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3种有机磷农药间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量：7
1
作者 刘运清 李岩松 +4 位作者 乔斌 孙宇 郝成玉 司朝朝 周玉 《农药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期746-749,766,共5页
[目的]建立能同时检测甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA)。[方法]根据ic-ELISA检测的基本程序,利用能同时识别甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷的宽谱特异性单克隆抗体,优化相关反应的理化参数,确定最佳... [目的]建立能同时检测甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA)。[方法]根据ic-ELISA检测的基本程序,利用能同时识别甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷的宽谱特异性单克隆抗体,优化相关反应的理化参数,确定最佳反应条件。[结果]建立的ic-ELISA检测方法对甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷的灵敏度(IC_(10)值)分别为8.81、11.73、13.25μg/L;检测范围分别为12.03μg/L^0.94 mg/L、15.84μg/L^1.07 mg/L和18.92μg/L^2.79 mg/L。[结论]建立的ic-ELISA方法可以满足甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷在果蔬及谷物中最大残留限量的检测要求。 展开更多
关键词 ic-ELISA 有机磷农药 多残留 宽谱特异性 单克隆抗体
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吡虫啉农药间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量：6
2
作者 于祥东 李岩松 +5 位作者 司朝朝 刘琰 关乃瑜 张胜兰 查永红 周玉 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2019年第2期107-112,118,共7页
为建立特异性检测吡虫啉的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA),利用能特异性识别吡虫啉的单克隆抗体,对ic-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结果表明:建立的ic-ELISA检测方法的灵敏度(ICI0)和检测范围(IC15~IC85)分别为... 为建立特异性检测吡虫啉的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA),利用能特异性识别吡虫啉的单克隆抗体,对ic-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结果表明:建立的ic-ELISA检测方法的灵敏度(ICI0)和检测范围(IC15~IC85)分别为0.06、0.08~3.26μg·L^-1。该方法对大米、梨、卷心菜3种样品加标回收率为83.61%~112.65%,与商品化试剂盒检测结果相比,其决定系数(R^2)为0.9531。这一研究建立的检测方法灵敏度高于大多数报道的检测方法,可满足我国规定的农产晶中吡虫啉最大残留限量标准检测要求,用于谷物、果蔬中吡虫啉残留定量检测。 展开更多
关键词 农产品 吡虫啉 ic-ELISA
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猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白1α(nsp1α)的N端锌指结构是其抑制NLRP3炎症小体活性所必需 被引量：2
3
作者 王超 史西保 +5 位作者 王丽 陈静 司朝朝 王爱萍 邓瑞广 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2032-2039,共8页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害养猪业的病毒性传染病之一,其致病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抑制宿主的天然免疫和特异性免疫反应,引起机体免疫抑制,造成持续性感染,从而给该病的防控带来困难。NLRP3炎症小体作为先天性免疫... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害养猪业的病毒性传染病之一,其致病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抑制宿主的天然免疫和特异性免疫反应,引起机体免疫抑制,造成持续性感染,从而给该病的防控带来困难。NLRP3炎症小体作为先天性免疫的重要组分在机体抗病毒中发挥重要作用。前期研究发现PRRSV能够激活NLRP3炎症小体,但PRRSV是否存在拮抗NLRP3炎症小体的组分还未见报道。本研究首先在缺失内源性炎症小体的HEK293T细胞中,共转染NLRP3、ASC、procaspase-1和pro-IL-1β四个真核表达质粒,建立NLRP3炎症小体的体外研究模型。然后,在该炎症小体模型细胞和猪肺泡巨噬细胞中,转染PRRSV nsp1α的真核表达质粒,结果表明nsp1α能够明显拮抗炎症小体的活化,而进一步的突变试验表明缺失N端锌指(ZF)结构或者突变ZF结构的nsp1α均不能抑制NLRP3炎症小体活化。本研究不仅首次发现了拮抗NLRP3炎症小体活化的PRRSV蛋白——nsp1α,而且发现nsp1α的N端锌指结构是其抑制NLRP3炎症小体活性所必需。本研究进一步发现了PRRSV拮抗天然免疫的新机制,并为PRRSV的防控提供了潜在的分子靶点和理论指导。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp1α ZF结构域 NLRP3炎症小体 IL-1Β
