实时荧光定量PCR在病毒检测中的应用 被引量：27

1

作者 高鑫 朱武洋 卢学新 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期660-667,共8页

实时荧光定量PCR是通过荧光信号监测目的基因扩增数量的定量PCR技术,具有灵敏度高,检测速度快等优点。实时荧光定量PCR已被应用于乙肝病毒、登革热病毒、流感病毒、水疱口炎病毒等病毒的快速检测,在病毒快速分型、相似病毒的鉴别检测、... 实时荧光定量PCR是通过荧光信号监测目的基因扩增数量的定量PCR技术,具有灵敏度高,检测速度快等优点。实时荧光定量PCR已被应用于乙肝病毒、登革热病毒、流感病毒、水疱口炎病毒等病毒的快速检测,在病毒快速分型、相似病毒的鉴别检测、耐药病毒突变体检测等临床和公共卫生领域得到广泛应用。狂犬病是危害严重的人兽共患病,病死率几乎为100%。实时荧光定量PCR技术已被应用于狂犬病病毒和狂犬病相关病毒的核酸检测,具有与金标准DFA相当的灵敏度和特异度,同时克服了金标准DFA的某些局限性,如检测速度更快,无需提取脑组织,对唾液、脑脊液等低病毒载量样本具有较好的检出效果,具有成为人间狂犬病诊断技术的潜力。灵敏度是传统RT-PCR的200倍以上,交叉污染的风险更低。实时荧光定量PCR也应用于欧洲蝙蝠病毒等狂犬病相关病毒的检测,可建立多重实时荧光定量PCR在单一检测体系对多种病毒进行快速鉴别,对于预防病毒性传染病具有重要的公共卫生意义。本文详细介绍了该技术的相关原理和方法,以及在病毒检测方面的国内外研究进展。 展开更多

关键词 实时荧光定量PCR 核酸 狂犬病病毒 狂犬病病毒属

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不同温度、时间、IPTG和菌种浓度对丁肝抗原蛋白表达量的影响 被引量：11

2

作者 丁军颖 伊瑶 +4 位作者 卢学新 苏秋东 田瑞光 邱丰 毕胜利 《医学研究杂志》 2012年第5期31-34,共4页

目的确定以大肠杆菌表达丁肝抗原的最佳条件,为规模生产以求研发丁肝ELISA诊断试剂奠定基础。方法在不同温度、时间、IPTG和菌种浓度条件下,分别进行蛋白表达,取等体积样本进行SDS-PAGE电泳,经Image Lab软件分析,比较目的蛋白表达量,确... 目的确定以大肠杆菌表达丁肝抗原的最佳条件,为规模生产以求研发丁肝ELISA诊断试剂奠定基础。方法在不同温度、时间、IPTG和菌种浓度条件下,分别进行蛋白表达,取等体积样本进行SDS-PAGE电泳,经Image Lab软件分析,比较目的蛋白表达量,确定最佳表达条件。结果在25℃、29℃、33℃和37℃条件下,蛋白表达量无统计意义的差别;在添加IPTG后的1、2、3、4、5和6h,表达量无统计意义的差别;在以0.25、0.5、1、2和4mmol/L IPTG诱导时,表达量无统计意义的差别。当添加诱导剂前,菌种的OD600值分别为1.236、0.772、0.542和0.384,目的蛋白表达量有显著意义的差别。以OD600值为1.236和0.772时,表达量最高,两者之间无统计意义的差别;OD600值为0.542时,表达量次之;OD600值为0.384时,表达量最低。结论温度、表达时间和IPTG浓度在一定范围内对丁肝抗原蛋白表达量无影响;菌种的浓度是影响蛋白表达量的决定性因素;当菌种浓度在OD600值约为0.7～1.2时,以0.25mmol/L IPTG在37℃,诱导表达1h为最佳表达条件。该条件下,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的41.5%。 展开更多

关键词 丁肝 基因工程 抗原 表达

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RFFIT、FAVN、ELISA及狂犬病中和抗体检测试剂盒对狂犬病抗体检测的比较研究 被引量：7

3

作者 于鹏程 由淑珍 +4 位作者 卢学新 陶晓燕 刘淑清 纪军 朱武洋 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期265-268,共4页

