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灵芝转录因子AreA的生物学功能 被引量：8
1
作者 朱静 宋书琪 +2 位作者 岳思宁 连玲丹 赵明文 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期57-65,共9页
AreA作为丝状真菌氮代谢中的关键转录因子,在真菌响应外界氮源、生长发育、次级代谢及抗逆过程中发挥了重要作用。本研究通过生物信息学比对分析,获得了灵芝AreA的全长序列,研究了AreA对菌丝生长、抵御细胞壁胁迫以及次级代谢的影响,Are... AreA作为丝状真菌氮代谢中的关键转录因子,在真菌响应外界氮源、生长发育、次级代谢及抗逆过程中发挥了重要作用。本研究通过生物信息学比对分析,获得了灵芝AreA的全长序列,研究了AreA对菌丝生长、抵御细胞壁胁迫以及次级代谢的影响,AreA编码蛋白的C末端含有保守的GATA型锌指结构域,与其他担子菌中AreA的亲缘关系较近。通过qRT-PCR分析发现,外界氮源浓度的变化能够影响AreA的转录水平。在低氮源浓度条件下,AreA的转录水平显著高于氮源丰富的条件。利用前期构建的AreA沉默转化子研究发现,沉默AreA后菌株生长速率显著低于野生菌株,约下降70%;且AreA沉默菌株菌丝比野生菌株蓬松。细胞壁的组成成分检测发现,AreA沉默菌株的葡聚糖和几丁质含量比野生菌株(WT)和转入空载沉默质粒的菌株(CK)分别下降约65%和40%–60%。随后检测了对细胞壁胁迫的耐受性,结果发现AreA沉默转化子对刚果红和SDS极为敏感,几乎不能生长。在AreA沉默菌株中,灵芝三萜的含量相比于对照菌株下降了约23%。研究结果表明灵芝AreA能够响应环境中的氮源浓度,并且在灵芝的生长发育、次级代谢以及抵御细胞壁胁迫中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 转录因子AreA 氮源 生长 细胞壁胁迫 次级代谢
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谷氨酸合酶在灵芝中生物学功能的研究 被引量：6
2
作者 朱静 岳思宁 +3 位作者 陈琛 宋书琪 连玲丹 赵明文 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1073-1079,共7页
[目的]通过对谷氨酸合酶(glutamate synthase,GOGAT)的基因序列进行预测和分析,构建谷氨酸合酶基因的沉默转化子,验证谷氨酸合酶在灵芝吸收、利用氮源、生长及次级代谢中的作用。[方法]利用真菌中已报道的谷氨酸合酶基因,在灵芝基因组... [目的]通过对谷氨酸合酶(glutamate synthase,GOGAT)的基因序列进行预测和分析,构建谷氨酸合酶基因的沉默转化子,验证谷氨酸合酶在灵芝吸收、利用氮源、生长及次级代谢中的作用。[方法]利用真菌中已报道的谷氨酸合酶基因,在灵芝基因组库中分析比对得到灵芝中可能的谷氨酸合酶基因。通过构建进化树和结构域分析及酶活性测定,确定灵芝谷氨酸合酶序列。随后利用RNA干扰技术,将灵芝的GOGAT基因进行沉默,研究GOGAT对灵芝生长及次级代谢的影响。[结果]获得灵芝谷氨酸合酶序列,该酶具有保守的谷氨酸合酶结构域,并且在进化上高度保守。在4种氮源(谷氨酰胺、铵盐、脯氨酸和硝酸盐)条件下检测谷氨酸合酶活性和基因转录水平,野生菌株中的GOGAT比酶活和转录水平在不同氮源条件下没有显著变化。通过RNA干扰方法,获得沉默效率分别为(77.0±1.9)%和(77.5±2.0)%的GOGAT沉默菌株2株。平板试验表明,将GOGAT沉默后,灵芝菌丝的生长受到一定程度的抑制。在硝酸盐培养条件下,相比于野生菌株,GOGAT沉默菌株基本停止生长;而在脯氨酸存在条件下,2株沉默菌株的生长直径分别降低(16.0±1.9)%和(21.0±1.3)%。进一步检测灵芝三萜含量发现,当使用铵盐或脯氨酸作为唯一氮源培养时,相比于对照菌株,GOGAT沉默菌株中的灵芝三萜含量分别降低(32.1±4.5)%和(11.0±1.1)%;而以谷氨酰胺和硝酸盐培养时,各菌株中的灵芝三萜含量没有显著变化。[结论]本研究获得了灵芝中合成谷氨酸的重要酶基因GOGAT,发现其对灵芝的生长及次级代谢十分重要。 展开更多
关键词 灵芝 谷氨酸合酶 基因沉默 氮源 菌丝生长 灵芝三萜合成
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历史性小城镇城市传统风貌认知——河南省博爱县清化老城风貌现状调研
3
作者 蔡朋 宋书琪 《科技视界》 2015年第23期279-279,315,共2页
城市,既是地域文化的象征,又是文化过程的产物,无论大小。通过河南省博爱县清化老城的区域特征及城市传统风貌的整体格局、建筑风格、空间尺度等现状特点的调查,并分析其所包含的地域文化价值。旨在引导当地人对其城市传统风貌的认知,... 城市,既是地域文化的象征,又是文化过程的产物,无论大小。通过河南省博爱县清化老城的区域特征及城市传统风貌的整体格局、建筑风格、空间尺度等现状特点的调查,并分析其所包含的地域文化价值。旨在引导当地人对其城市传统风貌的认知,进而能对保护和传承城市的传统文化起到一定作用。 展开更多
关键词 清化老城 传统风貌 现状 博爱县
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