松嫩平原盐碱地中耐(嗜)盐菌的生物多样性 被引量：14

1

作者 潘媛媛 黄海鹏 +7 位作者 孟婧 肖鸿禹 李成 孟琳 洪闪 刘贺男 王雪枫 姜巨全 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1187-1194,共8页

【目的】分离纯化松嫩平原盐碱地中可培养的耐盐菌和嗜盐菌,并分析其生物多样性。【方法】采用纯培养法和定向富集法从该地区盐碱土样中分离耐盐菌和嗜盐菌,然后通过16S rRNA基因同源性比对鉴定所分离细菌的系统发育学地位,从而获取松... 【目的】分离纯化松嫩平原盐碱地中可培养的耐盐菌和嗜盐菌,并分析其生物多样性。【方法】采用纯培养法和定向富集法从该地区盐碱土样中分离耐盐菌和嗜盐菌,然后通过16S rRNA基因同源性比对鉴定所分离细菌的系统发育学地位,从而获取松嫩平原盐碱地中耐盐菌和嗜盐菌的多样性信息。【结果】共分离到细菌40株,分属于细菌域中3个门(Actinobacteria,Firmicutes,γ-Proteobacteria)、8个科、16个属、34个种。其中多数菌株属于厚壁菌门(Firmicutes),最优势属为葡球菌属(Staphylococcus)(8株,占总菌株的20%),其次依次为盐单胞菌属(Halomonas)(5株,12.5%)、芽胞杆菌属(Bacillus)(4株,10%)、大洋芽胞杆菌属(Oceanbacillus)(4株,10%)、库克菌属(Kocuria)(4株,10%)和假单胞菌属(Pseudomonas)(3株,7.5%)等。其中9株细菌的16S rRNA基因序列与最近缘种的同源性在97.2%-99.0%之间,可能为新种。菌株耐盐能力主要在5%-10%之间,其中62.5%的菌株为耐盐菌,其余则为中度嗜盐菌。所有菌株的耐碱能力在pH 9-12之间,其中60%的菌株耐碱能力则高达pH 12,除两株为嗜碱菌,其余均为耐碱菌。【结论】研究结果表明,松嫩平原盐碱地中耐盐菌与嗜盐菌种群丰富,主要以葡萄球菌和盐单胞菌为主,菌株不仅耐盐能力高而且耐碱能力也高,并且该地区可能含有丰富的耐盐菌和嗜盐菌的新物种。 展开更多

关键词 耐盐菌 嗜盐菌 16S RRNA基因序列 生物多样性 松嫩平原盐碱地

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新型Na^(+)/H^(+)逆向转运蛋白UPF0118的Na^(+)结合鉴定

2

作者 李红洋 华贝杰 姜巨全 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期62-70,共9页

UPF0118蛋白是一种新型Na^(+)(Li^(+))/H^(+)逆向转运蛋白,属于AI-2E超家族,目前已被划分至Na^(+)/H^(+)逆向转运蛋白亚家族,但无直接证据表明该蛋白可与Na+产生相互作用。为鉴定UPF0118蛋白是否具有Na^(+)结合功能,利用PCR技术扩增upf0... UPF0118蛋白是一种新型Na^(+)(Li^(+))/H^(+)逆向转运蛋白,属于AI-2E超家族,目前已被划分至Na^(+)/H^(+)逆向转运蛋白亚家族,但无直接证据表明该蛋白可与Na+产生相互作用。为鉴定UPF0118蛋白是否具有Na^(+)结合功能,利用PCR技术扩增upf0118基因编码序列,通过Eco RⅠ和PstⅠ酶切位点构建至原核表达载体p ETDuet-1,转化至E. coli BL21*(DE3),对诱导后大量表达的蛋白进行Ni^(2+)亲和层析和凝胶过滤层析,利用等温滴定量热技术对纯化蛋白进行滴定。结果表明,在pH 5.5条件下,Na^(+)滴入导致蛋白溶液产生明显放热现象。在pH 5.5条件下该蛋白具有Na^(+)结合功能,证明该蛋白Na+结合功能为其功能单元与分子机制的研究奠定基础。 展开更多