为了比较RFFIT、FAVN、ELISA及狂犬病中和抗体检测试剂盒(RVNA Kit)等四种方法对狂犬病抗体的检测效果,对65份狂犬病疫苗免疫前、免疫后临床血清样本,分别使用RFFIT、FAVN、ELISA及RVNA Kit方法对狂犬病病毒特异性抗体进行测定,并对检... 为了比较RFFIT、FAVN、ELISA及狂犬病中和抗体检测试剂盒(RVNA Kit)等四种方法对狂犬病抗体的检测效果,对65份狂犬病疫苗免疫前、免疫后临床血清样本,分别使用RFFIT、FAVN、ELISA及RVNA Kit方法对狂犬病病毒特异性抗体进行测定,并对检测结果的阳性符合率、相关性及重复性进行分析。检测结果显示,RFFIT、FAVN及RVNA kit的阳性符合率为100%,三种方法与ELISA试剂盒的阳性符合率为95.38%,对0.5IU/mL^10IU/mL的血清样本进行阳性符合率分析显示,四种方法的阳性符合率为100%;相关性研究结果表明,RFFIT、FAVN及RVNA Kit之间任意两种方法检测结果的相关系数均超过0.97,但ELISA与其他三种方法检测结果的相关系数均低于0.86;同一份样品的重复性检验结果显示,RVNA Kit和ELISA比RFFIT和FAVN具有更好的重复性,而RVNA Kit的重复性最好,其变异系数仅6%。研究结果表明,RFFIT、FAVN及RVNA Kit等三种方法可通用于血清中抗狂犬病病毒中和抗体的检测,而ELISA检测结果与中和抗体效价有一定差距,但在经过优化、校验后ELISA也可以在有效范围内用于狂犬病抗体的检测。 展开更多

关键词 RVNA KIT RFFIT ELISA FAVN

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狂犬病病毒体外生存活力研究 被引量：2

4

作者 张冉昕 刘铮然 +1 位作者 卢学新 朱武洋 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期203-208,共6页

目的了解狂犬病病毒在体外组织和体液样本中的生存能力。方法通过病毒滴度测定、直接免疫荧光、RT-PCR和病毒分离实验室技术手段对体外组织和悬液中狂犬病病毒生存活力进行验证。结果随着温度升高,脑组织和悬液中狂犬病病毒活力逐渐下降... 目的了解狂犬病病毒在体外组织和体液样本中的生存能力。方法通过病毒滴度测定、直接免疫荧光、RT-PCR和病毒分离实验室技术手段对体外组织和悬液中狂犬病病毒生存活力进行验证。结果随着温度升高,脑组织和悬液中狂犬病病毒活力逐渐下降,在56℃,30 min后病毒即失去感染力,在37℃时,组织中病毒活力可保持7 d;在pH9.6时,1 h后无法检测病毒活力;终浓度30%以上乙醇,500 mg/L以上次氯酸钠和100 mg/L以上苯扎溴铵对悬液中狂犬病病毒作用3 min后即可完全灭活;80%丙酮对组织中狂犬病病毒灭活作用最强,在浸泡4 h后样本即无法进行病毒分离。结论狂犬病病毒不耐高温,在pH6.8~7.4环境中较为稳定,常用消毒剂即可对病毒发挥作用;本实验旨在为狂犬病病毒的体外生存活力提供详细数据,为下一步狂犬病防控工作开展提供理论支持。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 生存活力 消毒剂 病毒分离

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狂犬病病毒TaqMan qRT-PCR检测方法的建立 被引量：5

5

作者 高鑫 刘佳佳 +2 位作者 宋云 卢学新 朱武洋 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期504-506,508-511,共8页

