鸭短喙-侏儒综合征病原的初步鉴定 被引量：26

1

作者 李传峰 李琦 +2 位作者 陈宗艳 唐井玉 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第6期1-6,共6页

2014年下半年以来,在我国华东地区商品肉鸭养殖地区暴发了一种以生长迟缓、鸭喙变短、舌头外露下垂、跛行、瘫痪、拉稀以及翅腿易折断为主要临床特征的传染性疾病,暂命名为鸭短喙-侏儒综合征。剖检时可见发病鸭胰腺、肺脏和胸腺等组织... 2014年下半年以来,在我国华东地区商品肉鸭养殖地区暴发了一种以生长迟缓、鸭喙变短、舌头外露下垂、跛行、瘫痪、拉稀以及翅腿易折断为主要临床特征的传染性疾病,暂命名为鸭短喙-侏儒综合征。剖检时可见发病鸭胰腺、肺脏和胸腺等组织出血。组织病理学变化主要表现为心脏、胰腺、肾脏、肺脏和肝脏等组织细胞变性、坏死以及充血、出血。RT-PCR/PCR检测结果显示,在患鸭组织中存在类似鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)的特异性核酸,未见其他水禽病毒核酸。系统进化树分析显示本病病原与经典GPV密切相关。免疫组化进一步检测发现,患鸭组织中存在GPV特异性的抗原。鉴于本病与经典水禽细小病毒病的临床表征、剖检及组织病理学变化的差异性,我们初步确定鸭短喙-侏儒综合征病原为一种与GPV密切相关的新型鸭细小病毒(Novel duck parvovirus,NDPV)。 展开更多

关键词 鸭短喙侏儒综合征 鹅细小病毒 免疫组化 PCR

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新型鸭源细小病毒安徽株AH-D15株的分离鉴定 被引量：12

2

作者 殷冬冬 唐井玉 +8 位作者 王瑞 周晓雅 张莉 陈鹏 张雪梅 梅楠 祁克宗 王勇 王桂军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期528-531,共4页

为确定安徽省某鸭场发生的以雏鸭发育迟缓、鸭喙萎缩、舌头外伸下弯为特征的疾病病因,本研究利用PCR对病鸭样品进行检测,结果扩增出鹅细小病毒(GPV)特异性目的片段。将PCR阳性病料组织样品接种11日龄樱桃谷鸭胚,盲传3代后,可致鸭胚胚体... 为确定安徽省某鸭场发生的以雏鸭发育迟缓、鸭喙萎缩、舌头外伸下弯为特征的疾病病因,本研究利用PCR对病鸭样品进行检测,结果扩增出鹅细小病毒(GPV)特异性目的片段。将PCR阳性病料组织样品接种11日龄樱桃谷鸭胚,盲传3代后,可致鸭胚胚体出血严重,并且鸭喙畸形,证实分离到一株鸭源细小病毒(命名为AH-D15株)。利用第3代尿囊液感染2日龄健康樱桃谷肉鸭,2周后感染鸭出现短喙症状,并从鸭脑、肾、脾、胰腺和肝脏组织内检测到病毒。将分离病毒株的VP3核苷酸序列与Gen Bank中登录的GPV和番鸭细小病毒进行比对,结果表明AH-D15株与德国的VG32/1株和匈牙利的virulent B株亲缘关系最近,同源性分别为96.3%和96.5%。上述结果表明从病鸭体内分离到的鸭细小病毒可能来源于GPV,因此为该病的防控提供实验依据。 展开更多

关键词 新型鸭细小病毒 樱桃谷鸭 分离鉴定

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小反刍兽疫病毒分子生物学及其疫苗研究进展 被引量：9

3

作者 董丹丹 刘腾 +7 位作者 缪秋红 朱杰 张莉 殷冬冬 唐井玉 李传峰 陈宗艳 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第1期110-118,共9页

小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科、麻疹病毒属,主要感染山羊、绵羊、野生小反刍兽,临床症状以发热、肺炎、腹泻及呼吸道和消化道黏膜炎症为主要特征。目前小反刍兽疫在世界范围内广泛传播,给畜牧业造成了严重经济损失。加强对小反刍兽疫... 小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科、麻疹病毒属,主要感染山羊、绵羊、野生小反刍兽,临床症状以发热、肺炎、腹泻及呼吸道和消化道黏膜炎症为主要特征。目前小反刍兽疫在世界范围内广泛传播,给畜牧业造成了严重经济损失。加强对小反刍兽疫病毒的致病机理和疫苗研究,对于防控小反刍兽疫具有重要意义。本文对近年来小反刍兽疫病毒及其疫苗研究领域的进展进行了综述与展望。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 疫苗 进展

