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肠道病毒71型灭活疫苗的免疫原性和保护性效果评价研究 被引量:9
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作者 李秀玲 张中洋 +15 位作者 王潇潇 郝春生 杨永娟 李懿 马淑花 刘宇 郭会杰 吴蕴怡 张晨 张冲 陈明 赵敏 宁海 田龙 刘松友 沈心亮 《中国病毒病杂志》 CAS 2012年第6期415-418,共4页
目的评价研制的肠道病毒71型(EV71)灭活疫苗的免疫原性和保护性效果。方法 EV71FY7VP5/AH/CHN/2008株感染Vero细胞后,收获病毒培养液,经灭活、浓缩和纯化后制备EV71灭活疫苗,并通过高效液相色谱法(HPLC)进行纯度分析、Western blot进行... 目的评价研制的肠道病毒71型(EV71)灭活疫苗的免疫原性和保护性效果。方法 EV71FY7VP5/AH/CHN/2008株感染Vero细胞后,收获病毒培养液,经灭活、浓缩和纯化后制备EV71灭活疫苗,并通过高效液相色谱法(HPLC)进行纯度分析、Western blot进行特异性鉴定。采用不同剂量疫苗免疫食蟹猴,间隔1周采集血清,连续采集9周,采用微量细胞病变抑制法对血清中和抗体进行检测。疫苗免疫动物血清通过腹腔注射至乳鼠后,对乳鼠进行病毒攻击,计算乳鼠生存率及半数动物保护性抗体水平。结果 HPLC分析结果提示,制备的纯化EV71灭活疫苗纯度可达96.6%;Western blot检测结果显示,其可与EV71特异性多抗结合。不同剂量的EV71灭活疫苗免疫食蟹猴,可诱导产生较高水平的EV71特异性中和抗体,中和抗体水平于第2剂接种后1周达到高峰,随后中和抗体维持在一定的水平,中和抗体水平与疫苗剂量存在明显的量效关系;采集小鼠免疫血清,测定中和抗体效价为1∶512,将其进行4、16、64、256倍系列稀释,经腹腔注射乳鼠后,进行病毒攻击,连续观察14d,乳鼠生存率分别为100.0%、100.0%、50.0%、28.6%;对照组乳鼠于病毒攻击后5~7d全部死亡。采用寇氏法计算,平均半数动物保护中和抗体效价为1∶11。结论制备的EV71灭活疫苗可诱导产生高水平的中和抗体,并可保护乳鼠免受EV71感染。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒71型 灭活疫苗 免疫原性 保护效果
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抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原单克隆抗体的制备及其初步应用 被引量:2
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作者 张中洋 郭会杰 +10 位作者 赵敏 杨永娟 郝春生 李懿 马淑花 刘宇 宁海 张晨 陈明 田龙 李秀玲 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第1期82-86,共5页
目的制备脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)Ⅰ型D抗原单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法采用Vero细胞培养脊髓灰质炎病毒Ⅰ型,柱层析纯化病毒抗原,SDS-PAGE鉴定病毒蛋白,HPLC分析抗原纯度,Western blot分析抗原的反应原性。以... 目的制备脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)Ⅰ型D抗原单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法采用Vero细胞培养脊髓灰质炎病毒Ⅰ型,柱层析纯化病毒抗原,SDS-PAGE鉴定病毒蛋白,HPLC分析抗原纯度,Western blot分析抗原的反应原性。以纯化的脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合,筛选可分泌脊髓灰质炎病毒I型D抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体经纯化后,采用间接ELISA法检测小鼠腹水抗体效价、单抗的特异性及相对亲和力。分别以纯化的单抗作为捕获抗体和酶标抗体,进行配对试验,建立用于脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原检测的双抗体夹心ELISA方法,确定方法的最佳线性范围,并验证方法的特异性。结果纯化的脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原经SDS-PAGE分析,共显示4条蛋白条带,相对分子质量分别为约40 000、35 000、32 000和28 000;经HLPC分析,纯度达99%;小鼠免疫血清可与相对分子质量约为35 000的VP1蛋白发生特异性反应。共筛选出5株可稳定分泌脊髓灰质炎病毒I型D抗原单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,纯化的单抗仅与D抗原发生反应;2H1和3B5株单抗的效价分别为2×107和2×106,且亲和力高于其他3株单抗。采用2H1和3B5株单抗配对,可以特异性检测D抗原,而与C抗原不反应;D抗原最佳线性范围为4.300~0.071 DU/ml,R2为0.994 6。该法仅可检出脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原,而与脊髓灰质炎病毒Ⅱ型、Ⅲ型D抗原和脊髓灰质炎病毒Ⅰ型C抗原、EV71抗原、Vero细胞培养上清不发生交叉反应。结论制备了脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原单克隆抗体,建立了可用于脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原特异性检测的双抗体夹心ELISA方法。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎病毒 D抗原 C抗原 抗体 单克隆 酶联免疫吸附测定
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发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒灭活疫苗生产用毒株的筛选及鉴定 被引量:3
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作者 戴新宪 郝春生 +7 位作者 陈蕾 王潇潇 刘宇 吴蕴怡 马淑花 支惠 宁海 李秀玲 《中国新药杂志》 CSCD 北大核心 2016年第23期2670-2675,共6页
