皂角刺总黄酮对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭能力影响的实验研究 被引量：16

1

作者 何光志 邓树轩 +9 位作者 何前松 李世军 吴玛莉 魏良纲 王文佳 王平 曹锋 黄高 安传伟 安传相 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2012年第1期77-81,共5页

目的:研究皂角刺总黄酮对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,探讨其抗肿瘤作用机制.方法:通过体外培养人肝癌HepG2细胞,用不同浓度的皂角刺总黄酮处理后,采用WST-1法检测皂角刺总黄酮对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,琼脂糖凝胶电... 目的:研究皂角刺总黄酮对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,探讨其抗肿瘤作用机制.方法:通过体外培养人肝癌HepG2细胞,用不同浓度的皂角刺总黄酮处理后,采用WST-1法检测皂角刺总黄酮对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化,流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞的凋亡率,划痕实验和Transwell小室检测皂角刺总黄酮对HepG2细胞侵袭、转移的影响.结果:不同浓度的皂角刺总黄酮作用于细胞48 h后,能显著抑制HepG2细胞的增殖,随着药物浓度的增加,抑制作用增强,IC50为(190.62±0.89)mg/L;流式AnnexinV/PI双染法检测显示,不同浓度的皂角刺总黄酮均可诱导HepG2细胞凋亡;不同浓度的皂角刺总黄酮处理组发现凋亡细胞所特有的DNA ladder条带;皂角刺总黄酮可降低HepG2细胞的黏附能力,使Tr-answell小室膜上的肝癌细胞明显减少,并且呈剂量依赖性.结论:皂角刺总黄酮能明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭能力和诱导其凋亡. 展开更多

关键词 皂角刺总黄酮 HEPG2 增殖 凋亡 侵袭能力

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贵州野生天麻抗菌提取物外抑菌动力学研究 被引量：2

2

作者 安传伟 石广娅 +2 位作者 安传相 叶建 何光志 《中医学报》 CAS 2013年第11期1695-1697,共3页

目的:提取天麻抗菌物质,采用大肠杆菌株、金黄色葡萄球菌株和变形杆菌株对其抗菌物质进行抑菌动力学研究。方法:利用天麻抗菌提取物对大肠杆菌株、金黄色葡萄球菌株和变形杆菌的体外抗菌作用,研究其生长曲线和细菌细胞通透性。结果:天... 目的:提取天麻抗菌物质,采用大肠杆菌株、金黄色葡萄球菌株和变形杆菌株对其抗菌物质进行抑菌动力学研究。方法:利用天麻抗菌提取物对大肠杆菌株、金黄色葡萄球菌株和变形杆菌的体外抗菌作用,研究其生长曲线和细菌细胞通透性。结果:天麻抗菌提取物对大肠杆菌株、金黄色葡萄球菌株和变形杆菌株生长具有较强的抑制作用,影响细菌的生长和增加细菌细胞膜通透性。结论:天麻抗菌提取物对以上细菌均表现出良好的杀菌作用,天麻在抗感染治疗领域具有较好的开发和应用前景。 展开更多

关键词 天麻 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 变形杆菌 抑菌动力学 贵州

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皂角刺总黄酮对体内外人肝癌细胞株HepG2作用活性的研究 被引量：1

3

作者 何光志 何前松 +8 位作者 李世军 吴玛莉 魏良纲 王文佳 王平 曹锋 黄高 安传伟 安传相 《内蒙古中医药》 2012年第4期47-48,119,共3页

目的:探索皂角刺总黄酮对肝癌细胞体内外抑制作用。方法:采用不同剂量的皂角刺总黄酮对肝癌细胞的体外敏感性;对荷瘤小鼠进行体内实验,观察该提取物对肝癌细胞生长的抑制情况。结果:体外实验2.0-0.75mg/ml浓度下皂角刺总黄酮对其增殖有... 目的:探索皂角刺总黄酮对肝癌细胞体内外抑制作用。方法:采用不同剂量的皂角刺总黄酮对肝癌细胞的体外敏感性;对荷瘤小鼠进行体内实验,观察该提取物对肝癌细胞生长的抑制情况。结果:体外实验2.0-0.75mg/ml浓度下皂角刺总黄酮对其增殖有明显的抑制作用,体内实验50、100和150mg/kg剂量分别对荷瘤小鼠生命延长率分别为50.2%、67.2%和74.6%,抑瘤率分别达到55.3%、55.4%和60.3%。结论:皂刺总黄酮在体内外具有明显抑制肝癌细胞的作用。该实验结果为将来皂刺总黄酮应用于临床提供了理论依据。 展开更多