建立狂犬病病毒TaqMan qRT-PCR检测方法,并进行评价和初步应用。针对狂犬病病毒L基因保守区域设计特异性引物、探针,建立PCR反应体系并评价检测体系的扩增效率、灵敏度、特异性和准确性等指标,灵敏度评价结果与现有巢式RT-PCR和基于N基... 建立狂犬病病毒TaqMan qRT-PCR检测方法,并进行评价和初步应用。针对狂犬病病毒L基因保守区域设计特异性引物、探针,建立PCR反应体系并评价检测体系的扩增效率、灵敏度、特异性和准确性等指标,灵敏度评价结果与现有巢式RT-PCR和基于N基因qRT-PCR检测方法相比较。结果显示本研究建立的基于L基因qRTPCR检测体系扩增效率高于90%;最小检测病毒滴度为2.7×10-3FFU/mL,灵敏度高于基于N基因qRT-PCR和巢式RT-PCR 100倍;最小检测核酸拷贝数为100拷贝,建立了基于目的基因RNA标准品的标准曲线,可用于定量检测;对于我国的狂犬病病毒流行毒株检测范围较广,动物样本检测结果与金标准DFA检测结果相一致,准确性较高。本研究建立的狂犬病病毒qRT-PCR可用于狂犬病病毒实验室检测。 展开更多

关键词 狂犬病(Rabies) 狂犬病病毒(RABV) 实时荧光定量PCR

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自发生物素化风疹病毒重组诊断抗原的制备 被引量：4

6

作者 苏秋东 郭敏卓 +7 位作者 邱丰 贾志远 卢学新 孟庆玲 田瑞光 高燕 毕胜利 伊瑶 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2016年第2期236-240,共5页

目的 获取原核表达过程中自发生物素化的风疹病毒（Rubella Virus,RV）重组抗原E1（RV-E1）,并初步评价其抗原性.方法 将2×BirA酶底物（BSP）插入到RV-E1抗原优势表位区域aa 148-295的羧基端,硫氧还蛋白（Thioredoxin,TRX）插入到R... 目的 获取原核表达过程中自发生物素化的风疹病毒（Rubella Virus,RV）重组抗原E1（RV-E1）,并初步评价其抗原性.方法 将2×BirA酶底物（BSP）插入到RV-E1抗原优势表位区域aa 148-295的羧基端,硫氧还蛋白（Thioredoxin,TRX）插入到RV-E1的氨基端,密码子优化后全基因合成;在大肠埃希进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化获取生物素化的RV-E1抗原;利用Western Blotting技术对目的蛋白进行鉴定,并建立风疹病毒IgM抗体检测方法,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力.结果 获取高度均质的生物素化的可溶性RV-E1抗原,WB实验表明目的蛋白不但可以被RV-E1抗原和TRX抗原单克隆抗体识别,而且可以被标记HRP的链霉亲和素所识别.分别对50份风疹病毒感染阳性血清、阴性血清和健康人血清进行检测,发现一致性优异.结论 RV-E1诊断抗原携带BSP,可以在大肠埃希菌表达过程中自发共价结合生物素分子,并可以作为新型诊断抗原应用于生物素-亲和素ELISA血清学检测中. 展开更多

关键词 BirA酶底物 风疹病毒E1抗原 原核表达 生物素化抗原

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风疹病毒多表位诊断抗原的制备与评价 被引量：4

7

作者 苏秋东 郭敏卓 +6 位作者 邱丰 贾志远 卢学新 孟庆玲 田瑞光 毕胜利 伊瑶 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期249-255,共7页

原核表达与层析纯化获取风疹病毒（Rubella Virus,RV）多表位诊断抗原,并初步评价其抗原性。将RV衣壳蛋白C aa 3～29、aa 96～123以及包膜糖蛋白E1aa208～247三个主要免疫显性表位串联,密码子优化后全基因合成;利用基因重组技术将多表... 原核表达与层析纯化获取风疹病毒（Rubella Virus,RV）多表位诊断抗原,并初步评价其抗原性。将RV衣壳蛋白C aa 3～29、aa 96～123以及包膜糖蛋白E1aa208～247三个主要免疫显性表位串联,密码子优化后全基因合成;利用基因重组技术将多表位串联片段插入带有GST标签的表达质粒中,在大肠杆菌中进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western Blot（WB）技术对目的蛋白抗原性进行鉴定,并建立RV-IgM抗体检测ELISA技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。获取高度均质的RV多表位诊断抗原,WB实验表明目的蛋白不但可以被anti-GST单克隆抗体识别,还可以被anti-RV多克隆抗体、RV-IgM阳性血清相应抗体所识别。分别对48份RV急性感染病例的阳性血清、阴性血清和健康人血清进行检测,发现一致性优异。原核表达与层析纯化可以获取抗原性良好的RV多表位诊断抗原,偶联HRP后可以作为检测抗原应用于RV-IgM ELISA血清学检测中。 展开更多

