目的:构建、表达迁移诱导蛋白7(migration-inducing protein 7,MIG7),制备该融合蛋白的兔多克隆抗体,纯化并鉴定该多克隆抗体。方法:设计并合成MIG7蛋白特异性多肽片段,合成的MIG7多肽与马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联,构建半抗原-...目的:构建、表达迁移诱导蛋白7(migration-inducing protein 7,MIG7),制备该融合蛋白的兔多克隆抗体,纯化并鉴定该多克隆抗体。方法:设计并合成MIG7蛋白特异性多肽片段,合成的MIG7多肽与马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联,构建半抗原-载体偶联物。以MIG7特异性多肽-KLH为抗原免疫大白兔,制备抗MIG7多克隆抗体。40%硫酸铵沉淀、甘氨酸溶液洗脱纯化抗体,Dot blot检测抗体血清效价。免疫组化与qRT-PCR验证MIG7抗体。结果:免疫组织化学染色与qRT-PCR检测结果一致,证明该抗体可特异性结合MIG蛋白,获得MIG7多克隆抗体。结论:本研究成功制备并纯化了特异性较高的抗MIG7多克隆抗体,为进一步研究MIG7在血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)形成和肝癌侵袭转移中的机制奠定了基础。展开更多
文摘目的:构建、表达迁移诱导蛋白7(migration-inducing protein 7,MIG7),制备该融合蛋白的兔多克隆抗体,纯化并鉴定该多克隆抗体。方法:设计并合成MIG7蛋白特异性多肽片段,合成的MIG7多肽与马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联,构建半抗原-载体偶联物。以MIG7特异性多肽-KLH为抗原免疫大白兔,制备抗MIG7多克隆抗体。40%硫酸铵沉淀、甘氨酸溶液洗脱纯化抗体,Dot blot检测抗体血清效价。免疫组化与qRT-PCR验证MIG7抗体。结果:免疫组织化学染色与qRT-PCR检测结果一致,证明该抗体可特异性结合MIG蛋白,获得MIG7多克隆抗体。结论:本研究成功制备并纯化了特异性较高的抗MIG7多克隆抗体,为进一步研究MIG7在血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)形成和肝癌侵袭转移中的机制奠定了基础。