促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响 被引量：15

1

作者 戈一峰 王大勇 +7 位作者 蒋超 张艳梅 韩雪峰 卢坤刚 崔英霞 黄宇烽 黄祝 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2008年第11期1138-1142,共5页

目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH... 目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH拮抗剂(GnRH-antagonists,GnRHant)(10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)mRNA表达的改变。结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01)。同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45%(p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义。结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSDmRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究。 展开更多

关键词 GNRH类似物 荧光定量PCR 大鼠睾丸间质细胞 膜联蛋白5 3β-羟类固醇脱氢酶

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促性腺激素释放激素激动剂通过ERK MAPK途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA表达 被引量：10

2

作者 柳海燕 时姗姗 +6 位作者 陶晓倩 卢坤刚 韩雪峰 张艳梅 崔英霞 李晓军 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2009年第8期789-793,共5页

目的:促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素,通过刺激促性腺激素释放激素的合成和分泌,调节性激素的合成。GnRH对睾丸间质细胞也具有直接的刺激作用。文中研究GnRH激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞ERK MAPK信号通路和3β-HSD... 目的:促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素,通过刺激促性腺激素释放激素的合成和分泌,调节性激素的合成。GnRH对睾丸间质细胞也具有直接的刺激作用。文中研究GnRH激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞ERK MAPK信号通路和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,血清饥饿2 h。GnRHa(10-7mol/L)和ERK抑制剂PD98059(50μmol/L)刺激细胞后Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK(t-ERK)的蛋白表达,荧光实时定量PCR检测3β-HSD mRNA表达。结果:结果显示GnRHa刺激间质细胞0、5、10、30、60和90 min后,p-ERK水平在5 min时达到最高,与对照组比较升高了约3.5倍(P<0.05);10 min时开始下降,但与对照组相比较仍显著升高2.2倍(P<0.05);90 min时恢复到正常水平。加入ERK选择性抑制剂PD98059后,p-ERK水平显著下降50%(P<0.05);再用GnRHa刺激细胞5 min,p-ERK水平仍无法恢复正常水平。用PD98059处理细胞后,再加入GnRHa培养24 h,3β-HSD mRNA水平也显著下降(与GnRHa组相比,P<0.05)。结论:GnRH激动剂可能通过ERKMAPK信号通路来调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA的表达,进而调控睾酮的分泌。 展开更多

关键词 促性腺激素释放激素 ERK MAPK 睾丸间质细胞 3Β-HSD

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大鼠睾丸间质细胞中促性腺激素释放激素激动剂调控睾酮合成的机制 被引量：8

3

作者 柳海燕 陶晓倩 +8 位作者 时姗姗 张艳梅 卢坤刚 韩雪峰 崔英霞 戈一峰 黄宇烽 李晓军 姚兵 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1337-1341,共5页

目的:研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的调控机制。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞,GnRHa(10-7 mol/L)分别处理间质细胞6、12、24、36、48 h后,Western blot方法分析3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD... 目的:研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的调控机制。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞,GnRHa(10-7 mol/L)分别处理间质细胞6、12、24、36、48 h后,Western blot方法分析3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)蛋白的变化;MEK1/2抑制剂PD98059(50μmol/L)和GnRHa共作用于间质细胞后,分析3β-HSD蛋白表达和睾酮水平的变化。结果:GnRHa处理间质细胞不同时间后,结果显示3β-HSD蛋白的表达对GnRHa的刺激具有时间依赖性。GnRHa处理12 h后,3β-HSD蛋白表达与对照组相比显著上升45%(P<0.05),24 h达到最高水平,升高1.0倍(P<0.05);48 h后3β-HSD恢复至正常水平。加入PD98059后,显著抑制了GnRHa对3β-HSD的刺激作用,3β-HSD水平下降了61%(与GnRHa组相比,P<0.05),睾酮水平也随之显著下降45%(与GnRHa组相比,P<0.05)。结论:GnRHa可能通过细胞外信号调节激酶(ERK1/2)途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD的表达,进而促进睾酮的合成。 展开更多

关键词 促性腺激素释放激素激动剂 原代培养 ERK1/2 间质细胞 3β-羟基类同醇脱氢酶

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促性腺激素释放激素激动剂对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD的表达影响 被引量：9

4

作者 蒋超 韩雪峰 +4 位作者 张艳梅 卢坤刚 黄祝 黄宇烽 姚兵 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第2期107-110,共4页

