,表面可见细胞分泌物;经茜素红染色鉴定,证实细胞分泌物中含有矿化物质沉淀;经Real-time PCR检测,证实过表达Fad24试验组显著下调成脂分化核心转录因子PPARγ2、SREBP-1c(P<0.05)和显著上调成骨分化核心转录因子Runx2的表达(P<0.01)。结果提示,过表达Fad24通过调控成脂和成骨核心转录因子,完全抑制猪DFAT细胞成脂分化,并强力促进向成骨分化转化。 展开更多

关键词 过表达Fad24 DFAT细胞 成脂 成骨 分化 猪

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一个重要的精子受体—猪透明带糖蛋白β-D-半乳糖残基 被引量：2

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作者 宋学雄 曹国强 +2 位作者 张进玉 张圆 于晓云 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1780-1785,共6页

【目的】证明末端半乳糖残基在猪透明带糖蛋白中的分布以及它在精子结合和侵入中的作用。【方法】体外成熟的猪卵母细胞去除周围卵丘细胞,用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)络合西非单叶豆凝集素(Bandeiraea simplicif... 【目的】证明末端半乳糖残基在猪透明带糖蛋白中的分布以及它在精子结合和侵入中的作用。【方法】体外成熟的猪卵母细胞去除周围卵丘细胞,用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)络合西非单叶豆凝集素(Bandeiraea simplicifolia lectin-I,BS-I)或蓖麻凝集素(Ricinus communis agglutinin,RCA-I)处理30min,分别观察末端α-D-半乳糖残基或β-D-半乳糖残基在透明带中的定位分布。荧光显微镜观察显示,BS-I和RCA-I都标记于整个透明带上且比较集中于透明带的外层,其中BS-I显示微弱荧光反应,而RCA-I呈强荧光反应且在透明带的外层反应尤为强烈。植物凝集素处理的卵母细胞用于体外受精,分别在受精2h或12h观察精-卵结合和精子入卵情况。【结果】RCA-I处理组卵母细胞平均精子结合数显著低于对照组(18vs95),而精子入卵则完全被阻断;可是BS-I处理组的卵母细胞的精子结合数少量被抑制(59vs95),而且精子入卵率与对照组无显著差异。【结论】猪透明带末端β-D-半乳糖残基作为精子受体的重要组成成分,参与精-卵结合和受精。 展开更多

关键词 精子受体 猪透明带 糖蛋白 β-D-半乳糖残基 植物凝集素

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Krüppel样因子4在猪脂肪间充质干细胞成脂分化过程中的表达模式 被引量：2

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作者 李秀 李方正 +3 位作者 郇延军 高霞 姜忠玲 宋学雄 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期416-420,共5页

目的探讨猪脂肪间充质干细胞(AMSCs)成脂分化过程中Krüppel样因子4(KLF4)的表达模式。方法采用F3代以上猪AMSCs进行成脂诱导分化,用油红O染色提取法检测成脂分化程度,用RT-PCR和Realtime PCR检测KLF4的表达模式。结果猪AMSCs成脂... 目的探讨猪脂肪间充质干细胞(AMSCs)成脂分化过程中Krüppel样因子4(KLF4)的表达模式。方法采用F3代以上猪AMSCs进行成脂诱导分化,用油红O染色提取法检测成脂分化程度,用RT-PCR和Realtime PCR检测KLF4的表达模式。结果猪AMSCs成脂诱导分化,诱导3 d开始出现脂肪滴,诱导10 d时成脂分化率达60%;RT-PCR检测,在诱导分化2、4、8、12和16 d时都能检测出KLF4的表达;经Real-time PCR检测,上述各诱导分化时间点的表达量分别为对照组的1.6657±0.2269、2.6790±0.0524、2.6293±0.0280、2.3633±0.1568和2.6146±0.1575倍。这些结果表明,KLF4的表达在猪AMSCs成脂诱导分化的第2天就有显著上调,表达高峰出现在成脂分化的第4天,此后持续高表达。结论在猪AMSCs成脂分化过程中,从早期到晚期,KLF4发挥持续性的调控作用。 展开更多

关键词 脂肪间充质干细胞 成脂分化 Krüppel样因子4 实时定量聚合酶链反应 猪

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shRNA在抗猪瘟病毒中稳定遗传表达的研究进展 被引量：1

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作者 许小琴 宋学雄 黄天华 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2013年第3期239-243,共5页

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种能特异性地介导同源基因沉默的现象,随着对其机制的深入了解,它在病毒性疾病的治疗和预防上发挥出日益重要的作用。本文介绍了RNAi的作用机制,干扰RNA载体短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)及其... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种能特异性地介导同源基因沉默的现象,随着对其机制的深入了解,它在病毒性疾病的治疗和预防上发挥出日益重要的作用。本文介绍了RNAi的作用机制,干扰RNA载体短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)及其与转基因技术结合防治猪瘟病毒的作用,并从供体细胞类型的选择、干扰RNA的设计、位置效应及RNAi脱靶效应4个方面对影响RNAi持续干扰猪瘟病毒复制的因素进行了综述。 展开更多