关键词 多表位抗原 风疹病毒 原核表达 层析纯化 GST标签

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CpG寡聚脱氧核苷酸佐剂对狂犬病疫苗免疫效果的影响 被引量：3

8

作者 闫江泓 于鹏程 +5 位作者 陶晓燕 刘淑清 吴未辰 卢学新 李淑英 朱武洋 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第6期566-570,共5页

目的探讨CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对狂犬病疫苗(rabies vaccine,RV)免疫效果的影响。方法以市售狂犬病疫苗为抗原,分别以低、中、高剂量的CpG ODN(1.25、5、20μg/剂)及其与氢氧化铝[(Al(OH)_3]联合的复... 目的探讨CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对狂犬病疫苗(rabies vaccine,RV)免疫效果的影响。方法以市售狂犬病疫苗为抗原,分别以低、中、高剂量的CpG ODN(1.25、5、20μg/剂)及其与氢氧化铝[(Al(OH)_3]联合的复合物作为疫苗佐剂,按Essen程序经腿部肌肉免疫BALB/c小鼠。免疫前2 d及首次免疫后分别于第6、8、10、14、35和42天采血,分离血清,通过快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测血清中抗狂犬病病毒中和抗体效价;并经ELISPOT法分析首次免疫第6和14天小鼠脾细胞分泌IFNγ的情况。结果低、中剂量的CpG ODN及其与Al(OH)_3联合使用均可使小鼠在首次免疫后第8天产生具有保护水平的中和抗体,第10天阳转率均达100%;在首次免疫后第35及42天,小鼠产生抗狂犬病病毒中和抗体水平均明显升高(P<0.05);在首次免疫后第6及14天,低、中剂量的CpG ODN可明显提高小鼠脾细胞的IFNγ分泌水平(P<0.05)。结论 CpG ODN对RV具有免疫增效作用,可能成为一种新型的RV佐剂。 展开更多

关键词 CPG寡聚脱氧核苷酸 佐剂 狂犬病疫苗 体液免疫 细胞免疫

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广东省佛山市乙型肝炎患者伴随丁型肝炎感染的现状调查 被引量：2

9

作者 李炜煊 丁军颖 +6 位作者 卢学新 苏秋东 伊瑶 贾志远 田瑞光 邱丰 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期382-383,共2页

目的了解广东省佛山市的丁型肝炎（丁肝）感染现状，为全国的丁肝流行病学调查工作奠定基础。方法搜集广东省佛山市第一人民医院2011年的乙型肝炎（乙肝）阳性血清，以不同公司的丁肝酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent as... 目的了解广东省佛山市的丁型肝炎（丁肝）感染现状，为全国的丁肝流行病学调查工作奠定基础。方法搜集广东省佛山市第一人民医院2011年的乙型肝炎（乙肝）阳性血清，以不同公司的丁肝酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）诊断试剂平行检测；进一步以反转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT—PCR）方法辅证。结果两种ELISA丁肝诊断试剂检测结果一致，8例阳性；经RT-PCR进一步验证，结果正确。结论广东省佛山市丁肝病毒感染率高于全国平均水平，无性别统计学差异，且感染人群偏于高年龄组。 展开更多

关键词 δ肝炎病毒 感染 流行病学研究

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浙江省1株犬源狂犬病病毒全基因组序列测定及细胞分离鉴定 被引量：1

10

作者 张冉昕 马岩 +4 位作者 赵中飞 任江萍 凌锋 卢学新 朱武洋 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期849-853,共5页