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口疮病毒AH-GY13株的分离鉴定及B2L基因的原核表达 被引量：9

4

作者 宫晓华 殷冬冬 +8 位作者 王瑞 唐井玉 周晓雅 梅楠 张雪梅 兰梦蝶 陈鹏 王勇 王桂军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期185-191,共7页

为确定安徽地区某山羊场发生的疑似口疮（orf）的病原,经过临床诊断、PCR检测以及HeLa细胞培养等途径,确定其为口疮病毒（ORFV）,并命名为AH-GY13株。根据GenBank中公布的口疮病毒B2L囊膜蛋白基因序列,设计引物,用PCR方法扩增口疮病毒B2... 为确定安徽地区某山羊场发生的疑似口疮（orf）的病原,经过临床诊断、PCR检测以及HeLa细胞培养等途径,确定其为口疮病毒（ORFV）,并命名为AH-GY13株。根据GenBank中公布的口疮病毒B2L囊膜蛋白基因序列,设计引物,用PCR方法扩增口疮病毒B2L基因,并将此基因序列及其推导的氨基酸序列与其他不同来源的ORFV分离株进行比较。结果显示,AH-GY13株与选取的10株毒株的核苷酸序列同源性在97.4%~99.3%之间,氨基酸同源性在97.9%~99.7%之间;进化树分析显示,此毒株与辽宁省分离株属于同一分支。将该基因定向插入到原核表达载体pET-32a（＋）中,构建原核表达载体pET-32a（＋）-B2L。转化BL21,经IPTG诱导,B2L基因获得表达,以包涵体的形式存在,通过优化诱导时间和IPTG的浓度,确定了表达B2L基因的最佳诱导条件：IPTG终浓度为1 mmol/L,37℃诱导4 h。Western-blot分析表明,表达产物具有良好的免疫活性。上述结果为进一步研究ORFV B2L囊膜蛋白的结构与功能奠定了基础。 展开更多

关键词 口疮病毒 分离鉴定 B2L基因 序列分析 原核表达 蛋白质免疫印迹

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鸭坦布苏病毒AH-F10株全基因组的分子克隆与序列分析 被引量：8

5

作者 王楠楠 姜安安 +5 位作者 王蓓 王晓旭 毕庄莉 唐井玉 刘光清 王桂军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期50-54,共5页

为了解鸭坦布苏病毒安徽分离株AH-F10的分子特征，利用RT—PCR方法对其全基因组序列进行了克隆，并将全基因组及其推导的氨基酸序列与参考毒株进行序列比对及系统进化分析。结果显示，毒株AH—F10的全基因组序列长10990nt，含有1个大的... 为了解鸭坦布苏病毒安徽分离株AH-F10的分子特征，利用RT—PCR方法对其全基因组序列进行了克隆，并将全基因组及其推导的氨基酸序列与参考毒株进行序列比对及系统进化分析。结果显示，毒株AH—F10的全基因组序列长10990nt，含有1个大的阅读框架，两侧各有一个非编码区（Untranslationregion，UTR）。序列比对结果表明，AH—F10株与13株参考毒株的基因编码区具有较高的氨基酸序列同源性，其中与江苏JS20LO株的同源性最高，达98％。研究还发现，鸭坦布苏病毒各分离株的5IUTR的序列表现一定程度的变异，AH—F10株与参考株的核苷酸序列同源性在94％～97％之间。此研究结果为进一步了解鸭坦布苏病毒的遗传变异及构建该病毒的反向遗传学操作系统奠定了基础。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 AH—F10株 全基因组 序列分析

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Nectin-4基因的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：6

6

作者 殷冬冬 白彩霞 +7 位作者 唐井玉 张成 王瑞 李传峰 刘光清 祁克宗 王桂军 王勇 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2016年第3期6-10,共5页

