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基于EGFR/AKT和JAK2/STAT3通路研究α-常春藤皂苷单独或与顺铂联用对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响 被引量：2
1
作者 朱志明 王苏美 +6 位作者 唐青 王晰 万信良 莫瀚丹 贾璐瑜 俞晓燕 周绮纯 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期333-341,共9页
目的:探讨α-常春藤皂苷(α-Hed)诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的作用靶点及其潜在机制,明确α-Hed与顺铂(DDP)联用后对相应的靶点蛋白表达的影响。方法:采用CCK-8法检测不同浓度α-Hed处理后NSCLC细胞A549、H1299和PC-9的存活率,采... 目的:探讨α-常春藤皂苷(α-Hed)诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的作用靶点及其潜在机制,明确α-Hed与顺铂(DDP)联用后对相应的靶点蛋白表达的影响。方法:采用CCK-8法检测不同浓度α-Hed处理后NSCLC细胞A549、H1299和PC-9的存活率,采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率,采用WB法检测细胞中C-caspase-3和Bcl-2蛋白的表达。通过网络药理学相关方法筛选α-Hed的潜在靶点,利用分子对接法分析其结合效果,WB法检测靶点蛋白的表达。通过CCK-8法、细胞集落形成实验和WB法检测α-Hed与DDP联用对NSCLC细胞的抑制作用。结果:给药24和48 h后,10、15和20μmol/Lα-Hed可以显著抑制NSCLC细胞增殖活力(均P<0.01);与对照组相比,20μmol/Lα-Hed处理后细胞凋亡率显著升高(P<0.01);α-Hed可上调NSCLC细胞中C-caspase-3的表达(P<0.05),下调Bcl-2的表达(P<0.05)。网络药理学和分子对接筛选出结合亲和力小于-5 kcal/mol的靶点AKT1、STAT3、EGFR和JAK2。WB法检测结果显示,α-Hed处理后A549、H1299细胞中EGFR、p-AKT/AKT、p-STAT3/STAT3和JAK2蛋白的表达均明显下调(均P<0.05)。α-Hed与DDP联用后,更显著地抑制NSCLC细胞的增殖(P<0.01),进一步下调EGFR、p-AKT/AKT、p-STAT3/STAT3和JAK2蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:α-Hed通过下调EGFR和JAK2的表达抑制STAT3和AKT的磷酸化,诱导NSCLC细胞凋亡,与DDP联用后其抑制效果增强,EGFR/AKT和JAK2/STAT3通路也进一步被抑制。 展开更多
关键词 α-常春藤皂苷 非小细胞肺癌 增殖 凋亡 AKT1 STAT3 EGFR JAK2
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微小RNA hsa-miR-93靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗敏感性的机制研究 被引量：3
2
作者 周绮纯 王晰 +4 位作者 邓芷茵 徐梦菲 唐青 吴万垠 王苏美 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2023年第1期17-25,共9页
