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牛支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:11
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作者 李建 高航飞 +7 位作者 安维 牛同州 赵永春 遇培之 满都拉图 乌力吉那仁 王建国 申之义 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1059-1064,共6页
本研究旨在建立一种快速检测牛支原体(Mycoplasma bovis)的实时荧光定量PCR检测方法。根据GenBank中收录的牛支原体OPPD/F基因序列(登录号:AF130119),利用Primer 5.0软件设计特异性引物与TaqMan探针,以重组质粒作为绝对定量模板,构建检... 本研究旨在建立一种快速检测牛支原体(Mycoplasma bovis)的实时荧光定量PCR检测方法。根据GenBank中收录的牛支原体OPPD/F基因序列(登录号:AF130119),利用Primer 5.0软件设计特异性引物与TaqMan探针,以重组质粒作为绝对定量模板,构建检测牛支原体的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果显示该检测方法线性关系良好,标准曲线的相关系数R2=0.994,扩增效率E=1.280。荧光定量PCR法检测的敏感性是常规PCR的10倍;特异性良好,检测9种相关细菌和病毒均为阴性;重复性好,组内及组间样本检测Ct值均小于2%。牛支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法较之于常规PCR方法有快速、特异性强、敏感性高、稳定性好的优点。 展开更多
关键词 牛支原体 0PPD/F基因 荧光定量PCR
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羊口疮病毒内蒙株的生物学特性 被引量:9
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作者 涂明亮 安维 +3 位作者 张志丹 李娜 庞方圆 张七斤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1349-1353,共5页
为增强羊口疮病毒(ORFV)的基础理论研究及羊口疮的防控等工作,本研究通过将毒株接种羊睾丸细胞进行增殖培养、病毒粒子的形态学观察、超薄切片观察、动物回归、B2L和VIR基因序列的测定与分析等试验,对待检毒株(内蒙古分离株ORFV/n... 为增强羊口疮病毒(ORFV)的基础理论研究及羊口疮的防控等工作,本研究通过将毒株接种羊睾丸细胞进行增殖培养、病毒粒子的形态学观察、超薄切片观察、动物回归、B2L和VIR基因序列的测定与分析等试验,对待检毒株(内蒙古分离株ORFV/nm-w)进行了病毒学和分子生物学的特性研究。结果表明,本分离株能够引起羊睾丸细胞产生明显病变,病变开始出现和出现80%CPE的时间分别为接种后24和72h,病毒滴度TCID 50为10-6。5。病毒粒子为椭圆形,在细胞质内增殖,接种毒株的羊只出现典型的CE症状。扩增后的产物经序列分析表明,ORFV/nm-w分离株的B2L基因和VIR基因与GenBank已发布毒株的该序列之间核苷酸同源性分别为96.7%~98.8%,96.2~99.3%,且该分离株与中国陕西株和新疆株同源关系最近。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 ORFV/nm-W分离株 动物回归试验 生物学特征
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羊痘病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:6
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作者 安维 庞方圆 +4 位作者 王艳杰 李旭东 苏日娜 李浩 张七斤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期572-578,共7页
山羊痘和绵羊痘是由羊痘病毒引起的一种急性、热性、接触性传染病。为了更快、更准确的诊断该病,本研究根据Gen Bank已经发表的GTPV和SPPV参考毒株(登录号分别为AY077836和AY077832)A29L基因序列,设计合成了1对特异性引物和2条Taq Man探... 山羊痘和绵羊痘是由羊痘病毒引起的一种急性、热性、接触性传染病。为了更快、更准确的诊断该病,本研究根据Gen Bank已经发表的GTPV和SPPV参考毒株(登录号分别为AY077836和AY077832)A29L基因序列,设计合成了1对特异性引物和2条Taq Man探针,同时制备重组质粒标准品。经过反应条件的优化,建立了羊痘病毒实时荧光定量PCR检测方法,对所建立的实时荧光定量PCR方法反应体系的特异性、灵敏性和重复性进行了评价,并用此方法对19份临床样品进行了检测。结果显示:该诊断方法与4种非羊痘病毒不发生交叉反应,并且山羊痘病毒和绵羊痘病毒之间也不发生交叉反应。该方法的重复性试验变异系数均低于2%,并且双重实时荧光定量PCR最低浓度检测限分别为470和440 fg。对标准阳性模板进行定量检测,生成的标准曲线相关系数分别为0.995和0.997。在检测的临床样品中,GTPV和SPPV阳性分别有14和4份,混合感染有1份。结果表明所建立的方法具有良好的特异性,灵敏性、稳定性,可以对GTPV和SPPV进行准确的定量检测。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 山羊痘病毒 绵羊痘病毒
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布鲁菌S2疫苗株的核酸探针检测方法的建立 被引量:4
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作者 张岩 李建 +4 位作者 宫利娜 高航飞 李旭东 安维 申之义 《动物医学进展》 北大核心 2015年第8期51-54,共4页
