支原体感染与肿瘤 被引量：7

1

作者 宁金鹰 寿成超 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期602-604,共3页

支原体是广泛存在于自然界的条件致病微生物,可能是唯一可以与真核生物共生,并可与哺乳动物细胞长期相互作用的原核生物。多种不同的肿瘤组织中可检测到支原体的存在,某些支原体的持续感染可导致哺乳动物细胞的转化、上调癌基因的表达... 支原体是广泛存在于自然界的条件致病微生物,可能是唯一可以与真核生物共生,并可与哺乳动物细胞长期相互作用的原核生物。多种不同的肿瘤组织中可检测到支原体的存在,某些支原体的持续感染可导致哺乳动物细胞的转化、上调癌基因的表达并引起肿瘤细胞生物学行为的改变,提示支原体感染与肿瘤的发生有潜在的相关性。 展开更多

关键词 支原体感染 肿瘤 原核生物 持续感染 癌基因 基因表达

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抗TREM2抗体的制备及生物学活性的初步研究 被引量：1

2

作者 胡钰清 冯艳平 +3 位作者 梁家蓓 郝锋 宁金鹰 李莉 《中南药学》 CAS 2024年第6期1429-1434,共6页

目的制备抗髓系细胞触发受体2(TREM2)抗体并初步探究其生物学活性。方法采用杂交瘤筛选的方法,获得稳定分泌抗TREM2抗体的杂交瘤细胞株,并对杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行筛选,选择结合效果最佳的单克隆抗体进行人源化改造得到嵌合... 目的制备抗髓系细胞触发受体2(TREM2)抗体并初步探究其生物学活性。方法采用杂交瘤筛选的方法,获得稳定分泌抗TREM2抗体的杂交瘤细胞株,并对杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行筛选,选择结合效果最佳的单克隆抗体进行人源化改造得到嵌合抗体;对嵌合抗体进行进一步的人源化改造,采用酶联免疫吸附法(ELISA)及流式细胞术(FACS)检测人源化抗体的抗原抗体结合活性;采用生物膜干涉技术(BLI)检测人源化抗体与人TREM2结合动力学;通过基于报告基因的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)生物学活性测定方法,检测人源化抗体的依赖细胞介导的细胞毒效应;使用免疫缺陷小鼠对人源化抗体进行体内药效实验。结果利用杂交瘤技术成功筛选到稳定表达抗TREM2抗体的杂交瘤细胞株,对杂交瘤细胞株进行进一步人源化改造,获得纯度高于95%的人源化抗体h7B6-11,抗体h7B6-11与TREM2-His蛋白具有高度亲和性,且对293T-TREM2细胞的ADCC活性明显强于对照抗体。体内药效实验结果显示,h7B6-11与程序性死亡受体1(PD1)抗体联合用药抑制肿瘤生长效果明显。结论抗体h7B6-11具有高度亲和力和良好的生物学活性,有望开发成为新一代肿瘤免疫治疗的抗体药物。 展开更多

关键词 髓系细胞触发受体2 杂交瘤 单克隆抗体 人源化抗体 生物学活性

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靶向抗TIGIT和PVRIG双特异抗体的制备及体外生物性活性的研究

