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哮喘大鼠气道平滑肌细胞培养方法探讨 被引量：6
1
作者 卢虹蓓 张维溪 李昌崇 《温州医学院学报》 CAS 2009年第3期264-266,共3页
目的:探讨哮喘大鼠气道平滑肌细胞培养方法,了解其生长特性。方法:制作慢性哮喘大鼠模型,用酶解离法、组织贴块法分别培养哮喘大鼠气道平滑肌细胞,倒置相差显微镜观察其生长情况,用免疫组化SP法分析SMα-action抗原的表达。结果:以酶解... 目的:探讨哮喘大鼠气道平滑肌细胞培养方法,了解其生长特性。方法:制作慢性哮喘大鼠模型,用酶解离法、组织贴块法分别培养哮喘大鼠气道平滑肌细胞,倒置相差显微镜观察其生长情况,用免疫组化SP法分析SMα-action抗原的表达。结果:以酶解离法培养2～3d可见细胞贴壁,7～9d可融合;以贴块法培养7～10d组织块周围有细胞长出,10～14d融合,传代后细胞"谷峰"生长明显。SMα-action免疫组化SP法染色均呈阳性。结论:两种方法均能培养出纯度较高的哮喘大鼠平滑肌细胞,其中酶解离法细胞产量高,纯度高,生长速度快,能为气道疾病细胞实验提供可靠的细胞模型。 展开更多
关键词 大鼠 哮喘 气道 平滑肌 细胞培养
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ERK信号转导通路在哮喘大鼠气道重塑中的作用 被引量：6
2
作者 卢虹蓓 李昌崇 《浙江临床医学》 2009年第5期452-455,共4页
目的研究在哮喘大鼠气道平滑肌细胞ASMC（airway smooth muscle cell）中ERK信号转导通路对哮喘气道重塑中的作用。方法原代培养ASMC，实验设未干预组（A组）、ERK阻断剂（U0126）组（B组）、PDGF组（C组）、PDGF＋ERK阻断剂组（D组）。... 目的研究在哮喘大鼠气道平滑肌细胞ASMC（airway smooth muscle cell）中ERK信号转导通路对哮喘气道重塑中的作用。方法原代培养ASMC，实验设未干预组（A组）、ERK阻断剂（U0126）组（B组）、PDGF组（C组）、PDGF＋ERK阻断剂组（D组）。B组又分为B1组、B2组、B3组、B4组，加入浓度分别为0．1μmol／L、1μmol／L、5μmol／L、10μmol／L的U0126；C组又分为C1组、C2组、C3组、C4组，加入浓度分别为1μg／L、10μg／L、25μg／L、50μg／L的PDGF—BB。免疫组化法测ERK。蛋白的表达（仅测A、B4、C4、D组），RT—PCR法测其mRNA表达。结果ASMC中ERK，蛋白表达B4组显著低于A组（P〈0．01），C4组显著高于A组（P〈0．01），D组与A组相比差异无统计学意义（P〉0．05）；B1组、B2组、B3组．B4组ERK，mRNA表达均显著低于A组（P〈0．01），U0126以浓度依赖性的方式抑制PDGF—BB诱导ASMC中ERK的活化；C1组、C2组、C3组、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（P〈0．01），ERK1 mRNA的表达与PDGF—BB存在明显的浓度依赖关系，D组则与A组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PDGF可剂量依赖地激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路，ERK通路参与了PDGF诱导的ASMC增殖的细胞内信号转导过程。 展开更多
关键词 哮喘 大鼠 气道重塑 气道平滑肌细胞
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哮喘大鼠气道平滑肌细胞ERK信号通路调控Smad6/7的研究 被引量：6
3
作者 卢虹蓓 张维溪 李昌崇 《医学研究杂志》 2012年第10期42-46,共5页
目的探讨在哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中ERK信号通路对Smad6/7蛋白的调控。方法复制哮喘大鼠模型,原代培养ASMC,实验设未干预组(A组)、细胞外调节激酶(ERK)阻断剂(U0126)组(B组)、血小板源性生长因子(PDGF)组(C组)、PDGF+ERK阻断剂... 目的探讨在哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中ERK信号通路对Smad6/7蛋白的调控。方法复制哮喘大鼠模型,原代培养ASMC,实验设未干预组(A组)、细胞外调节激酶(ERK)阻断剂(U0126)组(B组)、血小板源性生长因子(PDGF)组(C组)、PDGF+ERK阻断剂组(D组)。免疫组化法测定Smad6/7蛋白的表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定Smad6/7 mRNA表达。结果哮喘大鼠ASMC中Smad 6/7蛋白B组显著高于A组(P<0.01),C组显著低于A组(P<0.01),D组与A组比较无统计学差异(P>0.05);各组哮喘大鼠ASMC中Smad6/7 mRNA表达无统计学差异。结论哮喘大鼠ASMC中ERK信号通路调控Smad6/7的作用发生在蛋白水平,不发生于基因水平。 展开更多
