鸡IFN-α和IFN-β及IFN-γ基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：17

1

作者 张贺楠 赖汉漳 +4 位作者 齐岩 孔留五 张小桃 曹伟胜 廖明 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期173-177,共5页

根据GenBank上鸡α-、β-、γ-干扰素（ChIFNα-、β-、γ-）基因的序列，在保守区设计并合成各自特异引物，并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶（GAPDH）基因为内参，采用SYBRGreen工染料以建立实时荧光定量PCR检测方法。将IFNα-、β-、γ-基因... 根据GenBank上鸡α-、β-、γ-干扰素（ChIFNα-、β-、γ-）基因的序列，在保守区设计并合成各自特异引物，并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶（GAPDH）基因为内参，采用SYBRGreen工染料以建立实时荧光定量PCR检测方法。将IFNα-、β-、γ-基因克隆至pGEM-T载体上，以各阳性质粒作为标准品，构建标准曲线，并进行了熔解曲线分析。结果表明，鸡IFNα-、β-、γ-和GAPDH基因的C1值与标准品稀释度在1×10^2～1×10^8 copies／μL范围分别呈良好的线性关系，r^2均大于0．990。熔解曲线分析表明，产物为特异的单峰，检测周期从RNA提取到荧光定量PCR结束只需4h。建立的鸡IFNα-、β-、γ-基N实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短，为在mRNA水平对鸡IFN的定量分析奠定了基础。 展开更多

关键词 实时荧光定量PCR 鸡 Α-干扰素 Β-干扰素 γ-干扰素

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猪圆环病毒2型环介导等温扩增(LAMP)检测方法的研究 被引量：15

2

作者 何逸民 邹国秋 +6 位作者 张得玉 罗玉均 曹宗喜 何冉娅 秦宏阳 孔留五 张桂红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第12期7-10,共4页

本研究介绍了一种便捷、灵敏而又特异的环介导逆转录等温扩增(LAMP)基因检测技术,该技术分别使用特异对应于靶序列中2对特殊引物,并在Bst DNA聚合酶的作用下对靶序列进行等温核酸扩增反应。本研究对LAMP反应体系和反应条件的优化,结果表... 本研究介绍了一种便捷、灵敏而又特异的环介导逆转录等温扩增(LAMP)基因检测技术,该技术分别使用特异对应于靶序列中2对特殊引物,并在Bst DNA聚合酶的作用下对靶序列进行等温核酸扩增反应。本研究对LAMP反应体系和反应条件的优化,结果表明PCV-2 LAMP在63℃1 h内能够成功的检测猪圆环病毒2型基因;敏感性和特异性试验表明,本研究能够特异的检测PCV-2并且其敏感度可以达到10个拷贝的DNA分子,初步研究LAMP的阳性检出率与PCR的阳性检出率比较结果为94%符合。以上结果证明,LAMP扩增技术是一种检测程序简便、灵敏度和特异性较高的基因检测手段,在猪圆环病毒2型的快速检测方面具有一定的开发潜力。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型(PCV-2) 环介导等温扩增(LAMP) 敏感性 特异性 快速检测

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应用RT-PCR检测鸭肝炎病毒Ⅰ型感染 被引量：6

3

作者 罗玉均 张桂红 +5 位作者 陈建红 张济培 潘全会 钟植文 何逸民 孔留五 《广东畜牧兽医科技》 2007年第3期20-21,共2页

鸭肝炎病毒Ⅰ型（duck hepatitis virus Ⅰ，DHVⅠ）感染是雏鸭的一种急性高度致死性传染病，主要侵害4周龄以内的雏鸭，特别是1周龄以下的雏鸭最易感染，死亡率较高，是危害养鸭业最为严重的传染病之。1945年在美国首次发现，我国于196... 鸭肝炎病毒Ⅰ型（duck hepatitis virus Ⅰ，DHVⅠ）感染是雏鸭的一种急性高度致死性传染病，主要侵害4周龄以内的雏鸭，特别是1周龄以下的雏鸭最易感染，死亡率较高，是危害养鸭业最为严重的传染病之。1945年在美国首次发现，我国于1963年在上海首次报道了该病的临床病例，至今，全国各养鸭地区均有不同程度的发生和流行。目前，已有多种检测DHVI抗原的方法， 展开更多

关键词 鸭肝炎病毒 PCR检测 感染 Ⅰ型 RT 应用 VIRUS 临床病例

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I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：8