关键词 UPF0118 Na^(+)/H^(+)逆向转运蛋白 等温滴定量热法 蛋白纯化

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中度嗜盐菌Halobacillus Y5甘氨酸甜菜碱转运蛋白opuD基因的克隆及功能分析 被引量：6

3

作者 王艳红 曹宁 +2 位作者 贾桂燕 余丽芸 姜巨全 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第3期258-263,共6页

目的克隆中度嗜盐菌Halobacillus Y5甘氨酸甜菜碱转运蛋白(betaine-choline-carnitine transporter,BCCT)opu D基因,对其结构及蛋白功能进行分析,并通过耐盐碱特性试验明确其功能。方法将经过Sau3AⅠ部分酶切回收的Halobacillus Y5基因... 目的克隆中度嗜盐菌Halobacillus Y5甘氨酸甜菜碱转运蛋白(betaine-choline-carnitine transporter,BCCT)opu D基因,对其结构及蛋白功能进行分析,并通过耐盐碱特性试验明确其功能。方法将经过Sau3AⅠ部分酶切回收的Halobacillus Y5基因组总DNA,与用Bam HⅠ酶切并去磷酸化的线性p UC18载体连接,电转化法导入E.coli KNabc感受态细胞中,涂布在含0.2 mol/L Na Cl、Amp^(50)的LBK固体培养基上,筛选阳性克隆,提取质粒测序后,进行生物信息学分析及耐盐碱特性检测。结果已从中度嗜盐菌-喜盐芽孢杆菌Halobacillus Y5中成功克隆了1个新的耐盐碱基因,将其命名为HY5_opu D,该基因是1个新的甘氨酸甜菜碱转运蛋白基因,其编码的蛋白氨基酸序列和结构不同于以往报道的Opu D转运蛋白,且该基因能够使KNabc在0.2 mol/L Na Cl、5 mmol/L Li Cl及碱性p H 8.0环境下生长。结论成功克隆了1个新型的opu D转运蛋白基因,为开发利用中度嗜盐菌的耐盐碱基因奠定了理论基础。 展开更多

关键词 中度嗜盐菌 甘氨酸甜菜碱转运蛋白 基因克隆

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乳酸克鲁维酵母表面展示系统研究

4

作者 姜巨全 安吉一 +2 位作者 商娜 刘文婷 郑迎迎 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期39-45,57,共8页

酵母表面展示技术通过将目标蛋白锚定在细胞表面,广泛应用于疫苗制备、药物筛选、环境治理、菌株筛选等领域。为在乳酸克鲁维酵母中进行医药蛋白的高效生产并开展蛋白质工程研究,利用酿酒酵母来源的Sed1作为锚蛋白,His Tag作为检测靶标... 酵母表面展示技术通过将目标蛋白锚定在细胞表面,广泛应用于疫苗制备、药物筛选、环境治理、菌株筛选等领域。为在乳酸克鲁维酵母中进行医药蛋白的高效生产并开展蛋白质工程研究,利用酿酒酵母来源的Sed1作为锚蛋白,His Tag作为检测靶标,在乳酸克鲁维酵母中进行表面展示系统的构建,并利用间接法免疫荧光标记和全细胞流式分析相结合的方法进行高通量表征。激光扫描共聚焦显微镜成像结果进一步证实了人血清白蛋白的成功表达。优化检测条件后,最高展示效率达89.8%。研究首次在乳酸克鲁维酵母中建立并系统优化了酵母表面展示系统,为在乳酸克鲁维酵母中开展高效蛋白质生产和蛋白质工程研究奠定了基础。 展开更多

关键词 乳酸克鲁维酵母 酵母表面展示 优化 人血清白蛋白

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枯草芽孢杆菌YvdSR蛋白转运Na^(+)关键残基的研究

