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白藜芦醇对玉米赤霉烯酮致小鼠肝脏氧化损伤及炎症的保护作用 被引量：7
1
作者 朱根生 夏苏干 +7 位作者 佘进进 白玉妮 邹辉 顾建红 袁燕 刘学忠 刘宗平 卞建春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第11期4254-4261,共8页
为探究白藜芦醇(RSV)对玉米赤霉烯酮(ZEA)中毒小鼠肝脏损伤是否具有保护作用,试验将40只清洁级雄性BALB/c小鼠随机分为5组:对照组(生理盐水)、ZEA组(40 mg/kg)、不同浓度的RSV(50、100或200 mg/kg)与ZEA(40 mg/kg)共处理组,每组8只,各... 为探究白藜芦醇(RSV)对玉米赤霉烯酮(ZEA)中毒小鼠肝脏损伤是否具有保护作用,试验将40只清洁级雄性BALB/c小鼠随机分为5组:对照组(生理盐水)、ZEA组(40 mg/kg)、不同浓度的RSV(50、100或200 mg/kg)与ZEA(40 mg/kg)共处理组,每组8只,各组均灌胃给药,试验期12 d。试验结束后采集小鼠肝脏样品,计算肝脏系数,采用苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色法观察各组肝脏病理变化;检测肝脏NF-κB蛋白表达;比色法检测肝脏组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,ELISA法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-1β含量。结果显示,与对照组相比,ZEA组小鼠肝组织发生明显病理学变化;与ZEA组相比,不同浓度RSV与ZEA共处理组小鼠肝脏组织病理学变化都有所减轻。免疫组织化学结果显示,与对照组相比,ZEA组肝脏NF-κB蛋白表达增多;与ZEA组相比,不同浓度的RSV与ZEA共处理组肝脏NF-κB蛋白表达均有下降。与对照组相比,ZEA组肝脏系数和肝脏组织MDA含量极显著升高(P<0.01),肝脏组织SOD和CAT活性显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01),血清中AST、ALT和LDH活性,IL-6、TNF-α和IL-1β含量均极显著升高(P<0.01)。与ZEA组相比,不同浓度RSV与ZEA共处理组肝脏组织CAT活性显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),血清中AST、ALT和LDH活性及IL-6和IL-1β含量显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01);50 mg/kg RSV与ZEA共处理组肝脏组织SOD活性和血清中TNF-α含量分别显著升高(P<0.05)和极显著降低(P<0.01);100和200 mg/kg RSV与ZEA共处理组肝脏系数和肝脏组织MDA含量显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01)。结果表明,ZEA对小鼠肝脏有严重的氧化及炎症损伤作用,RSV对ZEA中毒的肝损伤具有一定保护作用,尤其以100 mg/kg RSV保护效果最佳。 展开更多
关键词 白藜芦醇 玉米赤霉烯酮 氧化损伤 炎症 肝脏
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苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立 被引量：5
2
作者 项自来 王玲 +6 位作者 夏苏干 邹辉 顾建红 袁燕 刘学忠 刘宗平 卞建春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期849-857,共9页
为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利... 为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR<0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12 800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5～1 000 ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845 (R^2=0.990),其IC_(50)为58.88 ng/mL,LOD为3.83 ng/mL,回收率在85.96%～104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。 展开更多
关键词 苯乙醇胺A(PA) 杂交瘤 单克隆抗体 间接竞争ELISA 回收试验
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ZEA、DON及其联合作用对李斯特菌感染小鼠血清免疫相关细胞因子的影响
3
作者 许晴雨 夏苏干 +6 位作者 蔡国栋 邹辉 顾建红 袁燕 刘学忠 刘宗平 卞建春 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第4期133-138,共6页
旨在探究玉米赤霉烯酮(ZEA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其联合作用对细菌感染动物防御能力的影响。试验以小鼠为对象,研究了低剂量的ZEA、DON对李斯特菌感染小鼠血清中免疫相关因子的变化。试验分别设空白对照组(Con)、李斯特菌组(Lis)... 旨在探究玉米赤霉烯酮(ZEA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其联合作用对细菌感染动物防御能力的影响。试验以小鼠为对象,研究了低剂量的ZEA、DON对李斯特菌感染小鼠血清中免疫相关因子的变化。试验分别设空白对照组(Con)、李斯特菌组(Lis)、10 mg/kg ZEA+李斯特菌组(ZEA+Lis)、1 mg/kg DON+李斯特菌组(DON+Lis)、10 mg/kg ZEA+1 mg/kg DON+李斯特菌组(ZEA+DON+Lis),染毒方式为灌胃,细菌感染方式为尾静脉注射,剂量5×104CFU。在试验结束后,用抗体芯片技术检测小鼠血清中免疫相关细胞因子的水平。结果显示,与Con组相比,Lis组免疫细胞因子如白介素IL-1β、IL-12P40/P70,集落刺激因子MCSF,趋化因子MIG皆显著升高(P<0.05)。