目的了解浙江地区狂犬病分子流行病学现状,为浙江地区狂犬病防控提供相关数据。方法使用RT-PCR扩增浙江狂犬病病毒街毒株核苷酸并进行全基因组序列测定,与32株中国狂犬病病毒街毒株基因序列进行比对分析;使用Neuro-2a细胞进行病毒分离,... 目的了解浙江地区狂犬病分子流行病学现状,为浙江地区狂犬病防控提供相关数据。方法使用RT-PCR扩增浙江狂犬病病毒街毒株核苷酸并进行全基因组序列测定,与32株中国狂犬病病毒街毒株基因序列进行比对分析;使用Neuro-2a细胞进行病毒分离,测定不同代次全基因组序列并比较核苷酸突变情况。结果获得了全长为11782 bp的全基因组序列,经过比对分析后发现该毒株属于ChinaⅠ型,与全部参考基因Ⅰ型病毒核苷酸序列一致性为97.10%~99.31%;通过Neuro-2a细胞成功分离到狂犬病病毒,连续三代培养后病毒滴度最终达到5.71×10^(7)FFU/mL,子代之间序列一致性在99.9%以上,其中F3代较F1代核苷酸序列发生了7个位点突变,氨基酸未发生改变。结论新狂犬病病毒分离毒株(ZJSX-2021)属于ChinaⅠ型,与以往分离毒株属同一基因型,表明狂犬病病毒近年在浙江地区仍持续传播。细胞分离后病毒序列并无明显变化。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 全基因组 序列分析 细胞培养

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融合穿梭肽的狂犬病单链抗体在大肠杆菌中的重组表达及中和活性分析 被引量：1

11

作者 谢嵩 于宗琴 +1 位作者 赵文瑞 卢学新 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2021年第2期172-175,共4页

目的融合穿梭肽和狂犬病单链抗体,优化在大肠杆菌中的表达条件,获得具有中和活性的重组穿梭肽-单链抗体。方法重新编码SO57抗体序列,在N端融合Arg12的穿梭肽,构建pET22(b)-rSO57表达载体,在大肠杆菌中重组表达。在菌体生长密度OD600、... 目的融合穿梭肽和狂犬病单链抗体,优化在大肠杆菌中的表达条件,获得具有中和活性的重组穿梭肽-单链抗体。方法重新编码SO57抗体序列,在N端融合Arg12的穿梭肽,构建pET22(b)-rSO57表达载体,在大肠杆菌中重组表达。在菌体生长密度OD600、诱导时间、诱导温度和诱导剂浓度条件进行优化,获得较高的表达效果。使用固定化金属螯合层析对重组蛋白进行纯化,测定了重组单链抗体的相对亲和力,通过rSO57/CVS-11混合感染细胞和快速荧光灶抑制实验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT),验证重组单链抗体的中和作用。结果 rSO57构建成功,在BL21(de3)中诱导表达,最优表达条件为菌体密度OD600在0.8时,使用0.4 mmol/ml的IPTG诱导,16 ℃下诱导24 h,rSO57以可溶形式表达,表达量占到了菌体可溶性蛋白的19.8%。层析纯化后,获得了纯度为84%的重组rSO57。ELISA实验显示,rSO57的相对亲和力系数Ka=4.3×105。当rSO57与CVS-11混合时,随着稀释的增加,细胞的感染率上升,表明重组抗体具有中和狂犬病病毒的能力。使用RFFIT进行测定,50 μg的rSO57相当于2.17IU的狂犬病中和血清。结论本实验重组表达了融合穿梭肽的重组单链抗体rSO57,且可以中和狂犬病病毒,以期制备可以用于狂犬病治疗的特异性和靶向性的抗病毒药物载体。 展开更多

关键词 单链抗体 中和抗体 狂犬病 穿梭肽

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丁型肝炎的分子生物学特征及研究进展 被引量：1

12

作者 卢学新 伊瑶 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2013年第3期236-238,共3页

HDV是已知的最小动物病毒,具有很多独特的生物学特征.了解其生物学特性是进行诊断,防控和治疗的基础.HDV的研究也为其他病毒的研究提供了材料和支持.本研究就HDV的生物学特征和研究进展进行论述. 1 病毒学特征 HDV颗粒呈球形,直径在35 ... HDV是已知的最小动物病毒,具有很多独特的生物学特征.了解其生物学特性是进行诊断,防控和治疗的基础.HDV的研究也为其他病毒的研究提供了材料和支持.本研究就HDV的生物学特征和研究进展进行论述. 1 病毒学特征 HDV颗粒呈球形,直径在35 ～ 37 nm,在氯化铯中的浮力密度为1.25g/cm3.外面被HBV的表面抗原包被,L、M、S三种蛋白的比约为95：4：1,与乙肝病毒的Dana颗粒不同,与22 nm的杆状颗粒相似.[1] 展开更多