3

作者 叶银松 米梓毓 +4 位作者 雷毅 康金森 郝锋 宁金鹰 杨建 《新疆医科大学学报》 CAS 2024年第8期1153-1160,共8页

目的制备靶向抗T细胞免疫球蛋白-ITIM结构域蛋白(T cell immune receptor with Ig and ITIM domains,TIGIT)和脊髓灰质炎病毒受体相关免疫球蛋白结构域蛋白(Poliovirus receptor-related immunoglobin domain-containing protein,PVRIG... 目的制备靶向抗T细胞免疫球蛋白-ITIM结构域蛋白(T cell immune receptor with Ig and ITIM domains,TIGIT)和脊髓灰质炎病毒受体相关免疫球蛋白结构域蛋白(Poliovirus receptor-related immunoglobin domain-containing protein,PVRIG)双特异抗体,探究其体外生物学活性。方法用PVRIG人源化抗体hP1和TIGIT人源化抗体hT1构建KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV双特异性抗体,将纯化得到KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体进行SDS-PAGE凝胶电泳、热稳定性检测和稳定性分析;采用流式细胞术(Fluorescence activated cell sorting,FACS)检测双特异性抗体的结合活性;采用生物干涉膜技术(Bio-layer interferometry,BLI)检测双特异性抗体亲和力;用Jurkat-NFAT-Luc2-PD1-TIGIT-PVRIG细胞和293T-OS8-PVRL2-PDL1细胞中检测双特异性抗体KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV对于TIGIT/PVRIG靶点的阻断作用;采用CMV recall assay法检测IFN-r在上清液中的浓度。结果SDS-PAGE凝胶电泳结果显示KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV双特异性抗体纯度>95%;Tm结果为Tm1:66.34,Tm2:80.95。采用SEC-HPLC对双特异性抗体KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV进行稳定性分析,其纯度均>90%。KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体和PVRIG的人源化抗体hP1与293T-PVRIG cell line的EC 50分别为0.16870μg/mL和0.03865μg/mL,与293T-cyno-PVRIG cell line的EC 50分别为0.03714μg/mL和0.03198μg/mL,与Human PVRIG Protein,His Tag的亲和力为1.74E-10M和1.69E-10M。KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体和TIGIT的人源化抗体hT1与293T-PVRIG cell line的EC 50分别为0.07027μg/mL和0.03121μg/mL;与293T-cyno-TIGIT cell line的EC 50分别为0.02028μg/mL和0.02822μg/mL;与Human TIGIT Protein,His Tag的亲和力为8.50E-10M和8.47E-10M。KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体具有阻断PD1/PDL1/TIGIT/PVRIG相互作用活性,且KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV的EC 50为0.007μg/mL,优于单独人源化抗体hT1(EC 50为0.013μg/mL)和hP1(EC 50为0.048μg/mL)的作用。在含pp65 peptide条件下KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体分泌IFN-r为349.72 pg/mL,明显高于 展开更多

关键词 T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白 脊髓灰质炎病毒受体相关免疫球蛋白结构域蛋白 人源化抗体 双特异性抗体 生物学活性

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山莴苣素对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响 被引量：1

4

作者 叶银松 雷毅 +4 位作者 康金森 郝锋 宁金鹰 马晓丽 杨建 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1152-1156,共5页

目的探讨山莴苣素对MDA-MB-453乳腺癌细胞增殖和迁移的作用。方法实验分为对照组和低、中、高剂量山莴苣素实验组。对照组细胞给予常规培养,低、中、高剂量山莴苣素实验组分别用10、20和30μmol·L^(-1)山莴苣素处理MDA-MB-453乳腺... 目的探讨山莴苣素对MDA-MB-453乳腺癌细胞增殖和迁移的作用。方法实验分为对照组和低、中、高剂量山莴苣素实验组。对照组细胞给予常规培养,低、中、高剂量山莴苣素实验组分别用10、20和30μmol·L^(-1)山莴苣素处理MDA-MB-453乳腺癌细胞24 h。以划痕愈合实验评估细胞的迁移能力;以蛋白质印迹法检测细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白表达水平。结果对照组和低、中、高剂量山莴苣素组的迁移率分别为(29.35±2.99)%、(21.44±1.14)%、(18.83±0.49)%和(10.73±0.43)%;Akt蛋白的相对表达水平分别为1.00±0.04、0.94±0.05、0.92±0.05和1.09±0.03;p-Akt蛋白的相对表达水平分别为1.00±0.01、0.43±0.04、0.30±0.03和0.31±0.03;PI3K蛋白相对表达水平分别为1.00±0.04、1.03±0.19、1.14±0.12和1.09±0.08;p-PI3K蛋白相对表达水平分别为1.00±0.02、1.06±0.15、1.12±0.08和1.09±0.07。以上指标,低、中、高剂量山莴苣素实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论山莴苣素通过抑制PI3K/Akt信号通路,抑制MDA-MB-453乳腺癌细胞增殖和迁移。 展开更多

关键词 山莴苣素 乳腺癌 磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路

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重症肌无力患者外周血乙酰胆碱特异性单个核细胞IFN-γ和TGF-β的变化 被引量：2

