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非编码RNA在动物肌纤维类型转化中的调控作用研究进展
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作者 陈博赫 刘付穗 +4 位作者 王开明 刘晓林 易磊 马海明 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1132-1141,共10页
非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是由基因组转录而成的不编码蛋白质的RNA分子,包括微小RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)、环状RNA(circular RNA,circRNA)和未知功能的RNA。ncRNA在细胞内发挥多种调控... 非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是由基因组转录而成的不编码蛋白质的RNA分子,包括微小RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)、环状RNA(circular RNA,circRNA)和未知功能的RNA。ncRNA在细胞内发挥多种调控功能,如参与基因表达调控、DNA修复、细胞分裂等生物学过程。ncRNA可以靶向调控基因转录从而调节肌肉生长发育。肌纤维是构成肌肉的基本结构单元,不同生物的肌纤维类型作用不同,且不同肌纤维类型肉的颜色、口感、营养成分和保水性等方面都有所差异。因此,揭示肌纤维类型转化机理对于提高肉品质具有重要意义。ncRNA作为肌纤维类型转化中的关键调节因子,是不可忽视的研究方面。作者以miRNA、lncRNA、circRNA 3种ncRNA为主,综述了ncRNA和肌纤维类型的概念及ncRNA调控肌纤维类型转化的研究现状,以期为ncRNA应用于畜禽肉品质的改良提供重要参考。 展开更多
关键词 NCRNA MIRNA lncRNA circRNA 肌纤维类型转化
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干扰Mtmr 3基因对C2C12细胞增殖与分化的影响
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作者 王开明 +7 位作者 徐雪莉 艾妮妮 李昕瞳 何俊 陶灯 张硕 马海明 张跃博 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1478-1489,共12页
旨在探究肌管相关蛋白3(myotubularin related protein 3,Mtmr 3)对C2C12细胞增殖与分化的调控作用及机制。本试验以小鼠成肌细胞系(C2C12)为试验材料,分别使用qRT-PCR和免疫荧光染色检测Mtmr 3基因在成肌细胞生长期与分化期的mRNA表达... 旨在探究肌管相关蛋白3(myotubularin related protein 3,Mtmr 3)对C2C12细胞增殖与分化的调控作用及机制。本试验以小鼠成肌细胞系(C2C12)为试验材料,分别使用qRT-PCR和免疫荧光染色检测Mtmr 3基因在成肌细胞生长期与分化期的mRNA表达水平和分化第6天时的分布形态。合成Mtmr 3的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),试验分为siRNA NC对照组和Mtmr 3 siRNA处理组(n=3),利用EdU、CCK-8、qRT-PCR、Western blot技术检测Mtmr 3 siRNA对成肌细胞增殖与分化的影响,并通过信号通路研究调控成肌细胞增殖与分化的机制。结果显示,Mtmr 3在生长期的mRNA水平表达量总体呈下降趋势,而在分化期的表达量呈逐渐上升趋势,Mtmr3免疫荧光染色呈肌管状。干扰Mtmr 3后,细胞内Mtmr 3基因的mRNA和蛋白表达水平均极显著地降低(P<0.01);在增殖试验中,转染细胞Mtmr 3 siRNA后,极显著地增加了EdU阳性细胞占总细胞的比率和细胞活力(P<0.01);干扰Mtmr 3表达后,Pcna和Cdk4的mRNA与蛋白表达水平极显著地升高(P<0.01),Ccnd基因的mRNA表达水平极显著地升高(P<0.01)。