目的采用非靶向代谢组学与转录组学技术分析乙型肝炎(hepatitis B virus,HBV)相关性肝细胞癌细胞差异表达的基因及代谢物,探讨HBV相关性肝细胞癌潜在的早期诊断标志物。方法取对数生长期Huh7细胞,分为实验组(转染HBV质粒)和对照组(转染...目的采用非靶向代谢组学与转录组学技术分析乙型肝炎(hepatitis B virus,HBV)相关性肝细胞癌细胞差异表达的基因及代谢物,探讨HBV相关性肝细胞癌潜在的早期诊断标志物。方法取对数生长期Huh7细胞,分为实验组(转染HBV质粒)和对照组(转染空载质粒),转染48 h采用Western blot法检测2组乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、乙肝核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)蛋白相对表达量;提取2组细胞代谢物进行液相色谱-质谱分析并筛选出差异表达代谢物,进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析;提取2组细胞总RNA进行全转录组测序并筛选出差异表达基因,进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析、KEGG富集分析;应用Pearson相关法和KEGG富集分析法分析差异表达基因与差异表达代谢物的相关性。结果转染48 h,实验组细胞HBsAg、HBcAg蛋白相对表达量(0.45±0.04、1.01±0.07)均高于对照组(0.10±0.05、0.25±0.06)(t=9.459,P=0.011;t=14.286,P=0.005)。实验组与对照组显著差异表达代谢物有90个,与对照组比较,实验组57个代谢物表达上调,33个代谢物表达下调;差异代谢物主要在亚油酸代谢、丙酮酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、生物素代谢、视黄醇代谢等代谢通路上富集。实验组与对照组差异表达基因有431个,与对照组比较,实验组387个基因表达上调,44个基因表达下调;差异表达的基因主要在胶原蛋白结合、急性时相反应、胶原蛋白分解代谢、细胞外基质结合等条目上富集;差异表达基因高富集于紧密连接、细胞黏附分子、环磷酸腺苷信号通路等。差异表达基因和差异表达代谢物共同富集于氨基酸代谢、辅助因子和维生素、脂质代谢、碳水化合物代谢等通路。本研究绘制了明显差异表达的18个基因和15个代谢物的关联网络图。结论HBV感染使18个基因差异表达并导致肝�展开更多
目的观察人源干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)激动剂G10抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)作用。方法采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法从健康志愿者全血分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear...目的观察人源干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)激动剂G10抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)作用。方法采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法从健康志愿者全血分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMCs),采用不同浓度的G10处理,qRT-PCR法检测PBMCs、细胞IFN-β、TNF-α、IL-28A、IL-29mRNA表达和人单核细胞(THP1)IFN-β mRNA表达。用不同浓度G10处理过的THP1上清液刺激HepAD38细胞,采用qRT-PCR法检测HBVDNA表达水平。结果G10处理的PBMCsIFN-β、TNF-α、IL-28A、IL-29 mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05),以诱导IFN-β表达作用最强,可上调达678倍,并呈剂量依赖性。与对照组相比,G10显著上调THP1细胞表达INF-β mRNA(P<0.05),在G1050μmol/L时达峰值。与对照组相比,G10明显抑制HepAD38细胞HBVDNA,最高抑制率可达14.8%。而G10直接刺激HepAD38细胞却无类似效应。结论人源STING激动剂G10能够诱导PBMCs和THP1分泌IFN-β为主的细胞因子。该研究证实了激活STING通路能够诱导细胞因子表达发挥抗HBV作用,同时也证实开发人源小分子STING激动剂作为治疗慢性乙型肝炎的免疫治疗是可行的。展开更多
文摘目的采用非靶向代谢组学与转录组学技术分析乙型肝炎(hepatitis B virus,HBV)相关性肝细胞癌细胞差异表达的基因及代谢物,探讨HBV相关性肝细胞癌潜在的早期诊断标志物。方法取对数生长期Huh7细胞,分为实验组(转染HBV质粒)和对照组(转染空载质粒),转染48 h采用Western blot法检测2组乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、乙肝核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)蛋白相对表达量;提取2组细胞代谢物进行液相色谱-质谱分析并筛选出差异表达代谢物,进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析;提取2组细胞总RNA进行全转录组测序并筛选出差异表达基因,进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析、KEGG富集分析;应用Pearson相关法和KEGG富集分析法分析差异表达基因与差异表达代谢物的相关性。结果转染48 h,实验组细胞HBsAg、HBcAg蛋白相对表达量(0.45±0.04、1.01±0.07)均高于对照组(0.10±0.05、0.25±0.06)(t=9.459,P=0.011;t=14.286,P=0.005)。实验组与对照组显著差异表达代谢物有90个,与对照组比较,实验组57个代谢物表达上调,33个代谢物表达下调;差异代谢物主要在亚油酸代谢、丙酮酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、生物素代谢、视黄醇代谢等代谢通路上富集。实验组与对照组差异表达基因有431个,与对照组比较,实验组387个基因表达上调,44个基因表达下调;差异表达的基因主要在胶原蛋白结合、急性时相反应、胶原蛋白分解代谢、细胞外基质结合等条目上富集;差异表达基因高富集于紧密连接、细胞黏附分子、环磷酸腺苷信号通路等。差异表达基因和差异表达代谢物共同富集于氨基酸代谢、辅助因子和维生素、脂质代谢、碳水化合物代谢等通路。本研究绘制了明显差异表达的18个基因和15个代谢物的关联网络图。结论HBV感染使18个基因差异表达并导致肝�
