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氧化还原状态的改变控制手霉素诱导HL-60白血病细胞凋亡 被引量：7
1
作者 佘妙容 郭坤元 +2 位作者 牛新清 卢晓珣 涂三芳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期772-777,共6页
目的研究手霉素对HL-60白血病细胞的作用,探讨其作用机制,主要是线粒体的改变。方法使用人的白血病细胞株HL-60细胞。MTT细胞毒性测定评价对白血病细胞的作用,使用Annexin V和一氧化氮(nitric oxide,NO)染料标记细胞,应用流式细胞仪术... 目的研究手霉素对HL-60白血病细胞的作用,探讨其作用机制,主要是线粒体的改变。方法使用人的白血病细胞株HL-60细胞。MTT细胞毒性测定评价对白血病细胞的作用,使用Annexin V和一氧化氮(nitric oxide,NO)染料标记细胞,应用流式细胞仪术检测细胞内NO生成和细胞凋亡。细胞内超氧阴离子通过二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)测定。应用化学发光法测定超氧歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。采用荧光法测定谷胱甘肽(glutathi-one,GSH),萤光素-萤光素酶发光法测定ATP含量。免疫印迹技术检测细胞色素C和Mn-SOD的表达。结果手霉素引起HL-60细胞活性的下降,且呈剂量依赖性。手霉素诱导产生反应性氧基(reactive oxygen species,ROS):NO和超氧阴离子,降低GSH,但不影响SOD。手霉素诱导线粒体降低细胞ATP的含量,线粒体肿胀和细胞色素C从线粒体释放到细胞质。手霉素诱导的凋亡与ROS的增加有关。用N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)抑制ROS可保护HL-60细胞逃避手霉素的细胞毒作用和避免手霉素诱导的凋亡。结论细胞内ROS的产生对手霉素的细胞毒作用起非常重要的作用。手霉素通过包括上游ROS产生,线粒体形态改变和细胞色素C释放的线粒体途径,诱导白血病细胞凋亡。 展开更多
关键词 白血病 凋亡 手霉素 反应性氧基 一氧化氮 超氧 阴离子 线粒体 超氧歧化酶
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高、低表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的人鼻咽癌耐药细胞生物学特性差异研究 被引量：6
2
作者 黄宇贤 王杨 +1 位作者 卢晓珣 郭坤元 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期987-991,共5页
目的探讨高表达与低表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人多药耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞、ABCG2Low细胞)的生物学差异,分析两种细胞的耐药特点。方法分离ABCG2High和ABCG2Low细胞,检测其体外克隆... 目的探讨高表达与低表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人多药耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞、ABCG2Low细胞)的生物学差异,分析两种细胞的耐药特点。方法分离ABCG2High和ABCG2Low细胞,检测其体外克隆形成率并分析细胞周期。流式细胞术(FCM)检测两种细胞传代前及传至第5代时ABCG2阳性表达率的差异。RT-PCR检测耐药基因ABCG2、Bcl-2、MDR1、MRP、MGMT的mRNA表达差异。MTT法检测两种细胞在1～14d的吸光度,绘制生长曲线;检测两种细胞对氟尿嘧啶、顺铂、长春新碱、卡铂、表阿霉素、柔红霉素、紫杉醇、丝裂霉素等化疗药物耐药性的差异。结果ABCG2High和ABCG2Low细胞在7d内的克隆形成率分别为25.24%±1.18%和16.28%±1.11%。FCM分析显示,ABCG2High的S期细胞占41.5%,ABCG2Low的G1/M0期细胞占63.9%。FCM分离后,ABCG2的表达率在ABCG2High细胞为98%,在ABCG2Low细胞为2%;两种细胞传至第5代,ABCG2在前者的表达率降低为75%,在后者升高至20%。RT-PCR显示,ABCG2mRNA在ABCG2High细胞中的表达明显高于ABCG2Low细胞,其他耐药基因在两种细胞中的表达无差异。生长曲线显示,ABCG2High细胞早期生长速度较ABCG2Low细胞快,后期生长速度逐渐减慢。耐药谱分析表明,ABCG2High细胞对8种抗肿瘤药物的IC50值高于ABCG2Low细胞两倍以上,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论ABCG2High细胞是一种快周期细胞,而ABCG2Low细胞为慢周期细胞,前者更具有多药耐药的特点,可用于ABCG2介导的鼻咽癌细胞非经典多药耐药的研究。 展开更多