5

作者 张凌霄 张正来 +1 位作者 郑秀桃 姜巨全 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期56-64,共9页

对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis strain 168)双组分基因YvdSR表达的双组分蛋白YvdSR进行功能鉴定,得出YvdSR具有转运Na^(+)/Li^(+)功能,为探究YvdSR离子转运机制,分别对两种组分作同源序列比对,从每种组分中筛选出完全保守的酸性氨... 对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis strain 168)双组分基因YvdSR表达的双组分蛋白YvdSR进行功能鉴定,得出YvdSR具有转运Na^(+)/Li^(+)功能,为探究YvdSR离子转运机制,分别对两种组分作同源序列比对,从每种组分中筛选出完全保守的酸性氨基酸残基并进行氨基酸残基定点突变。结果表明,YvdS和YvdR共有的E13在同源物中完全保守且突变为丙氨酸后均失去Na^(+)(Li^(+))/H^(+)逆向转运活性,说明两种组分的E13均是蛋白质行使功能不可或缺的,YvdS的E13A经回复突变后可恢复高水平Na^(+)(Li^(+))/H^(+)逆向转运活性,YvdR的E13A经回复突变后仍失去Na^(+)(Li^(+))/H^(+)逆向转运活性,表明YvdS和YvdR在Na^(+)(Li^(+))/H^(+)逆向转运中行使不同功能。 展开更多

关键词 Na^(+)/H^(+)逆向转运 YvdSR 膜蛋白 定点突变

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微生物学专业英语教学模式的探索与思考 被引量：4

6

作者 姜巨全 《东北农业大学学报（社会科学版）》 2011年第3期86-89,共4页

通过分析国内微生物学专业英语在教学过程中存在的问题,结合自身在美国从事微生物学和分子生物学的科研工作经验和对美国微生物学专业学生学习特点的了解,以及在东北农业大学生命科学学院讲授微生物学专业英语的实践经验,归纳了在该课... 通过分析国内微生物学专业英语在教学过程中存在的问题,结合自身在美国从事微生物学和分子生物学的科研工作经验和对美国微生物学专业学生学习特点的了解,以及在东北农业大学生命科学学院讲授微生物学专业英语的实践经验,归纳了在该课程教学的一些心得体会,提出了一些关于微生物学专业英语教学的方法和建议,希望通过论文的发表达到与国内同行探讨提高微生物学专业英语的教学效果的目的。 展开更多

关键词 微生物学专业英语 教学模式 探索与思考 教学效果

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大肠杆菌诺氟沙星超敏感多基因敲除株KYAH06构建与功能验证

7

作者 姜巨全 宋阳 +1 位作者 Heba Abdel-Motaal 邹俏 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期49-55,86,共8页

以E.coli DH5α为出发菌株采用pKD46质粒提供λRed重组系统完成以下三步基因敲除:大肠杆菌中RND超家族多药物抗性蛋白acrAB基因并借助其与pKD3质粒的氯霉素抗性片段同源重组被敲除;大肠杆菌中MATE家族多药物抗性蛋白ydhE基因通过卡那霉... 以E.coli DH5α为出发菌株采用pKD46质粒提供λRed重组系统完成以下三步基因敲除:大肠杆菌中RND超家族多药物抗性蛋白acrAB基因并借助其与pKD3质粒的氯霉素抗性片段同源重组被敲除;大肠杆菌中MATE家族多药物抗性蛋白ydhE基因通过卡那霉素抗性筛选和蔗糖反向筛选被无痕敲除;大肠杆菌中主要负责诺氟沙星外排的MFS超家族转运蛋白mdtH基因通过与pK18mobSacB质粒中的抗性片段的同源重组被敲除。以上基因敲除不同程度导致大肠杆菌对诺氟沙星的敏感性变化,最终获得诺氟沙星敏感性为0.0125μg·mL^(-1)的E.coli KYAH06,为大肠杆菌MdtH详细转运机制以及其他诺氟沙星外排转运蛋白鉴定和功能分析奠定试验基础。 展开更多