目的:探讨阿拉瑞林(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白V(annexin5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)的表达的影响.方法:建立体外分离、纯化和培养大鼠睾丸间质细胞原代培养技术,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定,同时用... 目的:探讨阿拉瑞林(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白V(annexin5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)的表达的影响.方法:建立体外分离、纯化和培养大鼠睾丸间质细胞原代培养技术,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定,同时用不同终浓度的GnRHa(分别为1×10-5,1×10-6,1×10-7mol/L)作用于间质细胞24h后,通过Western Blot检测间质细胞中annexin5和3β-HSD的表达变化情况.结果:间质细胞经GnRHa处理后,Western Blot结果显示,与对照组相比,当GnRHa终浓度为1×10-5mol/L时,anenxin5的表达量显著升高了69.2%(P<0.01),3β-HSD的表达量也升高了25.2%(P<0.05);当GnRHa的终浓度为1×10-6mol/L和1×10-7mol/L时,anenxin5的表达量分别升高了61.5%(P<0.05)和16.64%(P>0.05),3β-HSD的表达量则无显著性变化,分别升高了7.7%(P>0.05)和2.22%(P>0.05).结论:GnRHa在原代培养的睾丸间质细胞中,对annexin5,3β-HSD的表达具有调节作用. 展开更多

关键词 促性腺素释放激素 细胞 培养的 大鼠 莱迪希细胞 膜联蛋白A5 3Β-HSD

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精液中性粒细胞弹性蛋白酶的研究进展 被引量：9

5

作者 冯瑞祥 卢坤刚 +1 位作者 张红烨 陆金春 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1023-1028,共6页

影响男性生殖的因素很多,生殖道感染是其中重要因素之一。精液中性粒细胞弹性蛋白酶(polymor-phonuclear neutrophil elastase,PMNE)作为男性生殖道感染尤其是隐性感染诊断的重要炎症指标,对男性生育能力有潜在的负面影响。精液PMNE浓... 影响男性生殖的因素很多,生殖道感染是其中重要因素之一。精液中性粒细胞弹性蛋白酶(polymor-phonuclear neutrophil elastase,PMNE)作为男性生殖道感染尤其是隐性感染诊断的重要炎症指标,对男性生育能力有潜在的负面影响。精液PMNE浓度不仅与精液白细胞数、精浆ROS水平显著相关,而且与其他炎症相关细胞因子如IL-6、IL-8、TNF-α水平等密切相关。PMNE对精子质量亦有影响,可以削弱精子活力,影响精子形态和DNA完整性等。精液中存在PMNE抑制剂,可与PMNE形成复合物,两者比例的失衡可以促进慢性炎症的发生,进而可能导致男性不育。检测精液PMNE的方法主要为酶免疫分析法,但检测方法仍需标准化,诊断标准尚需统一。 展开更多

关键词 中性粒细胞 弹性蛋白酶 男性生殖 生殖道感染 精液

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促性腺激素释放激素拮抗剂对In-R1-G9细胞表达胰高血糖素的影响 被引量：6

6

作者 张艳梅 柳海燕 +7 位作者 陶晓倩 时姗姗 卢坤刚 韩雪峰 崔英霞 戈一峰 李晓军 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2009年第11期1136-1139,共4页

目的:促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRHant)能降低小鼠糖尿病的发生率,文中在细胞水平研究GnRHant对In-R1-G9细胞内胰高血糖素(glucagon)表达的调控作用。方法:分别用终浓度为0.1、10、1 000 nmol/L的GnRHant处理培养的In-R1-G9细胞2 h(... 目的:促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRHant)能降低小鼠糖尿病的发生率,文中在细胞水平研究GnRHant对In-R1-G9细胞内胰高血糖素(glucagon)表达的调控作用。方法:分别用终浓度为0.1、10、1 000 nmol/L的GnRHant处理培养的In-R1-G9细胞2 h(对照组用甘露醇处理),通过Western blot和荧光定量PCR技术观察胰高血糖素在蛋白水平及转录水平的变化。结果:与对照组相比,低浓度的GnRHant(0.1 nmol/L)使胰高血糖素在蛋白水平和转录水平的表达均有所降低,但是无统计学意义(P>0.05);而高浓度的GnRHant(10 nmol/L、1 000 nmol/L)能明显地降低胰高血糖素的表达(P<0.05)。结论:一定浓度的GnRHant能降低In-R1-G9细胞内胰高血糖素的表达。 展开更多

关键词 GNRH拮抗剂 In—R1-G9细胞 胰高血糖素

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光照应激对SD大鼠胃GnRH表达的影响 被引量：7

7

作者 黄祝 恽时锋 +4 位作者 卢坤刚 韩雪峰 张艳梅 蒋超 姚兵 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第23期2576-2580,共5页