根据Nectin-4基因序列设计特异性引物,进行PCR扩增,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,经PCR、酶切和测序鉴定,成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-Nectin-4。将重组质粒转化大肠埃希氏菌Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导表达目的蛋白。表达... 根据Nectin-4基因序列设计特异性引物,进行PCR扩增,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,经PCR、酶切和测序鉴定,成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-Nectin-4。将重组质粒转化大肠埃希氏菌Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定正确后,纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体血清,并利用琼脂扩散试验检测其效价。SDS-PAGE结果表明该重组蛋白获得高效表达,表达的蛋白以包涵体形式存在。Western blot结果表明表达的蛋白能与GST单抗发生反应,具有较好的反应原性。琼脂扩散试验结果表明制备的抗Nectin-4蛋白多克隆抗体效价达1∶8。由于Nectin-4是小反刍兽疫病毒新近发现的受体,这一研究为后续Nectin-4与小反刍兽疫病毒的相互作用研究奠定了一定基础。 展开更多

关键词 Nectin-4基因 原核表达 多克隆抗体

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干扰素刺激基因15抗病毒感染的分子机制 被引量：2

7

作者 唐井玉 杜汉宇 +6 位作者 贾楠楠 汤傲星 刘春草 朱杰 孟春春 李传峰 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第6期170-176,共7页

干扰素刺激基因15(ISG15)是由病原微生物或干扰素诱导产生的一种大小为15 kDa的泛素样蛋白。在干扰素诱导的数百个干扰素刺激基因中,ISG15是诱导最强烈、最快的ISG蛋白之一。研究表明,ISG15对多种病毒具有抗病毒作用。此外,ISG15在调节... 干扰素刺激基因15(ISG15)是由病原微生物或干扰素诱导产生的一种大小为15 kDa的泛素样蛋白。在干扰素诱导的数百个干扰素刺激基因中,ISG15是诱导最强烈、最快的ISG蛋白之一。研究表明,ISG15对多种病毒具有抗病毒作用。此外,ISG15在调节宿主损伤、DNA修复,调节信号通路及抗原递呈中也发挥着重要的作用。文章介绍了ISG15的概况,并阐述了近年来ISG15在抗病毒、免疫调节和调节宿主信号通路过程中的作用。 展开更多

关键词 干扰素刺激基因15 抗病毒作用 免疫调节

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3株猫细小病毒的分离鉴定及其遗传进化分析 被引量：1

8

作者 汤傲星 刘春草 +7 位作者 王真真 孟春春 朱杰 唐井玉 李传锋 郭宏元 宋新宇 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第2期86-92,共7页

为了解猫细小病毒(FPV)在国内的流行状况及其遗传变异和演化方向,本研究对采集的30份疑似感染FPV的肛拭子进行检测,利用常规方法从中分离并鉴定出3株FPV。然后扩增出3株FPV的VP2基因,利用DNAstar等软件将获得的VP2基因与国内外报道的流... 为了解猫细小病毒(FPV)在国内的流行状况及其遗传变异和演化方向,本研究对采集的30份疑似感染FPV的肛拭子进行检测,利用常规方法从中分离并鉴定出3株FPV。然后扩增出3株FPV的VP2基因,利用DNAstar等软件将获得的VP2基因与国内外报道的流行株和疫苗株的VP2基因序列进行比对和遗传进化分析。研究结果显示,本文分离的3株FPV均能在猫肾细胞中良好增殖,并产生典型致细胞病变(CPE),在电子显微镜下呈现典型的细小病毒形态特征。序列比对结果显示,此3株FPV的VP2序列与国内外参考毒株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为98.6%~99.8%和98.5%~99.8%;与疫苗株的VP2基因的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.1%~99.4%和99.1%~99.5%;进化树分析结果显示,本研究分离的FPV与国内流行株及疫苗株均具有较近的遗传距离,并处于同一拓朴群,但是SH612株和ZZ6293株与疫苗株的距离稍微远些,处于不同的拓朴亚群。本文研究结果丰富了中国FPV的流行病学资料,为进一步研发FPV疫苗提供了参考资料。 展开更多

关键词 猫细小病毒 VP2 序列同源性 遗传进化

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华东地区猫杯状病毒的分离鉴定及遗传进化分析 被引量：5

9

作者 汤傲星 刘春草 +8 位作者 王元红 孟春春 朱杰 戚睿斌 李传锋 唐井玉 郭宏元 宋新宇 刘光清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期667-671,共5页

