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K562细胞定向表达cDNA文库的快速构建 被引量：1
1
作者 刘智 唐迎胜 +2 位作者 周钢 曾海涛 朱定尔 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 1996年第4期12-14,共3页
采用一步法快速从培养的Ｋ５６２细胞中抽提、纯化ｍＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ分子后，通过在ｃＤＮＡ分子两端加ＥｃｏＲＩ适配子、Ｔ４多核苷酸激酶作用下磷酸化、ＮｏｔＩ内切酶消化、过ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱等步骤，与λ... 采用一步法快速从培养的Ｋ５６２细胞中抽提、纯化ｍＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ分子后，通过在ｃＤＮＡ分子两端加ＥｃｏＲＩ适配子、Ｔ４多核苷酸激酶作用下磷酸化、ＮｏｔＩ内切酶消化、过ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱等步骤，与λＥｘＣｅｌｌ／ＮｏｔＩ／ＥｃｏＲＩ／ＣＩＰ载体连接，然后用包装蛋白在体外包装连接产物，感染Ｅ·ＣｏｌｉＮＭ５２２以构建ｃＤＮＡ文库。经检测：该文库含有１．０×１０６个重组子，ｃＤＮＡ分子长度在０．４～８．５ｋ６范围，扩增后的滴度达１．２×１０１０ｐｆｕ／ｍｌ，完全达到筛选低表达基因的要求，为从Ｋ５６２细胞中克隆新的锌指蛋白ｃＤＮＡ基因奠定了基础。 展开更多
关键词 白血病 K562细胞 CDNA文库 锌指蛋白
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多发性骨髓瘤恶性相关基因MYEOV2对NIH/3T3细胞生长的影响 被引量：1
2
作者 汤立军 胡维新 +3 位作者 唐迎胜 江元山 罗赛群 刘静 《中国医师杂志》 CAS 2004年第8期1009-1011,共3页
目的　分析多发性骨髓瘤恶性相关基因MYEOV2对NIH/ 3T3细胞生长的影响。方法　将MYEOV2基因克隆到真核表达载体pcDNA3 1( +)上 ,并将阳性重组子通过脂质体转染入NIH/ 3T3细胞中 ,G418筛选获得转染阳性克隆并用RT -PCR检测MYEOV2基因的... 目的　分析多发性骨髓瘤恶性相关基因MYEOV2对NIH/ 3T3细胞生长的影响。方法　将MYEOV2基因克隆到真核表达载体pcDNA3 1( +)上 ,并将阳性重组子通过脂质体转染入NIH/ 3T3细胞中 ,G418筛选获得转染阳性克隆并用RT -PCR检测MYEOV2基因的表达。运用流式细胞分类法、细胞生长曲线分析MYEOV2基因对NIH/ 3T3细胞生长的影响。结果　成功获得转染pcDNA3 1( +) /MYEOV2的细胞阳性克隆。流式细胞分析显示转染pcDNA3 1( +) /MYEOV2、转染空载体及未转染的NIH/ 3T3细胞的S期细胞分别为 3 0 9%、2 0 1%、16 1% ,前者较后两者S期细胞增多 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。细胞生长曲线显示转染pcDNA3 1( +) /MYEOV2、转染空载体、未转染的NIH/ 3T3细胞的倍增时间分别为 13 6h、2 5 3h、2 7 4h ,前者细胞倍增时间较后两者缩短 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论　MYEOV2基因的表达增加促进DNA合成增加 ,细胞增殖加快 。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 恶性基因 MYEOV2 NIH/3T3 细胞生长 细胞周期 肿瘤
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一个新的C2H2型锌指蛋白cDNA基因的克隆
3
作者 曾海涛 周钢 +2 位作者 唐迎胜 刘智 胡维新 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2001年第2期46-46,48,共2页
