当前我国H5亚型高致病性禽流感流行情况分析 被引量：17

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作者 王念晨 曲楠楠 +7 位作者 欧阳国文 赵冰兵 陈祖贤 张友 王文清 吴斯宇 廖明 焦培荣 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第4期77-81,共5页

近年来,高致病性禽流感对我国养禽业造成了巨大损失,同时也严重威胁人类健康。本文根据2015年我国已经公开的H5亚型高致病性禽流感疫情及流行监测状况,分析了当前我国H5亚型高致病性禽流感流行特点,并提出流行病学监测、家禽养殖管理、... 近年来,高致病性禽流感对我国养禽业造成了巨大损失,同时也严重威胁人类健康。本文根据2015年我国已经公开的H5亚型高致病性禽流感疫情及流行监测状况,分析了当前我国H5亚型高致病性禽流感流行特点,并提出流行病学监测、家禽养殖管理、诊断方案及宣传舆论教育等防控策略,旨在为H5亚型高致病性禽流感的预防与控制工作提供参考。 展开更多

关键词 H5亚型高致病性禽流感 流行疫情 防控策略

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RGD环肽修饰的姜黄素/黄芩苷靶向共递送纳米脂质体的制备工艺优化及表征 被引量：11

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作者 吴斯宇 曾盈蓉 +2 位作者 唐聘 桂卉 胡立志 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第22期6834-6844,共11页

目的优化RGD环肽修饰的姜黄素(curcumin,Cur)/黄芩苷(baicalin,Bai)共递送靶向纳米脂质体(RGD-Cur/BaiLip)的制备工艺并进行表征评价。方法采用乙醇注入法制备RGD-Cur/Bai-Lip,首先通过Plackett-Burman筛选实验确定超声时间、胆脂比、... 目的优化RGD环肽修饰的姜黄素(curcumin,Cur)/黄芩苷(baicalin,Bai)共递送靶向纳米脂质体(RGD-Cur/BaiLip)的制备工艺并进行表征评价。方法采用乙醇注入法制备RGD-Cur/Bai-Lip,首先通过Plackett-Burman筛选实验确定超声时间、胆脂比、水合温度作为制备RGD-Cur/Bai-Lip的关键因素,然后采用Box-Behnken响应面法进行工艺优化,以姜黄素包封率、黄芩苷包封率、总载药量为考察指标,采用AHP-复相关系数法-拉开档次法进行多指标组合赋权以确定各指标权重系数并计算综合评分,从而确定RGD-Cur/Bai-Lip的最优处方及关键工艺参数。最后对其形态、粒径电位、稳定性、体外释放度及溶血性等进行表征评价。结果优选得到的最佳工艺为胆脂比1∶12,水合温度60℃,探头超声时间为10 min。RGD-Cur/Bai-Lip外观澄清透明,呈亮黄色,对光可视淡蓝色乳光,透射电子显微镜下观察形态圆整、分散均匀。平均粒径为(101.10±0.62)nm,多分散系数(PDI)为0.1910±0.0143,Zeta电位为(1.59±0.07)m V,姜黄素包封率为(94.28±4.51)%,黄芩苷包封率为(76.93±1.35)%,总载药量为(2.27±0.09)%。7 d内稳定性良好,无溶血性,并具有一定的缓释作用。结论优化处方后制备的RGD-Cur/Bai-Lip包封率高,粒径分布均匀,7 d内较稳定,无溶血性,并具有一定的缓释作用,为RGD-Cur/Bai-Lip的后续抗肝纤维化体内外研究提供了制剂基础。 展开更多

关键词 脂质体 姜黄素 黄芩苷 RGD环肽 PLACKETT-BURMAN设计 Box-Behnken响应面法 AHP-复相关系数法-拉开档次法

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清利咽喉方水提工艺的AHP-熵权法-独立性权法结合正交试验优化 被引量：8

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作者 吴斯宇 胡立志 +1 位作者 唐聘 桂卉 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期2400-2403,共4页