为了解猫杯状病毒(FCV)在中国华东地区的流行状况及其遗传变异和演化特征,本研究采集30份疑似感染FCV的猫眼鼻拭子,通过常规方法分离鉴定出9株FCV,经RT-PCR和测序获得了FCV VP1的基因序列,与文献报道的流行株、高致病力FCV(VS-FCV)株和... 为了解猫杯状病毒(FCV)在中国华东地区的流行状况及其遗传变异和演化特征,本研究采集30份疑似感染FCV的猫眼鼻拭子,通过常规方法分离鉴定出9株FCV,经RT-PCR和测序获得了FCV VP1的基因序列,与文献报道的流行株、高致病力FCV(VS-FCV)株和疫苗株VP1基因同源性进行比对及遗传进化分析。结果显示,9株华东地区分离株VP1基因核苷酸序列同源性为70.9%~93.3%,分离株与流行株VP1基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为66.9%~84.8%和78.0%~91.9%,且大部分分离株与国内流行株处于同一分支;与VS-FCV VP1基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为73.9%~80.3%和82.2%~89.8%,其中只有FCV AH1分离株与VS-FCV-5株处于同一分支;与国内疫苗株VP1基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为73.9%~80.3%和82.2%~89.8%,其中只有FCV AH1株与国内疫苗株Vaccine-FCV-D90357处于同一分支。以上结果首次表明,华东地区FCV不断发生变异,是导致传统疫苗不能达到很好免疫保护效果的原因。本研究丰富了中国FCV的流行病学资料,为FCV疫苗研发提供了参考。 展开更多

关键词 猫杯状病毒 分离鉴定 VP1 序列同源性 遗传进化

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鸭坦布苏病毒感染对BHK-21细胞分泌胞外体的影响 被引量：3

10

作者 周晓雅 周祺 +5 位作者 殷冬冬 唐井玉 邢雪 董靖 刘红梅 王桂军 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期161-166,共6页

目的:探讨鸭坦布苏病毒感染BHK-21细胞对胞外体的影响,进一步研究鸭坦布苏病毒的致病机制。方法:利用鸭坦布苏病毒AH-F10株感染BHK-21细胞,并设置未感染病毒的对照组。用PEG法提取感染病毒的BHK-21细胞和对照组细胞上清中的胞外体,通过... 目的:探讨鸭坦布苏病毒感染BHK-21细胞对胞外体的影响,进一步研究鸭坦布苏病毒的致病机制。方法:利用鸭坦布苏病毒AH-F10株感染BHK-21细胞,并设置未感染病毒的对照组。用PEG法提取感染病毒的BHK-21细胞和对照组细胞上清中的胞外体,通过电镜观察、Western blot检测对胞外体进行鉴定,并对提取的两组胞外体进行质谱鉴定分析。结果:电镜观察到纯度高的内部色浅、边缘浓染的杯状囊泡,直径30~160 nm。感染组胞外体的平均粒径大小大于对照组胞外体的平均粒径大小。Western blot试验中,均检测出CD9、CD63分子。应用液相质谱法从胞外体中鉴定出106种蛋白,其中感染坦布苏病毒组共检测出84种蛋白,对照组49种蛋白,有27种共同蛋白分子。结论:鸭坦布苏病毒感染BHK-21细胞会影响细胞胞外体的分泌,影响胞外体粒径大小及其蛋白组成成分。本试验为进一步研究坦布苏病毒的感染和致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 BHK-21细胞 胞外体 质谱分析

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鸭坦布苏病毒E蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：1

11

作者 王勇 殷冬冬 +5 位作者 宫晓华 王瑞 许漩 唐井玉 兰梦蝶 王桂军 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2016年第2期141-145,共5页

目的用RT-PCR技术扩增鸭坦布苏病毒(DTMUV)AH-F10株E基因,并克隆至pET32a(+)载体,构建重组表达质粒pET32a-E,表达E蛋白。方法重组表达质粒转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导后,获得含6个His标签的融合蛋白,大小约54kDa。表达的蛋白以... 目的用RT-PCR技术扩增鸭坦布苏病毒(DTMUV)AH-F10株E基因,并克隆至pET32a(+)载体,构建重组表达质粒pET32a-E,表达E蛋白。方法重组表达质粒转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导后,获得含6个His标签的融合蛋白,大小约54kDa。表达的蛋白以包涵体形式存在。对目的蛋白进行纯化,用纯化的E蛋白免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体血清。结果SDS-PAGE和Western blot试验结果表明E基因在大肠埃希菌中成功表达,并能与抗DTMUV多克隆抗体产生特异性反应,具有良好的反应原性。间接免疫荧光试验表明免疫小鼠后获得的多克隆抗体能与DTMUV反应。结论本研究为DTMUV新型疫苗和诊断试剂盒的进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 E蛋白 原核表达 多克隆抗体

