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斑马鱼造血系统发育与人类血液系统疾病研究进展 被引量：7
1
作者 夏海雄 何志旭 舒莉萍 《贵阳医学院学报》 CAS 2016年第7期745-749,共5页
斑马鱼（ zebrafish）是一种热带硬骨鱼，目前作为研究造血系统、胚胎发生以及器官形成过程的一种脊椎动物模型。斑马鱼的显著特点是在体外排卵受精，形成的胚胎是透明的，所以在显微镜下可以观察整个器官的形成过程，可以直接观察脉管... 斑马鱼（ zebrafish）是一种热带硬骨鱼，目前作为研究造血系统、胚胎发生以及器官形成过程的一种脊椎动物模型。斑马鱼的显著特点是在体外排卵受精，形成的胚胎是透明的，所以在显微镜下可以观察整个器官的形成过程，可以直接观察脉管系统循环通路。斑马鱼基因组测序工程研究结果显示，其基因与人类基因保守度约85%，从而使得斑马鱼逐渐成为连接非脊椎动物（果蝇、线虫等）和哺乳动物（小鼠）的“桥梁”，越来越受到科研者的关注。 展开更多
关键词 斑马鱼 胚胎发育 造血系统 突变 造血干细胞
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采用等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条检测登革热病毒 被引量：4
2
作者 赵锦 夏海雄 +4 位作者 刘雨杰 Ravinder Pal 范安然 何志旭 曾令文 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期405-412,共8页
目的:探讨等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条用于登革热病毒(DENV)快速检测的可行性。方法:采用磁珠富集法提取病毒总RNA,并逆转录为cDNA用于等温链置换扩增检测体系;等温链置换扩增用于检测DENV,琼脂糖凝胶电泳用于分析等温链置... 目的:探讨等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条用于登革热病毒(DENV)快速检测的可行性。方法:采用磁珠富集法提取病毒总RNA,并逆转录为cDNA用于等温链置换扩增检测体系;等温链置换扩增用于检测DENV,琼脂糖凝胶电泳用于分析等温链置换扩增产物及其检测的敏感度;采用柠檬酸三钠还原法制备用于试纸条的纳米金颗粒;利用核酸碱基互补配对原理设计纳米金测流层析试纸条的检测线与控制线,建立DENV的检测体系。结果:等温链置换扩增的敏感度为10 fmol/L。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的敏感度也为10 fmol/L,取其检测样品浓度的对数值进行线性分析,检测浓度范围为10～10^(12)fmol/L,符合线性回归方程,线性相关系数(R^2)为0. 98。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的特异性较高,与其他对照组无交叉。结论:建立了基于等温链置换扩增反应的纳米金试纸条用于DENV的检测方法,检测结果肉眼可见,敏感度高,可用于DENV的快速检测。 展开更多
关键词 登革热/诊断 DNA引物 序列分析 核酸扩增技术 纳米技术 金/诊断应用 生物技术
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band3基因在斑马鱼早期胚胎中的表达 被引量：1
3
作者 庹媛媛 尚鲁俊 +2 位作者 夏海雄 何志旭 舒莉萍 《贵阳医学院学报》 CAS 2016年第7期760-764,共5页
目的:用band3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,检测band3基因在野生型Tüebingen斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:Trizol法提取斑马鱼胚胎总RNA并设计特异性引物,采用RTPCR法扩增band3基因cDNA编码区片段;通过基因重... 目的:用band3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,检测band3基因在野生型Tüebingen斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:Trizol法提取斑马鱼胚胎总RNA并设计特异性引物,采用RTPCR法扩增band3基因cDNA编码区片段;通过基因重组技术构建PBSK-band3重组质粒,用Bam HⅠ酶切得到线性化PBSK-band3;以T7 RNA聚合酶转录合成反义地高辛标记的band3 RNA探针,用全胚胎原位杂交法检测band3基因在斑马鱼胚胎早期的表达情况。结果:成功克隆band3基因片段,构建PBSK-band3重组质粒;经体外转录获得地高辛标记的反义band3 mRNA探针,原位杂交后检测证实band3基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中间细胞群(ICM)和主动脉性腺中肾区(AGM)呈现高表达。结论:地高辛标记的反义band3 mRNA探针可检测到斑马鱼胚胎中band3基因的定位表达。 展开更多
关键词 斑马鱼 胚胎 band3 全胚胎原位杂交 探针
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不同代次人脐带间充质干细胞的生物学特性及分化 被引量：3
4
作者 刘雨思 王凤昌 +6 位作者 夏海雄 许键炜 杨燕 崔冬冰 王黎龙 何志旭 舒莉萍 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第13期2015-2022,共8页