目的优化清利咽喉方水提工艺。方法采用正交试验设计,以浸泡时间、加水量、提取时间为考察因素,选择L;(3;)正交表设计实验,以甘草酸铵、木蝴蝶苷B转移率及浸出物得率为评价指标,采用AHP-熵权法-独立性权法赋权得到多指标综合评分,通过... 目的优化清利咽喉方水提工艺。方法采用正交试验设计,以浸泡时间、加水量、提取时间为考察因素,选择L;(3;)正交表设计实验,以甘草酸铵、木蝴蝶苷B转移率及浸出物得率为评价指标,采用AHP-熵权法-独立性权法赋权得到多指标综合评分,通过对正交试验结果分析得出最佳水提工艺。结果优选得到的提取工艺为提取2次,浸泡0 h,加水量第一次为12倍、第二次为10倍,提取时间为90 min/次。结论优化得到的工艺综合评分优、提取效率高,工艺简便、稳定可行,可作为清利咽喉方水提工艺。 展开更多

关键词 清利咽喉方 正交试验 甘草酸铵 木蝴蝶苷B AHP-熵权法-独立性权法

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广东部分地区鹅星状病毒的分离鉴定、全基因组测序及遗传进化分析

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作者 喻复心 吴斯宇 +6 位作者 余界石 张晓爱 俞婷 董博 李建波 王蕾 魏文康 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2633-2643,共11页

【目的】了解鹅星状病毒(Goose astrovirus, GAstV)在广东部分地区的流行及遗传变异情况,阐明其遗传进化与全基因组的特征,为GAstV的防控提供理论基础。【方法】使用GAstV特异性引物对2021―2022年广东地区养鹅场内出现疑似痛风的36份... 【目的】了解鹅星状病毒(Goose astrovirus, GAstV)在广东部分地区的流行及遗传变异情况,阐明其遗传进化与全基因组的特征,为GAstV的防控提供理论基础。【方法】使用GAstV特异性引物对2021―2022年广东地区养鹅场内出现疑似痛风的36份鹅病料进行PCR检测,选取4份具有代表性的GAstV强阳性样品,利用鹅细小病毒、坦布苏病毒、禽流感病毒、新城疫病毒的特异性引物进行检测,以排除病料中存在其他常见的外源性病毒;在此基础上利用鹅胚及鸡肝癌细胞系(leghorn male hepatoma, LMH)对4份GAstV样品进行病毒的分离和纯化,使用透射电镜对病毒粒子的形态进行观察;设计7对特异性引物对4株GAstV进行全基因组扩增和测序,运用DNAStar软件对序列进行整理与拼接以获取GAstV的全基因组序列,利用MegAlign软件进行核苷酸相似性比对,并对关键氨基酸位点的变异情况进行分析,应用Mega-X软件对全基因及单个ORF基因(ORF1a、ORF1b、ORF2)进行系统进化树构建。【结果】经PCR鉴定发现被检样品中共有30份是GAstV阳性,选取的4份代表性GAstV阳性样品均不存在其他外源性病毒感染,利用鹅胚及LMH细胞成功分离出了该4株GAstV病毒,并获得了4株全长均为7 131 bp的GAstV基因组序列,包括18 bp的5′-UTR和184 bp的3′-UTR、3个阅读开放框(ORF1a、ORF1b和ORF2基因),其中ORF1a、ORF1b和ORF2基因分别长3 255、1 551和2 115 bp,与报道的GAstV全基因组特征基本一致。相似性分析显示,4株GAstV之间的核苷酸相似性在99.4%~99.8%之间,与GenBank收录的其他19株GAstV的核苷酸相似在57.6%~99.6%之间。全基因组及3个ORF基因的遗传进化分析显示,获得的4株GAstV均属于GAstV-Ⅱ型。氨基酸序列分析显示,4株GAstV的氨基酸存在22处位置上的突变,其中ORF1a基因有8处突变,ORF2基因有14处突变。【结论】分离的4株GAstV均为GAstV-Ⅱ型毒株,与中国其他地区流行的基因型基本� 展开更多

关键词 鹅星状病毒 分离鉴定 全基因组测序 遗传进化分析 突变位点分析

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某院实施静配医嘱审核服务的效果及成因分析 被引量：5

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作者 周利军 沈绍清 +2 位作者 吴斯宇 李外 刘萍 《中国医药导报》 CAS 2018年第3期176-180,共5页