关键词 诺氟沙星 λRed重组系统 多药物逆向转运蛋白 AcrAB YdhE MdtH

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阳离子扩散促进子(CDF)家族蛋白的研究进展 被引量：4

8

作者 姜巨全 洪闪 +2 位作者 徐桐 张爽 张诚 《黑龙江大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2014年第4期517-528,561,共12页

阳离子扩散促进子家族(Cation diffusion facilitator family,CDF)是一类负责转运重金属离子的新型蛋白质家族。该家族蛋白主要定位在包括细菌的细胞膜、植物和酵母的液泡膜以及哺乳动物的高尔基体在内的各类膜或膜系统上。CDF家族蛋白... 阳离子扩散促进子家族(Cation diffusion facilitator family,CDF)是一类负责转运重金属离子的新型蛋白质家族。该家族蛋白主要定位在包括细菌的细胞膜、植物和酵母的液泡膜以及哺乳动物的高尔基体在内的各类膜或膜系统上。CDF家族蛋白由于在维持生物体内金属离子的体内平衡、解除金属过度积累对生物造成的毒性以及生物修复等方面的重要作用而受到了人们的广泛关注,其结构特征、拓扑学分析、保守的特征序列、底物专一性、转运机制以及系统发育学等已被深入研究。本文从以上几个方面对CDF家族蛋白的有关研究进展进行了综述,并对其未来的研究方向予以展望。 展开更多

关键词 CDF家族蛋白 结构特征 拓扑学分析 特征序列 转运机制 系统发育

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大肠杆菌中dctA基因敲除及其苹果酸摄取功能鉴定 被引量：4

9

作者 姜巨全 张正来 +1 位作者 徐桐 孟琳 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期45-52,共8页

大肠杆菌(Escherichia coli)K12基因组中,仅dctA基因编码1个在有氧条件下负责摄取四碳-二羧酸的转运蛋白。为鉴定Dct A能否摄取四碳-2-羟基羧酸(如苹果酸),首先以p KD3为模版PCR扩增含有氯霉素抗性dctA基因同源臂,电转入E.coli K12/p K... 大肠杆菌(Escherichia coli)K12基因组中,仅dctA基因编码1个在有氧条件下负责摄取四碳-二羧酸的转运蛋白。为鉴定Dct A能否摄取四碳-2-羟基羧酸(如苹果酸),首先以p KD3为模版PCR扩增含有氯霉素抗性dctA基因同源臂,电转入E.coli K12/p KD46感受态细胞,筛选具有氯霉素抗性的基因敲除突变株E.coliΔdctA/p KD46。通过消除质粒p KD46构建大肠杆菌dctA基因敲除突变株E.coliΔdctA。构建dctA基因表达载体p Easy T3-dctA。通过苹果酸摄取功能互补试验,证实基因敲除菌株E.coliΔdctA丧失摄取苹果酸功能,四碳-二羧酸摄取蛋白Dct A具有摄取苹果酸功能。研究首次报道Dct A具有摄取苹果酸功能,该基因敲除突变株的构建可为其他菌株来源2-HCT转运蛋白的基因克隆与功能分析奠定基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌K12 dctA λRed重组 基因敲除 四碳-2-羟基羧酸

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细菌群体感应分子水平调控机制研究进展 被引量：3

10

作者 姜巨全 肖鸿禹 胡宝忠 《黑龙江大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2013年第2期232-238,共7页

细菌群体感应(QS)指的是细菌细胞产生、识别并响应被称为自诱导物的细胞外信号分子,同时借助信号分子完成细胞-细胞之间的群体协同以应对环境的改变的过程。由于其在趋化效应、生物膜形成以及细菌定殖等方面具有重要作用,群体感应相关... 细菌群体感应(QS)指的是细菌细胞产生、识别并响应被称为自诱导物的细胞外信号分子,同时借助信号分子完成细胞-细胞之间的群体协同以应对环境的改变的过程。由于其在趋化效应、生物膜形成以及细菌定殖等方面具有重要作用,群体感应相关的基因已被鉴定,其相应的调控机制已被详细地阐明,主要分为细胞内群体感应全细胞调控机制、不同模式的种内细菌群体感应机制以及种间的群体感应调控机制三个层次。本文从以上三个方面对细菌群体感应分子水平的调控机制进行了综述,并对其未来的研究方向予以展望。 展开更多

