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超滤法去除抗乙肝转移因子中病毒工艺的验证 被引量:6
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作者 杨国成 李汝霖 +2 位作者 夏腊 汤华东 欧阳怡 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2004年第6期334-335,338,共3页
目的对超滤法去除病毒工艺进行验证。方法以猪细小病毒 (PPV)为指示病毒 ,观察用截留相对分子质量 (Mr)为 5 0 0 0的超滤膜在进压 0 .14MPa、回流压 0 .0 7MPa和进压 0 .2MPa、回流压 0 .1MPa条件下去除抗乙肝转移因子原液中病毒的效果 ... 目的对超滤法去除病毒工艺进行验证。方法以猪细小病毒 (PPV)为指示病毒 ,观察用截留相对分子质量 (Mr)为 5 0 0 0的超滤膜在进压 0 .14MPa、回流压 0 .0 7MPa和进压 0 .2MPa、回流压 0 .1MPa条件下去除抗乙肝转移因子原液中病毒的效果 ,并以淋巴细胞提取液为供试品 ,在上述条件下超滤 ,用高效液相色谱法测定滤过液中各组分的Mr,以检查膜的完整性。结果PPV滴度为 6 .4logTCID50 /ml时 ,滤过液中未检测出PPV ,经盲传三代 ,亦未发现特异性细胞病变 ;滤过液中各组分Mr 均小于 10 0 0 0 ,表明超滤膜完整。 展开更多
关键词 病毒去除法 超滤法 猪细小病毒 高效液相色谱
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2,5-己二酮诱导的PC12细胞损伤和凋亡 被引量:4
2
作者 孙凌聪 杨国成 +3 位作者 夏腊 朱汉明 张澄宇 刘少平 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2005年第3期17-19,共3页
目的建立2,5己二酮诱导的PC12细胞凋亡模型。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,将2,5己二酮(30、40、50mmol/L)加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,Hochest33258观察细胞核变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂、流式细胞仪... 目的建立2,5己二酮诱导的PC12细胞凋亡模型。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,将2,5己二酮(30、40、50mmol/L)加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,Hochest33258观察细胞核变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂、流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较各组间的差异。结果随2,5己二酮浓度增加,细胞存活率下降(P<0.01);荧光显微镜观察有特征性的凋亡细胞核;琼脂糖凝胶电泳有明显的DNAladder;流式细胞仪检测凋亡率随2,5己二酮浓度的增大而增加(P<0.05)。结论一定浓度的2,5己二酮有导致PC12细胞损伤和凋亡的作用。 展开更多
关键词 2 5-己二酮 PC12细胞 凋亡
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川芎嗪对花生四烯酸诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用(英文) 被引量:4
3
作者 张冀 王韵 +2 位作者 汪炳华 陈丽达 夏腊 《中国临床康复》 CSCD 2003年第30期4066-4067,共2页
目的:研究川芎嗪对花生四烯酸(160μmol/L)诱导的血管内皮细胞损伤和凋亡的保护作用及其机制。方法:MTT法检测细胞存活率,比色法测LDH释放率和细胞MDA含量Hoechst33258荧光染色观察细胞核形态变化并测定凋亡率,琼脂糖凝胶电泳检测DNA降... 目的:研究川芎嗪对花生四烯酸(160μmol/L)诱导的血管内皮细胞损伤和凋亡的保护作用及其机制。方法:MTT法检测细胞存活率,比色法测LDH释放率和细胞MDA含量Hoechst33258荧光染色观察细胞核形态变化并测定凋亡率,琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解。结果:川芎嗪(0.25~1.00mmol/L)能浓度依赖性抑制花生四烯酸引起的细胞存活率下降(t=2.52~3.14,P<0.05),并降低细胞LDH释放率和MDA含量(t=3.27~5.88和t=4.64~7.41,P<0.05)。花生四烯酸处理24h后的细胞呈现典型的凋亡核固缩表现,凝胶电泳显示DNA凋亡梯带。川芎嗪(0.25~1.00mmol/L)能降低其凋亡率。结论:川芎嗪对花生四烯酸引起的内皮细胞损伤和凋亡具有保护作用其机制可能与其抗脂质过氧化作用有关。 展开更多
