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超声破碎法联合应用DTT提取纯化Ca_V1.2钙通道CT3蛋白 被引量：1
1
作者 苏敬阳 封瑞 +6 位作者 吕力婷 邵冬雪 李墨 方涵田 魏贵贵 孙雪菲 郝丽英 《解剖科学进展》 2016年第6期602-605,共4页
目的探讨心肌Ca_V1.2钙通道CT3蛋白片段提取与纯化的方法。方法将CT3的cDNA插入pG EX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导CT3的GST融合蛋白表达,并采用超声破碎法进行分离纯... 目的探讨心肌Ca_V1.2钙通道CT3蛋白片段提取与纯化的方法。方法将CT3的cDNA插入pG EX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导CT3的GST融合蛋白表达,并采用超声破碎法进行分离纯化,在10mmol/L二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol,DTT)存在的情况下,PreScission蛋白酶切除GST标签,凝胶电泳鉴定CT3蛋白,检测蛋白纯度和相对分子质量。结果 SDSPAGE结果显示,超声破碎法可以纯化得到GST-CT3融合蛋白,且单纯应用PreScission蛋白酶酶切GST-CT3,得到的CT3蛋白片段浓度较低,而采用PreS cission蛋白酶联合应用DTT则可以成功提取纯化出浓度较高的CT3蛋白片段。结论超声破碎法联合应用DTT与PreScission蛋白酶能够提取纯化出高浓度和纯度的CT3蛋白片段,为深入研究CT3的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 DTT CT3 融合蛋白 提取 纯化 超声破碎法
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构建可合成非天然辅酶的圆红冬孢酵母工程菌
2
作者 梁世玉 万里 +4 位作者 郭潇佳 王雪颖 吕力婷 胡英菡 赵宗保 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期58-68,共11页
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)及其还原态是生物体通用的氧化还原辅酶和重要小分子,参与胞内众多代谢反应,因此调控NAD水平不仅难以选择性作用于代谢途径,还常常产生意外的生物学效应。最近研究发现利... 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)及其还原态是生物体通用的氧化还原辅酶和重要小分子,参与胞内众多代谢反应,因此调控NAD水平不仅难以选择性作用于代谢途径,还常常产生意外的生物学效应。最近研究发现利用非天然辅酶烟酰胺胞嘧啶二核苷酸(nicotinamide cytosine dinucleotide,NCD),可构建正交的氧化还原催化体系,为调控胞内代谢提供了新机遇。为实现在产油酵母圆红冬孢酵母中建立NCD介导的氧化还原代谢,采用农杆菌介导转化方法,在基因组整合表达密码子优化的NCD合酶(NcdS)编码基因NCDS,获得系列有效表达NcdS的工程菌株。酶偶联法分析发现,工程菌细胞裂解液NcdS酶活达8.1×10;U/OD;。通过高效液相色谱法(HPLC)和超高分辨率质谱检测,确定细胞裂解液可催化合成NCD。在培养基内补加5.0 mmol/L烟酰胺核糖后,工程菌胞内合成NCD达41.6μmol/L。对工程菌进行发酵和油脂提取,发现胞内表达NCD合酶未导致细胞产油性能降低,后续可通过表达其他NCD偏好性酶,有望在圆红冬孢酵母中建立受NCD调控的油脂合成代谢体系。 展开更多
关键词 圆红冬孢酵母 非天然辅酶 烟酰胺胞嘧啶二核苷酸 合成生物学 氧化还原代谢
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多级接触氧化工艺处理汽车涂装废水工程实例 被引量：1
3
作者 朱玉芳 吕力婷 +3 位作者 朱彤 MICHAEL Groetzbach 马永光 韩辉 《水处理技术》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期135-139,共5页
针对汽车厂涂装废水的水质特征和处理工艺存在的问题,采用多级接触氧化系统对原有的物化处理工艺进行升级改造,进一步降低涂装废水的有机污染物含量。结果表明,最终出水COD可保持在200 mg/L以下,水质指标均可完全达到DB 21/1627-2008排... 针对汽车厂涂装废水的水质特征和处理工艺存在的问题,采用多级接触氧化系统对原有的物化处理工艺进行升级改造,进一步降低涂装废水的有机污染物含量。结果表明,最终出水COD可保持在200 mg/L以下,水质指标均可完全达到DB 21/1627-2008排放要求。整个多级接触氧化系统处理废水能力为480 m^3/d,平均处理费用为1.96元/t废水。该工程的成功应用和经验可供相关行业的废水处理参考。 展开更多
关键词 汽车涂装废水 多级接触氧化 工程实例
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表达透明颤菌血红蛋白对圆红冬孢酵母油脂积累的影响
4
作者 王爽 张月 +4 位作者 周人辉 吕力婷 钱斯日古楞 张素芳 赵宗保 《可再生能源》 CAS 北大核心 2020年第9期1143-1148,共6页
产油酵母的油脂合成是高度耗氧的生物过程,为提高油脂合成过程中细胞利用氧气的能力,将透明颤菌的血红蛋白基因vgb整合到油脂高产菌株圆红冬孢酵母(Rhodosporidium toruloides,R.toruloides)的染色体中。首先构建了透明颤菌血红蛋白基因... 产油酵母的油脂合成是高度耗氧的生物过程,为提高油脂合成过程中细胞利用氧气的能力,将透明颤菌的血红蛋白基因vgb整合到油脂高产菌株圆红冬孢酵母(Rhodosporidium toruloides,R.toruloides)的染色体中。首先构建了透明颤菌血红蛋白基因vgb表达载体pZPK-PPGK-hyg-TNOS-PGPD-vgb-THSP,再通过农杆菌介导转化的方法将其转化至R.toruloides NP11中,获得重组菌株。Western blot和CO差异光谱分析表明,透明颤菌血红蛋白在R.toruloides NP11中成功表达并且具有生物活性。摇瓶发酵结果表明:与出发菌株相比,在氧气充足条件下,重组菌株NG-21的油脂产量提高了18%;在氧气不足条件下,重组菌株NG-22的油脂产量提高了28%;在限氧和不限氧的条件下,透明颤菌血红蛋白均能够促进圆红冬孢酵母的油脂积累。 展开更多
关键词 VGB基因 油脂 圆红冬孢酵母 发酵
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