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酶解米糠蛋白分离提取ACE抑制肽及其结构研究 被引量：33
1
作者 刘志国 吴琼 +3 位作者 吕玲肖 武玉香 王亚林 屈伸 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期223-227,共5页
研究酶解米糠蛋白中具有ACE抑制活性短肽组分及其序列,本实验采用等电点沉淀法提取米糠蛋白,经胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等单独或联合水解米糠蛋白,并采用Sephadex G-15凝胶层析和SP-Sephadex C-25离子交换层析分离各酶解组分。AC... 研究酶解米糠蛋白中具有ACE抑制活性短肽组分及其序列,本实验采用等电点沉淀法提取米糠蛋白,经胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等单独或联合水解米糠蛋白,并采用Sephadex G-15凝胶层析和SP-Sephadex C-25离子交换层析分离各酶解组分。ACE抑制活性检测结果显示:酶解组分中含有较高抑制活性成分,其相对分子量在500单位以内。各组中活性最高的组分进行HPLC-MS分析,其中活性最高的胃蛋白酶联合胰蛋白酶酶解活性组分主要为Arg-Tyr、Met-Trp、Gly-Val-Tyr或Gly-Asp-Phe,其共同特征是C端具有苯环样结构,提示:这种环结构可能是ACE抑制剂的重要结构特征。 展开更多
关键词 米糠蛋白 血管紧张素转化酶 抑制剂 IC50 HPLC-MS
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四环素与金霉素完全抗原的制备研究 被引量：2
2
作者 武玉香 刘志国 +4 位作者 韩增飞 吕玲肖 周志春 杨高山 杜静 《武汉工业学院学报》 CAS 2007年第4期48-52,共5页
采用戊二醛交联法和混合酸酐法制备了四环素-BSA与金霉素-BSA完全抗原,分别将两种不同偶联法制备的四种完全抗原按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,酶联免疫吸附法测定出抗四环素与金霉素特异性抗体的效价最高达1∶320000... 采用戊二醛交联法和混合酸酐法制备了四环素-BSA与金霉素-BSA完全抗原,分别将两种不同偶联法制备的四种完全抗原按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,酶联免疫吸附法测定出抗四环素与金霉素特异性抗体的效价最高达1∶320000,这为进一步制备抗四环素与金霉素抗体提供了良好的免疫原,同时为食品中四环素类残留的免疫学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 四环素 金霉素 完全抗原 酶联免疫测定
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四环素多克隆抗体的制备、鉴定及ELISA检测 被引量：2
3
作者 武玉香 刘志国 +3 位作者 周志春 杨高山 杜静 吕玲肖 《中国兽药杂志》 2007年第9期13-16,共4页
采用戊二醛交联法和混合酸酐法制备了四环素-BSA完全抗原,分别将两种不同偶联法制备的四环素-BSA完全抗原按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,酶联免疫吸附法鉴定出多抗中含有四环素的特异性抗体,特异性抗体效价最高达1:32... 采用戊二醛交联法和混合酸酐法制备了四环素-BSA完全抗原,分别将两种不同偶联法制备的四环素-BSA完全抗原按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,酶联免疫吸附法鉴定出多抗中含有四环素的特异性抗体,特异性抗体效价最高达1:320000,抑制率为50%(IC50)时的四环素浓度为92.6μg/mL,四环素的最低检测限为6.25μg/mL,四环素和金霉素的交叉反应率达到78%,该方法灵敏度高,为试纸条法快速检测四环素类的残留奠定了基础。 展开更多
关键词 四环素 多克隆抗体 酶联免疫测定
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VLDL-R配体结合结构域的克隆与表达
4
作者 夏文豪 吕玲肖 +1 位作者 刘志国 屈伸1 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第1期35-39,共5页