4

作者 孔留五 罗玉均 +5 位作者 张桂红 陈建红 徐小芹 廖明 康艳梅 何逸民 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1068-1071,共4页

根据GenBank中的I型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因的引物,用该特异性表达引物从I型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1、3D,用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,转... 根据GenBank中的I型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因的引物,用该特异性表达引物从I型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1、3D,用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,转化宿主BL21(DE3),用不同浓度的IPTG诱导VP1、3D基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1、3D在大肠杆菌中表达量较高,表达产物的分子量约为48kD、68kD,并能被兔抗DHV-1血清所识别。I型鸭肝炎病毒VP1、3D蛋白在大肠杆菌中表达产物具有免疫原性。 展开更多

关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒 VP1基因 3D基因 克隆表达

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猪繁殖与呼吸综合征病毒各结构蛋白的融合表达 被引量：6

5

作者 曹宗喜 潘全会 +6 位作者 张原江 常智杰 罗玉均 何逸民 孔留五 秦宏阳 张桂红 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期85-88,共4页

本研究以测序质粒为模板,扩增出结构蛋白基因ORF2a-ORF7,将此基因片段插入真核表达载体pEGFP-N3中构建重组质粒pEGFP-N3-(ORF2a～ORF7),然后将重组表达质粒转染293T细胞。通过荧光显微镜观察显示,重组质粒pEGFP-N3-(ORF2a～ORF7)和载体p... 本研究以测序质粒为模板,扩增出结构蛋白基因ORF2a-ORF7,将此基因片段插入真核表达载体pEGFP-N3中构建重组质粒pEGFP-N3-(ORF2a～ORF7),然后将重组表达质粒转染293T细胞。通过荧光显微镜观察显示,重组质粒pEGFP-N3-(ORF2a～ORF7)和载体pEGFP-N3均有绿色荧光出现。SDS-PAGE电泳和western blot分析结果表明重组质粒pEGFP-N3-(ORF2a～ORF7)和载体pEGFP-N3均有EGFP表达;仅ORF7有43ku的融合蛋白EGFP出现,与预期大小相符;其他重组质粒pEGFP-N3-(ORF2a～ORF6)均没有融合蛋白出现。本实验为进一步研究这些蛋白的结构和生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 结构蛋白 真核表达

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猪圆环病毒2型对BALB／c小鼠的感染试验研究 被引量：5

6

作者 罗玉均 张桂红 +6 位作者 陈建红 徐小芹 廖明 任涛 罗开健 何逸民 孔留五 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第10期55-57,共3页

关键词 猪圆环病毒2型 BALB/C小鼠 感染试验 断奶仔猪多系统衰竭综合征 PCV2 DNA病毒 细胞培养物 动物病毒

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猪生殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量：5

7

作者 张得玉 康艳梅 +4 位作者 张翔峰 秦宏阳 孔留五 曹宗喜 张桂红 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期890-893,共4页

针对美洲型猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守的N蛋白基因设计了一套RT-LAMP的检测引物,通过优化反应条件,建立了一种检测PRRSV的RT-LAMP诊断方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测美洲型PRRSV,其最低检测限为10个拷... 针对美洲型猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守的N蛋白基因设计了一套RT-LAMP的检测引物,通过优化反应条件,建立了一种检测PRRSV的RT-LAMP诊断方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测美洲型PRRSV,其最低检测限为10个拷贝,而RT-PCR的最低检出限为1×104个拷贝。分别用建立的RT-LAMP法与RT-PCR法对临床50份样品进行检测,结果二者的符合率在96%以上,呈现很好的一致性。表明,建立的RT-LAMP法可应用于PRRSV的快速检测。 展开更多

关键词 猪生殖与呼吸综合征病毒 逆转录环介导恒温核酸扩增 诊断

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2株猪圆环病毒2型分离毒株全基因组的克隆及序列分析 被引量：4

8

作者 何逸民 孔留五 +3 位作者 罗玉均 潘全会 曹宗喜 张桂红 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期80-84,共5页

参考GenBank发表的猪圆环病毒2型（PCV2）全基因组序列，设计2对引物，通过PCR技术扩增出2株PCV2流行株的全基因，并进行了序列测定分析．结果表明，2个分离株基因组全长分别为1767bp和1768bp，2个分离株之间的核苷酸相似性为97．3％，... 参考GenBank发表的猪圆环病毒2型（PCV2）全基因组序列，设计2对引物，通过PCR技术扩增出2株PCV2流行株的全基因，并进行了序列测定分析．结果表明，2个分离株基因组全长分别为1767bp和1768bp，2个分离株之间的核苷酸相似性为97．3％，与GenBank上已发表的PCV2分离株之间的相似性为93．8％-99．3％．2个分离株的ORF2核苷酸序列相似性分别为91．3％-99．6％和90．6％-98．0％，存在一定的变异． 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 克隆 序列分析