5

作者 王尊荣 宁金鹰 孙兆林 《济宁医学院学报》 2003年第1期29-31,共3页

目的　研究重症肌无力 (myastheniagravis,MG)外周血AChR特异性单个核细胞IFN -γ和TGF -β的分泌能力 ,探讨细胞因子IFN -γ和TGF -β在MG发病机制中的作用。方法　应用体外细胞培养和ELISA方法检测MG患者外周血单个核细胞 (PBMNC)经A... 目的　研究重症肌无力 (myastheniagravis,MG)外周血AChR特异性单个核细胞IFN -γ和TGF -β的分泌能力 ,探讨细胞因子IFN -γ和TGF -β在MG发病机制中的作用。方法　应用体外细胞培养和ELISA方法检测MG患者外周血单个核细胞 (PBMNC)经AChR刺激后产生IFN -γ和TGF -β的水平。结果　急性期MG患者IFN -γ和TGF -β的诱生水平高于正常对照组 (P <0 0 1 ) ,AChRAb阳性组MG患者IFN -γ的诱生水平高于AChRAb阴性组 (P <0 0 1 )。 展开更多

关键词 重症肌无力 外周血 乙酰胆碱 特异性 单个核细胞 细胞培养 细胞因子 IFN-Γ TGF-Β

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基于PI3K/Akt通路研究山莴苣苦素对三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

6

作者 叶银松 雷毅 +3 位作者 康金森 宁金鹰 马晓丽 杨建 《新疆医科大学学报》 CAS 2023年第2期234-237,共4页

目的研究山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖和迁移的影响。方法采用CellTiter-Glo发光法测定山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖的影响;通过Transwell细胞迁移实验观察山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞迁移... 目的研究山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖和迁移的影响。方法采用CellTiter-Glo发光法测定山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖的影响;通过Transwell细胞迁移实验观察山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞迁移的影响;以蛋白质印迹法测定乳腺癌细胞中PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达水平。结果山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞的IC_(50)为2.879μmol/L。与对照组比较,随着山莴苣苦素浓度的升高,其对三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移能力的抑制作用明显增强,经山莴苣苦素处理的MDA-MB-453乳腺癌细胞的p-Akt随着山莴苣苦素处理浓度的升高,其表达水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论山莴苣苦素通过抑制PI3K/Akt信号通路,达到抑制MDA-MB-453乳腺癌细胞增殖和迁移的作用。 展开更多

关键词 MDA-MB-453乳腺癌细胞 山莴苣苦素 PI3K/AKT信号通路

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利用CHO(dhfr^-)细胞高效表达GM-CSFFc_(γ2)^-融合蛋白 被引量：1

7

作者 宁金鹰 王尊荣 许佐良 《济宁医学院学报》 2001年第1期27-29,共3页

目的　利用二氢叶酸还原酶缺陷型细胞CHO(dhfr - )高效表达融合蛋白GM -CSF Fcγ2-。方法　利用脂质体基因转染技术 ,把含有融合基因GM -CSF Fcγ2-的真核表达质粒pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-和含有二氢叶酸还原酶基因的真核表达质粒pSV2 ... 目的　利用二氢叶酸还原酶缺陷型细胞CHO(dhfr - )高效表达融合蛋白GM -CSF Fcγ2-。方法　利用脂质体基因转染技术 ,把含有融合基因GM -CSF Fcγ2-的真核表达质粒pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-和含有二氢叶酸还原酶基因的真核表达质粒pSV2 -dhfr共转染二氢叶酸还原酶缺陷型细胞CHO(dhfr - )中。用G4 18和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷 )双筛选 ,获得dhfr +neo +双表型阳性的细胞克隆。取表达产量最高的克隆进行亚克隆 ,并行MTX加压筛选 ,以提高表达量。用RT -PCR、ELISA和Westernblot对表达产物进行鉴定并行MTT法检测表达蛋白的生物学活性。结果　成功地表达出了具有GM -CSF生物学活性的融合蛋白GM -CSF Fcγ2-。结论　该方法可行 ,表达量达到 15μg ml。 展开更多

关键词 融合蛋白 基因表达 细胞CHO GM-CSF/Feγ2^-

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乳腺癌帕博西尼耐药细胞株的建立及耐药机制研究 被引量：2