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Viperin与病毒感染的研究进展

12

作者 贾楠楠 唐井玉 +1 位作者 刘光清 孟春春 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1253-1260,共8页

干扰素诱导的内质网相关抑制病毒蛋白(Viperin)是一种常见的干扰素诱导蛋白,可抑制多种病毒的增殖。研究证实Viperin是一种多功能的、膜靶向的抗病毒蛋白,其每个结构域都扮演着不同的病毒特异性角色。此外其表达不仅局限于依赖干扰素通... 干扰素诱导的内质网相关抑制病毒蛋白(Viperin)是一种常见的干扰素诱导蛋白,可抑制多种病毒的增殖。研究证实Viperin是一种多功能的、膜靶向的抗病毒蛋白,其每个结构域都扮演着不同的病毒特异性角色。此外其表达不仅局限于依赖干扰素通路调控,还具有鲜明的多样性来源特征。有趣的是,Viperin还可被多种被病毒利用来促进病毒自身的增殖。为更好的了解其功能,本文从Viperin的结构特征、产生机制、抑制病毒复制和促进病毒复制等方面最新的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 Viperin 结构特征 表达调控 抗病毒作用 促病毒作用

原文传递

山羊干扰素刺激基因15克隆、生物信息学分析及亚细胞定位

13

作者 唐井玉 杜汉宇 +1 位作者 孟春春 刘光清 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第8期2843-2854,共12页

【目的】对山羊干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)的CDS区进行克隆、表达和生物信息学分析,并探讨小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)感染山羊子宫内膜上皮细胞(caprine endometrial epitheli... 【目的】对山羊干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)的CDS区进行克隆、表达和生物信息学分析,并探讨小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)感染山羊子宫内膜上皮细胞(caprine endometrial epithelial cells,EEC)对ISG15的影响。【方法】根据GenBank中公布的山羊ISG15基因预测序列(登录号:XM_005690795)设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增山羊ISG15基因CDS区,连接至真核表达载体进行测序并表达,对不同物种ISG15核苷酸及氨基酸序列进行比对,并构建系统进化树,利用生物信息学方法对ISG15蛋白理化性质、跨膜结构、修饰位点、二级结构、三级结构、亚细胞定位等进行分析。通过构建真核表达载体转染及PPRV感染EEC细胞,利用间接免疫荧光的方法观察其外源性和内源性亚细胞定位,并探究PPRV感染对EEC细胞的影响。【结果】成功克隆出山羊ISG15基因CDS区并进行了真核表达。山羊ISG15核苷酸和氨基酸相似性及进化树分析都与盘羊和绵羊亲缘关系最近。生物信息学分析结果显示,山羊ISG15基因位于16号染色体上,全长474bp,编码157个氨基酸,分子质量约为17.47ku,为亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽,有1个潜在的N-糖基化位点,16个潜在的O-糖基化位点和10个潜在的磷酸化位点。二级结构与三级结构预测显示,山羊ISG15蛋白由无规则卷曲、延伸链、α-螺旋和β-转角组成,比例分别为34.39%、31.21%、21.66%和12.74%。可以与干扰素和泛素化相关的蛋白相互作用,并参与机体的抗感染作用。亚细胞定位显示,外源性和内源性ISG15均定位于细胞质中。【结论】试验成功克隆出山羊ISG15基因CDS区序列,亚细胞定位发现内源性和外源性ISG15均定位于EEC细胞的细胞质中。结果为后续ISG15基因细胞内功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 山羊 ISG15基因 克隆 表达 生物信息学分析 亚细胞定位

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核糖体蛋白调控病毒生命周期的研究进展

14

作者 郭宏元 朱杰 +5 位作者 缪秋红 汤傲星 戚睿斌 唐井玉 杨洪早 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第6期173-180,共8页