目的了解某院实施医嘱审核服务的效果,分析问题成因,促进临床合理用药,并为循证药学的研究提供参考依据。方法对我院静脉药物配置中心2016年11月~2017年3月审核发现的不合理用药医嘱进行统计分析,并随访后续不良事件发生情况。结果共审... 目的了解某院实施医嘱审核服务的效果,分析问题成因,促进临床合理用药,并为循证药学的研究提供参考依据。方法对我院静脉药物配置中心2016年11月~2017年3月审核发现的不合理用药医嘱进行统计分析,并随访后续不良事件发生情况。结果共审核医嘱69 046条,其中不合理用药医嘱1519条,包括溶媒选择不适宜、载体量不适宜、给药剂量不适宜、给药途径不适宜、配伍禁忌等,占总医嘱的2.20%。在追踪的230条不合理医嘱中,未发现不良事件发生。结论目前我院整体用药相对合理,但仍存在部分不合理用药现象,应进一步加强药师对医嘱的审核能力和干预力度,同时应深入对部分超说明书用药情况的合理性思考。 展开更多

关键词 静脉配置中心 医嘱审核 不合理医嘱 不良事件

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基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒病毒样颗粒的构建与鉴定

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作者 郜婷 吴斯宇 +6 位作者 高彩霞 夏苏东 尹纪元 王英英 李莹莹 石存斌 王庆 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期148-157,共10页

为研究Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)病毒样颗粒(VLPs)疫苗,实验利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统(BEVS)将具有免疫原性的GCRV-VP3/VP4/VP35蛋白进行GCRV-VLPs的组装。实验将编码VP35蛋白的GCRV-s11基因克隆入杆状病毒载体pFastBacHTA^(TM),... 为研究Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)病毒样颗粒(VLPs)疫苗,实验利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统(BEVS)将具有免疫原性的GCRV-VP3/VP4/VP35蛋白进行GCRV-VLPs的组装。实验将编码VP35蛋白的GCRV-s11基因克隆入杆状病毒载体pFastBacHTA^(TM),然后将鉴定正确的重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,筛选得到重组穿梭质粒Bacmid-VP35。将穿梭质粒Bacmid-VP35以及实验室前期构建的重组穿梭质粒Bacmid-VP3、Bacmid-VP4分别转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒pFHB-VP35、pFHB-VP3以及pFHB-VP4。利用Bac-PAK快速滴定试剂盒测定重组杆状病毒滴度,并通过间接免疫荧光(IFA)和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定重组蛋白的表达情况。结果显示,实验获得了较高滴度的重组杆状病毒,并且重组蛋白在杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中正确表达。将成功表达蛋白的重组杆状病毒pFHB-VP35、pFHB-VP3以及pFHB-VP4共感染Sf9细胞组装GCRV-VLPs,通过透射电镜(EM)观察VLPs的组装情况。结果显示,GCRV-Ⅱ的3个蛋白在Sf9昆虫细胞中可以完成自我组装,形成与天然病毒结构形似的VLPs,直径为65~72 nm。本实验结果为进一步研制安全、高效的GCRV-VLPs疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 草鱼 草鱼呼肠孤病毒 重组杆状病毒 病毒样颗粒

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鸡α干扰素的原核表达及纯化 被引量：4

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作者 吴斯宇 孙超 +6 位作者 崔进 冯赛祥 黄健妮 王念晨 曲楠楠 廖明 焦培荣 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第8期29-31,共3页

根据大肠杆菌密码子的偏好性对Gen Bank中发表的鸡α干扰素基因序列进行了密码子优化,全基因合成了鸡α干扰素基因片段486 bp。构建原核表达质粒p ET-23b-Ch IFN-α。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,表达产物主要... 根据大肠杆菌密码子的偏好性对Gen Bank中发表的鸡α干扰素基因序列进行了密码子优化,全基因合成了鸡α干扰素基因片段486 bp。构建原核表达质粒p ET-23b-Ch IFN-α。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,表达产物主要以包涵体形式存在,包涵体进行变性、复性和镍柱亲和纯化。表达产物经SDS-PAGE、WesternBlot分析表明,Ch IFN-α蛋白得到了高效表达,其蛋白分子质量约19 k D,经镍柱亲和纯化后获得了高纯度的重组鸡α干扰素蛋白,其含量为0.82 mg/m L。本研究为鸡α干扰素的生物学活性分析和临床产品研发奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡α干扰素 原核表达 蛋白纯化