在分化试验中,转染Mtmr 3 siRNA后极显著抑制了分化标志基因Myhc蛋白的表达水平(P<0.01),极显著抑制细胞分化第4和6天Mtmr 3、Myog和Myhc基因在mRNA的表达水平(P<0.01)。在增殖期和分化期干扰Mtmr 3表达后,Mtor和P70s6k的磷酸化蛋白表达水平分别极显著升高和极显著降低(P<0.01)。CCK-8的结果表明,与对照组相比,Mtmr 3 siRNA能够抵消部分Mtor通路特异性抑制剂Rapamycin(Rapa)的抑制作用,促进成肌细胞增殖(P<0.01);在细胞分化时加入Rapa处理成肌细胞,细胞内Mtor、P 70s6k、Myog和Myhc基因的mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。综上所述,Mtmr 3在成肌细胞生长期的表达量呈下降趋势,而在分化期的表达量呈逐渐上升趋势,Mtmr3免疫荧光染色呈肌管状。干扰Mtmr 3基因表达,通过激活Mtor通路促进成肌细胞增殖,通过失活Mtor� 展开更多
关键词 成肌细胞 Mtmr 3 增殖 分化 MTOR
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猪骨骼肌卫星细胞体外分离培养研究进展 被引量:1
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作者 马海明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第8期2931-2942,共12页
猪骨骼肌是动物机体重要的运动组织及人类主要的肉食来源,也是研究肌肉生长发育和疾病的良好模型。猪出生后,骨骼肌的生长发育、损伤修复都需要肌卫星细胞的参与,体外分离培养猪骨骼肌卫星细胞是深入研究骨骼肌生长发育及疾病发生机理... 猪骨骼肌是动物机体重要的运动组织及人类主要的肉食来源,也是研究肌肉生长发育和疾病的良好模型。猪出生后,骨骼肌的生长发育、损伤修复都需要肌卫星细胞的参与,体外分离培养猪骨骼肌卫星细胞是深入研究骨骼肌生长发育及疾病发生机理的基础,是在细胞水平进行分子功能验证的前提。随着肌肉发育和病理分子机制研究的不断深入,猪骨骼肌卫星细胞的体外分离培养技术也迅速发展起来。背最长肌、后腿肌和半腱肌常用于分离骨骼肌卫星细胞,1日龄猪背最长肌的分离效果最好。常用于分离骨骼肌卫星细胞的酶包括链酶蛋白酶、胶原酶、胰蛋白酶、胶原蛋白酶等,各酶及酶联合消化的时间不同,最优的过滤方式是200目+400目联合过滤,3次离心法可获得纯度较高的细胞。常使用的培养基为DMEM/F12+10%胎牛血清(FBS)+1%青-链霉素(P/S)。骨骼肌肌卫星细胞常见标记物有配对盒基因3(PAX3)、PAX7、生肌决定因子5(Myf5)、Myf4、肌分化因子(MyoD)、肌细胞生成素(MyoG)等。作者通过对猪骨骼肌肌卫星细胞的分离、培养及鉴定等方面进行综述,梳理出各步骤中最佳参数,为建立规范猪骨骼肌卫星细胞分离程序提供参考,以期为肌肉发育和疾病研究提供理论及技术支持。 展开更多
关键词 骨骼肌卫星细胞 分离 体外培养 酶消化法
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畜禽精液冷冻损伤保护研究进展 被引量:5
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作者 蒋隽 +1 位作者 燕海峰 谢农村 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期33-38,共6页
精液冷冻过程中液体冰晶化造成的机械损伤和氧化自由基造成的氧化损伤是畜禽冷冻精液产业化的主要限制因素。在冻精中添加外源抗氧化剂维持氧化还原平衡状态以此减轻氧化损伤、通过添加抗冻剂和控制冷冻速率来减少冰晶产生和减轻机械损... 精液冷冻过程中液体冰晶化造成的机械损伤和氧化自由基造成的氧化损伤是畜禽冷冻精液产业化的主要限制因素。在冻精中添加外源抗氧化剂维持氧化还原平衡状态以此减轻氧化损伤、通过添加抗冻剂和控制冷冻速率来减少冰晶产生和减轻机械损伤成为畜禽冻精技术研究的重点。本文从不同种类抗氧化剂的抗氧化机理及其在冻精中的应用现状、添加抗冻剂和控制冷冻速率等方面减少机械损伤进行综述,以期为畜禽精液冷冻技术提供理论和技术参考。 展开更多
关键词 畜禽 精液冷冻 机械损伤 氧化损伤 抗氧化剂 抗冻剂 冷冻速率
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攸县麻鸭DMA细管精液冷冻技术研究 被引量:3
