miR-590-5p通过靶向抑制YAP1的表达抑制A375恶性黑素瘤细胞侵袭和迁移 被引量：7

1

作者 王丽娟 史圣甲 +4 位作者 周艳 穆欣 韩丹 葛睿 牟宽厚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期326-330,336,共6页

目的探索miR-590-5p在A375恶性黑素瘤细胞中的表达及其对A375细胞侵袭和迁移能力的影响和机制。方法应用实时定量PCR技术检测A375细胞与人正常黑素细胞中miR-590-5p的表达水平;应用TranswellTM实验和划痕实验检测miR-590-5p对A375细胞... 目的探索miR-590-5p在A375恶性黑素瘤细胞中的表达及其对A375细胞侵袭和迁移能力的影响和机制。方法应用实时定量PCR技术检测A375细胞与人正常黑素细胞中miR-590-5p的表达水平;应用TranswellTM实验和划痕实验检测miR-590-5p对A375细胞侵袭和迁移的影响;应用荧光素酶报告基因实验明确yes相关蛋白(YAP1)是否为miR-590-5p的直接靶分子;应用实时定量PCR及Western blot法检测miR-590-5p对YAP1表达水平的影响。结果 miR-590-5p在A375细胞中的表达水平显著低于正常黑素细胞;与对照(miR-590-5p-NC)组相比,miR-590-5p mimcs组细胞侵袭和迁移能力均受到显著抑制;YAP1为miR-590-5p的直接靶分子;与miR-590-5p-NC组相比,miR-590-5p mimcs组细胞中YAP1 mRNA及蛋白的表达均受到抑制。结论 miR-590-5p在A375细胞中低表达,并通过靶向抑制YAP1的表达调控A375细胞的侵袭和迁移能力。 展开更多

关键词 miR-590-5p YAP1 侵袭 迁移 恶性黑素瘤

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Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌组织中的表达及其临床意义 被引量：4

2

作者 魏铭 王国栋 +7 位作者 郑国旭 郑甲 杨帆 史圣甲 席文锦 杨安钢 温伟红 秦卫军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期417-420,共4页

目的检测Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌组织中的表达情况,并分析Notch1的表达与临床病理特征的相关性。方法利用免疫组织化学染色,Western blot法和实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测肾细胞癌组织及对应的癌旁正常肾组织中Notch1的表... 目的检测Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌组织中的表达情况,并分析Notch1的表达与临床病理特征的相关性。方法利用免疫组织化学染色,Western blot法和实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测肾细胞癌组织及对应的癌旁正常肾组织中Notch1的表达,用qRT-PCR检测Notch下游靶分子Hes1的表达,并用SPSS17.0软件分析Notch1的表达水平与临床病理特征的相关性。结果免疫组织化学染色,Western blot法和qRT-PCR结果均显示Notch1在肾细胞癌组织中的表达低于正常肾组织,qRT-PCR结果显示Hes1在肾细胞癌组织中的表达低于正常肾组织,且Notch1的表达与肿瘤Fuhrman分级和AJCC分期呈负相关。结论 Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌的发生发展过程中可能具有肿瘤抑制基因的作用。 展开更多

关键词 肾细胞癌 NOTCH1 免疫组织化学 HES1 NOTCH通路

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前列腺癌非编码RNA1在雄激素非依赖去势抵抗型前列腺癌细胞中的作用 被引量：5

3

作者 王丽娟 史圣甲 +6 位作者 王乐 谢彦菊 白娥 周霞 李萌 金桂花 朱青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期789-793,共5页

目的探讨长链非编码RNA前列腺癌非编码RNA1(PRNCR1)在雄激素非依赖的前列腺癌细胞中的作用。方法应用实时定量PCR(qRT-PCR)检测雄激素依赖的前列腺癌细胞LNCaP及雄激素非依赖的前列腺癌细胞C4-2中PRNCR1的表达情况,通过RNA干扰技术沉默C... 目的探讨长链非编码RNA前列腺癌非编码RNA1(PRNCR1)在雄激素非依赖的前列腺癌细胞中的作用。方法应用实时定量PCR(qRT-PCR)检测雄激素依赖的前列腺癌细胞LNCaP及雄激素非依赖的前列腺癌细胞C4-2中PRNCR1的表达情况,通过RNA干扰技术沉默C4-2细胞中的PRNCR1,Western blot技术检测C4-2细胞中雄激素受体(AR)的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,MTT实验检测沉默PRNCR1表达对细胞增殖的影响,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 PRNCR1在雄激素非依赖的细胞系C4-2中高表达,干扰其表达可以明显降低前列腺癌细胞中AR的表达,抑制前列腺癌细胞的细胞增殖及细胞的侵袭能力,并促进细胞的凋亡。结论 PRNCR1介导AR在前列腺癌去势抵抗中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 前列腺癌非编码RNA1 LNCAP C4-2 雄激素受体 雄激素非依赖性前列腺癌