与Lis组相比,ZEA+Lis组IL-1β显著下降(P<0.05),基质金属蛋白酶TIMP-1显著上升(P<0.05);DON+Lis组IL-1β、IL-12P40/P70和MCSF显著下降(P<0.05),趋化因子BLC TIMP-1显著或极显著上升(P<0.05或P<0.01);ZEA+DON+Lis组IL-1β与IL-12P40/P70显著下降(P<0.05),集落刺激因子GCSF、趋化因子BLC与MIG显著或极显著上升(P<0.05或P<0.01)。与ZEA组相比,ZEA+DON+Lis组IL-6、趋化因子MIP-1α与MIG、TIMP-1显著上升(P<0.05),趋化因子LIX显著下降(P<0.05)。与DON+Lis组相比,ZEA+DON+Lis组GCSF与MCSF显著或极显著上升(P<0.05或P<0.01),MIP-1α显著上升(P<0.05)。结果表明,低剂量的ZEA、DON及其联合均能不同程度地降低李斯特菌感染小鼠血清中免疫相关细胞因子的水平,说明ZEA、DON及其联合作用下机体对李斯特菌感染的防御能力降低;但在经剂量下,ZEA和DON联合暴露对小鼠血清中免疫相关细胞因子表达表现出具有一定的拮抗作用。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 李斯特菌 抗体芯片 细胞因子
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β-玉米赤霉烯醇单克隆抗体的研制及CiELISA检测方法的建立
4
作者 朱根生 王凤丽 +7 位作者 夏苏干 原俊朝 邹辉 顾建红 袁燕 刘学忠 刘宗平 卞建春 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1469-1474,共6页
为建立一种针对β-玉米赤霉烯醇(β-ZOL)快速准确的检测方法,笔者用活性酯法将β-ZOL与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联合成人工完全抗原,纯化鉴定后免疫BALB/c小鼠。经筛选最终获得1株稳定分泌抗β-ZOL抗体的细胞株1F5。利用... 为建立一种针对β-玉米赤霉烯醇(β-ZOL)快速准确的检测方法,笔者用活性酯法将β-ZOL与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联合成人工完全抗原,纯化鉴定后免疫BALB/c小鼠。经筛选最终获得1株稳定分泌抗β-ZOL抗体的细胞株1F5。利用该抗体建立检测β-ZOL的间接竞争酶联免疫吸附试验(CiELISA)方法。结果显示,β-ZOL的药物抑制标准曲线在浓度为5~500 ng/m L时线性关系良好,标准曲线方程为y=0.406 3x-0.204 2(R^2=0.990 4),IC_(50)为53.19 ng/m L,检测下限(LOD)为6 ng/m L。该单克隆抗体对β-ZOL的抑制率为100%,与α-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉烯酮、β-雌二醇、呕吐毒素、伏马毒素等基本无交叉反应。牛奶样品β-ZOL添加回收试验显示,β-ZOL的回收率为91.24%~110.07%,变异系数为6.17%~8.73%。说明建立的检测β-ZOL的CiELISA方法稳定可靠。 展开更多
关键词 β-玉米赤霉烯醇 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫吸附试验 回收试验
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ZEA和DON及其联合作用对小鼠T淋巴细胞Fas/FasL凋亡信号通路的影响 被引量：2
5
作者 夏苏干 孙凯 +6 位作者 蔡国栋 邹辉 顾建红 袁燕 刘学忠 刘宗平 卞建春 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期781-788,共8页
为揭示玉米赤霉烯酮(ZEA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其联合作用免疫毒性的机理,试验研究了ZEA、DON及联合作用对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠离体T淋巴细胞细胞凋亡和Fas/FasL凋亡信号通路的影响。从BALB/c小鼠脾分离原代T淋巴细胞,分... 为揭示玉米赤霉烯酮(ZEA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其联合作用免疫毒性的机理,试验研究了ZEA、DON及联合作用对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠离体T淋巴细胞细胞凋亡和Fas/FasL凋亡信号通路的影响。从BALB/c小鼠脾分离原代T淋巴细胞,分别设细胞空白组、刀豆蛋白A对照组(Con A组)、Con A+不同浓度ZEA染毒组、Con A+不同浓度DON染毒组、Con A+不同浓度ZEA与DON联合染毒组,染毒时间为24 h,利用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western-blot检测Fas、FasL、Cleaved-caspase8、Bax、Bcl-2等关键蛋白表达情况。结果显示,与细胞空白组相比,Con A组细胞凋亡率上升但差异不显著(P>0.05);与Con A组相比,各染毒组细胞凋亡率均上升,多组出现显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01);联合处理组较单一毒素处理组细胞凋亡率升高,经CompuSyn软件拟合,ZEA和DON以20∶1联合作用时协同效应最为明显。Con A组与细胞空白组相比,Bax/Bal-2值显著降低(P<0.05)、Fas、FasL、Cleaved-caspase8等蛋白的表达量无明显变化(P>0.05);与Con A对照组相比,各染毒组Bax/Bal-2、Fas、FasL、Cleaved-caspase8等蛋白的表达量均上升,且呈剂量依赖性,多组出现显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01);联合染毒组较单一染毒组各蛋白表达量均升高。结果表明, ZEA、DON均可通过Fas/FasL凋亡信号通路诱导T细胞的凋亡,ZEA与DON联合可发挥协同效应。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 T细胞 凋亡 Fas/FasL信号通路
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