8

作者 唐瑶 杨建 +3 位作者 郭正成 郝峰 宁金鹰 康金森 《新疆医科大学学报》 CAS 2021年第11期1282-1288,共7页

目的建立人乳腺癌帕博西尼耐药细胞株T47D-PalR,分析研究其耐药机制。方法采用抑制剂低浓度梯度递增法,建立人乳腺癌帕博西尼耐受的T47D-PalR体外耐药细胞模型;采用CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega)法检测T47D-... 目的建立人乳腺癌帕博西尼耐药细胞株T47D-PalR,分析研究其耐药机制。方法采用抑制剂低浓度梯度递增法,建立人乳腺癌帕博西尼耐受的T47D-PalR体外耐药细胞模型;采用CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega)法检测T47D-PalR的耐药特性;采用实时荧光定量RT-PCR法与免疫蛋白印迹(Western-Blot)法分析T47D、T47D-PalR两种细胞相关耐药基因CDK2、CDK4、CDK6及CCND1、E2F1、Rb等的mRNA表达及蛋白表达水平。结果经10个月的诱导成功建立T47D-PalR耐药细胞株,可在20μmol帕博西尼培养液中稳定生长。帕博西尼对亲本细胞T47D和耐药细胞T47D-PalR的IC50别为(0.069±0.018)μmol和(4.281±0.167)μmol,耐药指数(RI)为62;帕博西尼对T47D-PalR的单克隆细胞T47D-PalR-clone 39#的IC50>10μmol,耐药指数>144.9,属于高度耐药。与亲本细胞T47D比较,T47D-PalR细胞形态发生了明显改变,且T47D-PalR耐药细胞中CDK2、CDK4、CDK6、E2F1、CCND1等耐药基因的mRNA相对表达量均较T47D细胞升高,差异有统计学意义(P<0.05),而Rb的mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);与母本细胞T47D比较,T47D-PalR耐药细胞中p-Rb、CDK4、CDK6、E2F1的蛋白表达均较T47D升高,差异有统计学意义(P<0.05),但CDK2与总的Rb蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌帕博西尼耐药细胞株对CDK4/6抑制剂帕博西尼具有稳定良好的耐药作用。 展开更多

关键词 CDK4/6抑制剂 乳腺癌 耐药细胞株 帕博西尼

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利用PCR技术构建GM-CSF/Fc_(γ2)^-融合蛋白真核表达载体

9

作者 宁金鹰 王尊荣 许佐良 《济宁医学院学报》 2001年第1期30-32,共3页

目的　对融合基因GM -CSF Fcγ2 进行定点突变 ,去除其补体结合位点 ,构建GM -CSF Fcγ2-融合蛋白真核表达载体。方法　通过设计突变引物 ,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM -CSF Fcγ2-。并通过T -A克隆策略 ,把突变后的融合基因GM -... 目的　对融合基因GM -CSF Fcγ2 进行定点突变 ,去除其补体结合位点 ,构建GM -CSF Fcγ2-融合蛋白真核表达载体。方法　通过设计突变引物 ,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM -CSF Fcγ2-。并通过T -A克隆策略 ,把突变后的融合基因GM -CSF Fcγ2-重组到真核表达载体pRc CMV2中 ,构建真核表达质粒pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-并经过酶切和测序确证。结果　成功对融合基因GM -CSF Fcγ2-进行了突变 ,构建了真核表达载体pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-。 展开更多

关键词 融合蛋白 定点突变 基因克隆 聚合酶链反应

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甲基化CpG岛扩增联合代表性差异分析方法在筛查人非小细胞肺癌组织中高甲基化修饰序列的应用