关键词 哮喘 气道平滑肌细胞 细胞外调节激酶 SMAD
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PDGF对哮喘大鼠气道平滑肌细胞中ERK通路的影响研究
4
作者 卢虹蓓 张维溪 李昌崇 《浙江医学》 CAS 2013年第22期1978-1981,共4页
目的研究血小板源性生长因子(PDGF)对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中ERK信号通路的调控作用。方法建立哮喘大鼠模型,原代分离培养ASMC,设未干预组(A组)、ERK阻断剂组(B组)、PDGF组(C组)和PDGF+ERK阻断剂组(D组)。A组不加干预;B组又分... 目的研究血小板源性生长因子(PDGF)对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中ERK信号通路的调控作用。方法建立哮喘大鼠模型,原代分离培养ASMC,设未干预组(A组)、ERK阻断剂组(B组)、PDGF组(C组)和PDGF+ERK阻断剂组(D组)。A组不加干预;B组又分为B1、B2、B3、B4组,分别加入浓度为0.1、1、5、10μmol/L的ERK阻断剂U0126;C组又分为C1、C2、C3、C4组,分别加入浓度为1、10、25、50μg/L的PDGF同二聚体PDGF-BB;D组加入10μmol/L的U0126和50μg/L的PDGF-BB。以RT-PCR法检测各组ERK1和TGF-β1的mRNA表达,免疫组化法检测A、B4、C4和D组中以上蛋白的表达。结果 RT-PCR提示B1、B2、B3、B4组ERK1 mRNA表达均显著低于A组(均P<0.01),U0126以浓度依赖的方式抑制PDGF诱导的ASMC中ERK的活化,C1、C2、C3、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组(均P<0.01),ERK1 mRNA的表达与PDGF-BB存在明显的浓度依赖关系,D组与A组比较无统计学差异(P>0.05)。免疫组化提示B4组ASMC中ERK1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组(均P<0.01),D组与A组相比无统计学差异(P>0.05);B4组TGF-β1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组,同时C4组显著高于B4组(均P<0.01),D组与A组相比无统计学差异(P>0.05)。结论 PDGF可剂量依赖性激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路,同时伴随TGF-β1信号通路的活化。ERK通路参与了ASMC增殖的细胞内信号转导过程,PDGF可能经ERK环节促进TGF-β1通路活化。 展开更多
关键词 哮喘 气道平滑肌细胞 细胞外调节激酶 气道重塑 转化生长因子-β1
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抗IgE单克隆抗体奥莫立迈在哮喘治疗中的应用
5
作者 卢虹蓓(综述) 张维溪(审校) 李昌崇(审校) 《国际儿科学杂志》 2009年第4期355-357,共3页
IgE介导的免疫反应在支气管哮喘（哮喘）的发病机制中起着重要作用。奥莫立迈是一种重组人抗IgE单克隆抗体，选择性地与人IgE结合，阻断IgE依赖的抗原呈递，最终减缓或阻止IgE介导的炎症反应，用于12岁以上中到重度持续性哮喘联合应用... IgE介导的免疫反应在支气管哮喘（哮喘）的发病机制中起着重要作用。奥莫立迈是一种重组人抗IgE单克隆抗体，选择性地与人IgE结合，阻断IgE依赖的抗原呈递，最终减缓或阻止IgE介导的炎症反应，用于12岁以上中到重度持续性哮喘联合应用吸入糖皮质激素加长效田受体激动剂效果不佳患者的治疗。临床试验表明，奥莫立迈能明显降低哮喘的恶化次数和严重程度，改善患者肺功能和提高生活质量。 展开更多
关键词 哮喘 免疫球蛋白E 抗体 单克隆
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