关键词 川芎嗪 花生四烯酸 血管内皮细胞 细胞凋亡 保护作用 脂质过氧化
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臭氧溶液对HBV体外感染的HepG2细胞的抗病毒作用 被引量:3
4
作者 付向阳 杨国成 +2 位作者 朱汉明 夏腊 雷少青 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2008年第4期496-499,512,共5页
目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)体外感染人肝癌HepG2细胞的实验模型,并研究臭氧溶液对感染了HBV后的HepG2细胞的抗病毒作用。方法:乙肝阳性血清与HepG2细胞共孵育建立体外感染模型,采用倒置相差显微镜检测细胞形态,MTT法检测细胞成活率,EL... 目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)体外感染人肝癌HepG2细胞的实验模型,并研究臭氧溶液对感染了HBV后的HepG2细胞的抗病毒作用。方法:乙肝阳性血清与HepG2细胞共孵育建立体外感染模型,采用倒置相差显微镜检测细胞形态,MTT法检测细胞成活率,ELISA法检测HBsAg和HBeAg表达水平,HBV荧光定量PCR检测HBV DNA表达量。结果:体外感染了HBV DNA的HepG2细胞能持续稳定分泌HBsAg和HBeAg,并能产生HBV DNA,通过低浓度臭氧溶液作用后,细胞形态无明显差异,细胞成活率无明显影响(P>0.05),HBsAg和HBeAg均转阴(P<0.01),HBV DNA拷贝量亦明显降低(P<0.01)。结论:较低浓度臭氧溶液对感染了HBV的HepG2细胞有明显的抗病毒作用,对细胞并无损伤。 展开更多
关键词 臭氧溶液 乙型肝炎病毒 HEPG2细胞 抗病毒
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小鼠颌下腺2.5S神经生长因子生物活性评估标准的建立 被引量:2
5
作者 刘少平 杨国成 +2 位作者 孟祥平 夏腊 朱汉民 《广西医学》 CAS 2005年第1期50-51,共2页
目的 观察小鼠颌下腺 2 5S神经生长因子 (NGF)对鸡胚背根神经节 (DRG)细胞生长的作用 ,建立一套对神经生长因子在生物活性的评估标准。方法 分离培养鸡胚背根神经节 ,加入不同浓度NGF、NGF标准品 ,另设空白和NGF与NGF抗体对照组 ,共... 目的 观察小鼠颌下腺 2 5S神经生长因子 (NGF)对鸡胚背根神经节 (DRG)细胞生长的作用 ,建立一套对神经生长因子在生物活性的评估标准。方法 分离培养鸡胚背根神经节 ,加入不同浓度NGF、NGF标准品 ,另设空白和NGF与NGF抗体对照组 ,共培养 4 8h后观察各组神经节周围神经突起的生长情况。结果 NGF促进神经节细胞突起生长 ,随浓度升高突起而增多增长 ,与标准品相似 ,而不加NGF或加NGF与NGF抗体则无或仅有少量突起生长。结论 小鼠颌下腺 2 5SNGF呈剂量依赖性促进背根神经节细胞生长的作用 ,依神经节突起生长的不同程度可将NGF的生物活性划分为五个等级标准。 展开更多
关键词 神经生长因子 生物活性 背根神经节
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重组人白细胞介素10的融合表达及鉴定 被引量:1
6
作者 方爱平 杨国成 +1 位作者 夏腊 朱汉明 《华中医学杂志》 2003年第1期20-21,F004,共3页
目的 研究重组人白细胞介素10(rhIL-10)载体在大肠杆菌BL21(DE3)pLyse细胞中的表达,为进一步研究IL—10在动脉粥样硬化中的作用机制奠定基础。方法 用构建成功的IL-10-PCR(?)T7/NT-TOPO(?)质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLyse细胞,并通过SDS... 目的 研究重组人白细胞介素10(rhIL-10)载体在大肠杆菌BL21(DE3)pLyse细胞中的表达,为进一步研究IL—10在动脉粥样硬化中的作用机制奠定基础。方法 用构建成功的IL-10-PCR(?)T7/NT-TOPO(?)质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLyse细胞,并通过SDS-PAGE鉴定融合表达蛋白。结果 PCR(?)T7/NT-TOPO(?)质粒载体成功载入rhIL-10基因;在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下表达的蛋白质主要以包涵体形式存在。结论 在IPTG诱导下,重组的IL-10-PCR(?)T7/NT-TOPO(?)质粒载体在大肠杆菌BL21(DE3)pLyse细胞内成功表达。 展开更多