关键词 皂角刺总黄酮 肝癌 活性

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贵州野生天麻抗真菌肽基因表达载体的构建 被引量：1

4

作者 何光志 田维毅 +12 位作者 王平 王文佳 奚锦 愈奇 刘蕾 黄高 蔡琨 韩洁 王乾宇 刘安胜 安传伟 查高武 张鹏 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第8期6-8,共3页

为了构建凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf)的表达载体,经BamHI和HindIII酶切的pMD18-T-gaf和pET32a(+)质粒的纯化回收产物并进行连接,连接产物pET32a(+)-gaf转化大肠杆菌感受态细胞DH5α后,采用菌落PCR、酶切鉴定和阳性质粒测序分析。... 为了构建凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf)的表达载体,经BamHI和HindIII酶切的pMD18-T-gaf和pET32a(+)质粒的纯化回收产物并进行连接,连接产物pET32a(+)-gaf转化大肠杆菌感受态细胞DH5α后,采用菌落PCR、酶切鉴定和阳性质粒测序分析。结果表明:构建的凤冈野生天麻抗真菌肽基因表达载体通过菌落PCR、酶切鉴定和阳性质粒测序分析,目的片段成功插入载体,目的片段与预期的gaf基因大小(545 bp)相符。试验成功构建了贵州野生天麻抗真菌肽基因表达载体,pET32a(+)-gaf可以用来制备抗真菌蛋白。 展开更多

关键词 野生天麻 抗真菌肽基因 表达载体 构建 贵州

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凤冈野生天麻抗真菌肽基因(gaf)的克隆与序列分析 被引量：1

5

作者 何光志 田维毅 +10 位作者 王平 王文佳 奚锦 俞琦 黄高 蔡琨 王乾宇 刘安胜 安传伟 查高武 张鹏 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第7期28-30,33,共4页

为了克隆凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf),以凤冈野生天麻的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增抗真菌肽基因(gaf),经克隆和测序结果显示:RT-PCR产物电泳扩增的目标条带长度为545 bp;经测序和序列分析,该基因与Genebank中公布的序列编码天... 为了克隆凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf),以凤冈野生天麻的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增抗真菌肽基因(gaf),经克隆和测序结果显示:RT-PCR产物电泳扩增的目标条带长度为545 bp;经测序和序列分析,该基因与Genebank中公布的序列编码天麻抗真菌蛋白的基因序列(AY032588)同源性达97%。此研究成功地克隆了凤冈野生天麻抗真菌肽编码基因。 展开更多

关键词 野生天麻 抗真菌肽基因(gaf) 克隆 序列分析

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蛔虫抗原基因ALAg表达载体的构建及其重组蛋白诱导小鼠的免疫保护研究 被引量：1

6

作者 何光志 田维毅 +10 位作者 王平 王文佳 奚锦 俞琦 王乾宇 黄高 蔡琨 刘安胜 安传伟 查高武 张鹏 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2012年第1期62-66,71,共6页

目的确定蛔虫基因工程疫苗候选基因。方法连接经BamHI和EcoRI酶切的pMD18-T-ALAg和pET-28a(+)质粒的纯化回收产物,将连接产物pET-28a(+)-ALAg表达载体转化表达菌株BL21(DE3)进行诱导表达,并纯化重组蛋白(rALAg)。30只小鼠分成免疫组、... 目的确定蛔虫基因工程疫苗候选基因。方法连接经BamHI和EcoRI酶切的pMD18-T-ALAg和pET-28a(+)质粒的纯化回收产物,将连接产物pET-28a(+)-ALAg表达载体转化表达菌株BL21(DE3)进行诱导表达,并纯化重组蛋白(rALAg)。30只小鼠分成免疫组、佐剂组和对照组,每组10只,各组分别接种重组蛋白与弗氏完全佐剂(FCA)混合物、FCA以及磷酸盐缓冲液(PBS)后,采用蛔虫感染性虫卵进行攻击(3600个/只),观察各组小鼠体内虫体数,并采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗体IgG。结果 rALAg能被兔抗蛔虫阳性血清所识别。免疫组小鼠的肝脏和肺脏中的蛔虫幼虫数量(25.30±4.55)比对照组(57.60±5.76)减少了69.26%,与对照组和佐剂组比较差异有统计学意义(P<0.01);免疫组IgG抗体水平检测血清吸光度值A45(00.858±0.003)与对照组(0.149±0.004)、佐剂组比较(0.134±0.004)差异有统计学意义(P<0.01)。结论 ALAg基因可作为蛔虫基因工程疫苗的候选基因。 展开更多