目的研究hsa-miR-93在鼻咽癌放疗抗拒过程中的作用及分子机制。方法以人鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、CNE-2R、HONE1、C666.1以及鼻咽上皮永生细胞NP460为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞经放疗后hsa-miR-93的表达;... 目的研究hsa-miR-93在鼻咽癌放疗抗拒过程中的作用及分子机制。方法以人鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、CNE-2R、HONE1、C666.1以及鼻咽上皮永生细胞NP460为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞经放疗后hsa-miR-93的表达;采用Western blot法检测各组细胞经放疗后STAT3蛋白的表达;通过miRWalk软件和RNAHybrid软件预测hsa-miR-93和STAT3的结合作用及结合位点;通过双荧光素酶报告基因法检测hsa-miR-93对STAT3靶向结合情况;瞬时转染小分子模拟物或抑制剂调控hsa-miR-93的表达后,采用qRT-PCR和Western blot法检测STAT3的表达;转染siSTAT3沉默STAT3的表达后,通过细胞集落形成实验检测鼻咽癌细胞经放疗后的集落形成能力。结果与CNE-1、CNE-2细胞(相对放疗敏感)相比,hsa-miR-93在HONE1、CNE-2R细胞(相对放疗抗拒)中表达降低(P<0.001),且各组鼻咽癌细胞经放疗后hsa-miR-93的表达呈剂量及时间依赖性降低(P<0.05);与CNE-1、CNE-2细胞相比,STAT3在HONE1、CNE-2R细胞中表达升高,且各组鼻咽癌细胞经放疗后表达呈剂量及时间依赖性升高;经预测,hsa-miR-93可直接靶向结合STAT3。过表达hsa-miR-93可以在mRNA以及蛋白水平上显著抑制STAT3的表达(P<0.05),而抑制hsa-miR-93的表达可以显著上调STAT3的表达(P<0.05);过表达hsa-miR-93或沉默STAT3均使鼻咽癌细胞的集落形成显著减少(P<0.001);抑制hsa-miR-93减弱了鼻咽癌对放疗的敏感性,而同时抑制hsa-miR-93和STAT3后,可提高鼻咽癌对放疗的敏感性。结论hsa-miR-93可能通过靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗的敏感性。 展开更多
关键词 鼻咽癌 放疗 微小RNA hsa-miR-93 STAT3
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山柰酚通过Met/PI3K/Akt/mTOR通路诱导非小细胞肺癌NCI-H1650细胞发生自噬进而影响其增殖 被引量：2
3
作者 朱志明 周绮纯 +7 位作者 王娟娟 邓芷茵 唐青 吴万垠 王晰 万信良 莫瀚丹 王苏美 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期965-972,共8页
目的:探讨山柰酚诱导人非小细胞肺癌(NSCLC)NCI-H1650细胞发生自噬及其机制。方法:常规培养NCI-H1650细胞,用不同浓度山柰酚处理细胞,用CCK-8法、MTT法以及EdU法检测山柰酚对NCI-H1650细胞增殖能力的影响,用自噬双标记腺病毒mCherry-EGF... 目的:探讨山柰酚诱导人非小细胞肺癌(NSCLC)NCI-H1650细胞发生自噬及其机制。方法:常规培养NCI-H1650细胞,用不同浓度山柰酚处理细胞,用CCK-8法、MTT法以及EdU法检测山柰酚对NCI-H1650细胞增殖能力的影响,用自噬双标记腺病毒mCherry-EGFR-LC3感染实验检测山柰酚对NCI-H1650细胞发生自噬的影响,用WB法检测山柰酚处理后NCI-H1650细胞中自噬相关蛋白及Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达,用qPCR法检测山柰酚处理后NCI-H1650细胞中Met mRNA的表达。采用荧光素酶标记A549-luc细胞建立裸鼠移植瘤模型后用山柰酚进行处理,用活体动物成像技术观察移植瘤生长情况,用WB法检测移植瘤组织中自噬相关蛋白以及Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:山柰酚能显著抑制NCI-H1650细胞的增殖能力(P<0.05),山柰酚处理后NCI-H1650细胞内的自噬小体数量明显增加(P<0.05)、自噬标志蛋白LC3B和beclin1表达均明显上调(均P<0.05)、P62表达明显下调(P<0.05),山柰酚可明显抑制NCI-H1650细胞中Met mRNA和蛋白的表达(均P<0.05)、抑制p-PI3K p85、PI3K p85、p-Akt和p-mTOR蛋白表达(均P<0.05)。山柰酚抑制A549细胞裸鼠移植瘤的生长(P<0.05)和影响其体内自噬、Met/PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达(均P<0.05)。结论:山柰酚通过影响Met/PI3K/Akt/mTOR通路诱导NSCLC NCI-H1650细胞发生自噬,进而抑制其增殖能力。 展开更多