关键词 白细胞介素10 基因重组 大肠杆菌 基因表达 鉴定 包涵体
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神经生长因子对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的保护作用
7
作者 高兴华 杨国成 +3 位作者 夏腊 孟祥平 刘莉 汤贝贝 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2006年第2期192-195,共4页
目的:研究神经生长因子(NGF)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导鼠肾上腺嗜咯瘤细胞(PC12)凋亡的作用,从而探讨NGF对阿尔茨海默病的治疗作用。方法:以PC12细胞为神经元的细胞模型,将Aβ和NGF+Aβ分别加入培养的PC12细胞中,采用MTT法观察细胞存活率... 目的:研究神经生长因子(NGF)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导鼠肾上腺嗜咯瘤细胞(PC12)凋亡的作用,从而探讨NGF对阿尔茨海默病的治疗作用。方法:以PC12细胞为神经元的细胞模型,将Aβ和NGF+Aβ分别加入培养的PC12细胞中,采用MTT法观察细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态改变,hochest33258观察细胞核变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较两组间差异。结果:Aβ组细胞存活率随作用时间延长而下降(P<0.01),胞体变小,轴突退化变形,可见特征性的凋亡细胞核,并检测到典型的凋亡峰;而NGF+Aβ组细胞存活率明显增高,凋亡率明显减少(P<0.01)。结论:一定浓度的Aβ2535能诱导PC12细胞凋亡,NGF对Aβ诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 β淀粉样蛋白PC12细胞 神经生长因子 细胞凋亡
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GM1对PC12细胞缺氧缺糖损伤中HO-1表达的影响及PI-3K/Akt通路在此过程中的作用 被引量:1
8
作者 汤贝贝 杨国成 +3 位作者 夏腊 孟祥平 刘莉 高兴华 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2006年第5期580-584,共5页
目的:探讨PC12细胞缺氧缺糖损伤中,单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)对血红素加氧酶(HO-1)表达的影响,并研究PI-3K/Akt通路在此过程中的作用。方法:用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)消除培养基中的氧合并培养基质缺糖制造PC12细胞缺氧缺糖损伤(OGD... 目的:探讨PC12细胞缺氧缺糖损伤中,单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)对血红素加氧酶(HO-1)表达的影响,并研究PI-3K/Akt通路在此过程中的作用。方法:用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)消除培养基中的氧合并培养基质缺糖制造PC12细胞缺氧缺糖损伤(OGD)模型,用RT-PCR和Western blot方法检测不同剂量(25-100μmol/L)GM1和PI-3K抑制剂LY294002对缺氧缺糖损伤时PC12细胞HO-1mRNA及蛋白表达的影响。结果:与对照组和单纯缺氧缺糖组相比,GM1可显著上调缺氧缺糖PC12细胞的HO-1mRNA和蛋白表达,且两者呈明显的剂量依赖关系;PC12细胞经LY294002预处理后,GM1上调HO-1mRNA和蛋白表达的作用均受到抑制。结论:GM1可上调缺氧缺糖损伤时PC12细胞HO-1mRNA和蛋白表达,PI-3K/Akt通路在此过程中发挥了一定的信号转导作用。 展开更多
关键词 缺氧缺糖 神经节苷脂 血红素加氧酶 PC12细胞 LY294002
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重组人白细胞介素-10融合表达载体的构建及其在BL21(DE3)pLysE细菌细胞中的表达
9
作者 方爱平 杨国成 +3 位作者 YEShui-qing 夏腊 孙凌聪 刘少平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期75-77,共3页