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作者 袁景阳 +3 位作者 张明军 李闯 姚亚铃 燕海峰 《生命科学研究》 CAS CSCD 2019年第2期115-121,共7页
为利用冷冻精液保存地方鸭品种资源,以笼养攸县麻鸭公鸭(日龄170 d)为试验对象,检测其精子密度与活力,对精液稀释液渗透压进行筛选;将活力在0.5以上的精液以6%二甲基乙酰胺(dimethylacetamide,DMA)作为冷冻保护剂,用便携式简易专利技术... 为利用冷冻精液保存地方鸭品种资源,以笼养攸县麻鸭公鸭(日龄170 d)为试验对象,检测其精子密度与活力,对精液稀释液渗透压进行筛选;将活力在0.5以上的精液以6%二甲基乙酰胺(dimethylacetamide,DMA)作为冷冻保护剂,用便携式简易专利技术装置,将细管精液置于液氮面上约2 cm高度熏蒸冷冻7 min后浸入液氮10 min以上,随后40℃水浴解冻10 s,检测解冻精子活力;将精子活力在0.3以上的细管精液在液氮中保存,待收集到足够细管精液后对相近周龄临武鸭母鸭进行输精。结果显示:1)在不同渗透压稀释液中,精子体外存活时间以LR液303 m Osm/kg组最佳,其活力与273 m Osm/kg组差异不显著(P>0.05),与215 m Osm/kg组差异显著(P<0.05); 2)采集的原精平均活力中,诱情方式的为0.71,按摩方式的为0.61; 3)诱情方式冻精液的平均活力为0.33,活力在0.3以上的冻精输精组的受精率为85.93%,鲜精组为88.17%,且冻精最高批次平均受精率达93.8%。本文精液冷冻方法为我国鸭乃至禽类延长公禽在后裔测定中的种用期限,利用精液冷冻保存种质资源,弥补活体保种的不足等领域的研究与应用提供了技术支撑。 展开更多
关键词 攸县麻鸭 精液冷冻 二甲基乙酰胺(DMA) 细管
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手持密度仪检测鸡与鸭精子密度技术的研究 被引量:2
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作者 高亚楠 +3 位作者 李闯 姚亚铃 蒲学慧 燕海峰 《激光生物学报》 CAS 2019年第2期168-177,共10页
精子密度仪在哺乳动物中已推广应用,但在家禽中还研究很少。本文以黑凤鸡和攸县麻鸭精液为实验材料,手持精子密度仪与血细胞计数板为检测工具,对影响精子密度测定方法准确率因素进行分析,建立鸡、鸭精子密度-吸光度函数并进行验证。结... 精子密度仪在哺乳动物中已推广应用,但在家禽中还研究很少。本文以黑凤鸡和攸县麻鸭精液为实验材料,手持精子密度仪与血细胞计数板为检测工具,对影响精子密度测定方法准确率因素进行分析,建立鸡、鸭精子密度-吸光度函数并进行验证。结果表明:用密度仪测定时的稀释液(简称"测试液")为3%NaCl时,精液稀释后应尽快检测吸光度;样液在比色皿中的混匀方式对吸光度测定有很大影响;精液用3%NaCl以及3种常用家禽精液稀释液进行10倍稀释后测定吸光度,B液吸光度显著高于与其它3组(P<0.05),其它3组间差异不显著(P>0.05)。用测试液为3.0%NaCl,鸡和鸭精子密度-吸光度呈三次函数关系,回归方程分别是Y_1=1.374X^3-0.786X^2+0.945X-0.002(R^2=0.997)、Y_2=1.283X^3-0.899X^2+0.994X-0.009(R^2=0.996);用0.9%NaCl代替3%NaCl作测试液简化精子密度测定方法可行,鸡精子密度-吸光度回归方程为Y_3=-0.264X^3+1.23X^2+0.468X+0.019(R^2=0.999)。鸡精液测试液为0.9%NaCl、3%NaCl时两种函数的吸光度最佳范围分别是0.035~0.692、0.069~0.624,在此范围内计数板与方程两种方法得到的密度差异不显著(P>0.05),以计数法为真实值,两种方法平均相对误差分别为6.95%、3.11%。以3%NaCl为测试液,鸭精液函数所测样品吸光度最佳范围小于鸡精液的,以计数板法为真实值,在吸光度0.054~0.123范围内的,函数与计数板两种方法所得的精子密度的平均相对误差为4.61%。本文将促进家禽手持精子密度仪研发,以及更好的使用哺乳动物精子密度仪。 展开更多
关键词 精子密度 密度仪 细胞计数
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品种、冷冻速率和白藜芦醇对鸡精液冷冻保存效果的影响 被引量:2