关键词 山柰酚 非小细胞肺癌 NCI-H1650细胞 A549细胞 细胞自噬 Met/PI3K/Akt/mTOR通路 增殖
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山柰酚抗肿瘤作用的药理研究进展
4
作者 朱志明 王娟娟 +1 位作者 王苏美 周绮纯 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期445-452,共8页
山柰酚是天然的黄酮类化合物,可从多种中药材及水果蔬菜中提取,具有药理活性广泛、毒副作用少的特点。研究表明,山柰酚对多种常见癌症如结肠癌、乳腺癌、白血病等有明显的预防和抑制作用。其主要通过阻滞细胞周期、抑制侵袭和迁移、诱... 山柰酚是天然的黄酮类化合物,可从多种中药材及水果蔬菜中提取,具有药理活性广泛、毒副作用少的特点。研究表明,山柰酚对多种常见癌症如结肠癌、乳腺癌、白血病等有明显的预防和抑制作用。其主要通过阻滞细胞周期、抑制侵袭和迁移、诱导细胞凋亡和自噬、抑制有氧糖酵解等来发挥抗肿瘤作用。同时山柰酚与许多药物联合使用可以发挥协同抗肿瘤、增敏的作用,其纳米制剂治疗肿瘤具有更好的疗效,表明山柰酚具有很好的临床应用前景。该文综述近年来山柰酚抗肿瘤的药理作用机制的研究进展,为其进一步的研发提供理论基础和研究思路。 展开更多
关键词 山柰酚 抗肿瘤 作用机制 凋亡 自噬
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尖尾芋醇提物保护黑色素瘤小鼠脾的作用机制 被引量：2
5
作者 肖市林 房淼 +5 位作者 林汝堃 周绮纯 陈毅飞 李婵 罗超华 莫志贤 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期228-232,共5页
目的研究尖尾芋醇提物对荷瘤小鼠脾保护的作用机制。方法C57BL/6小鼠背部右侧皮下接种黑色素瘤B16-F10细胞后,将未造模的6只小鼠作为正常组(normal),造模的30只小鼠随机分为模型组(model)、环磷酰胺组(CTX)和低、中、高剂量的尖尾芋醇... 目的研究尖尾芋醇提物对荷瘤小鼠脾保护的作用机制。方法C57BL/6小鼠背部右侧皮下接种黑色素瘤B16-F10细胞后,将未造模的6只小鼠作为正常组(normal),造模的30只小鼠随机分为模型组(model)、环磷酰胺组(CTX)和低、中、高剂量的尖尾芋醇提物组(lEAC、mEAC、hEAC),每组各6只。连续给药10 d,末次给药24 h后,小鼠眼球采血后颈椎脱臼处死,剥离脾组织并称重计算脏器指数,以苏木精-伊红(HE)染色观察脾组织的病理变化,以TUNEL荧光染色检测不同组小鼠脾组织中细胞凋亡的情况,以免疫组化检测脾组织中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达水平,以细胞计数法-8(CCK-8)法检测尖尾芋醇提物对正常小鼠脾细胞的生长活性的影响。结果模型组和高剂量尖尾芋醇提物组脾指数分别为5.26±0.94和7.78±1.63,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫组化中,正常组、模型组和高剂量尖尾芋醇提物组小鼠脾组织中Bcl-2阳性细胞IOD值分别为8171.34±1210.74,712.79±203.90和7437.72±1342.33;Bax阳性细胞IOD值分别为1235.50±302.81,1.14×10^(4)±882.91和5241.06±991.12;caspase-3阳性细胞IOD值分别为2197.56±388.14,1.08×10^(4)±700.90和3267.04±531.23。模型组与正常组相比,高剂量尖尾芋醇提物组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论尖尾芋醇提物能够抑制荷瘤小鼠的脾组织在肿瘤微环境下发生异常凋亡,对荷瘤小鼠脾组织具有一定的保护作用,其作用机制与上调Bcl-2抗凋亡的蛋白的活性,降低Bax促凋亡的蛋白的活性,减低caspase-3蛋白表达相关。 展开更多