关键词 群体感应 自诱导物 种内 种间 调控机制

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苜蓿中华根瘤菌042BMnoeA基因的克隆、敲除与功能的初步分析 被引量：1

11

作者 杜秉海 姜巨全 +2 位作者 李小红 王磊 杨苏声 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期195-200,共6页

通过PCR扩增获得了 0 4 2BM的noeA基因。该基因与苜蓿中华根瘤菌 (Sinorhizobiummeliloti) 10 2 1noeA的同源性为 99% ,而其NoeA与 10 2 1NoeA的相似性为 97%。还发现其NoeA与中慢生根瘤菌 (Mesorhizobiumsp .)BNC1可能的SAM_依赖性的... 通过PCR扩增获得了 0 4 2BM的noeA基因。该基因与苜蓿中华根瘤菌 (Sinorhizobiummeliloti) 10 2 1noeA的同源性为 99% ,而其NoeA与 10 2 1NoeA的相似性为 97%。还发现其NoeA与中慢生根瘤菌 (Mesorhizobiumsp .)BNC1可能的SAM_依赖性的甲基转移酶相似性为 32 % ,而其 30 3～ 36 2氨基酸区域与大肠杆菌 (Escherichiacoli)的核糖体 5 0S亚基的L11蛋白甲基转移酶 (PrmA)的 16 0～ 2 2 0氨基酸区域的相似性达到 4 1%。通过插入卡那盒 ,敲除noeA ,获得突变株 0 4 2BMA_Km。与苜蓿中华根瘤菌 0 4 2BM相比 ,敲除noeA的突变株在普通紫花、保定、宁夏、百发和傲汉苜蓿品种上的结瘤数、根瘤鲜重和植株地上部分的干重都有不同程度的增加 ,而在秘鲁苜蓿品种上的结瘤数和植株地上部分的干重明显下降 ,在皇后和美国杂花苜蓿品种上则没有明显的变化。 展开更多

关键词 苜蓿中华根瘤菌 结瘤基因 基因敲除 结瘤作用

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松嫩盐单胞菌中Group 2 mrp操纵子敲除及突变株耐盐碱分析 被引量：1

12

作者 姜巨全 孙开福 +2 位作者 杨立娜 陈金 张正来 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期11-20,共10页

为分析编码多亚基钠/氢逆向转运蛋白Group 2型mrp(mrp2)操纵子耐盐碱能力,首先构建mrp2自杀质粒p K18mobsac B-mrp2-Nco I,电转化野生型菌株-松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)NEAU-ST10-39T,基于以上基因敲除原理获得mrp2敲除菌株... 为分析编码多亚基钠/氢逆向转运蛋白Group 2型mrp(mrp2)操纵子耐盐碱能力,首先构建mrp2自杀质粒p K18mobsac B-mrp2-Nco I,电转化野生型菌株-松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)NEAU-ST10-39T,基于以上基因敲除原理获得mrp2敲除菌株。PCR验证及测序结果表明,成功获得mrp2敲除菌株,并将其命名为NEAU-ST10-39T-△mrp2。为进一步验证突变株正确性,构建重组穿梭载体p BBR1-MCS5-mrp2,转化敲除菌株NEAU-ST10-39T-△mrp2,获得转化子命名为NEAU-ST10-39T-△mrp2/p BBR1-MCS5-mrp2。耐盐碱测试显示,NEAU-ST10-39T-△mrp2/p BBR1-MCS5-mrp2表现出与野生型菌株类似耐盐碱能力,进一步证实敲除菌株NEAUST10-39T-△mrp2构建正确;随Na Cl浓度和p H升高,敲除菌株NEAU-ST10-39T-△mrp2生长受到抑制,表明mrp2对宿主菌NEAU-ST10-39T在高盐碱条件下生长具有重要作用。电转化方法可避免p K18mobsac B在三亲本接合过程中受体菌抗性筛选、突变株纯化弊端,简化质粒导入宿主程序;NEAU-ST10-39T-△mrp2成功构建为敲除盐单胞菌中其他耐盐碱基因和揭示该基因耐盐碱机制奠定基础。 展开更多