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两株猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆和序列分析 被引量：4

9

作者 何逸民 罗玉均 +5 位作者 潘全会 吴翠花 曹宗喜 孔留五 李少方 张桂红 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期4-7,共4页

根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,从分离的PCV-2GZ株、HN株的细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp)。将此基因片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2,并对其测序。结果表明,所克隆的ORF2基因与其他... 根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,从分离的PCV-2GZ株、HN株的细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp)。将此基因片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2,并对其测序。结果表明,所克隆的ORF2基因与其他PCV-2的ORF2基因核苷酸序列同源性在90.6%～99.6%之间,推导的氨基酸序列同源性在88.9%～98.7%之间。 展开更多

关键词 圆环病毒2型 ORF2 序列分析

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PRRSV广东株XH-GD的分离及其NSP2、ORF3、ORF5的序列分析 被引量：3

10

作者 曹宗喜 潘全会 +3 位作者 林哲敏 孔留五 何逸民 张桂红 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期159-163,共5页

将采集的广东某猪场疑似猪高热症病料处理后接种于Marc-145细胞,出现细胞聚集、固缩、脱落等特异性细胞病变。根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因序列设计并合成针对NSP2、ORF3和ORF5基因的引物,扩增目的基因并测序分析... 将采集的广东某猪场疑似猪高热症病料处理后接种于Marc-145细胞,出现细胞聚集、固缩、脱落等特异性细胞病变。根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因序列设计并合成针对NSP2、ORF3和ORF5基因的引物,扩增目的基因并测序分析。结果表明:分离毒株XH-GD株PRRRSV属于美洲型,且NSP2基因发生30个氨基酸的不连续缺失;XH-GD的NSP2、ORF3和ORF5基因与HUB1、NX06、BJsy06、VR-2332、HB-1(sh)2002、HB-2(sh)2002、CH-la和RespPRRS MLV等毒株等位基因的核苷酸同源性分别为83.3%-98.9%、88.6%-99.2%、88.1%-99.2%,推导的氨基酸同源性分别为76.8%-98.3%、83.7%-98.8%、88.1%-99.2%;而与LV的等位基因核苷酸同源性分别为52.9%、65.0%和64.3%,推导的氨基酸同源性分别为31.3%、57.5%和58.9%。基因系统发育树分析表明,XH-GD与NX06、BJsy06株的亲缘关系很近,与HUB1、NX06、BJsy06、VR-2332、HB-1(sh)2002、HB-2(sh)2002、CH-la和RespPRRS MLV亲缘关系较近,与LV毒株处于不同的分支。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 XH—GD毒株 序列分析

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对Ⅰ型鸭肝炎病毒3D基因克隆及其原核表达的研究 被引量：3

11

作者 孔留五 康艳梅 +3 位作者 何逸民 罗玉均 潘全会 张桂红 《四川畜牧兽医》 2009年第2期25-27,共3页

根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列,应用Primer 5.0分析软件设计合成了扩增I型鸭肝炎病毒3D基因的一对引物,用该特异性表达引物体外克隆Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒3D基因,构建重组表达质粒pET32a-3D,将此重组质粒转化到受体菌Rosseta... 根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列,应用Primer 5.0分析软件设计合成了扩增I型鸭肝炎病毒3D基因的一对引物,用该特异性表达引物体外克隆Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒3D基因,构建重组表达质粒pET32a-3D,将此重组质粒转化到受体菌RossetaⅡ(DE3)中进行诱导表达。SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表明,诱导4 h后表达量达到最高,表达产物大小约为70 Ku,表达蛋白能与I型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应。 展开更多

关键词 鸭病毒性肝炎病毒(DHV) 3D基因 诱导表达

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猪圆环病毒2型感染对小鼠脾脏中IFN-γ基因表达的影响 被引量：2

12

作者 何冉娅 孙伟 +5 位作者 罗玉均 冯春复 何逸民 张得玉 孔留五 张桂红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第2期75-77,共3页