关键词 尖尾芋醇提物 脾保护 B细胞淋巴瘤2蛋白 B细胞淋巴瘤2相关-X蛋白 胱天蛋白酶3
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人参皂苷对抗生素处理小鼠离体小肠平滑肌收缩活动的影响 被引量：2
6
作者 林汝堃 陈嘉慧 +3 位作者 周绮纯 李婵 陈志杰 莫志贤 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期790-793,共4页
目的探讨人参皂苷对肠道运动行为的调节作用及肠道菌群介导所产生的影响。方法采用小鼠离体小肠平滑肌实验,设置未使用抗生素处理和使用抗生素处理两种离体肠管模型,考察人参皂苷对小鼠离体肠管平滑肌张力的影响。结果在未使用抗生素情... 目的探讨人参皂苷对肠道运动行为的调节作用及肠道菌群介导所产生的影响。方法采用小鼠离体小肠平滑肌实验,设置未使用抗生素处理和使用抗生素处理两种离体肠管模型,考察人参皂苷对小鼠离体肠管平滑肌张力的影响。结果在未使用抗生素情况下,人参皂苷Rg1的50、100μmol/L组及人参总皂苷3.125、6.25、12.5、50、200、300、400、500μg/L组具有明显舒张小鼠离体肠管平滑肌的作用(P<0.05);乙酰胆碱组具有显著收缩小鼠离体肠管平滑肌的作用(P<0.05)。阿托品组对小鼠离体小肠无明显舒张作用(P>0.05)。经抗生素处理后,空白对照组、人参皂苷Rg150μmol/L和人参总皂苷3.125、50、400μg/L组对小鼠离体肠管平滑肌具有明显舒张作用(P<0.05);抗生素处理后的乙酰胆碱组对小鼠离体肠管平滑肌具有明显收缩作用(P<0.05);抗生素处理的阿托品组对小鼠离体小肠无明显舒张作用(P>0.05)。结论人参皂苷对小鼠离体肠管运动行为具有舒张作用。经抗生素处理使肠管内菌群减少,能降低离体肠管的收缩张力,减小平滑肌的收缩幅度,同时也减弱了人参皂苷Rg1和人参总皂苷对肠管的舒张作用。表明人参皂苷对离体肠管运动行为的影响与肠道菌群有一定关系。 展开更多
关键词 人参皂苷RG1 人参总皂苷 肠道菌群 小鼠离体肠管 收缩张力
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尖尾芋多糖的提取纯化及其免疫活性研究 被引量：1
7
作者 周绮纯 彭求贤 +5 位作者 林汝堃 陈毅飞 李婵 陈志杰 史珏 莫志贤 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第17期2064-2069,共6页
目的 从中药尖尾芋中分离提纯出多糖,鉴定其理化性质并对其免疫活性进行研究。方法 通过苯酚-硫酸法和Bradford法分别测定尖尾芋水提物中总多糖和总蛋白的含量。经过水提、Sevag法除蛋白、透析、醇沉等步骤将尖尾芋粗多糖提取出来,并通... 目的 从中药尖尾芋中分离提纯出多糖,鉴定其理化性质并对其免疫活性进行研究。方法 通过苯酚-硫酸法和Bradford法分别测定尖尾芋水提物中总多糖和总蛋白的含量。经过水提、Sevag法除蛋白、透析、醇沉等步骤将尖尾芋粗多糖提取出来,并通过DEAE-52和Sephadex G-200柱层析纯化多糖。对纯化多糖进行理化检识,并采用薄层色谱法分析其单糖组成。进行尖尾芋多糖(polysaccharide of Alocasia cucullata,PAC)诱导THP-1细胞分化实验;采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定5,10,20,40,80,160,320,640和1 280μg·mL^(-1) PAC对小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞活性的影响。结果 尖尾芋水提物中糖和蛋白含量百分比分别为67.89%和7.40%。