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前列腺特异性膜抗原(PSMA)与程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)在原发性前列腺癌组织的表达及临床意义 被引量：6

4

作者 赖盛伟 席文锦 +4 位作者 史圣甲 王超 郝晓柯 刘家云 张翔 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期729-733,共5页

目的检测并分析前列腺特异性膜抗原(PSMA)与程序性细胞死亡蛋白1配体1(PD-L1)在原发性前列腺癌组织中的表达及相关性,探索PSMA/PD-L1联合检测与原发性前列腺癌患者临床病理特征及生存周期的相关性。方法采用免疫组织化学染色法检测218... 目的检测并分析前列腺特异性膜抗原(PSMA)与程序性细胞死亡蛋白1配体1(PD-L1)在原发性前列腺癌组织中的表达及相关性,探索PSMA/PD-L1联合检测与原发性前列腺癌患者临床病理特征及生存周期的相关性。方法采用免疫组织化学染色法检测218例原发性前列腺癌组织中PSMA与PD-L1表达,应用Pearson相关分析前列腺癌组织中PSMA和PD-L1的免疫组织化学染色评分相关性。根据免疫组织化学染色法检测结果,将患者分为PSMA^+PD-L1^+、PSMA^+PD-L1^-、PSMA^-PD-L1^+、PSMA^-PD-L1^-四组,而后应用Spearman秩相关分析PSMA/PD-L1联合检测与原发性前列腺癌患者临床病理特征的相关性,应用Kaplan-Meier生存周期曲线分析PSMA/PD-L1联合检测与原发性前列腺癌患者术后生存周期的关系。结果原发性前列腺癌组织中PSMA与PD-L1表达呈正相关,PSMA和PD-L1双阳性表达与前列腺癌患者临床分期和淋巴结转移呈正相关,与原发性前列腺癌患者术后5年总体生存率呈负相关。结论PSMA与PD-L1在原发性前列腺癌组织中表达呈正相关,两分子联合检测有助于前列腺癌恶性程度评估及生存周期预测。 展开更多

关键词 前列腺癌 前列腺特异性膜抗原(PSMA) 程序性细胞死亡蛋白1配体1(PD-L1) 免疫组织化学染色

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E盒锌指结合蛋白1基因沉默抑制结肠癌HCT116细胞增殖并促进其凋亡 被引量：3

5

作者 郑国旭 史圣甲 +6 位作者 魏铭 席文锦 郭张燕 杨帆 孟艳玲 温伟红 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期396-398,402,共4页

目的使用针对E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)的siRNA在结肠癌HCT116细胞中下调ZEB1的表达,研究其对HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人ZEB1的mRNA序列设计并合成2对针对ZEB1的siRNA,瞬时转染HCT116细胞后,利用实时荧光定量PCR,Western blo... 目的使用针对E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)的siRNA在结肠癌HCT116细胞中下调ZEB1的表达,研究其对HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人ZEB1的mRNA序列设计并合成2对针对ZEB1的siRNA,瞬时转染HCT116细胞后,利用实时荧光定量PCR,Western blot法分别在mRNA和蛋白水平检测siRNA对ZEB1的抑制效果;利用MTT法检测细胞增殖;AnnexinⅤ-FITC/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与对照组相比,针对ZEB1的siRNA可在mRNA和蛋白水平有效抑制ZEB1的表达,ZEB1的表达下调可有效抑制HCT116细胞的增殖,并促进细胞凋亡。结论 ZEB1对结肠癌细胞的生存和增殖具有重要作用,可能参与结肠癌的发生发展过程。 展开更多

关键词 siRNA ZEB1 结肠癌 细胞增殖 细胞凋亡

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过表达前列腺特异性膜抗原和荧光素酶的PC3稳定细胞系的建立及成瘤性鉴定 被引量：2

6

作者 张玲玲 吴介恒 +8 位作者 韩东晖 史圣甲 杨发 谢品 席文锦 郭张燕 秦卫军 杨安钢 温伟红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期513-516,共4页