目的 :从K5 6 2细胞中克隆新的锌指蛋白cDNA基因片段。方法 :提取K5 6 2细胞中总RNA ,逆转录后 ,用CX2C和H -CLink引物进行加端PCR ,扩增产物经限制性内切酶酶切后 ,重组至 pGEMTZf(+ )载体 ,用末端终止法测定插入片段的序列。结果 :测... 目的 :从K5 6 2细胞中克隆新的锌指蛋白cDNA基因片段。方法 :提取K5 6 2细胞中总RNA ,逆转录后 ,用CX2C和H -CLink引物进行加端PCR ,扩增产物经限制性内切酶酶切后 ,重组至 pGEMTZf(+ )载体 ,用末端终止法测定插入片段的序列。结果 :测出五个插入片段的序列。与GenBank核酸数据库中的已知序列进行同源性比较分析 ,发现一个序列为新的cDNA基因片段。该基因编码产物至少含有五个C2H2型锌指结构。结论 :从K5 6 2细胞中克隆出一个新的C2H2型锌指蛋白cDNA基因片段 ,为测定该基因的全序列和功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 562细胞 克隆 C2H2型锌指蛋白 CDNA基因
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8例葡萄糖－6－磷酸脱氢酶缺乏症的快速基因诊断
4
作者 唐迎胜 谢慎思 +1 位作者 彭兴华 朱定尔 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 1995年第2期21-22,共2页
８例葡萄糖－６－磷酸脱氢酶缺乏症的快速基因诊断湖南医科大学分子生物学研究室（４１００７８）唐迎胜，谢慎思，彭兴华，朱定尔葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｌｌａｓｅ，Ｇ６... ８例葡萄糖－６－磷酸脱氢酶缺乏症的快速基因诊断湖南医科大学分子生物学研究室（４１００７８）唐迎胜，谢慎思，彭兴华，朱定尔葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｌｌａｓｅ，Ｇ６ＰＤ）缺乏症是人类最常见的遗传性酶... 展开更多
关键词 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 基因诊断 缺乏症 外显子 基因突变分析 点突变 样本 分析结果 产前基因诊断 分子生物学研究
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46，XY女性的SRY基因启动子序列的突变研究 被引量：1
5
作者 刘智 唐迎胜 +3 位作者 谢慎思 周钢 曾海涛 朱定尔 《湖南医科大学学报》 CSCD 1996年第6期513-516,共4页
采用非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对６例４５，ＸＹ女性的ＳＲＹ基因的启动子序列进行突变分析。结果表明，患者ＳＲＹ基因的启动子序列均未发生突变。推测某些４６，ＸＹ女性患者在其ＳＲＹ基因ＨＭＧ盒序列及启动子序列均无突变发生... 采用非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对６例４５，ＸＹ女性的ＳＲＹ基因的启动子序列进行突变分析。结果表明，患者ＳＲＹ基因的启动子序列均未发生突变。推测某些４６，ＸＹ女性患者在其ＳＲＹ基因ＨＭＧ盒序列及启动子序列均无突变发生的情况下，可能存在与性分化有关的其它基因的突变，从而导致性反转。 展开更多
关键词 性反转 SRY基因 启动子序列 突变
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从K562细胞中克隆新的锌指蛋白cDNA基因的初步研究
6
作者 唐迎胜 刘智 +3 位作者 周钢 曾海涛 谢慎思 朱定尔 《湖南医科大学学报》 CSCD 1996年第6期493-496,共4页
采用５＇加端ＰＣＲ从Ｋ５６２ｃＤＮＡ文库中扩增出含锌指结构域的ｃＤＮＡ基因片段，重组至ｐＧＥＭ７ＺＤＮＡ载体中。通过ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交初步从Ｋ５６２ｃＤＮＡ文库中筛选出９个含锌指基因片段的重组克隆。经Ｄ... 采用５＇加端ＰＣＲ从Ｋ５６２ｃＤＮＡ文库中扩增出含锌指结构域的ｃＤＮＡ基因片段，重组至ｐＧＥＭ７ＺＤＮＡ载体中。通过ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交初步从Ｋ５６２ｃＤＮＡ文库中筛选出９个含锌指基因片段的重组克隆。经ＤＮＡ序列分析和基因库检索，发现有２个克隆的序列与巳知基因差异显著，有可能为新的锌指蛋白基因片段。 展开更多
关键词 锌指蛋白 基因 克隆 CDNA K562细胞
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