关键词 分子生物学特征 丁型肝炎 动物病毒 生物学特性 病毒学特征 HDV 表面抗原 乙肝病毒

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两种嵌合乙型肝炎病毒preSl中和表位的乙肝核心病毒样颗粒的制备与抗原性分析 被引量：1

13

作者 苏秋东 郭敏卓 +5 位作者 伊瑶 陈斯勇 贾志远 卢学新 邱丰 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2013年第5期336-339,共4页

目的构建嵌合preSl2147位氨基酸（aa）、以全长乙肝病毒（HBV）核心抗原（HBcAg）为骨架的病毒样颗粒H2和嵌合preSlaa37-45、以截断HBcAg为骨架的病毒样颗粒H3，并对比其抗原性。方法将HBVadr血清型preSl中和表位aa2147和aa37-45分别插... 目的构建嵌合preSl2147位氨基酸（aa）、以全长乙肝病毒（HBV）核心抗原（HBcAg）为骨架的病毒样颗粒H2和嵌合preSlaa37-45、以截断HBcAg为骨架的病毒样颗粒H3，并对比其抗原性。方法将HBVadr血清型preSl中和表位aa2147和aa37-45分别插入到全长HBc（aa1—183）和截断HBc（8a1—144）的第78位天冬氨酸和第79位脯氨酸之间，密码子优化之后全基因合成，目的片段经双酶切（NdeI和XhoI）回收后连接到同样处理的pET43．1a载体上，在大肠埃希菌E．coliBL21（DE3）中表达，精细纯化后通过电镜观察蛋白形态、ELISA以及WesternBlott检测其抗原性。结果成功构建表达质粒H2和H3，并在BL21（DE3）中高效表达和自发组装成病毒样颗粒。纯化后电镜观察H2和H3形态为二十面体立体对称样病毒样颗粒，H2为实心颗粒，直径为（31．61±1．27）nm，H3为空心颗粒，直径为（28．46±1．16）nm。统计分析可得H2直径要比H3直径大（P〈0．01）。ELISA和WesternBlott检测结果证实其插入表位preSl以及载体蛋白HBc的抗原性。结论成功获得两种嵌合HBVpreSl中和表位的病毒样颗粒，为其在疫苗研究中的应用探索奠定基础。 展开更多

关键词 肝炎病毒 乙型 表位 病毒核心蛋白质类 病毒样颗粒

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肥皂水对狂犬病病毒灭活作用的研究 被引量：1

14

作者 刘淑清 王茜 +6 位作者 李艳荣 陶晓燕 于鹏程 卢学新 吴未辰 闫江弘 朱武洋 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2017年第3期227-231,共5页

目的 为考察肥皂水对狂犬病病毒的灭活作用,探讨狂犬病暴露后处置中冲洗伤口推荐使用肥皂水的浓度.方法 用不同浓度肥皂水与狂犬病病毒CVS-11混合作用后,分别感染BSR和N2a细胞,通过直接免疫荧光（DFA）和逆转录PCR（RT-PCR）的方法检测... 目的 为考察肥皂水对狂犬病病毒的灭活作用,探讨狂犬病暴露后处置中冲洗伤口推荐使用肥皂水的浓度.方法 用不同浓度肥皂水与狂犬病病毒CVS-11混合作用后,分别感染BSR和N2a细胞,通过直接免疫荧光（DFA）和逆转录PCR（RT-PCR）的方法检测不同浓度肥皂水对狂犬病病毒的灭活效力.结果 在24孔板培养细胞为基础的模型中,确定了BSR和N2a细胞所能承受的肥皂水浓度上限为1.0％;不同浓度肥皂水对狂犬病病毒的灭活试验结果显示,终浓度为0.5％的肥皂水作用BSR或N2a细胞3 min后可完全灭活狂犬病病毒,使其丧失感染细胞的能力,而浓度为0.1％的肥皂水不能完全抑制狂犬病病毒的存活.结论 使用浓度为0.5％～1.0％的肥皂水与狂犬病病毒CVS-11混合作用3 min后能使其完全灭活. 展开更多

关键词 狂犬病病毒 肥皂水 灭活作用

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白藜芦醇对狂犬病病毒体外抑制作用研究

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作者 刘茜 何晴 +5 位作者 陶晓燕 于鹏程 刘淑清 卢学新 杨丽芬 朱武洋 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期472-477,共6页