病毒是一种基因组比较小,仅编码自身结构蛋白和一些重要的与复制相关的非结构蛋白的细胞内寄生物。为了完成其生命周期,它还需要劫持宿主细胞内的一些蛋白或细胞因子,以组装成病毒的复制或翻译机器。其中,核糖体蛋白(RPs)就是病毒经常... 病毒是一种基因组比较小,仅编码自身结构蛋白和一些重要的与复制相关的非结构蛋白的细胞内寄生物。为了完成其生命周期,它还需要劫持宿主细胞内的一些蛋白或细胞因子,以组装成病毒的复制或翻译机器。其中,核糖体蛋白(RPs)就是病毒经常劫持的一类宿主蛋白,被用来组装病毒的“翻译机器”。本文即对近年来关于RPs在病毒蛋白翻译中的调控作用研究进展做一综述。 展开更多

关键词 核糖体蛋白 病毒感染 调控作用

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山羊BST-2基因的表达及其亚细胞定位

15

作者 张莉 刘腾 +6 位作者 缪秋红 唐井玉 朱杰 董丹丹 陈宗艳 王桂军 刘光清 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期702-706,共5页

将山羊的BST-2基因(Capra hircus bone marrow stromal antigen 2 gene)分别克隆至原核表达载体p GEX-4T-1和真核表达载体p3×Flag-CMV-14中,获得了重组表达质粒p GEX-BST-2和p3×Flag-BST-2。将重组质粒p GEX-BST-2转化至E.col... 将山羊的BST-2基因(Capra hircus bone marrow stromal antigen 2 gene)分别克隆至原核表达载体p GEX-4T-1和真核表达载体p3×Flag-CMV-14中,获得了重组表达质粒p GEX-BST-2和p3×Flag-BST-2。将重组质粒p GEX-BST-2转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE及Western blot结果显示,诱导表达的重组蛋白分子量约为42 ku,与预期蛋白一致。利用脂质体介导转染法将重组质粒p3×Flag-BST-2转染Vero细胞,经激光共聚焦显微镜检测,结果显示,BST-2蛋白在细胞中可以良好表达,并主要定位于细胞膜上。 展开更多

关键词 BST-2基因 原核表达 真核表达 亚细胞定位 山羊

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鸭源新型鹅细小病毒DS15株生物学特性研究 被引量：13

16

作者 宫晓华 李琦 +4 位作者 李传峰 张莉 唐井玉 刘光清 王桂军 《中国家禽》 北大核心 2017年第4期52-55,共4页

试验对鸭源新型鹅细小病毒(Duck derived goose parvovirus,DDPV)DS15株在鸭胚上的增殖特性及对鸭胚的致病力进行了研究。结果显示,鸭胚接种DDPV DS15株以后,96~120 h出现死亡,胚体全身出血,病毒滴度ELD50为10-5.5/0.2 m L。以鸭胚增殖... 试验对鸭源新型鹅细小病毒(Duck derived goose parvovirus,DDPV)DS15株在鸭胚上的增殖特性及对鸭胚的致病力进行了研究。结果显示,鸭胚接种DDPV DS15株以后,96~120 h出现死亡,胚体全身出血,病毒滴度ELD50为10-5.5/0.2 m L。以鸭胚增殖的病毒攻击樱桃谷肉鸭,复制出典型的鸭"大舌病"临床症状,并从发病鸭脏器中分离到病毒。对DDPVDS15株VP2基因进行克隆并并将其因序列与国内外报道的部分鹅细小病毒(GPV)及番鸭细小病毒(MDPV)分离株的VP2基因进行比对和分析。结果表明,DS15株VP2基因与GPV之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为89.2%~96.5%和93.4%~97.8%,而与MDPV核苷酸和氨基酸同源性则较低,分别为80.1%~89.3%和87.8%~93.5%;在亲缘关系方面,DDPV DS15株与GPV较近,提示二者可能是由同一病毒进化而来。 展开更多

关键词 鸭源 新型 鹅细小病毒 鸭胚 VP2基因

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新型鸭细小病毒VP3基因的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：8

17

作者 李琦 李传峰 +6 位作者 唐井玉 刘柱 宫晓华 陈宗艳 王桂军 吴润 刘光清 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期717-722,共6页