目的利用慢病毒感染的方法建立能稳定表达前列腺特异性膜抗原(PSMA)和荧光素酶的PSMA^+-PC3细胞系,并将其接种到裸鼠皮下检测其成瘤能力。方法包装表达PSMA的慢病毒和表达荧光素酶的慢病毒,将其感染PC3细胞后,用嘌呤霉素进行筛选,建立... 目的利用慢病毒感染的方法建立能稳定表达前列腺特异性膜抗原(PSMA)和荧光素酶的PSMA^+-PC3细胞系,并将其接种到裸鼠皮下检测其成瘤能力。方法包装表达PSMA的慢病毒和表达荧光素酶的慢病毒,将其感染PC3细胞后,用嘌呤霉素进行筛选,建立能够稳定表达PSMA和荧光素酶的PSMA^+ -PC3细胞和仅表达荧光素酶的PSMA--PC3细胞;利用流式细胞术检测PSMA的表达情况。将PSMA^+ -PC3和PSMA^- -PC3细胞接种于裸鼠皮下建立荷瘤模型,利用生物发光成像法观察其在体内的成瘤情况,利用免疫组织化学染色法检测PSMA^+ -PC3和PSMA^- -PC3肿瘤组织中PSMA的表达情况。结果成功建立了能够稳定表达PSMA和荧光素酶的PSMA^+ -PC3细胞和仅表达荧光素酶的PSMA^- -PC3细胞,流式细胞术检测证实PSMA^+ -PC3细胞上PSMA呈阳性表达,小动物活体成像结果显示PSMA^+ -PC3和PSMA^- -PC3细胞均可有效成瘤,免疫组织化学染色检测证实PSMA^+ -PC3肿瘤上PSMA的表达为阳性。结论成功建立了能稳定表达PSMA和荧光素酶的PSMA^+ -PC3细胞系,并在裸鼠体内证实其可有效成瘤,为靶向PSMA的研究提供了有用的细胞和动物模型。 展开更多

关键词 PSMA 慢病毒 前列腺癌 靶向治疗 动物模型

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梗阻性无精子症延迟恢复1例报告

7

作者 刘项 史圣甲 +4 位作者 宋娟 孙峥 季兴哲 张洲 孙建华 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期632-633,共2页

梗阻性无精子症病因复杂,多为永久性,未经药物或手术治疗而自行恢复正常的情况极为罕见。本文报道1例梗阻性无精子症患者,未行手术和药物治疗,精子密度延迟恢复正常,原因可能与无症状附睾炎和射精管囊肿有关。特定病因导致的梗阻性无精... 梗阻性无精子症病因复杂,多为永久性,未经药物或手术治疗而自行恢复正常的情况极为罕见。本文报道1例梗阻性无精子症患者,未行手术和药物治疗,精子密度延迟恢复正常,原因可能与无症状附睾炎和射精管囊肿有关。特定病因导致的梗阻性无精子症患者有自行复通的可能。 展开更多

关键词 梗阻性无精子症 精子密度 显微手术

原文传递

HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定 被引量：2

8

作者 席文锦 彭红艳 +7 位作者 白文栋 郑国旭 史圣甲 皇甫罗锴 王曦 贾林涛 张英起 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期93-95,共3页

目的构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的原核表达载体并鉴定其基因工程菌种稳定性。方法应用PCR技术以pCMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pET-22b原核表达载体;将该表达载体转化BL21大肠杆菌并... 目的构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的原核表达载体并鉴定其基因工程菌种稳定性。方法应用PCR技术以pCMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pET-22b原核表达载体;将该表达载体转化BL21大肠杆菌并挑取表达蛋白较高的克隆菌,划线接种传代50次;通过革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及蛋白诱导表达的Western blot分析鉴定e23sFv-Fdt-tBid免疫促凋亡蛋白表达工程菌的稳定性。结果成功构建pET-22b-e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体,并在BL21大肠杆菌中诱导表达;革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及Western blot法鉴定结果表明基因工程菌种稳定性良好,可以稳定表达免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid。结论成功构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白原核表达载体,鉴定了表达该免疫促凋亡蛋白的基因工程菌种稳定性,为HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的应用研究奠定了基础。 展开更多