目的 构建重组人白细胞介素 10 (recombinanthumaninterleukin 10 ,rhIL 10 )融合蛋白的表达载体 ,并在大肠杆菌中表达。方法 应用RT PCR方法扩增IL 10基因 ,克隆PCR产物 ,构建PCRR○T7/NT TOPOR○ IL 10重组质粒 ,以AppiedBiosystems... 目的 构建重组人白细胞介素 10 (recombinanthumaninterleukin 10 ,rhIL 10 )融合蛋白的表达载体 ,并在大肠杆菌中表达。方法 应用RT PCR方法扩增IL 10基因 ,克隆PCR产物 ,构建PCRR○T7/NT TOPOR○ IL 10重组质粒 ,以AppiedBiosystems 370 0DNA分析仪进行分析。构建成功的重组质粒转化大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysE细胞 ,经 12 %SDS PAGE鉴定融合表达蛋白。结果 PCRR○T7/NT TOPOR○ 质粒已载入rhIL 10基因 ,其序列与理论设计完全一致 ,表达质粒在BL2 1(DE3)pLysE中得到高效表达 ,产物主要以包涵体形式存在。结论 已成功构建重组PCRR○T7/NT TOPOR○ IL 10质粒载体 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3) 展开更多
关键词 RHIL-10 人重组白细胞介素-10 融合表达 包涵体 大肠杆菌
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小鼠2.5s神经生长因子对2,5-己二酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用
10
作者 孙凌聪 夏腊 +3 位作者 孟祥平 刘莉 高兴华 杨国成 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期154-156,共3页
目的建立神经生长因子(NGF)对2,5己二酮(HD)诱导的PC12细胞凋亡保护作用的模型,并探讨其作用机制。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,将HD和不同浓度的NGF加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂... 目的建立神经生长因子(NGF)对2,5己二酮(HD)诱导的PC12细胞凋亡保护作用的模型,并探讨其作用机制。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,将HD和不同浓度的NGF加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Westernblot检测p53蛋白表达,比较各组间的差异。结果随NGF浓度增加,细胞存活率升高,差异有统计学意义(P<0.01);DNA断裂减少;细胞凋亡率减小(P<0.01);p53表达量下降(P<0.05)。结论NGF对PC12细胞可能具有直接的神经营养作用,且可保护PC12细胞免于2,5HD诱导的损伤以及具有抗凋亡作用。 展开更多
关键词 神经生长因子 PC12细胞 凋亡 2 5-己二酮
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The relationship between LDL oxidation and macrophage myeloperoxidase activity
11
作者 武军驻 刘艳红 +3 位作者 李小明 陈丽达 夏腊 洪嘉玲 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2003年第5期791-793,共3页
Objective To explore low density lipoprotein (LDL) oxidation by macrophage myeloperoxidase (MPO) at molecular level.Methods Using a mouse macrophage model, we examined the relationship between LDL oxidation and mac... Objective To explore low density lipoprotein (LDL) oxidation by macrophage myeloperoxidase (MPO) at molecular level.Methods Using a mouse macrophage model, we examined the relationship between LDL oxidation and macrophage MPO by measuring macrophage MPO activity, LDL oxidation products, MPO gene expression