目的构建含VLDL-R配体结合结构域融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达与纯化。方法利用PCR技术扩增LBR1-8的DNA片段,将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,随后将阳性重组质粒转化到大肠埃希菌Rosetta中,利用IPTG诱导蛋白表达并优... 目的构建含VLDL-R配体结合结构域融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达与纯化。方法利用PCR技术扩增LBR1-8的DNA片段,将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,随后将阳性重组质粒转化到大肠埃希菌Rosetta中,利用IPTG诱导蛋白表达并优化其表达条件,表达产物经Ni+-NTA亲和层析柱纯化回收,并采用SDS-PAGE和Western印迹对目的蛋白进行分析和鉴定。结果构建的重组表达质粒经PCR,酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,含有重组质粒的表达宿主经过IPTG诱导成功表达了LBR1-8,并经优化确定了最佳的诱导表达条件。结论成功构建pET28a(+)-LBR1-8表达质粒,表达并经纯化得到了LBR1-8。 展开更多
关键词 极低密度脂蛋白受体 配体结合结构域 基因克隆 蛋白纯化
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猪血降脂作用的实验观察 被引量：1
5
作者 刘志国 殷雪 +2 位作者 吕玲肖 谢佳燕 郭明 《武汉工业学院学报》 CAS 2006年第3期11-14,共4页
研究猪血对实验性高血脂大鼠血脂含量的影响。以3月龄的雌性SD大鼠为实验对象随机分为4组:空白对照组、高脂饲养组、猪血沉淀组、猪血浸出液组。实验开始后每隔10 d对大鼠断尾取血测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及动物体重变化。... 研究猪血对实验性高血脂大鼠血脂含量的影响。以3月龄的雌性SD大鼠为实验对象随机分为4组:空白对照组、高脂饲养组、猪血沉淀组、猪血浸出液组。实验开始后每隔10 d对大鼠断尾取血测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及动物体重变化。结果显示:与高脂对照组比较,猪血沉淀组与猪血浸出液组大鼠的血清TC、TG含量均显著的降低(P<0.05),并且体重明显降低。实验结果表明饲喂猪血能够显著预防实验大鼠血清TC、TG含量的升高。 展开更多
关键词 猪血 胆固醇 甘油三酯 动脉粥样硬化 高脂血症
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人源受体相关蛋白的原核表达及功能检测
6
作者 刘志国 张红 +1 位作者 吕玲肖 屈伸 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2006年第11期1191-1195,共5页
目的研究人源受体相关蛋白(RAP)的表达并鉴定表达产物的功能。方法用IPTG诱导培养含有人源RAP重组表达载体(pET-28 a(+)-RAP)的BL21转化菌,利用融合蛋白中6个组氨酸纯化标签,经N i+-NTA树脂亲和层析、SDS-PAGE分离鉴定表达产物,并经脱... 目的研究人源受体相关蛋白(RAP)的表达并鉴定表达产物的功能。方法用IPTG诱导培养含有人源RAP重组表达载体(pET-28 a(+)-RAP)的BL21转化菌,利用融合蛋白中6个组氨酸纯化标签,经N i+-NTA树脂亲和层析、SDS-PAGE分离鉴定表达产物,并经脱盐、浓缩、冻干处理获得RAP融合蛋白冻干品。将RAP融合蛋白与富含LDLR家族受体的巨噬细胞进行结合实验,分析RAP融合蛋白的功能。结果经亲和层析分离纯化后获得可溶性表达的RAP融合蛋白。实验显示,表达的RAP融合蛋白可竞争性抑制VLDL与巨噬细胞的结合。结论实验获得的RAP融合蛋白具有正常的结合活性,可用于相关研究,为RAP蛋白生产开发奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 受体相关蛋白 诱导表达 原核表达
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极低密度脂蛋白受体结合功能片段的克隆与表达
7
作者 吕玲肖 刘志国 +1 位作者 陈上海 张怀东 《武汉工业学院学报》 CAS 2007年第1期7-10,共4页
建立具有正常极低密度脂蛋白(VLDL)受体结合功能的小分子受体片段模型并借助此模型研究VLDL受体与配体结合的作用机制。PCR扩增获得LBR1-3和LBR1-8两个DNA片段并将其克隆至原核表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌菌株Rosetta(DE3),利用IPT... 建立具有正常极低密度脂蛋白(VLDL)受体结合功能的小分子受体片段模型并借助此模型研究VLDL受体与配体结合的作用机制。PCR扩增获得LBR1-3和LBR1-8两个DNA片段并将其克隆至原核表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌菌株Rosetta(DE3),利用IPTG诱导蛋白表达。表达产物经N i+-NTA亲和层析柱纯化,为VLDL受体的进一步功能与应用研究,特别是针对该受体的配体识别、结合作用机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 极低密度脂蛋白 基因克隆 表达 纯化
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