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鸡β干扰素的原核表达及抗病毒活性检测 被引量：2

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作者 吴斯宇 黄健妮 +6 位作者 崔进 冯赛祥 欧阳国文 向程威 郭旸 廖明 焦培荣 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第4期59-63,共5页

根据大肠杆菌密码子的偏好性对GenBank中发表的鸡β干扰素基因序列进行密码子优化与人工合成,构建原核表达质粒pET-28b-ChIFN-β,重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导表达,产物主要以包涵体形式存在。包涵体进行变性、复性... 根据大肠杆菌密码子的偏好性对GenBank中发表的鸡β干扰素基因序列进行密码子优化与人工合成,构建原核表达质粒pET-28b-ChIFN-β,重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导表达,产物主要以包涵体形式存在。包涵体进行变性、复性和镍柱亲和纯化后,SDS-PAGE、Western blot分析表明pET-28b-ChIFN-β表达正确,并且表达量较高。重组鸡β干扰素蛋白在DF-1细胞上能明显抑制水疱性口炎病毒繁殖,抗病毒活性达2.73×10-6UI/mg。本研究结果为鸡β干扰素在临床防治禽类病毒性疾病的探索奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡β干扰素 原核表达 抗病毒活性

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草鱼源乳酸菌的分离鉴定及其生物学特性研究 被引量：2

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作者 王楠 尹纪元 +6 位作者 王英英 李莹莹 吴斯宇 石存斌 李家豪 曹际振 王庆 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期74-84,共11页

随着水产养殖病害问题日益严重,抗生素和药物使用对环境造成的危害越来越大,开展绿色生态防控技术研究是实现水产健康养殖的重要途径。该研究从健康草鱼(Ctenopharyngodon idella)肠道分离获得8株乳酸菌(Lactobacillus),经生化反应和16S... 随着水产养殖病害问题日益严重,抗生素和药物使用对环境造成的危害越来越大,开展绿色生态防控技术研究是实现水产健康养殖的重要途径。该研究从健康草鱼(Ctenopharyngodon idella)肠道分离获得8株乳酸菌(Lactobacillus),经生化反应和16S rRNA鉴定,均为植物乳杆菌(L.plantarum)。生物学特性评价结果表明植物乳杆菌分离株Y190430的发酵性能最好,且具有良好的抗生素敏感性;与植物乳杆菌标准株ATCC8014和商品乳酸菌相比较,分离株Y190430对酸、碱、盐、温度等环境胁迫具有更好的耐受性,同时具有更快的产酸速率,并可通过代谢产物抑制病原菌生长,体外抑菌试验表明分离株Y190430对常见水产病原菌的拮抗能力更强。 展开更多

关键词 乳酸菌 发酵性能 抗生素敏感性 生态防控 益生功能

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不同醇沉浓度对清利咽喉浸膏粉吸湿性影响的实验研究 被引量：2

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作者 唐聘 张怡春 +1 位作者 吴斯宇 桂卉 《湖南中医药大学学报》 CAS 2020年第4期429-433,共5页

目的探讨醇沉对清利咽喉浸膏粉吸湿性的影响。方法测定不同醇沉浓度所得清利咽喉浸膏粉在不同湿度环境下的吸湿率与临界相对湿度(critical relative humidity,CRH),绘制各浸膏粉在不同湿度环境下的吸湿速度曲线,用Origin 2018统计软件... 目的探讨醇沉对清利咽喉浸膏粉吸湿性的影响。方法测定不同醇沉浓度所得清利咽喉浸膏粉在不同湿度环境下的吸湿率与临界相对湿度(critical relative humidity,CRH),绘制各浸膏粉在不同湿度环境下的吸湿速度曲线,用Origin 2018统计软件对实验数据进行处理。结果在25℃条件下,RH低于48.52%,各浸膏粉的吸湿率均低于5%;RH为57.70%,醇沉浓度对吸湿性无显著影响;RH 75.28%、84.26%、92.40%时,50%醇沉浓度的干浸膏粉吸湿率最小,分别于6.49 h、4.04 h、3.42 h,吸湿率达5%;各浓度醇沉浸膏粉的CRH大约为49.34%。结论不同醇沉浓度对清利咽喉浸膏粉吸湿性有影响,且RH越大,其影响越显著。 展开更多

