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CRISPR/Cas9技术敲除酿酒酵母gpd2基因对产2,3-丁二醇的影响 被引量：5
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作者 刘磊 李娜 +3 位作者 姜雪雍 孙健 吕雨泽 葛菁萍 《中国农学通报》 2020年第29期69-77,共9页
旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除酿酒酵母甘油-3-磷酸脱氢酶基因(gpd2),探究其对2,3-丁二醇产量的影响。根据酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)W5甘油-3-磷酸脱氢酶基因(gpd2)设计供体片段及gRNA片段,将gRNA片段与可表达Cas9蛋... 旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除酿酒酵母甘油-3-磷酸脱氢酶基因(gpd2),探究其对2,3-丁二醇产量的影响。根据酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)W5甘油-3-磷酸脱氢酶基因(gpd2)设计供体片段及gRNA片段,将gRNA片段与可表达Cas9蛋白的敲除载体相连,之后将重组质粒及供体DNA片段转化到S.cerevisiae W5细胞中,根据表型筛选及PCR验证获得gpd2基因缺失菌株。结果表明目的基因gpd2敲除成功,基因缺失菌株与原始菌株经发酵实验相比,甘油产量下降22.01%,乙醇产量提高24.65%,2,3-丁二醇产量下降10.60%。gpd2基因的敲除并没有提高2,3-丁二醇的产量,原因可能是逐渐积累的NADH会优先被细胞内大量的乙醇脱氢酶所氧化,作用于乙醇的产生,而不是优先作用于2,3-丁二醇的合成。本实验构建了适用于酿酒酵母的基因敲除系统,该系统对进一步探究酿酒酵母其他代谢产物与2,3-丁二醇合成之间的关系具有实际的借鉴意义。 展开更多
关键词 酿酒酵母 CRISPR/Cas9 2 3-丁二醇 载体构建 代谢工程
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副干酪乳杆菌与芽孢杆菌属共培养种间关系对产细菌素的影响 被引量：3
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作者 姜雪雍 岳元春 +3 位作者 孙养存 高冬妮 平文祥 葛菁萍 《中国农学通报》 2021年第24期124-132,共9页
为使芽孢杆菌属与副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)通过种间信息交流形成稳定的小生态环境,加大芽孢杆菌属的初始接种量,来探究L.paracasei HD1.7与其共培养的生态学关系。结果表明,将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)与L.paracas... 为使芽孢杆菌属与副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)通过种间信息交流形成稳定的小生态环境,加大芽孢杆菌属的初始接种量,来探究L.paracasei HD1.7与其共培养的生态学关系。结果表明,将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)与L.paracasei HD1.7以5%:1%的初始接种比例共培养,L.paracasei HD1.7所产细菌素为其单培养的1.21倍,群体感应相关基因luxS,prcK和prcR分别上调表达3.14、4.98和5.41倍。同时,B.subtilis形成更多的芽孢以回避细菌素的攻击,芽孢形成相关基因spo0A,sigE,sigF和sigG分别上调2.37、2.71、3.15和2.56倍。此时,二者形成了一种协同合作的生态关系。冗余分析结果表明,共培养体系中与细菌素产生关系最为密切的是芽孢数量、培养时间以及B.subtilis活菌数。L.paracasei HD1.7与芽孢杆菌属之间存在不同的生态关系,有与之共培养后对L.paracasei HD1.7偏利的芽孢杆菌,也存在对其偏害的芽孢杆菌。 展开更多
关键词 副干酪乳杆菌 芽孢杆菌属 共培养 细菌素 种间关系 次生代谢产物 生物胁迫
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