为了鉴别布鲁菌疫苗免疫和自然感染,建立鉴别布鲁菌S2疫苗株与其他菌株的斑点杂交法。针对布鲁菌基因序列保守区S2疫苗株与其他菌株的差异设计探针,同时根据差异部分设计引物进行PCR扩增;PCR产物经过回收、纯化、变性后固定在NC膜上,与... 为了鉴别布鲁菌疫苗免疫和自然感染,建立鉴别布鲁菌S2疫苗株与其他菌株的斑点杂交法。针对布鲁菌基因序列保守区S2疫苗株与其他菌株的差异设计探针,同时根据差异部分设计引物进行PCR扩增;PCR产物经过回收、纯化、变性后固定在NC膜上,与探针杂交、显色。结果显示,PCR引物能够对S2疫苗株扩增出约330bp的核酸片段,对其他布鲁菌扩增出约360bp的核酸片段;探针只能和S2疫苗株的PCR产物杂交,最低检测到10pg DNA,能够在10h内鉴别出布鲁菌S2疫苗株。 展开更多
关键词 布鲁菌 检测技术 斑点杂交
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绵羊痘病毒的分离与鉴定 被引量:4
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作者 安维 李建 +4 位作者 李娜 涂明亮 张志丹 王艳杰 张七斤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1103-1108,1114,共7页
利用羔羊睾丸细胞、Marc-145、Vero细胞对病毒进行分离和培养,通过动物回归试验、组织病理学切片的观察、透射电镜观察、PCR鉴定等方法进行病毒的鉴定,并参照GenBank中绵羊痘病毒P32基因序列设计并合成1对特异性引物,成功地对分离株的P3... 利用羔羊睾丸细胞、Marc-145、Vero细胞对病毒进行分离和培养,通过动物回归试验、组织病理学切片的观察、透射电镜观察、PCR鉴定等方法进行病毒的鉴定,并参照GenBank中绵羊痘病毒P32基因序列设计并合成1对特异性引物,成功地对分离株的P32基因进行克隆、测序,并与多株参考毒株进行同源性比对分析。结果显示:透射电镜下观察到典型的痘病毒粒子;动物回归试验中试验动物临床症状为典型的羊痘症状;组织病理学切片中观察到羊痘病毒嗜酸性包涵体;通过DNASTAR与参考毒株进行同源性比对,与参考株同源性为97.2%~99.5%。结果表明:该分离株为绵羊痘病毒,并命名为SPPV-NeiMengG2015。 展开更多
关键词 绵羊痘病毒 分离 鉴定 P32基因
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羊口疮疫苗对兔体液免疫和细胞免疫的影响 被引量:3
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作者 李智 张七斤 +4 位作者 安维 涂明亮 张志丹 李娜 仲亮 《中国动物检疫》 CAS 2016年第11期89-93,107,共6页
为深入研究羊口疮疫苗诱导机体产生免疫效应的分子机理,用羊口疮疫苗免疫兔,并对其血清中的特异性抗体水平和外周血免疫相关细胞因子的表达水平进行研究。将500 m L灭活的羊口疮病毒感染细胞毒液和经超声波破碎的灭活羊口疮病毒感染细... 为深入研究羊口疮疫苗诱导机体产生免疫效应的分子机理,用羊口疮疫苗免疫兔,并对其血清中的特异性抗体水平和外周血免疫相关细胞因子的表达水平进行研究。将500 m L灭活的羊口疮病毒感染细胞毒液和经超声波破碎的灭活羊口疮病毒感染细胞毒液分别浓缩至100 m L,按照佐剂说明书比例,分别与弗氏佐剂、201VG、1313VG、GEL01、11R VG混匀。另外,取灭活的羊口疮痂皮毒液10 m L与201 VG混匀,制备成疫苗。用所制备的不同佐剂疫苗各免疫2只兔子。在免疫后不同时间采集外周血,应用琼脂免疫扩散方法检测血清中特异性抗体效价,同时应用实时荧光定量PCR方法检测外周血中细胞因子表达水平。结果显示:在兔子接种羊口疮疫苗后期,血清中抗体效价除了"1313VG+未破碎病毒"组为1:8之外,其他组别的抗体效价均达到1:16或1:32;各组别外周血中Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ、TNF-α)的表达量与对照组相比总体上升,而Th2型细胞因子(IL-4、IL-6)的表达量总体呈下降趋势。结果表明,羊口疮疫苗可以同时诱导机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答,但对该两种免疫应答的诱导水平不同。 展开更多
关键词 羊口疮疫苗 体液免疫 细胞免疫 特异性抗体 细胞因子 佐剂
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羊口疮的实验室诊断及防控措施 被引量:2
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作者 涂明亮 张志丹 +3 位作者 安维 李娜 庞方圆 张七斤 《畜牧与饲料科学》 2014年第12期97-99,共3页
羊口疮是一种严重危害养羊业的传染性疾病,其病原为羊口疮病毒(ORFV),主要感染动物的口唇、鼻孔、眼部及周围皮肤,出现丘疹和脓疱,易对幼龄动物吸吮乳汁和成年动物采食造成一定的影响。该病一年四季均可发生,在春夏季节尤为严重,传播速... 羊口疮是一种严重危害养羊业的传染性疾病,其病原为羊口疮病毒(ORFV),主要感染动物的口唇、鼻孔、眼部及周围皮肤,出现丘疹和脓疱,易对幼龄动物吸吮乳汁和成年动物采食造成一定的影响。该病一年四季均可发生,在春夏季节尤为严重,传播速度快、范围广,在世界各地广泛流行,常给养羊业造成巨大的损失。对羊口疮的病原学、流行病学、临床症状、实验室诊断及防治措施等方面进行综述,以期为羊口疮的防控提供理论依据。 展开更多
关键词 羊口疮 羊口疮病毒 实验室诊断 防控措施
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奶牛场厩螫蝇的防控
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作者 巴依尔塔 安维 《兽医导刊》 2023年第1期33-34,共2页
对奶牛场内厩螫蝇的鉴别方法、生活习性及危害进行总结,指导奶牛场采取措施有效开展防控工作,降低厩螫蝇造成的产奶量下降和经济损失。
关键词 厩螫蝇 防控 奶牛场
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