关键词 HER2 原核表达 基因工程菌种 稳定性

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精子浮游板优选效果的评估

9

作者 杨杰 刘茹月 +2 位作者 王琪 史圣甲 张洲 《临床检验杂志》 CAS 2023年第10期731-735,共5页

目的 比较精子浮游板与临床常用的密度梯度离心结合上游法(简称梯度上游法)在人类精子优选效果上的差异。方法 收集我中心不育症患者的精液样本,在排除无精子症、重度少弱精子症和精液体积小于2 mL者后,纳入50例研究者。精液液化后分别... 目的 比较精子浮游板与临床常用的密度梯度离心结合上游法(简称梯度上游法)在人类精子优选效果上的差异。方法 收集我中心不育症患者的精液样本,在排除无精子症、重度少弱精子症和精液体积小于2 mL者后,纳入50例研究者。精液液化后分别用精子浮游板和梯度上游法对等体积的相同精液进行优化处理,回收相同体积的精子并检测浓度、前向运动精子百分率、前向运动精子总数(TMSC)、正常形态精子百分率、精子回收率和精子DNA碎片指数(DFI),比较两种不同处理方法间的差异。结果 与优选前的原精液组相比,浮游板组和梯度上游组优化处理后的精子浓度[(16.08±13.39)×10^(6)/mL、(8.88±8.06)×10^(6)/mL vs(60.05±27.21)×10^(6)/mL]、 TMSC[(7.41±6.14)×10^(6)、(3.98±3.57)×10^(6)vs(22.24±13.74)×10^(6)]和DFI [(2.20±3.44)%、(5.20±10.79)%vs(26.38±13.92)%]均显著下降,而前向运动精子百分率[(91.67±4.75)%、(87.86±7.90)%vs(40.21±16.83)%]和正常形态精子百分率[(9.58±5.08)%、(7.72±4.01)%vs(3.58±2.06)%]均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.001);相较于梯度上游组,浮游板组优选后的精子浓度、前向运动精子百分率、正常形态精子百分率、TMSC和精子回收率[(30.74±13.70)%vs(17.09±9.20)%]更高,而DFI更低,操作耗时也更短[(32.38±1.01) min vs(60.08±2.06) min],两组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 与传统的密度梯度离心结合上游的方法相比,精子浮游板操作更加简便、耗时更短、制备效果也更好,具有一定的临床应用前景。 展开更多

关键词 精子浮游板 密度梯度离心结合上游法 精子制备 精子DNA碎片指数

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6项肿瘤相关抗原联合检测在胆囊癌诊断中的临床价值 被引量：1

10

作者 安蓉 王丽娟 史圣甲 《现代检验医学杂志》 CAS 2013年第4期71-73,共3页

目的 探讨检测多项肿瘤相关抗原（tumor associated antigen,TAA）在胆囊癌术前诊断中的临床价值.方法 收集36例病理确诊为原发性胆囊癌的患者血清及36例正常人的血清,分析比较血清中P53,P62,P16,survivin,癌高表达K同源结构域蛋白（K h... 目的 探讨检测多项肿瘤相关抗原（tumor associated antigen,TAA）在胆囊癌术前诊断中的临床价值.方法 收集36例病理确诊为原发性胆囊癌的患者血清及36例正常人的血清,分析比较血清中P53,P62,P16,survivin,癌高表达K同源结构域蛋白（K homology domain containing protein overexpressed in cancer,KOC）和潜伏膜蛋白质1（latent membrane protein 1,LMP1）等六种肿瘤相关抗原诊断胆囊癌的灵敏度和特异度,评估联合检测肿瘤相关抗原的临床诊断价值.结果 胆囊癌病人血清中每一种肿瘤相关抗原的阳性率是波动的,范围为16.7%～25.0%,依次联合检测六种抗原,阳性率相应逐步增高;最终可达到灵敏度69.4%和特异度91.7%.阳性率和阴性率的似然比分别为8.361和0.334;阳性和阴性的预测价值分别为89.3%和71.6%,百分比一致性和Kappa值分别为80.6和0.611.结论 联合检测p53,p62,p16,survivin,KOC和IMPI肿瘤相关抗原可以明显提高胆囊癌诊断的灵敏度和特异度,对胆囊癌的诊断有一定价值. 展开更多