目的探讨白藜芦醇对狂犬病病毒的体外抑制作用。方法以狂犬病病毒动物攻毒标准株CVS-11为模式病毒,针对狂犬病病毒感染周期,建立白藜芦醇处理下的CVS-11和BHK-21细胞组成的感染模型,通过直接免疫荧光、细胞荧光灶转化等方法检测白藜芦... 目的探讨白藜芦醇对狂犬病病毒的体外抑制作用。方法以狂犬病病毒动物攻毒标准株CVS-11为模式病毒,针对狂犬病病毒感染周期,建立白藜芦醇处理下的CVS-11和BHK-21细胞组成的感染模型,通过直接免疫荧光、细胞荧光灶转化等方法检测白藜芦醇对狂犬病病毒的抑制作用。结果在不影响细胞生长的条件下,随着浓度的增加,白藜芦醇可阻滞病毒的吸附、干扰病毒进入细胞并抑制病毒的增殖,抑制率最高可达约95%。另外,白藜芦醇与病毒共孵育的结果显示,40μmol/L的白藜芦醇可直接杀灭病毒。结论白藜芦醇具有抑制狂犬病病毒活力的作用,且这种抑制效应具有剂量依赖性。 展开更多

关键词 CVS-11 白藜芦醇 病毒抑制效应

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中国狂犬病疫苗株CTN-1、PV-2061全基因组序列分析 被引量：1

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作者 卢学新 李艳荣 +5 位作者 于鹏程 陶晓燕 刘淑清 闫江泓 周蕾 朱武洋 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第2期113-120,共8页

目的对中国狂犬病疫苗株CTN-1、PV-2061全基因组序列进行分析。方法通过RT-PCR法获取CTN-1和PV-2061株主种子批的全基因组序列,与国内分离的全基因组序列进行比对,并对狂犬病病毒主要抗原进行比对分析。结果 CTN-1和PV-2061株具有较高... 目的对中国狂犬病疫苗株CTN-1、PV-2061全基因组序列进行分析。方法通过RT-PCR法获取CTN-1和PV-2061株主种子批的全基因组序列,与国内分离的全基因组序列进行比对,并对狂犬病病毒主要抗原进行比对分析。结果 CTN-1和PV-2061株具有较高的同源性,CTN-1株与我国街毒株的亲缘关系更近,符合作为疫苗候选株的要求。PV-2061株在氨基酸序列中具有独特的突变,推测与中和抗体的产生相关。结论对中国狂犬病疫苗株CTN-1、PV-2061全基因组进行了多重比对,为研制安全高效的狂犬病疫苗奠定了理论基础。 展开更多

关键词 狂犬病疫苗 CTN-1株 PV-2061株 全基因组 序列比对 位点突变

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牛黄清感胶囊溶液体外抑制新型冠状病毒活性效果分析

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作者 卢学新 祝双利 +3 位作者 刘亚宁 赵雪莹 遆铁军 周有财 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2022年第2期128-130,共3页

目的研究中药制剂牛黄清感胶囊对新型冠状病毒的抑制作用,可为药物筛选和新冠肺炎治疗提供实验依据。方法用Vero-E6细胞分离和培养新型冠状病毒GS048株,制备的牛黄清感胶囊溶液体外与新冠病毒共孵育后测定病毒滴度改变;将含有药物的培... 目的研究中药制剂牛黄清感胶囊对新型冠状病毒的抑制作用,可为药物筛选和新冠肺炎治疗提供实验依据。方法用Vero-E6细胞分离和培养新型冠状病毒GS048株,制备的牛黄清感胶囊溶液体外与新冠病毒共孵育后测定病毒滴度改变;将含有药物的培养液作用于新型冠状病毒接种的细胞,测定牛黄清感胶囊溶液在细胞培养中对新型冠状病毒增殖的抑制作用。结果实验发现药物浓度低于274.3μg/ml时对细胞无毒害作用,药物和新型冠状病毒共孵育后可使病毒滴度从10^(4.4)TCID_(50)/ml下降至10^(2.8)TCID_(50)/ml;体外新冠病毒细胞培养实验中,加入药物使细胞病变数减少,病毒滴度对数值下降了40%~50%。结论牛黄清感胶囊在体外具有部分抑制新冠病毒的能力,可作为候选药物进一步验证对新冠肺炎的治疗作用。 展开更多