关键词 蛔虫 蛔虫抗原基因 重组蛋白 免疫保护

原文传递

抗结核杆菌人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选 被引量：1

7

作者 何光志 田维毅 +5 位作者 高英 王平 王文佳 王乾宇 黄高 安传伟 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2011年第5期70-74,共5页

目的:构建人源噬菌体展示单链抗体(ScFv)库,筛选抗结核杆菌特异性、高亲和力的ScFv.方法:从结核患者的外周血淋巴细胞中,提取RNA并通过RT-PCR扩增出VH和VL基因,并采用SOE-PCR构建ScFv基因,将其克隆入噬粒载pCANTAB5E中,转化于大肠杆菌T... 目的:构建人源噬菌体展示单链抗体(ScFv)库,筛选抗结核杆菌特异性、高亲和力的ScFv.方法:从结核患者的外周血淋巴细胞中,提取RNA并通过RT-PCR扩增出VH和VL基因,并采用SOE-PCR构建ScFv基因,将其克隆入噬粒载pCANTAB5E中,转化于大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单链抗体库.结果:初级库库容量为3.5×106,在大肠杆菌TG1中重组后得到2.6×106的次级抗体库.结论:成功构建噬菌体展示ScFv库并获得人源抗结核杆菌特异性ScFv,为进一步研制抗抗结核杆菌的高特异性、高亲和力的基因工程抗体奠定了基础. 展开更多

关键词 结核杆菌 人源噬菌体单链抗体 制备及筛选

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猪蛔虫卵可溶性抗原单链抗体库的构建及初步筛选

8

作者 何光志 周颖 +5 位作者 安传伟 张太华 熊文康 崔小东 罗成松 谢波 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第12期178-182,共5页

为进一步研制抗猪蛔虫的高特异性、高亲和力的基因工程抗体奠定基础,以猪蛔虫未成熟虫卵可溶性抗原免疫BALB/C小鼠,提取小鼠脾脏总RNA,以RT-PCR技术分别扩增出H链和L链可变区基因,以SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成ScFv片段,然后将ScF... 为进一步研制抗猪蛔虫的高特异性、高亲和力的基因工程抗体奠定基础,以猪蛔虫未成熟虫卵可溶性抗原免疫BALB/C小鼠,提取小鼠脾脏总RNA,以RT-PCR技术分别扩增出H链和L链可变区基因,以SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成ScFv片段,然后将ScFv片段克隆至pCANTAB-5E载体,并转化至感受态TG1菌,经辅助噬菌体M13K07拯救,构建猪蛔虫卵可溶性抗原噬菌体展示单链抗体库,结果从20个噬菌体克隆中筛选到15个阳性克隆。 展开更多

关键词 蛔虫 可溶性抗原 单链抗体库 构建与筛选

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间接ELISA检测蛔虫抗体方法的建立

9

作者 何光志 田维毅 +11 位作者 高英 王平 王文佳 奚锦 俞琦 曹峰 黄高 蔡琨 韩洁 王乾宇 安传伟 刘安胜 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1414-1416,共3页

目的寻找能更准确地对蛔虫感染进行检测的方法。方法以蛔虫虫卵可溶性蛋白为抗原,建立检测蛔虫特异性抗体的间接ELISA方法。结果 ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为1μg/mL,血清最佳稀释度为1∶80,酶标二抗的最佳工作浓度为1∶8 00... 目的寻找能更准确地对蛔虫感染进行检测的方法。方法以蛔虫虫卵可溶性蛋白为抗原,建立检测蛔虫特异性抗体的间接ELISA方法。结果 ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为1μg/mL,血清最佳稀释度为1∶80,酶标二抗的最佳工作浓度为1∶8 000。对100份人血清样本采用本方法进行检测,其阳性检出率为10.0%;血清样本对应粪便样本进行现场粪检虫卵法确定阳性率为2.0%。结论建立了稳定而特异的抗蛔虫体IgG的间接ELISA检测方法,可用于蛔虫感染的临床监测。 展开更多