关键词 三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2 基因 MDR 鼻咽肿瘤
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三氧化二砷提高多发性骨髓瘤ARH-77细胞对NK细胞杀伤敏感性的研究 被引量：4
3
作者 孙明 胡亮杉 +4 位作者 周健 涂三芳 卢晓珣 牛新青 郭坤元 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期154-157,共4页
目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)前后人多发性骨髓瘤ARH-77对NK细胞杀伤细胞敏感性的变化,并初步探讨其机制。方法分别应用CCK-8法和台盼蓝染色法测算ATO对ARH-77细胞株的50%抑制量(IC50)和细胞活性;乳酸脱氢酶释放法检测ATO... 目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)前后人多发性骨髓瘤ARH-77对NK细胞杀伤细胞敏感性的变化,并初步探讨其机制。方法分别应用CCK-8法和台盼蓝染色法测算ATO对ARH-77细胞株的50%抑制量(IC50)和细胞活性;乳酸脱氢酶释放法检测ATO作用前后ARH-77细胞对NK细胞的杀伤敏感性。流式细胞仪检测ARH-77细胞表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)和HLA-Ⅰ类分子表达以及ATO作用前后的细胞周期变化。结果ATO对ARH-77细胞的IC50为5.0μmol/L。NK细胞杀伤ATO作用前后ARH-77细胞的活性有显著差异(P<0.05)。ATO作用后,ARH-77细胞发生G1/S期阻滞,同时其表面MICA/B、ULBP1、ULBP3表达显著升高,二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。ULBP2和HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P>0.05)。结论ATO能提高ARH-77细胞NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP3)表达;从而使其对NK细胞的杀伤敏感性增强。 展开更多
关键词 三氧化二砷 多发性骨髓瘤 NK细胞 NKG2D配体
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光动力治疗药物5-氨基乙酰丙酸及其己脂的相关研究进展 被引量：3
4
作者 卢晓珣 郭坤元 《实用医学杂志》 CAS 2008年第12期2035-2037,共3页
光动力治疗（photodynamic therapy，PDT）是近30年发展起来的一种疾病治疗新方法，在临床各种疾病特别是肿瘤的治疗中已取得了令人瞩目的成就。其原理为光敏剂与病变细胞和组织选择性结合后，在特定波长、特定功率光源的照射下产生细... 光动力治疗（photodynamic therapy，PDT）是近30年发展起来的一种疾病治疗新方法，在临床各种疾病特别是肿瘤的治疗中已取得了令人瞩目的成就。其原理为光敏剂与病变细胞和组织选择性结合后，在特定波长、特定功率光源的照射下产生细胞毒性作用，从而起到杀灭病变细胞和组织的作用。PDT的三要素是光源、氧、光敏剂，其中光敏剂的选择是直接决定光动力疗效的关键。 展开更多
关键词 光动力治疗药物 5-氨基乙酰丙酸 相关研究进展 组织选择性 细胞毒性作用 疾病治疗 病变细胞 光敏剂
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白藜芦醇提高CD34^＋CD38^-KG1a白血病细胞对人外周血单个核细胞的杀伤敏感性 被引量：3
5
作者 贾振薇 郭坤元 +4 位作者 孙明 王国征 卢晓珣 佘妙容 涂三芳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期622-625,共4页