关键词 牛黄清感胶囊 新冠病毒 新冠肺炎 治疗 药物筛选

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诊断用丁肝抗原的基因优化及其蛋白表达、纯化和鉴定 被引量：1

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作者 丁军颖 郭敏卓 +4 位作者 伊瑶 苏秋东 卢学新 邱丰 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2012年第2期87-89,共3页

目的获取有生物活性的丁肝抗原蛋白，探讨其作为诊断试剂的应用价值。方法经密码子优化，合成人工编码的丁肝抗原基因序列；以M48作为表达载体，构建带有硫氧还蛋白的重组表达质粒；在大肠埃希氏菌中经IPTG诱导表达；以亲和层析纯化并以... 目的获取有生物活性的丁肝抗原蛋白，探讨其作为诊断试剂的应用价值。方法经密码子优化，合成人工编码的丁肝抗原基因序列；以M48作为表达载体，构建带有硫氧还蛋白的重组表达质粒；在大肠埃希氏菌中经IPTG诱导表达；以亲和层析纯化并以ELISA鉴定该蛋白。结果酶切鉴定构建的质粒正确；SDS—PAGE结果显示表达和纯化的外源蛋白与预期相对分子质量大小一致；ELISA鉴定该蛋白有与丁肝抗体特异性结合的活性。结论成功获得有生物活性的可供诊断用的丁肝抗原蛋白，为丁肝诊断试剂的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 基因 硫氧还蛋白 色普法 肝炎 丁型

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1例HDV抗体IgM阳性HBVS抗原阴性的肝炎患者分子诊断分析

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作者 卢学新 伊瑶 +1 位作者 苏秋东 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2016年第3期303-306,共4页

目的 为了进一步对临床中可能出现HDV抗体IgM阳性，常规HBV五项检测阴性的特殊患者进行诊断，从而对HDV的感染进行准确的判定。方法设计HBV和HDV的特异引物，通过提取血清中病毒的核酸，扩增出病毒的基因组序列，使用BLAST在Genebank中... 目的 为了进一步对临床中可能出现HDV抗体IgM阳性，常规HBV五项检测阴性的特殊患者进行诊断，从而对HDV的感染进行准确的判定。方法设计HBV和HDV的特异引物，通过提取血清中病毒的核酸，扩增出病毒的基因组序列，使用BLAST在Genebank中进行比对。结果本实验在这例血清中扩增到了HDV和HBV的基因序列，通过BLAST后发现扩增序列与HBV和HDV基因序列存在较高的一致性。结论在临床诊断中，HDV感染者会出现血清中HDV抗体IgM阳性HBVS抗原阴性的特殊情况，应当引起临床的重视。 展开更多

关键词 HDV 共感染 丁肝抗体 分子诊断

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高效表达乙型肝炎病毒表面抗原的CHO细胞株的建立

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作者 伊瑶 郭敏卓 +6 位作者 田瑞光 苏秋东 卢学新 邱丰 周文亭 贾志远 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2013年第4期289-291,共3页

目的探索乙型肝炎病毒表面抗原（s）基因在CHO无血清细胞培养系统中的高效表达。方法构建包含乙肝病毒s基因的质粒，转染CHO细胞，经MTX筛选后对培养液上清中的表达产物进行血清学检测以及形态学的观察。结果获得了能高效稳定表达HBsAg... 目的探索乙型肝炎病毒表面抗原（s）基因在CHO无血清细胞培养系统中的高效表达。方法构建包含乙肝病毒s基因的质粒，转染CHO细胞，经MTX筛选后对培养液上清中的表达产物进行血清学检测以及形态学的观察。结果获得了能高效稳定表达HBsAg的CHO细胞株，电镜下可观测到小球型和管型颗粒，ELISA检测表达产物滴度达到1：5000。结论成功构建高效表达乙型肝炎病毒s蛋白的CHO无血清培养细胞株，表达的HBsAg具有良好的抗原活性。 展开更多

关键词 肝炎病毒 乙型 肝炎表面抗原 乙型 细胞培养

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