and cellular orientation of LDL oxidation. Results MPO gene expression increased to its maximum gradually when the concentration of LDL was increased, and then maintained at that level. NaN 3 inhibied the elevation of MPO activity and LDL oxidation, which was LDL concentration-dependent. After the composition of macrophage membrane was roughly analyzed, it was determined that the contents of MPO and LDL in 5% sucrose were 7.667 and 21 times higher than those in 10% sucrose, respectively. Conclusion LDL is attached to the “microdomain” of the macrophage membrane in which LDL is oxidized by MPO. 展开更多
关键词 low density lipoprotein · oxidation · myeloperoxidase
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氚-胆固醇标记血浆脂蛋白方法的研究
12
作者 杨国成 张华征 +2 位作者 夏腊 韩豫 殷以礼 《湖北医学院学报》 1992年第1期35-37,共3页
本研究用~3H-胆固醇标记血浆脂蛋白,血浆经3.75%PAGE,可将脂蛋白分成HDL、LDL和VLDL。分别测定各脂蛋白的每分钟计数(cpm),并计算放射化学纯度。HDL、LDL和VLDL的放射化学纯度分别为99%、96%和94%。本法标记的脂蛋白具有一定的化学... 本研究用~3H-胆固醇标记血浆脂蛋白,血浆经3.75%PAGE,可将脂蛋白分成HDL、LDL和VLDL。分别测定各脂蛋白的每分钟计数(cpm),并计算放射化学纯度。HDL、LDL和VLDL的放射化学纯度分别为99%、96%和94%。本法标记的脂蛋白具有一定的化学稳定性,不改变生物活性和其他理化性质等优点。可通过制备性PAGE纯化~3H-胆固醇标记的脂蛋白。该方法操作简单,~3H-胆固醇半衰期长,可广泛应用于血浆脂蛋白代谢的研究。 展开更多
关键词 同位素标记 脂蛋白 3^H-胆固醇
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荧光分光光度法测定血清精氨酸代琥珀酸合成酶
13
作者 朱汉明 夏腊 +2 位作者 柯三才 黄伏生 冯秋珍 《湖北医科大学学报》 1997年第3期204-208,共5页
采用荧光分光光度法测定血清精氨酸代琥珀酸合成酶(ASS)的活力,并对方法的可靠性作了一系列的研究,包括反应产物量与荧光强度,酶量与荧光强度,精密度,敏感度等,结果表明,此法简单、灵敏、可靠。还测定了145例健康成人血... 采用荧光分光光度法测定血清精氨酸代琥珀酸合成酶(ASS)的活力,并对方法的可靠性作了一系列的研究,包括反应产物量与荧光强度,酶量与荧光强度,精密度,敏感度等,结果表明,此法简单、灵敏、可靠。还测定了145例健康成人血清ASS的活力,并对67例肝炎病人血清ASS活力与正常人作了比较,结果显示,肝炎病人组血清ASS活力均显著高于正常成人组(P<0001)。 展开更多
关键词 血液 荧光分光光度法 ASS
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酶法测定血氨
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作者 朱汉明 夏腊 +2 位作者 陈芳 柯三才 李小明 《湖北医科大学学报》 1999年第2期170-172,共3页
采用酶法测定血氨,并对方法的可靠性作了一系列的研究。结果:在磷酸盐缓冲液中,酶促反应的最适pH 值为8-0 ,吸收峰扫描的最大吸收波长为560-4 nm ,批内和批间CV 分别为3-75% 、4-10% ,线性范围可达30... 采用酶法测定血氨,并对方法的可靠性作了一系列的研究。结果:在磷酸盐缓冲液中,酶促反应的最适pH 值为8-0 ,吸收峰扫描的最大吸收波长为560-4 nm ,批内和批间CV 分别为3-75% 、4-10% ,线性范围可达300μmol/L。正常参考值-x= 57 .52 μmol/L,-x ±2s 为32-65 ~82.99 μmol/L,男女间差异无显著性(P> 0-05) 。 展开更多
关键词 血氨 比色法 谷氨酸脱氢酶 肝昏迷 酶法
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