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作者 蒋隽 +3 位作者 朱立军 姚亚铃 蒲学慧 燕海峰 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1880-1887,共8页
【目的】明确品种、冷冻速率和白藜芦醇对鸡精液冷冻保存效果的影响及其互作关系,为解决鸡精液冷冻保存不稳定的困境及加快新品种培育进程提供技术支持。【方法】采集黑丝羽乌骨鸡(简称乌鸡)和黄土二鸡(简称黄鸡)2个品种的公鸡精液,分... 【目的】明确品种、冷冻速率和白藜芦醇对鸡精液冷冻保存效果的影响及其互作关系,为解决鸡精液冷冻保存不稳定的困境及加快新品种培育进程提供技术支持。【方法】采集黑丝羽乌骨鸡(简称乌鸡)和黄土二鸡(简称黄鸡)2个品种的公鸡精液,分别添加0、25、50和100μmol/L白藜芦醇,以二甲基乙酰胺(DMA)为抗冻剂制备细管冻精,在液氮面上1 cm处(高冷冻速率)或3 cm处(低冷冻速率)冷冻,通过冻后精子活力、脂质过氧化水平和线粒体膜电位水平评价鸡精液冻后品质。【结果】黄鸡精液冻后精子活力显著高于乌鸡(P<0.05,下同),但线粒体膜电位水平差异不显著(P>0.05,下同);高冷冻速率下的鸡精液冻后脂质过氧化水平显著低于低冷冻速率,但冻后精子活力和线粒体膜电位水平差异不显著;不同白藜芦醇添加量下,鸡精液冻后精子活力和脂质过氧化水平差异不显著,但线粒体膜电位水平差异显著。双因素组合时,品种×冷冻速率、品种×白藜芦醇和冷冻速率×白藜芦醇间均存在交互作用,其中,乌鸡×高冷冻速率组合的鸡精液冻后脂质过氧化水平显著低于黄鸡×高冷冻速率组合,但冻后精子活力和线粒体膜电位水平无显著差异。三因素组合时,鸡精液冻后脂质过氧化水平最低的组合是乌鸡×低冷冻速率×50μmol/L白藜芦醇,线粒体膜电位水平最高的组合是乌鸡×低冷冻速率×0μmol/L白藜芦醇。【结论】鸡精液冷冻保存时其品种、冷冻速率和白藜芦醇间存在二元互作效应或三元互作效应。因此,只有充分考虑鸡品种、冷冻速率和抗氧化剂间的互作效应,才能切实提高鸡冷冻精液的品质。 展开更多
关键词 冷冻精液 品种 冷冻速率 白藜芦醇 互作效应
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雪峰乌骨鸡HSP70基因多态性与精液品质关联分析
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作者 蒋隽 +3 位作者 姚亚铃 郭英 李闯 燕海峰 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第8期1378-1384,共7页
旨在研究雪峰乌骨鸡HSP70基因多态性及其与鸡冻精品质的关系,以期筛选出鸡精液抗冻性相关分子标记,为鸡精液冷冻保存及其分子育种提供技术支撑。选取100只同一批次、性成熟的白羽雪峰乌骨种公鸡,测定采精量、精子密度和冻精活力等指标... 旨在研究雪峰乌骨鸡HSP70基因多态性及其与鸡冻精品质的关系,以期筛选出鸡精液抗冻性相关分子标记,为鸡精液冷冻保存及其分子育种提供技术支撑。选取100只同一批次、性成熟的白羽雪峰乌骨种公鸡,测定采精量、精子密度和冻精活力等指标。翅静脉采血,提取基因组DNA并扩增HSP70基因,构建精液品质低、中、高3个混池并测序。单个样本测序后,比对测序峰图,完成基因分型,统计不同基因型个体数,并进一步进行精液品质关联分析。结果发现:HSP70基因436 bp处存在G>A突变,G为优势基因,将群体分成AA、AG和GG这3种基因型,各基因型频率依次为22%、44%和34%,该位点遗传多样性分析PIC=0.3714,为中度多态位点,Hardy-Weinberg平衡适合性检验得χ^2=1.1480(P>0.05),该群体符合Hardy-Weinberg平衡规律。基因多态与精液品质关联分析表明,GG基因型个体采精量和精子密度极显著(P<0.01)高于AG型、AA型个体,且冻后活力显著(P<0.05)高于AG型个体,极显著(P<0.01)高于AA型个体;AG型个体采精量和精子密度极显著(P<0.01)高于AA型个体,冻精活力差异不显著(P>0.05)。综上所述,HSP70基因突变G/A位点与鸡冻精品质显著相关,可以作为雪峰乌骨鸡个体精液抗冻性的候选基因,基因型GG的个体精液更具抗冻性,其次为AG型个体。 展开更多
关键词 HSP70基因 单核苷酸多态性 精液品质 冷冻精液 雪峰乌骨鸡 测序
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