关键词 松嫩盐单胞菌 Group2型Mrp 基因敲除 耐盐碱

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肇东盐单胞菌中胞苷酸激酶基因cmk的克隆与功能分析 被引量：1

13

作者 姜巨全 杨立娜 +1 位作者 刘艳双 孙开福 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期33-40,共8页

为探究一株中度嗜盐菌-肇东盐单胞菌(Halomonas zhaodongensis)NEAU-ST10-25T的耐盐碱机制,采用基因文库筛选方法从该菌株获得一个重组质粒p UC-LYS1。该质粒可恢复大肠杆菌(Escherichia coli)Na+/H+逆向转运蛋白缺陷株KNabc在含有0.2 m... 为探究一株中度嗜盐菌-肇东盐单胞菌(Halomonas zhaodongensis)NEAU-ST10-25T的耐盐碱机制,采用基因文库筛选方法从该菌株获得一个重组质粒p UC-LYS1。该质粒可恢复大肠杆菌(Escherichia coli)Na+/H+逆向转运蛋白缺陷株KNabc在含有0.2 mol·L-1Na Cl的LBK培养基上生长。序列分析显示,重组质粒p UC-LYS1中外源DNA片段由1个N端截短的ORF1、三个完整的ORF(ORF2-4)以及1个C端截短的ORF5组成。其中,ORF4与伸长盐单胞菌(Halomonas enlongata)中1个推测的胞苷酸激酶(Cytidylate kinase,CMK)同源性最高(86%)。为便于区分与其同源物,编码ORF4的基因cmk来自肇东盐单胞菌(Halomonas zhaodongensis)被定名为Hz_cmk。Hz_CMK也与包括已被鉴定来自大肠杆菌(E.coli)的Ec_CMK等其他同源物具有较高同源性。为进一步鉴定Hz_cmk是否编码胞苷酸激酶,通过PCR扩增分别将Hz_cmk和大肠杆菌(E.coli)的同源基因Ec_cmk(作为正对照)构建至原核表达载体p ET19,转化到大肠杆菌(E.coli)C41(DE3)感受态细胞中诱导表达。SDS-PAGE表明其以可溶形式存在。酶学分析表明Hz_CMK与Ec_CMK均具有较高胞苷酸激酶活性。为国内外首次中度嗜盐菌的胞苷酸激酶基因功能鉴定。 展开更多

关键词 肇东盐单胞菌 胞苷酸激酶(cMK) 原核表达 酶活性

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大肠杆菌Zn2+敏感突变株构建及其功能验证

14

作者 王玉婷 徐桐 +1 位作者 华贝杰 姜巨全 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期2538-2549,共12页

【背景】Zn^(2+)在细胞解毒及许多生理过程中发挥着关键作用,Zn^(2+)转运蛋白已逐渐引起人们的重视。在大肠杆菌中,zntA和zitB是2个外排Zn^(2+)的关键基因。【目的】构建大肠杆菌Zn^(2+)敏感突变株,并对其功能进行验证。【方法】以Esche... 【背景】Zn^(2+)在细胞解毒及许多生理过程中发挥着关键作用,Zn^(2+)转运蛋白已逐渐引起人们的重视。在大肠杆菌中,zntA和zitB是2个外排Zn^(2+)的关键基因。【目的】构建大肠杆菌Zn^(2+)敏感突变株,并对其功能进行验证。【方法】以Escherichia coli DH5α为出发菌株,利用λRed重组系统,通过携带卡那霉素抗性基因的同源重组片段敲除zntA基因。在单基因敲除菌株基础上,利用携带庆大霉素抗性基因的同源重组片段敲除zitB基因,获得一株敲除了zntA和zitB的双基因敲除菌株KZAB04。通过功能互补实验检测基因敲除菌株及对照菌株对不同浓度Zn^(2+)的敏感程度。【结果】基因敲除菌株KZAB04比出发菌株E.coli DH5α具有更高的Zn^(2+)敏感性。【结论】大肠杆菌Zn^(2+)敏感突变株构建成功。该菌株的构建为zntA和zitB基因功能的研究提供了必要条件,同时也为其他Zn^(2+)转运蛋白基因的功能鉴定与分析奠定了基础。 展开更多