关键词 肿瘤相关抗原 联合检测 胆囊癌 诊断

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YAP蛋白在前列腺癌中的表达及其意义 被引量：1

11

作者 安蓉 王丽娟 +1 位作者 史圣甲 段英飞 《现代检验医学杂志》 CAS 2013年第2期70-73,共4页

目的探讨前列腺癌中YAP蛋白的表达及与前列腺癌临床病理特征的关系及其临床意义。方法选取2005年1月～2007年1月西京医院泌尿外科100例前列腺癌患者手术标本，应用免疫组织化学技术检测100例前列腺癌患者癌组织（实验组）及相对应的癌... 目的探讨前列腺癌中YAP蛋白的表达及与前列腺癌临床病理特征的关系及其临床意义。方法选取2005年1月～2007年1月西京医院泌尿外科100例前列腺癌患者手术标本，应用免疫组织化学技术检测100例前列腺癌患者癌组织（实验组）及相对应的癌旁组织（对照组）中YAP蛋白的表达情况，并对结果进行分析。结果100例前列腺癌组织中有74例为阳性，占74％，而在100例癌旁组织中有42例为阳性，占42％。两组比较，表达差异有统计学意义（χ^2=21．018，P〈0．005）；前列腺癌中YAP的表达阳性率与PSA浓度、TNM分期及Gleason评分有明显关系（P〈0．05）；而与前列腺癌患者年龄无明显关系（P〉0．05）。结论YAP蛋白在前列腺癌组织中的表达高于癌旁组织，其阳性表达率在侵袭性前列腺癌组织中最高。YAP蛋白高表达可能与前列腺癌的侵袭转移相关，YAP蛋白可成为诊断、治疗前列腺癌的新靶位。 展开更多

关键词 前列腺癌 YAP蛋白 免疫组织化学 Hippo信号通路

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实验性自身免疫性脑脊髓炎中B7-H1分子在脾脏和中枢神经系统淋巴细胞上的表达变化

12

作者 史圣甲 席文锦 +6 位作者 王丽娟 郭张燕 王曦 皇甫罗凯 王国栋 杨安钢 温伟红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期834-836,共3页

目的:观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病高峰期淋巴细胞表面B7-H1分子的表达变化,探讨B7-H1在EAE发病和病情进展中的作用。方法:以MOG35-55诱导雌性C58BL/6小鼠制备EAE动物模型,并对其行为学变化进行记录与评分。分别于发病前和发... 目的:观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病高峰期淋巴细胞表面B7-H1分子的表达变化,探讨B7-H1在EAE发病和病情进展中的作用。方法:以MOG35-55诱导雌性C58BL/6小鼠制备EAE动物模型,并对其行为学变化进行记录与评分。分别于发病前和发病高峰期处死小鼠,分离脾脏与中枢神经系统中的淋巴细胞,用流式细胞术分析淋巴细胞表面B7-H1分子的表达差异。结果:与发病前相比,EAE发病高峰期脾脏分离的淋巴细胞中B7-H1阳性细胞率由(35.1±2.46)%下降至(18.9±2.06)%(P<0.01),其中CD4+T细胞中B7-H1阳性细胞由发病前的(6.4±1.25)%下降至发病后的(2.3±1.04)%(P<0.05)。中枢神经系统浸润的淋巴细胞中有8.7%为B7-H1阳性细胞。结论:在EAE发病过程中,B7-H1分子在外周淋巴细胞的阳性细胞数下降,而中枢神经系统浸润的淋巴细胞中有一定比例的B7-H1阳性细胞,提示B7-H1可能在EAE发病过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 B7-H1 EAE CD4+T细胞

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含B7-H1 shRNA基因的慢病毒表达载体的制备及其抑制效果鉴定

13

作者 皇甫罗锴 王曦 +7 位作者 郭张燕 席文锦 史圣甲 杨帆 陈晓燕 杨安钢 张剑宁 温伟红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期242-245,共4页

目的设计针对B7-H1的shRNA序列,构建慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后检测其对U251细胞中B7-H1基因的沉默效果。方法设计3对针对B7-H1 mRNA的shRNA,化学合成正义链和反义链,退火后与酶切后的pLKO.1载体进行连接。测序正确后包装成病毒... 目的设计针对B7-H1的shRNA序列,构建慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后检测其对U251细胞中B7-H1基因的沉默效果。方法设计3对针对B7-H1 mRNA的shRNA,化学合成正义链和反义链,退火后与酶切后的pLKO.1载体进行连接。测序正确后包装成病毒并感染U251细胞,分别用qRT-PCR及Western blot法检测干扰效果。结果 qRT-PCR及Westernblot结果证实设计的3条RNA干扰序列中有2条可有效沉默U251细胞中B7-H1的表达。结论所制备的针对B7-H1的shR-NA慢病毒能特异性沉默B7-H1。 展开更多

关键词 B7-H1 SHRNA 慢病毒载体 U251MG细胞

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针对B7-H1的siRNA对脑胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响 被引量：1

14

作者 王曦 皇甫罗锴 +5 位作者 杨帆 史圣甲 郭张燕 杨安钢 温伟红 张剑宁 《神经解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第2期183-188,共6页