目的:研究白藜芦醇(Resveratrol)作用前后CD34+CD38-KG1a白血病细胞对IL-15介导的人外周血单个核细胞(PBMC)杀伤敏感性的变化及机制的初步探讨。方法:应用CCK-8法检测白藜芦醇对白血病细胞的IC50值,以此量的白藜芦醇作用于白血病细胞.,... 目的:研究白藜芦醇(Resveratrol)作用前后CD34+CD38-KG1a白血病细胞对IL-15介导的人外周血单个核细胞(PBMC)杀伤敏感性的变化及机制的初步探讨。方法:应用CCK-8法检测白藜芦醇对白血病细胞的IC50值,以此量的白藜芦醇作用于白血病细胞.,并用LDH释放法检测白藜芦醇作用前后,效靶比分别为5∶1、10∶1、20∶1的IL-15介导的PBMC对CD34+CD38-KG1a细胞杀伤能力。流式细胞仪(FACS)检测IL-15介导前后PBMC表面NKG2D的表达。流式细胞仪(FACS)检测作用前后CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达。结果:白藜芦醇作用前后在不同效靶比时对IL-15介导的PBMC杀伤敏感性差异有统计学意义(P<0.05)。IL-15介导PBMC前后表面NKG2D的表达有显著变化,差异有统计学意义。白藜芦醇作用前后CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D各配体中MICA、MICB无显著变化(P>0.05),ULBP1、ULBP2、ULBP3有显著变化,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:白藜芦醇可以提高CD34+CD38-KG1a细胞对IL-15介导PBMC的杀伤敏感性,其机制可能与白藜芦醇提高CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关。 展开更多
关键词 白藜芦醇 CD34+CD38-KG1a 白血病 NKG2D配体
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甲氧胺联合手霉素对白血病U937细胞凋亡的影响 被引量：2
6
作者 佘妙容 郭坤元 +1 位作者 牛新清 卢晓珣 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第8期835-839,共5页
背景与目的:DNA损伤修复对细胞生存很重要。我们既往的研究发现手霉素可诱导肿瘤细胞出现DNA损害反应。因此,碱基切除修复抑制剂甲氧胺(methoxyamine)有可能增强手霉素(manumycin)的抗肿瘤作用。为此,本实验研究甲氧胺对手霉素诱导白血... 背景与目的:DNA损伤修复对细胞生存很重要。我们既往的研究发现手霉素可诱导肿瘤细胞出现DNA损害反应。因此,碱基切除修复抑制剂甲氧胺(methoxyamine)有可能增强手霉素(manumycin)的抗肿瘤作用。为此,本实验研究甲氧胺对手霉素诱导白血病细胞凋亡的影响,探讨联合甲氧胺和手霉素诱导白血病细胞凋亡过程中线粒体凋亡途径的变化。方法:不同浓度手霉素和甲氧胺处理U937细胞48h后,MTT细胞毒性测定U937细胞存活率,软琼脂法检测细胞的克隆形成。应用流式细胞术检测细胞凋亡。免疫印迹技术检测细胞色素C、Caspase-9、聚腺苷核糖聚合酶(poly-adenosyl ribose polymerase,PARP)的表达。中位效应方法评价两药的相互作用。结果:甲氧胺使手霉素的剂量反应曲线向左边移动,结合指数(CI)<1(P<0.05)。1μmol/L手霉素、5mmol/L甲氧胺和联合两药处理U937细胞,相对于对照组的克隆形成分别是0.3641±0.0463,0.7541±0.0379,0.0473±0.0024(联合用药组与对照组、手霉素组或甲氧胺组相比,P<0.05);进一步发现,联合两药协同诱导细胞凋亡,引起Annexin V荧光值增加,阳性细胞增加,分别是(2.34±0.30)%、(8.80±0.95)%、(2.21±0.19)%、(13.37±0.91)%,联合用药组与对照组、手霉素组或甲氧胺组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。联合甲氧胺和手霉素增强细胞色素C从线粒体释放到细胞浆,Caspase-9激活,PARP特异性裂解。结论:甲氧胺增强手霉素通过线粒体凋亡途径诱导U937细胞凋亡,提示甲氧胺联合FTIs和DNA修复抑制剂治疗白血病的可能性。 展开更多
关键词 白血病 法尼基转移酶抑制剂 甲氧胺 手霉素 碱基切除修复抑制剂 U937细胞 凋亡
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激光激发5-氨基乙酰丙酸己酯对人红白血病耐药/非耐药细胞株的杀伤效应研究 被引量：1