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猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白1α多克隆抗体的制备及应用 被引量：1
4
作者 赵慧君 赵旭阳 +11 位作者 史西保 陈静 范小敏 司朝朝 王丽 李青梅 常晓博 李雪莹 付建蒙 徐雅甜 邓瑞广 张改平 《安徽农业科学》 CAS 2019年第12期115-119,131,共6页
以真核质粒pcDNA3.1-flag-nsp1α为模板,利用PCR扩增出nsp1α基因片段,构建原核重组载体pET32a-nsp1α,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态,1mmol/LIPTG在37℃诱导表达6h,成功获得以包涵体形式存在的重组蛋白,能够与小鼠抗His标签单克隆抗... 以真核质粒pcDNA3.1-flag-nsp1α为模板,利用PCR扩增出nsp1α基因片段,构建原核重组载体pET32a-nsp1α,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态,1mmol/LIPTG在37℃诱导表达6h,成功获得以包涵体形式存在的重组蛋白,能够与小鼠抗His标签单克隆抗体反应;包涵体复性后作为抗原免疫新西兰大白兔,3次免疫后20d获得兔多抗血清。通过间接ELISA、Westernblot、间接免疫荧光、免疫组化等试验获得了高效价的兔多抗血清,该血清能够特异性地识别真核质粒表达的nsp1α以及PRRSVBJ4株。该试验成功表达了pET32a-nsp1α重组蛋白,并制备了高效价、高特异性的兔抗nsp1α多克隆抗体。 展开更多
关键词 PRRSV nsp1α 多克隆抗体
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苊烯完全抗原的制备与鉴定
5
作者 郝成玉 李岩松 +3 位作者 乔斌 孙宇 司朝朝 周玉 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期467-472,共6页
为制备免疫原性较好的苊烯完全抗原,以3-苊烯丁酸(ACE)为原料,分别采取活化酯法和混合酸酐法与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫原和包被原,经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和紫外光谱吸收法鉴定偶联结果。足垫免疫BALB/... 为制备免疫原性较好的苊烯完全抗原,以3-苊烯丁酸(ACE)为原料,分别采取活化酯法和混合酸酐法与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫原和包被原,经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和紫外光谱吸收法鉴定偶联结果。足垫免疫BALB/C小鼠,间接ELISA检测血清效价。结果表明:BSA(OVA)、过程载体、BSA(OVA)-ACE在Native-PAGE中迁移率发生明显改变,紫外光谱扫描发现3种物质在最大吸收峰处波长发生明显偏移,表明2种方法制备的苊烯完全抗原偶联成功。间接ELISA检测血清效价最高为1∶256 000,可以进行苊烯单克隆抗体的制备。 展开更多
关键词 多环芳烃 苊烯 完全抗原 活化酯法 混合酸酐法 间接ELISA
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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒非结构蛋白nsp1α的表达及活性检测 被引量：3
6
作者 司朝朝 史西保 +7 位作者 李恭贺 乔松林 王丽 李青梅 王超 陈静 王寅彪 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第1期126-129,共4页
为获得具有活性的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白1α(nsp1α),以BJ-4PRRSV nsp1α真核表达质粒pc DNA3.1-nsp1α为模板扩增nsp1α,克隆到原核表达载体p ET-28a,1 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导含有重组质粒的大肠杆... 为获得具有活性的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白1α(nsp1α),以BJ-4PRRSV nsp1α真核表达质粒pc DNA3.1-nsp1α为模板扩增nsp1α,克隆到原核表达载体p ET-28a,1 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导含有重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)。SDS–PAGE结果显示,nsp1α以包涵体形式高效表达,重组蛋白大小约为20 ku;Western blot结果显示,表达的重组蛋白能与小鼠抗His标签单克隆抗体反应;包涵体蛋白复性后,ELISA方法检测结果显示,重组蛋白能与1∶6 400稀释的PRRSV阳性血清反应。表明成功表达了nsp1α蛋白,且表达的重组蛋白具有较好的免疫学活性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 非结构蛋白1α 重组蛋白 免疫学活性
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