本研究对PCV-2感染对小鼠组织中IFN-γ基因表达的影响进行了分析。分别取各基因RT-PCR扩增的回收产物进行序列稀释（10-1-10-6）,再进行实时荧光定量PCR扩增,扩增完毕后,进行熔解曲线分析,相对定量检测了PCV-2感染小鼠脾脏不同时段IFN-... 本研究对PCV-2感染对小鼠组织中IFN-γ基因表达的影响进行了分析。分别取各基因RT-PCR扩增的回收产物进行序列稀释（10-1-10-6）,再进行实时荧光定量PCR扩增,扩增完毕后,进行熔解曲线分析,相对定量检测了PCV-2感染小鼠脾脏不同时段IFN-γ基因的表达水平。试验结果表明,得到定量标准曲线,起始模板浓度与Ct值之间呈良好的线性关系,-βactin基因标准曲线为y=-3.32x＋31.57,IFN-γ基因标准曲线为y=3.43x＋45.83,PCV-2感染小鼠后脾脏IFN-γ基因表达水平升高,但第14~28天IFN-γ基因表达水平呈下降趋势。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 小鼠 脾脏 IFN-Γ基因

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Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因克隆及其原核表达 被引量：2

13

作者 孔留五 康艳梅 +3 位作者 何逸民 李小康 潘全会 张桂红 《上海畜牧兽医通讯》 2009年第2期8-10,共3页

根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的包含有EcoRV和XhoⅠ酶切位点的引物,用该特异性引物从Ⅰ型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1,以相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后... 根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的包含有EcoRV和XhoⅠ酶切位点的引物,用该特异性引物从Ⅰ型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1,以相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序证明目的基因正确插入了表达载体,转化宿主菌RossetaⅡ,用不同浓度的IPTG诱导VP1基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1在大肠杆菌RossetaⅡ中表达量较高,表达产物的分子量约为48 ku、并能被Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清所识别。Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白在大肠杆菌RossetaⅡ中表达产物具有免疫原性。 展开更多

关键词 Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒 VP1基因 诱导表达

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猪圆环病毒2型ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5重组杆状病毒疫苗的研究 被引量：1

14

作者 张翔峰 何逸民 +4 位作者 曹宗喜 孔留五 张得玉 秦宏阳 张桂红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第9期62-67,共6页

参照GenBank上收录的基因组序列自行设计引物,分别扩增猪圆环病毒2型ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5。将外源基因分别插入经改造的杆状病毒穿梭载体pFVC,获得3种重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2。将重组质粒pFVC-ORF2... 参照GenBank上收录的基因组序列自行设计引物,分别扩增猪圆环病毒2型ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5。将外源基因分别插入经改造的杆状病毒穿梭载体pFVC,获得3种重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2。将重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2分别转入带有杆状病毒骨架的DH10BacTME.coli感受态细胞中。提取高质量的重组质粒rBacmid-ORF2、rBacmid-ORF5、rBacmid-ORF5-ORF2,将重组质粒转染Sf9细胞,获取重组病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2。通过间接免疫荧光检测证实了外源基因正确表达。重组杆状病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2对BALB/c小鼠的免疫试验结果显示,rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2均能够刺激小鼠机体产生免疫应答,产生抗体,并能持续较长时间。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征病毒 重组杆状病毒 BALB/c小鼠免疫试验

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猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株RT-PCR鉴别诊断方法的建立 被引量：1

15

作者 孔留五 何逸民 +6 位作者 康艳梅 罗玉均 李小康 潘全会 李少方 吴翠花 张桂红 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第1期71-72,共2页

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 RT-PCR鉴别 诊断方法 变异株 virus 基因组结构 开放阅读框 呼吸道症状

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河南省新大牧业有限公司猪伪狂犬病净化经验

16

作者 孔留五 《中国畜牧业》 2017年第1期37-38,共2页

动物疫病净化对养殖企业来说，是一项综合而又具体的工作，更是关系企业效益的重要工作。一、净化工作思路要明确动物疫病净化工作是河南省新大牧业有限公司防控动物疫病的主要手段，也是工作目标，通过生产实践和摸索，证明净化工作开... 动物疫病净化对养殖企业来说，是一项综合而又具体的工作，更是关系企业效益的重要工作。一、净化工作思路要明确动物疫病净化工作是河南省新大牧业有限公司防控动物疫病的主要手段，也是工作目标，通过生产实践和摸索，证明净化工作开展的顺利与否、成效如何，工作思路一定要明确。目前无论围绕哪个病开展净化工作，关键抓4项重点工作：一是完善生物安全体系；二是制定合理的监测、检测、淘汰计划；三是做好科学的免疫防控制度；四是规范现场管理，提高执行力。 展开更多