关键词 蛔虫 间接ELISA 蛔虫抗体

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抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选

10

作者 何光志 田维毅 +8 位作者 高英 王平 王文佳 奚锦 俞琦 王乾宇 黄高 蔡琨 安传伟 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期9-12,共4页

为了构建抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体库,从中筛选抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库特异性单链抗体,试验提取患者外周淋巴细胞总RNA,以总RNA为模板,通过RT-PCR技术分别扩增出H链和L链可变区基因,采用SOE-PCR方法将VH和VL片段随机... 为了构建抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体库,从中筛选抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库特异性单链抗体,试验提取患者外周淋巴细胞总RNA,以总RNA为模板,通过RT-PCR技术分别扩增出H链和L链可变区基因,采用SOE-PCR方法将VH和VL片段随机拼接成ScFv片段,然后将ScFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转E.coil TG1,构建抗乙肝病毒人源单链抗体库,并从中筛选阳性克隆抗体。结果表明:经过5轮筛选,获得2株能与乙肝病毒抗原特异性结合的阳性克隆。说明利用噬菌体抗体技术可不经免疫制备抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体。 展开更多

关键词 乙肝病毒(HBV) 人源噬菌体单链抗体 构建 筛选

原文传递

抗类风湿人源单链抗体库的制备及筛选

11

作者 何光志 田维毅 +8 位作者 王平 王文佳 奚锦 俞琦 王乾宇 黄高 韩洁 蔡琨 安传伟 《中国慢性病预防与控制》 CAS 北大核心 2011年第5期492-495,共4页

目的通过噬菌体展示技术构建抗类风湿人源单链抗体库,为其进一步的临床应用研究奠定基础。方法提取患者外周淋巴细胞总RNA,逆转录合成cDNA,以人源免疫球蛋白H链和L链可变区的扩增引物,分别扩增出H链和L链可变区基因。采用SOE-PCR法将VH... 目的通过噬菌体展示技术构建抗类风湿人源单链抗体库,为其进一步的临床应用研究奠定基础。方法提取患者外周淋巴细胞总RNA,逆转录合成cDNA,以人源免疫球蛋白H链和L链可变区的扩增引物,分别扩增出H链和L链可变区基因。采用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成scFv片段,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中,构建噬菌体单链抗体库。结果初级库库容量为3×106,在大肠杆菌TG1中重组后得到1.2×106的次级抗体库。结论本研究成功构建类风湿人源单链抗体库,拟为类风湿病的预防、诊断、治疗奠定基础。 展开更多

关键词 关节炎 类风湿 人源单链抗体 制备及筛选

原文传递

抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌鼠源化噬菌体抗体库的构建及筛选

12

作者 何光志 田维毅 +7 位作者 高英 王平 王文佳 王乾宇 奚锦 俞琦 黄高 安传伟 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第13期131-134,共4页

用灭活的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌免疫小鼠后,取出小鼠脾脏提取总RNA,以RT-PCR扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,以重叠延伸PCR(SOE-PCR)法将VH和VL拼接成ScFv基因,克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中,转化大肠杆菌E.coli TG1,... 用灭活的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌免疫小鼠后,取出小鼠脾脏提取总RNA,以RT-PCR扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,以重叠延伸PCR(SOE-PCR)法将VH和VL拼接成ScFv基因,克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中,转化大肠杆菌E.coli TG1,构建鼠源抗金黄色葡萄天然噬菌体抗体库。研究结果表明,构建的鼠源性抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库库容为3.2×106,多样性良好,共筛选出8个阳性克隆。说明已成功构建抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库,为筛选有效治疗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌奠定了基础。 展开更多

关键词 甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌 抗体库 单链抗体库

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几种不同方法检测抗蛔虫抗体的建立

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作者 何光志 田维毅 +13 位作者 高英 王平 王文佳 奚锦 俞琦 曹峰 黄高 蔡琨 韩洁 王乾宇 刘安胜 安传伟 查高武 张鹏 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第40期69-71,共3页