纯化多糖的纯度较高,为白色固体,易溶于水,属于非淀粉类多糖,不含游离单糖、多酚、糖醛酸和蛋白质,其由D-葡萄糖和D-半乳糖组成。PAC可诱导THP-1细胞分化。PAC作用于小鼠腹腔巨噬细胞48 h的结果显示,80和160μg·mL^(-1)的PAC处理组的光密度(optical density,OD_(570))分别为(18.24±0.57)×10^(-2)和(17.16±0.49)×10^(-2),均显著高于对照组的(13.46±0.37)×10^(-2),差异均有统计学意义(均P<0.001)。PAC作用于小鼠脾细胞48 h后,40μg·mL^(-1)的PAC处理组的OD_(570)为(16.97±0.19)×10^(-2),明显高于对照组的(15.42±0.22)×10^(-2)(P<0.05),80,160,320,640和1 280μg·mL^(-1)的PAC处理组的OD_(570)分别为(18.14±0.42)×10^(-2),(18.58±0.98)×10^(-2),(20.68±0.61)×10^(-2),(20.12±0.22)×10^(-2)和(18.38±0.57)×10^(-2),均显著高于对照组的(15.42±0.22)×10^(-2),差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论 多糖是尖尾芋水煎液的主要成分,可以通过除蛋白、透析、醇沉、柱层析的方法将其提取纯化。尖尾芋多糖具有激活THP-1单核细胞、增强巨噬细胞代谢活力和刺激淋巴细胞增殖的免疫活性。 展开更多
关键词 尖尾芋多糖 分离 提纯 理化性质 免疫活性
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钩藤叶水提物对TH-GFP转基因斑马鱼甲基苯丙胺依赖的影响 被引量：1
8
作者 聂玲辉 陈毅飞 +4 位作者 宿爱山 肖市林 周绮纯 朱玲玲 莫志贤 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第18期2149-2152,共4页
目的培育TH-GFP转基因斑马鱼幼鱼,建立转基因斑马鱼幼鱼甲基苯丙胺依赖模型,观察钩藤叶水提物对模型幼鱼的影响。方法收集健康斑马鱼受精卵,向卵黄囊中注射TH-GFP质粒,构建TH-GFP转基因斑马鱼幼鱼。取转基因斑马鱼幼鱼,随机放入含有60,6... 目的培育TH-GFP转基因斑马鱼幼鱼,建立转基因斑马鱼幼鱼甲基苯丙胺依赖模型,观察钩藤叶水提物对模型幼鱼的影响。方法收集健康斑马鱼受精卵,向卵黄囊中注射TH-GFP质粒,构建TH-GFP转基因斑马鱼幼鱼。取转基因斑马鱼幼鱼,随机放入含有60,6,0. 6,0. 06 mg·L-1甲基苯丙胺溶液中,3d后,将斑马鱼幼鱼固定,然后放入液态的低熔点琼脂糖中,用荧光体视显微镜观察其头部的荧光变化。取转基因斑马鱼幼鱼,随机分为空白组、对照组(甲基苯丙胺0. 6 mg·L-1)、高剂量实验组(钩藤叶水提物330 mg·mL-1)和低剂量实验组(钩藤叶水提物33 mg·mL-1)。除空白组外,将各组斑马鱼幼鱼放入0. 6 mg·L-1的甲基苯丙胺溶液中自由游动。48 h后,将高、低剂量实验组斑马鱼幼鱼放入相应浓度的钩藤叶水提物中,甲基苯丙胺模型组放入鱼用生理盐水中,自由游动。24 h后,将各组斑马鱼幼鱼固定,放入液态的低熔点琼脂糖中,用激光扫描共聚焦显微镜观察其荧光变化。结果与空白组相比,显微注射THGFP质粒后的斑马鱼幼鱼头部出现明显荧光。在绿色荧光下,与空白组斑马鱼幼鱼相比,对照组斑马鱼幼鱼头部荧光变化不明显,其余各组斑马鱼幼鱼头部荧光变化明显。将各组斑马鱼幼鱼放入相应浓度的钩藤叶水提物中24 h后,在共聚焦显微镜下观察,与空白组相比,对照组斑马鱼幼鱼头部荧光明显增强。与对照组相比,钩藤叶水提物组斑马鱼幼鱼头部荧光有所减弱。结论 TH-GFP转基因斑马鱼可以用于观察斑马鱼甲基苯丙胺依赖变化。0. 6 mg·L-1的甲基苯丙胺溶液可以使TH-GFP转基因斑马鱼头部荧光发生明显增强,而钩藤叶水提物可以降低这种荧光的改变。 展开更多
关键词 转基因斑马鱼 钩藤叶水提物 甲基苯丙胺 药物依赖
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