7
作者 卢晓珣 郭坤元 +5 位作者 李黎波 周健 胡海燕 周晓平 涂三芳 孙明 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期151-154,共4页
目的探讨5-氨基乙酰丙酸己酯-光动力疗法(He-ALA-PDT)对人红白血病细胞株K562及其耐阿霉素细胞株K562/ADM的杀伤效应。方法实验设4组:PDT组(加光敏剂并接受光照)、激光组(不加光敏剂只接受光照)、暗毒性组(只加光敏剂而不接受光照)、正... 目的探讨5-氨基乙酰丙酸己酯-光动力疗法(He-ALA-PDT)对人红白血病细胞株K562及其耐阿霉素细胞株K562/ADM的杀伤效应。方法实验设4组:PDT组(加光敏剂并接受光照)、激光组(不加光敏剂只接受光照)、暗毒性组(只加光敏剂而不接受光照)、正常对照组(不加光敏剂且不接受光照)。用不同浓度(0.025、0.1、0.4、1.6mmol/L)的He-ALA避光孵育细胞,给予不同功率密度(4.5、9、18、36J/cm2)的630nm波长激光照射后,继续培养12h,观察细胞形态学变化,以CCK8法测定细胞存活率,采用甲基纤维素培养体系分析白血病细胞克隆形成能力的变化。结果暗毒性组、激光组均未对细胞产生明显杀伤作用,而PDT组能明显杀伤白血病细胞,且细胞存活率随He-ALA浓度和激光功率密度的增加而降低,且在相同条件下,K562细胞的存活率显著低于K562/ADM细胞(P<0.05)。PDT组的集落形成率明显低于正常对照组(P<0.001),且与K562/ADM细胞相比,K562细胞的集落形成率降低程度更为显著(P<0.001)。结论He-ALA-PDT可杀伤K562、K562/ADM细胞,并显著降低白血病细胞的克隆形成能力;K562/ADM细胞对PDT的反应不如K562细胞敏感。 展开更多
关键词 光动力疗法 5-氨基乙酰丙酸己酯 抗药性 肿瘤 白血病 幼红细胞 急性
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TJU103体外诱导造血干细胞移植的免疫耐受
8
作者 周健 涂三芳 +5 位作者 郭坤元 孙明 胡亮杉 吴远彬 卢晓珣 王杨 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第16期3049-3052,共4页
目的:前期研究表明,吲哚亚甲基异烟腙(简称TJU103)可以明显降低异基因造血干细胞移植小鼠移植物抗宿主病的发生率和程度,明显延长小鼠移植后的生存期。实验拟观察TJU103诱导造血干细胞移植免疫耐受和对移植物抗白血病的影响,探索一条既... 目的:前期研究表明,吲哚亚甲基异烟腙(简称TJU103)可以明显降低异基因造血干细胞移植小鼠移植物抗宿主病的发生率和程度,明显延长小鼠移植后的生存期。实验拟观察TJU103诱导造血干细胞移植免疫耐受和对移植物抗白血病的影响,探索一条既能降低移植物抗宿主病又能保留移植物抗白血病的移植途径。方法:实验于2007-07/10在南方医科大学珠江医院血液科实验室完成。①实验材料:人急性髓系白血病细胞株KG1a由中国医学科学院血液学研究所宋增璇教授惠赠。10份自愿捐献的健康人外周血白细胞由广州市中心血站提供,等分为供者与受者。②实验方法:采用梯度密度沉淀法常规分离人外周血单个核细胞。以供者外周血单个核细胞作为反应细胞,受者正常外周血单个核细胞作为刺激细胞,体外建立异基因造血干细胞移植中供、受者间的单向混合淋巴细胞反应体系,应用TJU103阻断CD4+T细胞激活的抗原信号通路,设单独刺激细胞和反应细胞对照以及1640完全培养基空白对照。③实验评估:于培养第1、3、5天应用MTT检测TJU103对供者淋巴细胞的增殖活性的影响,于第5天用乳酸脱氢酶释放法分别检测10∶1,20∶1,40∶1效靶比时供者淋巴细胞对受者单个核细胞和急性髓系白血病细胞KG1a的细胞毒活性影响,同时采用流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞的百分比。结果:第3天和第5天实验组A值低于对照组(P<0.05)。单向混合淋巴细胞5d后实验组各效靶比供者T细胞杀伤受者外周血单个核细胞的活性明显低于对照孔(P<0.05);二者对KG1a细胞的杀伤活性差异不显著(P>0.05)。TJU103对供者CD4+CD25+T细胞无影响。结论:TJU103降低T淋巴细胞增殖反应的同时并不影响其抗白血病效应,有望用于临床异基因造血干细胞移植中移植物抗宿主病和移植物抗白血病的免疫调节。 展开更多
关键词 干细胞移植 TJU103 T淋巴细胞增殖 细胞毒活性 移植物抗宿主病 移植物抗白血病 免疫耐受
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