目的:利用针对B7-H1的siRNA在脑胶质瘤U87细胞中下调B7-H1的表达,研究B7-H1的表达下调对U87细胞增殖和凋亡的影响。方法:根据人B7-H1的mRNA序列设计并合成两对针对B7-H1的siRNA,于转染前一天将U87细胞接种于10 cm细胞培养皿中,以转染时... 目的:利用针对B7-H1的siRNA在脑胶质瘤U87细胞中下调B7-H1的表达,研究B7-H1的表达下调对U87细胞增殖和凋亡的影响。方法:根据人B7-H1的mRNA序列设计并合成两对针对B7-H1的siRNA,于转染前一天将U87细胞接种于10 cm细胞培养皿中,以转染时细胞融合度为50%-80%为宜,分别用250μl OPTI-MEM稀释15μl siRNA与15μl转染试剂Lipofectamine 2000,将两者混匀室温静置20 min后,滴入细胞培养皿中。转染60或72 h后利用流式细胞术检测B7-H1在细胞表面的表达情况,利用荧光定量PCR和Western Blot分别检测B7-H1的mRNA和蛋白质水平,并用MTT和流式细胞术检测B7-H1表达下调后,U87细胞增殖和凋亡的改变。结果:与阴性对照组相比,两对针对B7-H1的siRNA均可有效下调U87细胞中B7-H1的表达,流式细胞术结果显示与阴性对照组相比,B7-H1阳性表达率由53.2%分别下调至26.7%和20.6%;MTT结果显示B7-H1表达下调后U87细胞的增殖被显著抑制,培养第5天吸光度值由0.58±0.02分别下降至0.451±0.02及0.342±0.016;流式细胞术结果显示B7-H1表达下调后U87细胞凋亡明显,早期凋亡率由0.1%分别增加至12.8%及13.2%。结论:B7-H1的表达下调可有效抑制脑胶质瘤U87细胞的增殖,并促进细胞凋亡,提示B7-H1可能作为脑胶质瘤基因治疗的一个潜在靶点。 展开更多

关键词 B7-H1 RNAI U87细胞 脑胶质瘤

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复方玄驹胶囊联合FSH治疗特发性少弱精子症的临床效果观察

15

作者 赵莹莹 陈莉莎 +2 位作者 魏威 史圣甲 于月新 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期810-814,共5页

目的:探讨复方玄驹胶囊联合尿促卵泡素(uFSH)治疗特发性少弱精子症的临床疗效。方法:回顾性分析2022年6月至2023年6月就诊的特发性少弱精子症患者,根据治疗方案的差异分为试验组(复方玄驹胶囊+uFSH,n=53)和对照组(uFSH,n=61)。药物使用... 目的:探讨复方玄驹胶囊联合尿促卵泡素(uFSH)治疗特发性少弱精子症的临床疗效。方法:回顾性分析2022年6月至2023年6月就诊的特发性少弱精子症患者,根据治疗方案的差异分为试验组(复方玄驹胶囊+uFSH,n=53)和对照组(uFSH,n=61)。药物使用方法为:复方玄驹胶囊每次3粒,3次/d.;uFSH肌注每次75IU,1次/3d;连续用药12周为1个疗程。首次就诊及治疗1个月后检测精液体积、精子浓度、前向运动精子百分率、血清生殖激素水平、肝功能,评估各组临床治疗效果。结果:治疗1个月后,试验组和对照组的精液体积、肝功与治疗前相比无明显变化,精子浓度、前向运动精子百分率、T、FSH、LH与治疗前相比明显升高,E2与治疗前相比明显下降。疗程结束后,试验组精子浓度、前向运动精子百分率、T、FSH、LH、T/E2比值与对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:复方玄驹胶囊联合uFSH可显著改善特发性少弱精子症患者精液质量,提高T水平、T/E2比值。 展开更多

关键词 特发性少弱精子症 复方玄驹胶囊 尿促卵泡素 睾酮/雌二醇

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沉默环状RNA_单酰甘油酯酶促进睾丸支持细胞增殖而抑制凋亡 被引量：3

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作者 史圣甲 贾一凡 +2 位作者 季兴哲 周梁 张洲 《西部医学》 2022年第2期185-189,194,共6页

目的探讨沉默环状RNA_单酰甘油酯酶(Circular RNA_monoglyceride lipase,circ_MGLL)表达对睾丸支持细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法应用siRNA沉默睾丸支持细胞中circ_MGLL和MGLL的表达。应用CCK-8和EdU检测沉默circ_MGLL对支持细... 目的探讨沉默环状RNA_单酰甘油酯酶(Circular RNA_monoglyceride lipase,circ_MGLL)表达对睾丸支持细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法应用siRNA沉默睾丸支持细胞中circ_MGLL和MGLL的表达。应用CCK-8和EdU检测沉默circ_MGLL对支持细胞增殖能力的影响。应用流式细胞术检测沉默circ_MGLL对支持细胞周期和凋亡的影响。应用生信网站预测与circ_MGLL具有结合潜能的miRNA。应用荧光素酶报告实验检测circ_MGLL与相关miRNAs的结合能力。结果沉默circ_MGLL的表达后,支持细胞增殖速度加快、增殖细胞比例和S期细胞比例升高(均P<0.05),而凋亡细胞比例和G1期细胞比例降低(P<0.05)。机制方面研究显示,circ_MGLL可结合miR-1228、miR-1233、miR-149和miR-924。结论circ_MGLL可结合miR-1228/miR-1233/miR-149/miR-924,并促进睾丸支持细胞增殖而抑制细胞凋亡。 展开更多