关键词 疫病净化 河南省 猪伪狂犬病 牧业 净化工作 动物疫病 生物安全体系 养殖企业

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PRRSV变异株ORF6基因重组杆状病毒的构建及其在昆虫细胞的表达 被引量：3

17

作者 曹宗喜 潘全会 +7 位作者 齐岩 孔留五 何逸民 罗玉均 秦宏阳 张翔峰 张得玉 张桂红 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期261-265,共5页

参照GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XH-GD株ORF6(M蛋白)基因序列,设计合成了一对引物,扩增PRRSV ORF6基因。将该基因克隆于转移质粒载体pFcDNA3.1(+)中,获得重组转移质粒pFcDNA3.1-ORF6并将其转化DH10Bac细胞,得到重组... 参照GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XH-GD株ORF6(M蛋白)基因序列,设计合成了一对引物,扩增PRRSV ORF6基因。将该基因克隆于转移质粒载体pFcDNA3.1(+)中,获得重组转移质粒pFcDNA3.1-ORF6并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒Bacmid-ORF6,再将其转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBacmid-ORF6,经PCR鉴定证实目的基因正确地插入到杆状病毒基因组的CMV启动子下游;经过间接免疫荧光试验(IFA)检测,M蛋白在Sf9细胞中得到了表达,而且表达的产物具有特异免疫学反应性。 展开更多

关键词 PRRSV 杆状病毒表达 克隆

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量RT-PCR鉴别诊断方法的建立

18

作者 孔留五 张桂红 +5 位作者 姜增固 康艳梅 秦宏阳 曹宗喜 张得玉 张翔峰 《广东畜牧兽医科技》 2009年第6期25-29,共5页

根据GenBank收录的PRRSV基因序列,利用PRRSV经典变异株与缺失变异株NSP2基因序列特点,设计合成两对特异性引物,经RT-PCR扩增后,用T4连接酶将目的片段与pMD18-T载体连接,并转化到大肠杆菌DH-5a株感受态细胞。提取的质粒经PCR、酶切和测... 根据GenBank收录的PRRSV基因序列,利用PRRSV经典变异株与缺失变异株NSP2基因序列特点,设计合成两对特异性引物,经RT-PCR扩增后,用T4连接酶将目的片段与pMD18-T载体连接,并转化到大肠杆菌DH-5a株感受态细胞。提取的质粒经PCR、酶切和测序鉴定,证实为PRRSV缺失变异株与经典变异株的阳性重组质粒。将重组标准质粒进行10倍系列稀释后作为模板,通过实时荧光定量PCR法(Real-timePCR),建立了PRRSV缺失变异株与经典变异株的标准曲线及其直线回归方程,并确定其最佳读板温度。该方法具有线性关系好、特异性强、敏感性高、重复性好等特点,为鉴别诊断及分析PRRSV缺失变异株与经典变异株感染猪体内病毒的绝对含量提供了技术手段。 展开更多

关键词 PRRSV 实时荧光定量 鉴别诊断 绝对含量

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猪圆环病毒研究进展

19

作者 黄建明 李华周 +2 位作者 孔留五 于淼 张桂红 《猪业观察》 2014年第11期106-109,共4页

猪圆环病毒（PCV）是迄今发现的一种最小的动物病毒,是一种重要的病原微生物。PCV具有PCV1和PCV2两种基因型。PCV1无有致病性,但广泛存在猪体内及猪源代细胞系,PCV2具有致病性,主要引起猪断奶后多系统衰竭综合征。1991年,在加拿大首次暴... 猪圆环病毒（PCV）是迄今发现的一种最小的动物病毒,是一种重要的病原微生物。PCV具有PCV1和PCV2两种基因型。PCV1无有致病性,但广泛存在猪体内及猪源代细胞系,PCV2具有致病性,主要引起猪断奶后多系统衰竭综合征。1991年,在加拿大首次暴发,随后,美国、英国、德国、法国、爱尔兰、捷克、西班牙、中国台湾、荷兰、瑞士、阿根廷、墨西哥、日本、丹麦、意大利、韩国、匈牙利、泰国、中国等国家和地区都有该病的报道，该病主要导致多系统病理损伤和进行性消瘦，已给养猪业造相当严重的经济损失。 展开更多

关键词 猪圆环病毒 猪断奶后多系统衰竭综合征 PCV2 病原微生物 动物病毒 病理损伤 经济损失 致病性

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