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微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因的克隆与原核表达 被引量：5
1
作者 于慧珠 陈兆国 +2 位作者 岳城 米荣升 夏延富 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期670-675,共6页
提取微小隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA,用RT-PCR扩增微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因并克隆到pMD18-T载体中。将鉴定正确的序列亚克隆于原核表达载体pET-28b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western-... 提取微小隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA,用RT-PCR扩增微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因并克隆到pMD18-T载体中。将鉴定正确的序列亚克隆于原核表达载体pET-28b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析,同时将重组蛋白免疫动物后检测血清抗体。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录的序列的同源性为98.66%。目的基因在大肠杆菌中以可溶形式高效表达。表达的重组蛋白占菌体可溶性总蛋白的57.5%,纯化的重组蛋白纯度达95.2%。重组蛋白可被兔抗微小隐孢子虫血清特异性识别,用重组蛋白免疫3次后,兔血清特异性抗体达到较高水平。表明,该重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 CP15/60基因 克隆 原核表达 抗原性
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雏鸡饲养管理要点 被引量：5
2
作者 夏延富 《畜牧兽医科技信息》 2014年第12期95-96,共2页
雏鸡是指从刚孵出到50日龄阶段的小鸡，该阶段小鸡具有生长速度快、代谢旺盛、消化和体温调节能力差、对疾病抵抗力弱和环境适应能力差等方面的特点，因此饲养雏鸡要精心。雏鸡饲养的好坏直接关系到雏鸡的成活率和养鸡户的经济效益。本... 雏鸡是指从刚孵出到50日龄阶段的小鸡，该阶段小鸡具有生长速度快、代谢旺盛、消化和体温调节能力差、对疾病抵抗力弱和环境适应能力差等方面的特点，因此饲养雏鸡要精心。雏鸡饲养的好坏直接关系到雏鸡的成活率和养鸡户的经济效益。本文阐述了育雏、饲养管理要点，供养殖户参考。 展开更多
关键词 雏鸡 育雏 育雏方式 饲养与管理
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隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的原核表达及抗血清的制备 被引量：2
3
作者 于慧珠 岳城 +2 位作者 陈兆国 米荣升 夏延富 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期622-626,共5页
为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检... 为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检测目的蛋白,westernblot分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录中的序列比较,同源性为90.5%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为46ku,westernblot分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)单克隆抗体、隐孢子虫兔基因型感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白3次免疫无特征病原体新西兰白兔后,兔血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。 展开更多
关键词 隐孢子虫鼠基因型 卵囊壁蛋白 CP41 克隆 原核表达
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小附红细胞体的分离鉴定及其对猪的人工感染试验 被引量：2
4
作者 雷晓思 周鹏 +8 位作者 米荣升 黄燕 刘宇轩 胡盼 詹婷婷 江帆 夏延富 邓俊良 陈兆国 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期142-149,共8页
采用2对附红细胞体种特异性引物,对上海地区2个屠宰场采集的736份猪血液基因组DNA进行PCR检测,将小附红细胞体特异性引物扩增产物克隆到pMD18-T载体,进行序列测定和生物信息学分析。将小附红细胞体阳性血液分离物肌肉注射给5头切除脾的... 采用2对附红细胞体种特异性引物,对上海地区2个屠宰场采集的736份猪血液基因组DNA进行PCR检测,将小附红细胞体特异性引物扩增产物克隆到pMD18-T载体,进行序列测定和生物信息学分析。将小附红细胞体阳性血液分离物肌肉注射给5头切除脾的断奶广西巴马小型猪仔猪,感染后定期采血,进行显微镜检,并提取基因组DNA进行PCR检测。另设3头猪作为不感染对照组,进行相同的检测。结果显示,共有101份样品检测出附红细胞体阳性,阳性率为13.72%,其中54份为小附红细胞体单独感染,占7.34%。5头巴马小型猪在接种小附红细胞体后第13~16天起,至第34天试验结束,出现明显的临床症状;血液显微镜检和PCR检测均发现存在小附红细胞体感染;其序列测定显示,16SrRNA基因的部分序列与接种的小附红细胞体的相应序列完全一致。上述结果表明,本研究成功筛选出小附红细胞体阳性血液,并成功实现了小附红细胞体对巴马小型猪的人工感染试验。 展开更多
关键词 小附红细胞体 分离 鉴定 猪 人工感染
原文传递
鸡六种艾美耳球虫ITS-1的克隆和序列分析 被引量：6
5
作者 夏延富 陈兆国 +2 位作者 陈铁桥 米荣升 薛方民 《中国家禽》 北大核心 2009年第13期24-27,共4页
为对上海地区分离的6种鸡艾美耳球虫内转录间隔区1(ITS-1)进行克隆和序列分析,探索ITS-1区域序列在鸡球虫分类学中的作用,利用一对属特异性引物,对上海地区分离的6种球虫的ITS-1序列进行PCR扩增,扩增产物克隆到pMD18-T后进行序列测定,并... 为对上海地区分离的6种鸡艾美耳球虫内转录间隔区1(ITS-1)进行克隆和序列分析,探索ITS-1区域序列在鸡球虫分类学中的作用,利用一对属特异性引物,对上海地区分离的6种球虫的ITS-1序列进行PCR扩增,扩增产物克隆到pMD18-T后进行序列测定,并与GenBank上下载的序列进行系统进化树分析。结果显示,巨型艾美耳球虫有大小分别为547bp和422bp两条PCR扩增条带;和缓艾美耳球虫有大小为627bp和493bp两条PCR扩增条带;其他4种球虫均为一条PCR扩增条带,大小分别为柔嫩艾美耳球虫668bp,毒害艾美耳球虫691bp,堆型艾美耳球虫507bp,早熟艾美耳球虫541bp。6种球虫序列之间的同源性为34%～52%。系统进化分析显示,各个种分别与GenBank中下载的对应球虫种在同一分支上。 展开更多
关键词 鸡 艾美耳球虫 内转录间隔区 克隆 序列分析
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鸡球虫抗药性相关差异基因和蛋白研究进展 被引量：1
6
作者 夏延富 陈兆国 +2 位作者 米荣升 陈铁桥 沈辉 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第10期74-78,共5页
抗药性是药物防治鸡球虫病的主要障碍之一。目前,鸡球虫的抗药性机制尚不清楚。论文对国内外学者分别采用的随机引物扩增多态性DNA、mRNA差异显示、抑制性消减杂交、cDNA阵列等技术研究抗药性相关差异基因,以及采用同工酶、ATP酶活性检... 抗药性是药物防治鸡球虫病的主要障碍之一。目前,鸡球虫的抗药性机制尚不清楚。论文对国内外学者分别采用的随机引物扩增多态性DNA、mRNA差异显示、抑制性消减杂交、cDNA阵列等技术研究抗药性相关差异基因,以及采用同工酶、ATP酶活性检测、聚苯烯酰胺电泳、蛋白质双向电泳结合质谱分析等技术研究抗药性相关差异表达蛋白的研究情况进行了综述,对鸡球虫抗药性相关差异基因和蛋白差异表达研究进行了展望。 展开更多
关键词 球虫 抗药性 差异基因 蛋白差异表达 鸡
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