关键词 支持细胞 环状RNA_单酰甘油酯酶 无精子症 微小RNA 细胞增殖

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长链非编码RNA波形蛋白反义RNA1(VIM-AS1)促进C4-2去势抵抗性前列腺癌细胞增殖与侵袭 被引量：2

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作者 史圣甲 张翔 +3 位作者 韩东晖 杨发 李宇 王丽娟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1083-1088,共6页

目的评估长链非编码RNA波形蛋白反义RNA1(VIM-AS1)在前列腺癌组织中的表达及临床相关性,探索其对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)C4-2细胞增殖和侵袭能力的影响及潜在机制。方法利用生物信息学数据库分析VIM-AS1在前列腺癌组织中的表达水平及... 目的评估长链非编码RNA波形蛋白反义RNA1(VIM-AS1)在前列腺癌组织中的表达及临床相关性,探索其对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)C4-2细胞增殖和侵袭能力的影响及潜在机制。方法利用生物信息学数据库分析VIM-AS1在前列腺癌组织中的表达水平及其与TNM分期、生存周期的相关性;应用反义寡核苷酸(ASO)沉默C4-2细胞中VIM-AS1的表达,5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶(EdU)实验检测细胞增殖的变化,流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化,CCK-8法检测比卡鲁胺杀伤敏感性的变化,Transwell^(TM)实验检测细胞侵袭和迁移以及细胞数目的变化,划痕实验检测迁移距离的变化。生物信息学分析VIM-AS1与含三联基元蛋白24(TRIM24)表达的相关性,实时定量PCR和Western blot法分别检测VIM-AS1对TRIM24 mRNA和蛋白表达的影响。结果前列腺癌组织VIM-AS1表达上调,并与患者TNM分期正相关,与总体生存率呈负相关。敲低VIM-AS1表达后,C4-2细胞增殖能力、S期细胞比例、侵袭细胞数和迁移距离、迁移细胞数降低,而比卡鲁胺杀伤敏感性、凋亡细胞百分比和G2期细胞比例升高。TRIM24与VIM-AS1表达正相关,沉默VIM-AS1将导致TRIM24表达下调。结论VIM-AS1在CRPC组织中上调,可能通过上调TRIM24表达促进C4-2细胞增殖与侵袭。 展开更多

关键词 去势抵抗性前列腺癌(CRPC) 波形蛋白反义RNA1(VIM-AS1) 含三联基元蛋白24(TRIM24) 细胞增殖 细胞侵袭

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沉默环状RNA_胚胎致死异常视觉样蛋白2(circELAVL2)抑制小鼠睾丸TM4支持细胞增殖并促进其凋亡

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作者 史圣甲 季兴哲 +1 位作者 孙建华 张洲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1005-1010,共6页

目的观测沉默环状RNA_胚胎致死异常视觉样蛋白2(circELAVL2)对小鼠睾丸TM4支持细胞增殖和凋亡的影响,并探索潜在机制。方法应用小干扰RNA技术沉默小鼠睾丸TM4细胞circELAVL2的表达,沉默circELAVL2后,采用CCK-8法和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧... 目的观测沉默环状RNA_胚胎致死异常视觉样蛋白2(circELAVL2)对小鼠睾丸TM4支持细胞增殖和凋亡的影响,并探索潜在机制。方法应用小干扰RNA技术沉默小鼠睾丸TM4细胞circELAVL2的表达,沉默circELAVL2后,采用CCK-8法和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷染色评估TM4细胞增殖能力,流式细胞术和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测TM4细胞的凋亡。生物信息学方法预测微小RNA-382-3p(miR-382-3p)与circELAVL2的结合位点,荧光素酶报告实验检测circELAVL2与miR-382-3p的结合能力。实时定量PCR检测circEALVL2和miR-382-3p表达水平。结果沉默circELAVL2的表达后,TM4细胞增殖速度和EdU阳性细胞比例降低,凋亡细胞比例增加。机制研究结果显示circELAVL2可结合并下调miR-382-3p表达。结论circELAVL2可通过结合并抑制miR-382-3p表达促进小鼠TM4支持细胞增殖能力并抑制其凋亡。 展开更多