关键词 RNA干扰 猪瘟病毒 转基因 位置效应 短发夹RNA

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不同发育时期兔胎儿肝脏发育形态学观察 被引量：1

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作者 王奇惠 吴丹丹 +1 位作者 宋学雄 曲伟杰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期245-248,302,共5页

家兔既是重要的试验动物，也是重要的经济动物。随着家兔育种工作的进行和饲养管理科学水平的提高，对兔的生理解剖、细胞结构、基因组合、生活习性、消化特点、新陈代谢、生态环境、繁殖规律、生长发育、饲养管理等方面开展了卓有成效... 家兔既是重要的试验动物，也是重要的经济动物。随着家兔育种工作的进行和饲养管理科学水平的提高，对兔的生理解剖、细胞结构、基因组合、生活习性、消化特点、新陈代谢、生态环境、繁殖规律、生长发育、饲养管理等方面开展了卓有成效的系统研究。 展开更多

关键词 形态学观察 家兔 肝脏发育 发育时期 胎儿 饲养管理 试验动物 经济动物

原文传递

金黄地鼠超排后未排卵泡卵母细胞的成熟度和受精能力的观察 被引量：1

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作者 周婧 唐元凤 +2 位作者 曲洪磊 何宇乾 宋学雄 《青岛农业大学学报（自然科学版）》 2011年第2期88-92,共5页

为了证实金黄地鼠超排后卵巢中未排卵卵泡卵母细胞的成熟程度和受精能力,用促性腺激素PMSG和HCG进行4次超排处理,其中选择12只超排效率低下的金黄地鼠,回收输卵管和卵巢卵母细胞,观察卵母细胞的成熟程度、体外培养成熟能力及体外受精能... 为了证实金黄地鼠超排后卵巢中未排卵卵泡卵母细胞的成熟程度和受精能力,用促性腺激素PMSG和HCG进行4次超排处理,其中选择12只超排效率低下的金黄地鼠,回收输卵管和卵巢卵母细胞,观察卵母细胞的成熟程度、体外培养成熟能力及体外受精能力。结果显示,输卵管中回收超排卵数平均为22.6±7.8枚/只,从超排后卵巢中回收卵丘扩展卵数平均为23.2±3.9枚/只,卵丘未扩展卵数平均为13.4±3.7枚/只。卵丘扩展卵经0.1%透明质酸酶消化,裸卵占86.1%,带放射冠卵占11.5±2.4%。裸卵中排出极体的成熟卵占卵丘扩展卵的80.4±2.3%,无极体裸卵占5.7±0.8%。经体外培养2h,无极体裸卵的成熟率达100%,带放射冠卵的成熟率仅为6.3±9.4%,而卵丘未扩展卵未见有成熟卵。人精子穿透试验显示,卵巢回收成熟卵的受精率44.1±6.0%,同超排卵的受精率45.4±4.7%比较,无显著差异(P<0.05)。从低超排率的金黄地鼠卵巢中可获取与超排卵数相近的成熟卵母细胞,且具有可利用于去透明带金黄地鼠卵子穿透实验(HOP)及相关发育生物学研究的潜能。 展开更多

关键词 金黄地鼠 超数排卵 卵巢 卵母细胞 HOP

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兔胎儿后肾发育的组织学观察 被引量：1

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作者 李田田 周婧 +1 位作者 刘京霞 宋学雄 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第5期18-20,I0002,共4页

为阐明兔胎儿肾脏发育的组织学特征,采集四组比利时兔胎儿（平均体长1.9、2.75、4.7 cm和10.35 cm）肾脏,经石蜡切片,显微镜观察肾脏发育变化。结果显示：胎儿体长1.9 cm组肾脏呈果蝇卵型,在肾脏中央可见积聚的5个初级肾小体,远端小管... 为阐明兔胎儿肾脏发育的组织学特征,采集四组比利时兔胎儿（平均体长1.9、2.75、4.7 cm和10.35 cm）肾脏,经石蜡切片,显微镜观察肾脏发育变化。结果显示：胎儿体长1.9 cm组肾脏呈果蝇卵型,在肾脏中央可见积聚的5个初级肾小体,远端小管位于其背后方,近端小管位于肾周边;胎儿体长2.75 cm组皮髓质已分化,皮质深层含第1代肾小体,皮质浅层含有分支的输尿管芽及不同发育阶段的肾小体;胎儿体长4.7 cm组皮质增厚,含第1-3代肾小体,浅层皮质类似2.75 cm组;胎儿体长10.35 cm组皮质进一步增厚,含1-7代肾小体,皮质浅层已无输尿管芽及不同发育阶段的肾小体,肾椎体和髓放线明显,肾乳头细长。这些结果表明,兔胎儿肾单位的发育是经输尿管芽的分支,从后肾中央起始向外推移,在皮质浅层大量形成肾单位,到临近出生时肾单位生成停止。 展开更多

关键词 兔 胎儿 肾脏 发育 组织学

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