关键词 基因敲除 λRed重组 Zn2+转运蛋白 zntA zitB

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偶联钠离子转运草酰乙酸脱羧酶研究进展

15

作者 姜巨全 黄海鹏 +1 位作者 孟婧 胡宝忠 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期133-140,共8页

偶联钠离子转运草酰乙酸脱羧酶是第一个被发现具有初级钠离子泵活性脱羧酶家族成员,由α,β,γ三个亚基以及生物素组成。由于其脱羧反应对柠檬酸发酵途径具有关键作用,并且在脱羧过程中偶联钠离子输出,该酶已受到学术界广泛关注。目前,... 偶联钠离子转运草酰乙酸脱羧酶是第一个被发现具有初级钠离子泵活性脱羧酶家族成员,由α,β,γ三个亚基以及生物素组成。由于其脱羧反应对柠檬酸发酵途径具有关键作用,并且在脱羧过程中偶联钠离子输出,该酶已受到学术界广泛关注。目前,该酶已在包括克雷伯菌属(Klebsiella)、沙门氏菌属(Salmonella)和弧菌属(Vibrio)等多个属细菌中被发现,并且其生理学基本特征已被鉴定。在肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)中,该酶中参与偶联脱羧反应钠离子输出重要氨基酸活性位点通过拓扑学分析、定点突变等方法被深入地进行鉴定,在此基础上能量偶联模型被提出以解释该酶偶联钠离子输出脱羧反应机制。本文对以上研究进展进行综述并对该酶未来研究方向加以展望。 展开更多

关键词 草酰乙酸脱羧酶 初级钠离子泵 拓扑学分析 定点突变 能量偶联模型

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产甲酸草酸杆菌细胞数群体感应系统基因hdtS克隆和功能分析

16

作者 姜巨全 刘贺男 +2 位作者 肖鸿禹 付晓薇 朱光宇 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期49-56,共8页

为鉴定产甲酸草酸杆菌(Oxalobacter formigenes)是否具有细胞数群体感应(QS)系统,将费氏弧菌(Vibrio fischeri)和荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorences)QS系统相关基因与产甲酸草酸杆菌(O.formigenes)基因组序列进行比对,初步确定hdtS和... 为鉴定产甲酸草酸杆菌(Oxalobacter formigenes)是否具有细胞数群体感应(QS)系统,将费氏弧菌(Vibrio fischeri)和荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorences)QS系统相关基因与产甲酸草酸杆菌(O.formigenes)基因组序列进行比对,初步确定hdtS和AGPA为QS系统候选基因。通过PCR和T-A克隆方法分别克隆以上两个基因并将其构建成表达载体pET19-hdtS和pET19-AGPA,借助SDS-PAGE凝胶电泳证实以上两个基因均在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中高效表达,采用平板菌株报告法鉴定hdtS具有酰基高丝氨酸内酯(AHL)合成酶的功能,而AGPA则不具有该功能。这是国内外首次报道产甲酸草酸杆菌(O.formigenes)中QS系统有关基因,对该菌株QS系统了解及分析影响该菌株在人肠道内定殖因素具有重要意义。 展开更多

关键词 克隆 鉴定 产甲酸草酸杆菌 细胞数群体感应系统 hdtS AGPA

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