应用PCR方法扩增了新型鸭细小病毒(novel duck parvovirus,NDPV)的VP3基因,然后将其克隆到原核表达载体p GEX-4T-1中,获得重组质粒p GEX-VP3。将p GEX-VP3转化BL21感受态细胞后,用1.0mmol/L IPTG于37℃进行诱导。最后,分别用SDS-PAGE和W... 应用PCR方法扩增了新型鸭细小病毒(novel duck parvovirus,NDPV)的VP3基因,然后将其克隆到原核表达载体p GEX-4T-1中,获得重组质粒p GEX-VP3。将p GEX-VP3转化BL21感受态细胞后,用1.0mmol/L IPTG于37℃进行诱导。最后,分别用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定。结果,NDPV VP3蛋白在大肠杆菌细胞中成功获得表达,表达产物主要以包涵体形式存在,分子质量为84 ku。将纯化的重组VP3蛋白免疫实验家兔,制备多克隆抗体。Western-blot检测结果表明,该抗体能同时与重组的NDPV VP3蛋白及自然感染的NDPV发生反应,说明制备的抗体具有良好的抗原反应性。这些结果为进一步建立NDPV检测方法和研发新型疫苗研究奠定了物质基础。 展开更多

关键词 新型鸭细小病毒 VP3基因 原核表达 多克隆抗体

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犬细小病毒SH14株的分离鉴定及其VP2基因的序列分析 被引量：6

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作者 唐井玉 李传峰 +5 位作者 戚伟强 贾仿阔 陈宗艳 王权 王桂军 刘光清 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1153-1158,共6页

为分离犬细小病毒(canine parvovirus,CPV),用疑似犬CPV感染的病犬肠组织研磨液接种猫肾细胞(CRFK),进行病毒分离,并利用常规病毒学和分子生物学方法以及动物回归试验鉴定分离的病毒,并对其VP2基因序列进行测定及分析。结果显示,该病毒... 为分离犬细小病毒(canine parvovirus,CPV),用疑似犬CPV感染的病犬肠组织研磨液接种猫肾细胞(CRFK),进行病毒分离,并利用常规病毒学和分子生物学方法以及动物回归试验鉴定分离的病毒,并对其VP2基因序列进行测定及分析。结果显示,该病毒能在CRFK细胞上良好生长并产生细胞变圆、脱落等特征性细胞病变;细胞培养物能扩增出CPV的特异性基因组;对病毒的VP2基因序列和推导的氨基酸序列进行分析,结果表明,本研究的分离毒株属于New CPV-2a型,与CPV SH-2/2011株的亲缘关系最近,其核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为99.83%和100%。上述结果表明,成功分离到1株New CPV-2a型犬细小病毒,将其暂命名为SH14株。本研究结果为进一步研究我国犬细小病毒的进化和变异,以及疫苗的研制奠定了物质基础。 展开更多

关键词 犬细小病毒 VP2基因 鉴定 序列分析

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犬细小病毒SH14株VP2基因原核表达及免疫原性分析 被引量：3

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作者 唐井玉 李传峰 +5 位作者 宫晓华 李琦 丁明洋 陈宗艳 王桂军 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第1期38-43,共6页

根据犬细小病毒(Canine Parvovirus,CPV)SH14株基因序列设计引物,采用PCR方法扩增CPV VP2基因,经Bam HⅠ、XhoⅠ双酶切后,将其克隆至p GEX-4T-1载体,构建重组表达载体p GEX-4T-VP2,经酶切鉴定和测序验证正确后转化大肠杆菌BL21中进行诱... 根据犬细小病毒(Canine Parvovirus,CPV)SH14株基因序列设计引物,采用PCR方法扩增CPV VP2基因,经Bam HⅠ、XhoⅠ双酶切后,将其克隆至p GEX-4T-1载体,构建重组表达载体p GEX-4T-VP2,经酶切鉴定和测序验证正确后转化大肠杆菌BL21中进行诱导表达,应用SDS-PAGE法检测蛋白的表达。然后,使用纯化的重组VP2蛋白制备其兔源多克隆抗体,分别应用蛋白免疫印迹、间接免疫荧光检测该抗体的免疫原性。结果表明,p GEX-4T-VP2能在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达,所制备的兔抗CPV-VP2抗体能与重组蛋白和病毒蛋白发生特异性反应。本研究为研发CPV亚单位疫苗、检测技术及致病机理研究等奠定了物质基础。 展开更多

关键词 犬细小病毒 VP2基因 原核表达 免疫原性

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