关键词 支持细胞 环状RNA(circRNA) 环状RNA_胚胎致死异常视觉样蛋白2(circELAVL2) 微小RNA(miRNA) 细胞增殖 细胞凋亡

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敲低环状RNA类网格蛋白重链1(circ_CLTCL1)表达抑制人睾丸支持细胞增殖 被引量：1

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作者 史圣甲 孙建华 +2 位作者 刘项 王磊 张洲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期828-834,共7页

目的检测环状RNA_类网格蛋白重链1(circ_CLTCL1)在梗阻性和非梗阻性无精子症患者睾丸组织中的表达,评估敲低circ_CLTCL1表达对支持细胞增殖和凋亡的影响,探索其调控细胞增殖的潜在机制。方法采用一步法实时定量PCR检测梗阻性和非梗阻性... 目的检测环状RNA_类网格蛋白重链1(circ_CLTCL1)在梗阻性和非梗阻性无精子症患者睾丸组织中的表达,评估敲低circ_CLTCL1表达对支持细胞增殖和凋亡的影响,探索其调控细胞增殖的潜在机制。方法采用一步法实时定量PCR检测梗阻性和非梗阻性无精子症患者睾丸组织及其来源支持细胞circ_CLTCL1和呈线性结构的CLTCL1表达。利用小干扰RNA技术沉默睾丸支持细胞中circ_CLTCL1的表达。采用CCK-8法和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法检测支持细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。采用生物信息学软件筛选与circ_CLTCL1具有结合潜能的微小RNA(miRNA)。荧光素酶报告实验检测circ_CLTCL1与miR-202结合能力。结果梗阻性无精子症睾丸组织及其来源支持细胞中circ_CLTCL1表达高于非梗阻性组,而CLTCL1在两组间表达水平无明显差异。敲低circ_CLTCL1的表达后,支持细胞增殖能力降低,凋亡水平升高、S期细胞比例减少。circ_CLTCL1可吸附结合miR-202。结论circ_CLTCL1在非梗阻性无精子症患者睾丸组织及支持细胞中低表达,可通过结合miR-202促进支持细胞增殖而抑制细胞凋亡。 展开更多

关键词 支持细胞 环状RNA_类网格蛋白重链1(circ_CLTCL1) 无精子症 微小RNA 细胞增殖

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长链基因间非编码RNA 00681竞争性结合miR-16促进黑素瘤细胞侵袭和迁移 被引量：1

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作者 穆欣 史圣甲 +3 位作者 葛睿 梁艳 杨莹莹 王丽娟 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2021年第19期3331-3336,共6页

目的:检测长链基因间非编码RNA 00681(long intergenic noncoding RNA 00681,linc00681)在恶性黑素瘤组织和皮肤良性痣组织中的表达,探索沉默linc00681对黑素瘤A375细胞侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:采用一步法实时定量聚合酶链式... 目的:检测长链基因间非编码RNA 00681(long intergenic noncoding RNA 00681,linc00681)在恶性黑素瘤组织和皮肤良性痣组织中的表达,探索沉默linc00681对黑素瘤A375细胞侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:采用一步法实时定量聚合酶链式反应(real time-quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测恶性黑素瘤组织和A375细胞中linc00681的表达。利用小干扰RNA技术沉默黑素瘤A375细胞中linc00681的表达。应用划痕实验检测敲低linc00681对细胞迁移距离的影响,Transwell检测敲低linc00681对细胞迁移和侵袭能力的影响。生信分析网站分析linc00681和微小RNA-16(microRNA-16,miR-16)的潜在结合位点。荧光素酶报告实验检测linc00681与miR-16的结合能力。挽救实验检测miR-16对linc00681调控A375细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:黑素瘤组织和A375细胞中linc00681的表达高于皮肤良性痣和正常黑素HEMa-LP细胞。沉默linc00681表达后,A375细胞迁移距离、迁移和侵袭细胞数目均显著降低。研究显示:linc00681可吸附结合miR-16;linc00681和miR-16共同沉默组侵袭和迁移能力明显高于linc00681单独沉默组。结论:linc00681在黑素瘤组织和A375细胞中表达升高,并可通过竞争性结合miR-16促进黑素瘤细胞迁移和侵袭。 展开更多

关键词 黑素瘤 长链基因间非编码RNA 00681 微小RNA-16 竞争性内源性RNA 迁移

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