关键词 浸膏粉 吸湿性 临界相对湿度

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猪链球菌宿主多样性调查 被引量：1

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作者 郭海翔 吴斯宇 +4 位作者 张创峰 李淼 宋帅 李春玲 臧莹安 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第4期13-15,19,共4页

利用PCR方法对表观健康的猪肉、禽、鱼和狗随机抽取317份样品进行猪链球菌检测.结果显示,猪肉样品中4份呈阳性,阳性率为5.4％;禽口腔拭样中15份呈阳性,阳性率为10.6％;鱼和犬样品皆为阴性.进一步对阳性株进行分型鉴定,19株中9型7株,22型... 利用PCR方法对表观健康的猪肉、禽、鱼和狗随机抽取317份样品进行猪链球菌检测.结果显示,猪肉样品中4份呈阳性,阳性率为5.4％;禽口腔拭样中15份呈阳性,阳性率为10.6％;鱼和犬样品皆为阴性.进一步对阳性株进行分型鉴定,19株中9型7株,22型4株,1型、2型、16型及24型各1株,还有4株未知型号.对分离出来的19株菌株进行毒力岛GI4、GI8、GI12、毒力基因lin和rmp检测,结果为猪肉中分离出来的1株2型猪链球菌对GI8、GI12、lin阳性.分别用从猪肉中分离出的2型、鹧鸪中分离出的9型、鸽子中分离出的9型、鸡中分离出的1型、研究室保存的2型菌株9801对斑马鱼进行攻毒试验,结果各半数致死量（LD50）依次为4.27x 10^4CFU、2.72x 10^4CFU、5.18x10^3CFU、2.25x 10^4CFU、6.38x10^5CFU. 展开更多

关键词 猪链球菌 分型鉴定 半数致死量

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稳定表达草鱼LamR鱼类细胞的建立及对基因Ⅱ型GCRV增殖的影响

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作者 黄志深 王庆 +4 位作者 吴斯宇 周文礼 王英英 尹纪元 李莹莹 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2021年第4期21-26,共6页

通过构建草鱼LamR(Ctenopharyngodon idella LamR,CiLamR)真核表达质粒,转染GCRV非敏感细胞系鲤鱼上皮细胞(EPC)和敏感细胞系草鱼肾细胞(CIK),利用G418筛选获得稳定表达CiLamR的细胞,经Western Blot验证CiLamR稳定表达细胞系的构建。采... 通过构建草鱼LamR(Ctenopharyngodon idella LamR,CiLamR)真核表达质粒,转染GCRV非敏感细胞系鲤鱼上皮细胞(EPC)和敏感细胞系草鱼肾细胞(CIK),利用G418筛选获得稳定表达CiLamR的细胞,经Western Blot验证CiLamR稳定表达细胞系的构建。采用Ⅱ型GCRV分别接毒CiLamR稳定表达EPC和CIK,检测接毒后Ⅱ型GCRV拷贝数差异,研究草鱼37 kDa/67 kDa层粘连蛋白受体(37 kDa/67 kDa laminin receptor,LamR)对Ⅱ型GCRV增殖的影响。结果显示:经PCR扩增获得927 bp CiLamR完整开放阅读框(ORF),并成功克隆进入真核表达质粒pEYFP-Mem,获得pEYFP-Mem-CiLamR重组质粒,转染并经过G418筛选后获得约80%阳性荧光的细胞。Western Blot证实稳定表达CiLamR的EPC和CIK细胞系构建成功。以不同初始浓度接种EPC-pEYFP-Mem、EPC-pEYFP-Mem-CiLamR细胞均未检测到Ⅱ型GCRV增殖,CIK-pEYFP-Mem、CIK-pEYFP-Mem-CiLamR可检测到病毒增殖,但是增殖量无明显差异。结果表明:CiLamR蛋白对基因Ⅱ型GCRV增殖无明显影响。 展开更多

关键词 草鱼(Ctenopharyngodon idella) 层粘连蛋白受体 稳定表达细胞系 基因Ⅱ型 GCRV

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