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丁香疫霉菌RPA/CRISPR-Cas12a快速检测方法的建立 被引量：6
1
作者 雷荣 孙夕雯 +5 位作者 江丽 王振华 李国庆 李远 廖晓玲 吴品珊 《植物检疫》 2022年第3期31-38,共8页
丁香疫霉病菌(Phytophthora syringae,PS)造成数十种蔷薇科植物严重病害,是我国的植物检疫性有害生物。本研究根据GenBank中PS的Ras-like protein(Ypt1)基因,建立重组酶聚合酶等温扩增结合CRISPR-Cas12a系统的荧光法和侧向流层析试纸条... 丁香疫霉病菌(Phytophthora syringae,PS)造成数十种蔷薇科植物严重病害,是我国的植物检疫性有害生物。本研究根据GenBank中PS的Ras-like protein(Ypt1)基因,建立重组酶聚合酶等温扩增结合CRISPR-Cas12a系统的荧光法和侧向流层析试纸条快速检测方法,以实现在田间或口岸快速、准确、灵敏检测丁香疫霉病菌的目的。本研究优化了RPA/CRISPR-Cas12a的反应条件,考察了特异性、灵敏度以及实际样品检测能力。结果表明,该方法37℃扩增40 min,能特异性地检测丁香疫霉菌,灵敏度为133 fg,与荧光定量PCR相当。本研究建立的快速检测方法可用于丁香疫霉菌的快速诊断。 展开更多
关键词 丁香疫霉病菌 重组酶聚合酶扩增 CRISPR-Cas12a 快速检测
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苜蓿轮枝菌RPA/CRISPR-Cas12a快速检测方法的建立
2
作者 李茗乐 雷荣 +6 位作者 杨藜 孙夕雯 杨益芬 王新一 范在丰 段维军 吴品珊 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期80-95,共16页
苜蓿轮枝菌Verticillium alfalfae是我国重要的进境植物检疫对象,能够对十几种作物造成严重危害。为了快速检测苜蓿轮枝菌,本研究选用苜蓿轮枝菌的特征序列扩增区域[sequence characterized amplified region(SCAR)marker]作为目标基因... 苜蓿轮枝菌Verticillium alfalfae是我国重要的进境植物检疫对象,能够对十几种作物造成严重危害。为了快速检测苜蓿轮枝菌,本研究选用苜蓿轮枝菌的特征序列扩增区域[sequence characterized amplified region(SCAR)marker]作为目标基因,设计了特异性引物Va-RPA-F/Va-RPA-R和CRISPR引导RNA(Va-crRNA),建立了重组酶聚合酶等温扩增技术结合CRISPR-Cas12a的快速检测方法。对该检测体系的反应时间、组分浓度等进行优化,结果显示苜蓿轮枝菌基因组DNA在39℃恒温条件下扩增30 min后,其扩增产物用基于CRISPR-Cas12a的荧光法和侧向流层析试纸条两种方法检测,可检测到10.6pg基因组DNA,其灵敏度与实时荧光定量PCR结果相当,加标回收实验结果证明本研究建立的方法可成功用于植物组织中苜蓿轮枝菌的快速检测。 展开更多
关键词 苜蓿轮枝菌 重组酶聚合酶等温扩增 CRISPR-Cas12a检测系统 快速检测
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基于重组酶介导等温扩增-侧流层析试纸条的玉米褪绿斑驳病毒快速检测方法 被引量：2
3
作者 邝瑞瑞 雷荣 +4 位作者 孙夕雯 赵振兴 焦志远 张永江 范在丰 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1457-1463,共7页
为快速和现场检测玉米褪绿斑驳病毒(maize chlorotic mottle virus,MCMV),根据MCMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因设计引物和探针,将一步法反转录重组酶介导的等温扩增(one-step reverse transcript recombinase-aid amplification,RT-R... 为快速和现场检测玉米褪绿斑驳病毒(maize chlorotic mottle virus,MCMV),根据MCMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因设计引物和探针,将一步法反转录重组酶介导的等温扩增(one-step reverse transcript recombinase-aid amplification,RT-RAA)技术与侧流层析试纸条(lateral flow assay,LFA)结合建立一种快速检测MCMV的方法,对该方法的探针浓度、反应温度和反应时间进行优化,并对优化后方法的特异性和灵敏度进行检测。结果表明,该检测方法的最佳探针浓度为0.02μmol/L,最佳反应温度为37℃,最佳反应时间为8 min;该检测方法的特异性强且对MCMV RNA的检测灵敏度为8.6×10^(-6) ng/μL,比常规RT-PCR方法的灵敏度提高10倍,对MCMV CP质粒DNA拷贝数的检测灵敏度为92.5 copies/μL,比常规RT-PCR方法的灵敏度提高10倍;该检测方法用时短,约13 min,其中RT-RAA仅需8 min,LFA仅需5 min,且操作简单,可用于MCMV的实时监测及病害的田间快速诊断。 展开更多
关键词 玉米褪绿斑驳病毒 等温扩增 侧流层析试纸条 外壳蛋白
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内心渴望与社会现实的碰撞——析《雨中的猫》空间场景的象征意蕴 被引量：1
4
作者 孙夕雯 《海外英语》 2014年第6X期196-196,198,共2页
《雨中的猫》是海明威最优秀的短篇小说之一,通过简练的语言、变换的场景,海明威生动细腻地反映了小说两性冲突这一主题内涵。该文通过分析空间场景的象征手法,来解读当时社会女性力图挣脱传统性别角色束缚,改变社会地位的内心渴望,以... 《雨中的猫》是海明威最优秀的短篇小说之一,通过简练的语言、变换的场景,海明威生动细腻地反映了小说两性冲突这一主题内涵。该文通过分析空间场景的象征手法,来解读当时社会女性力图挣脱传统性别角色束缚,改变社会地位的内心渴望,以期为读者更好的领略这篇小说的艺术魅力提供新的视角。 展开更多
关键词 《雨中的猫》 海明威 空间场景 象征意蕴
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创新打造“没有围墙的议事厅”
5
作者 叶笑影 孙夕雯 《村委主任》 2019年第8期17-18,共2页
“上次提出的村庄'形象’提升问题已经解决,村庄一下子亮堂了许多。”“种粮大户越来越多,机械化种植也越来越普遍,希望能把村里的路拓宽,方便农机下田作业……”近日,在江苏省海安市墩头镇墩头村,乡村观察员陈守明一边和村民们聊... “上次提出的村庄'形象’提升问题已经解决,村庄一下子亮堂了许多。”“种粮大户越来越多,机械化种植也越来越普遍,希望能把村里的路拓宽,方便农机下田作业……”近日,在江苏省海安市墩头镇墩头村,乡村观察员陈守明一边和村民们聊着家常,一边记录大家提出的农民失地保障、灌溉车口年久失修等问题,并承诺反馈给市、镇人大代表,切实帮助群众排忧解难。 展开更多
关键词 围墙 创新 机械化种植 提升问题 种粮大户 人大代表 江苏省 墩头
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