背景:人脐带间充质干细胞作为组织工程及再生医学领域的新兴种子细胞,其应用价值有赖于能否在长期体外传代扩增后仍保持稳定生物学特性和多向分化能力,需要进一步的实验研究。目的:研究不同培养代次人脐带间充质干细胞重要生物学属性的... 背景:人脐带间充质干细胞作为组织工程及再生医学领域的新兴种子细胞,其应用价值有赖于能否在长期体外传代扩增后仍保持稳定生物学特性和多向分化能力,需要进一步的实验研究。目的:研究不同培养代次人脐带间充质干细胞重要生物学属性的差异。方法:采用组织块法分离培养人脐带间充质干细胞,分别采用细胞计数法与MTT法检测第3-6代细胞增殖活性;流式细胞仪检测第1-9代细胞表面标志物;细胞染色法分析第3-6代细胞核型。取第3代人脐带间充质干细胞,检测其分化为神经细胞、成骨细胞及肝样细胞的能力。结果与结论:(1)细胞计数法与MTT方法检测结果一致,第3-6代脐带间充质干细胞的增殖曲线均呈"S"型,在一二天时处于缓慢增长期,2-4 d时处于对数增长期,四五天时处于平台期,五六天时处于衰退期;(2)第1-9代脐带间充质干细胞表面高表达CD90、CD44、CD73,不或低表达CD11b、CD18、CD34、CD43及HLA-DR;(3)第3-6代脐带间充质干细胞核型均为正常人体核型;(4)脐带间充质干细胞可分化为神经细胞、成骨细胞及肝样细胞;(5)结果表明,人脐带间充质干细胞具有高度增殖活性和多向分化特性。 展开更多
关键词 干细胞 脐带 间质干细胞 组织工程 脐带脐血干细胞 间充质干细胞 生物学特性 组织块贴壁培养 增殖 表型 染色体制备 诱导分化 三胚层
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转基因斑马鱼模型吉非替尼抗血管生成作用研究 被引量：2
5
作者 张乐平 舒莉萍 +3 位作者 何志旭 周艳华 吴西军 夏海雄 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2019年第7期447-451,共5页
目的吉非替尼是第一个选择性作用于表皮生长因子受体的酪氨酸激酶,主要用于非小细胞肺癌。本研究主要探讨吉非替尼对Tg(Flk1:EGFP)转基因斑马鱼模型血管生成的影响。方法选择Tg(Flk1:EGFP)转基因斑马鱼为动物模型,分别给予10、50和100μ... 目的吉非替尼是第一个选择性作用于表皮生长因子受体的酪氨酸激酶,主要用于非小细胞肺癌。本研究主要探讨吉非替尼对Tg(Flk1:EGFP)转基因斑马鱼模型血管生成的影响。方法选择Tg(Flk1:EGFP)转基因斑马鱼为动物模型,分别给予10、50和100μmol/L浓度的吉非替尼干预处理。以0.025μmol/L的1-苯基-2-硫脲(1-phenyl-2-thiourea,PTU)处理组为空白对照组,以10μmol/L的SU5416处理组为阳性对照组,在受精后12h(12hours post-fertilization,12hpf)开始加药干预,用荧光显微镜观察并统计受精后30h(30hpf)的斑马鱼胚胎体节间血管的数量并计算血管抑制率。用多功能酶标仪检测受精后4d(4days post-fertilization,4dpf)的斑马鱼体内绿色荧光蛋白的表达量,并进行统计学分析。结果空白对照组斑马鱼体节间血管正常形成;10μmol/L的SU5416完全抑制了斑马鱼体节间血管的生成,血管生成抑制率为100%,10、50和100μmol/L浓度吉非替尼血管生成抑制率分别为10.4%、19.6%和26.4%,随着吉非替尼浓度的增加,血管抑制率增加(P<0.05),斑马鱼体内绿色荧光蛋白的表达量减少(P<0.05),并呈剂量依赖性。结论吉非替尼具有抑制斑马鱼血管生成的作用。吉非替尼抑制血管生成可能对其抗肿瘤治疗起一定的辅助作用。 展开更多
关键词 吉非替尼 斑马鱼 体节间血管 抑制血管
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g6pd基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达 被引量：1
6
作者 夏海雄 李莉 +3 位作者 周艳华 任平平 何志旭 舒莉萍 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期57-63,共7页
目的:观察g6pd基因在野生型斑马鱼胚胎早期发育过程中的表达情况。方法:利用基因数据库和BLAST软件分别进行g6pd基因的共线性分析和G6pd蛋白质序列相似性分析。原位杂交技术观察不同时相斑马鱼胚胎中g6pd基因的表达;构建g6pd-EGFP-pCS^(... 目的:观察g6pd基因在野生型斑马鱼胚胎早期发育过程中的表达情况。方法:利用基因数据库和BLAST软件分别进行g6pd基因的共线性分析和G6pd蛋白质序列相似性分析。原位杂交技术观察不同时相斑马鱼胚胎中g6pd基因的表达;构建g6pd-EGFP-pCS^(2+)重组质粒,并将其显微注射入斑马鱼胚胎内,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达;蛋白质印迹法检测24、48、72 hpf斑马鱼胚胎中G6pd蛋白的表达量;改良G6pd定量比值法检测24、48、72 hpf斑马鱼胚胎中G6pd酶活性。结果:g6pd基因在进化过程中相对保守,斑马鱼与人类的G6pd蛋白质相似度为88%,斑马鱼与小鼠的G6pd蛋白质相似度为87%。原位杂交试验结果显示,g6pd基因主要表达于斑马鱼的造血组织,显微注射g6pd-EGFP-p CS2+重组质粒后观察的结果与原位杂交试验结果一致。24、48、72 hpf斑马鱼胚胎中G6pd蛋白相对表达量分别为1.44±0.03、1.47±0.05、1.54±0.02,差异无统计学意义(P>0.05);G6pd酶活性分别为1.74±0.17、1.75±0.12、1.71±0.22,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功观察到斑马鱼体内g6pd基因表达部位及其变化规律,并测定了不同发育时相斑马鱼胚胎中G6pd蛋白表达和酶活性,为建立斑马鱼G6PD缺乏症模型奠定了基础。 展开更多
关键词 葡糖磷酸脱氢酶缺乏 葡糖磷酸脱氢酶 原位杂交 DNA 重组 质粒 基因表达 斑马鱼 胚胎发育
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