10

作者 李勇 郭榕 宁金鹰 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期644-648,共5页

目的探讨甲基化CpG岛扩增联合代表性差异分析(MCA/RDA)方法在筛查人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中高甲基化修饰序列的应用。方法以92对NSCLC和癌旁对照组织DNA为研究对象,应用MCA/RDA方法筛查肺癌组织DNA中高甲基化修饰的CpG岛序列。应用... 目的探讨甲基化CpG岛扩增联合代表性差异分析(MCA/RDA)方法在筛查人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中高甲基化修饰序列的应用。方法以92对NSCLC和癌旁对照组织DNA为研究对象,应用MCA/RDA方法筛查肺癌组织DNA中高甲基化修饰的CpG岛序列。应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和甲基化特异性PCR(methylation-sensitive PCR,MSP)技术,分析胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP-4)基因启动子区CpG岛的甲基化修饰与基因表达的相关性。结果获得5个经Slot Blot验证在肺癌组织中高甲基化修饰的CpG岛序列(IGFBP-4、KLK10、ADAM23、GADD45G和DUOX1)。甲基化抑制剂5-aza-2'-deoxycytidine处理NSCLC细胞可明显上调IGFBP-4基因的表达。在41例(44.6%)癌组织中检测到IGFBP-4表达水平显著低于癌旁对照组织。47例(51.1%)癌组织检测到IGFBP-4高甲基化显著高于癌旁组织的检出率(16.3%,15/92;P<0.001)。IGFBP-4高甲基化与基因表达呈负相关(r=-0.396,P<0.001)。IGFBP-4高甲基化与TNM分期(P=0.013)和淋巴结转移(P=0.022)相关。结论应用MCA/RDA方法筛查到5个在NSCLC组织中高甲基化修饰的CpG岛序列,并证实IGFBP-4启动子区CpG岛的高甲基化可能通过抑制基因的表达参与了NSCLC的发生。 展开更多

关键词 癌 非小细胞肺 甲基化CpG岛扩增 代表性差异分析 胰岛素样生长因子结合蛋白质4

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胎儿膝关节半月板的组织发生

11

作者 张金萍 王凤芹 +1 位作者 宁金鹰 张子英 《济宁医学院学报》 1995年第4期28-29,共2页

本文取３６例１３～３８周胎儿膝关节半月板，石蜡切片，用ＨＥ及ＶａｎＧｉｅｓｏｎ氏染色，光镜观察。结果表明：１３～３８周半月板为致密胶原结缔组织。随着胎儿的生长发育，其纤维逐渐增多，集合成束，与半月板的周缘平行排列，细... 本文取３６例１３～３８周胎儿膝关节半月板，石蜡切片，用ＨＥ及ＶａｎＧｉｅｓｏｎ氏染色，光镜观察。结果表明：１３～３８周半月板为致密胶原结缔组织。随着胎儿的生长发育，其纤维逐渐增多，集合成束，与半月板的周缘平行排列，细胞则逐渐减少。 展开更多

关键词 组织发生 半月板 胎儿

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猪鼻支原体蛋白P37诱导人外周血单核细胞释放肿瘤坏死因子 被引量：4

12

作者 宁金鹰 黄甦 +2 位作者 吴健 孟麟 寿成超 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期353-357,共5页

胃癌组织中存在较高的猪鼻支原体感染率,提示猪鼻支原体感染同胃癌的发生可能存在某种相关性.由于肿瘤坏死因子(TNF-α)在微生物感染导致肿瘤发生中起重要作用,而P37蛋白是猪鼻支原体的主要免疫原,因此,探讨P37能否诱导TNF-α的表达与释... 胃癌组织中存在较高的猪鼻支原体感染率,提示猪鼻支原体感染同胃癌的发生可能存在某种相关性.由于肿瘤坏死因子(TNF-α)在微生物感染导致肿瘤发生中起重要作用,而P37蛋白是猪鼻支原体的主要免疫原,因此,探讨P37能否诱导TNF-α的表达与释放,对阐明猪鼻支原体在胃癌发生中的可能分子机制有重要意义,运用PCR技术克隆了p37基因,在对其编码序列中7个色氨酸密码子TGA进行TGG定点突变后,利用PGEX-4T-1表达载体在大肠杆菌中成功表达了P37蛋白,并经Western blot得到证实,在此基础上,利用RT-PCR及TNF-α敏感细胞株L929的细胞毒性实验,发现P37确能诱导外周血单核细胞表达和释放TNF-α,抗P37单克隆抗体PD4对该诱导活性有明显的中和作用,结果提示,猪鼻支原体通过P37诱导TNF-α产生在猪鼻支原体感染所致相关疾病中可能起重要作用,值得进一步研究. 展开更多

关键词 猪鼻支原体蛋白P37 人外周血单核细胞 肿瘤坏死因子 猪鼻支原体感染 TNF-Α 胃癌 PD4 组织化学检测

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