目的:从临床样本中分离发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)毒株,经过充分比较研究后,确定1株适合疫苗生产的毒株。方法:使用Vero细胞从发热伴血小板减少综合征患者临床... 目的:从临床样本中分离发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)毒株,经过充分比较研究后,确定1株适合疫苗生产的毒株。方法:使用Vero细胞从发热伴血小板减少综合征患者临床样本中分离病毒株,经噬斑纯化鉴定后进一步适应传代,比较研究各毒株在细胞中的传代适应性、免疫原性、交叉保护性以及遗传稳定性等,筛选并确定1株疫苗生产用毒株,按照要求建立三级种子库。结果:共获得7个SFTSV分离株,各分离株病毒均可以在Vero细胞中良好复制,病毒滴度均可达到7.0 lg CCID50·m L^(-1)以上,其中AH12株滴度可达9.0 lg CCID50·m L^(-1)。毒株适应传代后滴度稳定,灭活病毒免疫动物均可产生针对本株及其他毒株的中和抗体,其中HB29株和AH12株免疫后具有较高的中和抗体水平以及良好的交叉保护性。基于AH12株建立的三级种子库经全面检定,结果符合《中华人民共和国药典》三部(2010版)要求。结论:经过对不同SFTSV毒株的比较研究,确定AH12株为疫苗生产用毒株并成功建立三级种子库。 展开更多
关键词 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒 灭活疫苗 三级种子批 毒种筛选
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感染复数对Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中增殖的影响 被引量:1
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作者 石慧颖 张冲 +8 位作者 李懿 杨永娟 宋冬梅 陈明 宁海 刘宇 赵敏 支惠 沈心亮 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第12期1087-1089,共3页
目的观察不同感染复数(MOI)对Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中增殖的影响。方法分别用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒感染Vero细胞,观察不同MOI致细胞病变情况,并检测病毒滴度。结果病毒感染Vero细胞后48h,3组MOI(0.001、0.01、0... 目的观察不同感染复数(MOI)对Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中增殖的影响。方法分别用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒感染Vero细胞,观察不同MOI致细胞病变情况,并检测病毒滴度。结果病毒感染Vero细胞后48h,3组MOI(0.001、0.01、0.1)细胞病变均达莞。Ⅰ型病毒增殖高峰出现在接种后72h,3组MOI病毒滴度分别为(8.690±0.190)、(8.690±0.190)和(8.315±0.185)lgCCID50/ml;Ⅱ型病毒增殖高峰出现在接种后96h,3组MOI病毒滴度分别为(8.355±0.097)、(8.440±0.310)和(8.285±0.155)lgCCID50/ml;Ⅲ型病毒增殖高峰出现在接种后48~96h,3组MOI病毒最高滴度分别为(7.500±0.250)、(7.500±0.250)和(7.750±0.250)lgCCID50/ml。结论不同MOI对3型病毒增殖影响不大,可以采用低MO(I0.001)制备疫苗。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎病毒 Sabin株 感染复数 病毒增殖 灭活疫苗
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Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞上的传代稳定性
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作者 李懿 宁海 +8 位作者 张冲 支惠 陈明 宋冬梅 马淑花 赵敏 王红燕 石慧颖 沈心亮 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第8期786-788,共3页
目的探讨Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞上的传代稳定性。方法用Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型分别以0.01、0.1和1MOI接种Vero细胞,进行传代培养,共传13代。采用微量细胞病变法测定病毒滴度;双抗体夹心法测定D抗原含量;免疫Wiste... 目的探讨Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞上的传代稳定性。方法用Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型分别以0.01、0.1和1MOI接种Vero细胞,进行传代培养,共传13代。采用微量细胞病变法测定病毒滴度;双抗体夹心法测定D抗原含量;免疫Wister大鼠,采用微量中和试验测定病毒的免疫原性。结果Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型在Vero细胞上连续传13代,病毒滴度基本稳定;D抗原含量呈下降趋势;免疫原性下降迅速。结论用Sabin株脊髓灰质炎病毒制备灭活疫苗,在Vero细胞上传代的代次越低越好。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎病毒 Sabin株 VERO细胞 传代 稳定性
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肠道病毒71型抗原定量检测方法的建立
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作者 陈蕾 吴蕴怡 +8 位作者 鲁卫卫 马淑花 郭会杰 刘宇 宁海 田龙 陈明 戴新宪 李秀玲 《国际生物制品学杂志》 CAS 2017年第1期18-23,共6页
目的 建立肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)抗原的定量检测方法,用于EV71疫苗生产过程中EV71抗原含量的监测.方法 用EV71抗原免疫新西兰兔制备抗EV71多克隆抗体,纯化后用辣根过氧化物酶标记.采用双抗体夹心ELISA法建立抗原检测系统.... 目的 建立肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)抗原的定量检测方法,用于EV71疫苗生产过程中EV71抗原含量的监测.方法 用EV71抗原免疫新西兰兔制备抗EV71多克隆抗体,纯化后用辣根过氧化物酶标记.采用双抗体夹心ELISA法建立抗原检测系统.以EV71国家抗原标准品为定量标准,建立剂量反应曲线,确定该方法的线性范围和定量限,并对该方法的特异性、精密度、准确性、稳定性及适用性等进行验证.结果 建立的ELISA法的线性范围为5~80 U/ml,定量限为5 U/ml,线性决定系数均大于0.990 0;不同浓度样品回收率为85.0%~110.0%,变异系数均小于15%;置于2~8℃及37℃3、6d的抗体包被板对不同浓度样品的检测值变异系数均小于15%;该方法可特异性检测EV71原液,与非EV71样品无交叉反应.结论 建立了EV71抗原定量检测方法,为EV71疫苗生产工艺过程的质量控制奠定了基础. 展开更多
关键词 肠道病毒A型 定量分析 酶联免疫吸附测定
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