目的为了更准确地对蛔虫感染进行检测。方法本研究以蛔虫虫卵蛋白为可溶性抗原,建立了间接血凝试验(IHA)、间接ELISA和琼脂扩散试验(AGP)方法,检测100份来自农村小学生的血清样本。结果间接ELISA阳性检出率为10.00%(10/100),IHA阳性检... 目的为了更准确地对蛔虫感染进行检测。方法本研究以蛔虫虫卵蛋白为可溶性抗原,建立了间接血凝试验(IHA)、间接ELISA和琼脂扩散试验(AGP)方法,检测100份来自农村小学生的血清样本。结果间接ELISA阳性检出率为10.00%(10/100),IHA阳性检出率为7.0%(7/100),AGP阳性检出率为4.00%(4/100)。结论间接ELISA具有灵敏度高,特异性强的优点,可用于蛔虫病的诊断。 展开更多

关键词 蛔虫 间接ELISA 间接血凝试验 琼脂扩散试验

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蛔虫抗原基因ALAg克隆及序列分析

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作者 何光志 田维毅 +12 位作者 王平 王文佳 奚锦 俞琦 曹峰 黄高 蔡琨 韩洁 王乾宇 刘安胜 安传伟 查高武 张鹏 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第9期13-15,共3页

为了确定蛔虫基因工程疫苗的候选基因,试验以蛔虫幼虫的RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增出ALAg基因,扩增产物克隆到pMD18-T载体,筛选阳性克隆测序并进行Blast分析。结果表明:该基因与GenBank公布的猪蛔虫As37抗原基因(AB078971)的同源性为... 为了确定蛔虫基因工程疫苗的候选基因,试验以蛔虫幼虫的RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增出ALAg基因,扩增产物克隆到pMD18-T载体,筛选阳性克隆测序并进行Blast分析。结果表明:该基因与GenBank公布的猪蛔虫As37抗原基因(AB078971)的同源性为95%,与西式贝蛔虫Ag3抗原基因(EU927450)的同源性为92%。说明ALAg基因是线虫特有的抗原基因。 展开更多

关键词 蛔虫 抗原基因ALAg 克隆及序列分析

原文传递

胰腺癌人源噬菌体单链抗体库的构建及初步筛选

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作者 何光志 田维毅 +5 位作者 高英 王平 王文佳 黄高 蔡琨 安传伟 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期158-160,共3页

提取胰腺癌患者的外周淋巴细胞总RNA,以RT-PCR技术分别扩增出人源抗体H链和L链的可变区基因,采用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成scFv片段,然后将scFv片段克隆至pCANTAB5E载体,并电转化至感受态TG1菌,经辅助噬菌体M13K07拯救,获得胰腺... 提取胰腺癌患者的外周淋巴细胞总RNA,以RT-PCR技术分别扩增出人源抗体H链和L链的可变区基因,采用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成scFv片段,然后将scFv片段克隆至pCANTAB5E载体,并电转化至感受态TG1菌,经辅助噬菌体M13K07拯救,获得胰腺癌人源噬菌体单链抗体库。结果表明,从外周血淋巴细胞中获取可变区基因,利用噬菌体抗体库技术制备人源抗胰腺癌单链抗体的策略是可行的。 展开更多

关键词 胰腺癌 人源噬菌体单链抗体 构建与筛选

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体验式教学在道德与法治课堂中的研究

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作者 安传伟 《小学教学参考》 2021年第27期69-70,共2页

道德与法治课程是小学教育中的重要学科,对培养学生良好的个性和思想品德有积极意义。传统的道德与法治教学大多采用说教式的教学方式,导致学生对相关知识的学习产生抵触心理,无法将所学知识内化为实践行为。体验式教学能帮助学生强化感... 道德与法治课程是小学教育中的重要学科,对培养学生良好的个性和思想品德有积极意义。传统的道德与法治教学大多采用说教式的教学方式,导致学生对相关知识的学习产生抵触心理,无法将所学知识内化为实践行为。体验式教学能帮助学生强化感知,体验到学习的乐趣,形成积极的生活态度与良好的行为习惯,提高教与学的有效性。 展开更多

关键词 道德与法治 体验式教学 研究

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浅谈杜仲在医学上的应用

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作者 安传伟 何光志 《中国中医药咨讯》 2011年第20期361-361,共1页

总结近年来国内外有关杜仲的研究情况，包括其在降压、调节血脂、对免疫系统的作用、抗衰老作用和抗肿瘤作用等方面，为杜仲的进一步开发利用提供参考。

关键词 杜仲 研究 开发利用

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