目的:观察光照应激状态下SD大鼠胃内促性腺素释放素(GnRH)的表达变化.方法:建立SD大鼠光照应激模型,24h持续光照,分别取光照1d,2d,3d,4d,1wk,2wk,3wk,4wk和相应对照组的胃组织,采用免疫组化和Real-timePCR法检测GnRH在各时间段大鼠胃组... 目的:观察光照应激状态下SD大鼠胃内促性腺素释放素(GnRH)的表达变化.方法:建立SD大鼠光照应激模型,24h持续光照,分别取光照1d,2d,3d,4d,1wk,2wk,3wk,4wk和相应对照组的胃组织,采用免疫组化和Real-timePCR法检测GnRH在各时间段大鼠胃组织中的定位和蛋白及mRNA表达变化.结果:GnRH阳性细胞广泛分布于大鼠胃壁上皮细胞,免疫反应阳性细胞在实验组和对照组中定位没有差异.实验组的GnRH平均灰度值高于其相应的对照组,光照2-4wk时,实验组与对照组相比差异均显著(2wk:105.7±7.9vs77.4±7.2,P<0.05;3wk:97.4±7.7vs77.6±6.6,P<0.05;4wk:93.2±2.1vs77.9±4.0,P<0.05).实验组大鼠胃的GnRHmRNA水平高于对照组,与对照组相比,持续光照2-4wk时,实验组大鼠胃的GnRHmRNA增加具有显著性差异(2wk:1.01±0.10vs0.80±0.01,P<0.05;3wk:0.95±0.07vs0.81±0.01,P<0.05;4wk:0.94±0.05vs0.82±0.01P<0.05).结论:光照应激可以影响消化道中GnRH的表达,GnRH以自分泌和旁分泌的机制对消化系统产生调节作用.提示GnRH除参与消化道正常生理功能外,可能还是一种参与应激反应的激素. 展开更多

关键词 光照 应激 胃 促性腺素释放素 大鼠 免疫组化 实时荧光定量PCR

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光照应激对SD大鼠小肠促性腺激素释放激素受体表达的影响 被引量：5

8

作者 时姗姗 陶晓倩 +4 位作者 韩雪峰 卢坤刚 张艳梅 柳海燕 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2009年第11期1127-1130,1135,I0003,共6页

目的:机体遭受各种创伤应激后,常出现各种胃肠道症状,并且已有研究表明大鼠的消化系统广泛分布有促性腺激素释放激素(GnRH)受体免疫反应阳性细胞。文中观察光照应激状态下SD大鼠小肠黏膜GnRH受体的分布和表达变化。方法:建立SD大鼠光照... 目的:机体遭受各种创伤应激后,常出现各种胃肠道症状,并且已有研究表明大鼠的消化系统广泛分布有促性腺激素释放激素(GnRH)受体免疫反应阳性细胞。文中观察光照应激状态下SD大鼠小肠黏膜GnRH受体的分布和表达变化。方法:建立SD大鼠光照应激模型,24 h持续光照,分为短期光照应激(2、3、4、7 d)和长期光照应激(14、21、28 d),分别取应激组和相应对照组的小肠组织,采用免疫组化和Western blot技术分析GnRH受体在各时间段大鼠小肠组织中的分布和表达变化。结果:Western blot结果显示:与对照组相比,持续光照2、3、4、7 d后,实验组大鼠小肠GnRH受体表达无明显变化;持续光照14 d和21 d后,实验组大鼠小肠GnRH受体的相对表达量分别约升高了56.5%和59.9%,具有显著性差异(P<0.05);持续光照28 d后,实验组大鼠小肠GnRH受体的相对表达量约升高了27.8%,但无显著性差异(P>0.05)。免疫组织化学显示,GnRH受体在大鼠小肠中的分布未见明显改变,但长期应激后期实验组(14、21、28 d)GnRH受体免疫组化显色较深,说明GnRH受体表达升高,这与Western blot的结果基本一致。结论:GnRH受体随着光照应激时间的延长,在大鼠小肠中表达量发生改变。提示在光照应激中,GnRH对消化功能具有潜在的生理调节功能。 展开更多

关键词 光照 应激 小肠 促性腺激素释放激素

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精浆α葡糖苷酶全自动检测方法的建立及评价 被引量：7

9

作者 张红烨 陆金春 +1 位作者 卢坤刚 冯瑞祥 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2014年第10期886-889,共4页

目的：建立精浆α葡糖苷酶活性全自动检测方法并对其准确性、重复性和线性范围等进行评价。方法：利用速率法检测精浆α葡糖苷酶活性,并在全自动生化分析仪上建立检测参数,并评估该方法的试剂空白吸光度、准确性、重复性和线性范围。结... 目的：建立精浆α葡糖苷酶活性全自动检测方法并对其准确性、重复性和线性范围等进行评价。方法：利用速率法检测精浆α葡糖苷酶活性,并在全自动生化分析仪上建立检测参数,并评估该方法的试剂空白吸光度、准确性、重复性和线性范围。结果：试剂空白吸光度平均为0.002 14,空白吸光度变化率（△A/min）平均为0.015 26。3份高、中、低α葡糖苷酶活性的精浆样本重复测定10次的CV值分别为2.52%、0.36%和0.76%。采用比对试验的方法来评价准确性,40份精浆标本每个浓度点的相对偏差范围为-5.52%~7.54%,均低于15%的要求。精浆α葡糖苷酶活性在76~647 U/L范围时,具有良好的线性关系（r〉0.99）。结论：本研究建立的全自动精浆α葡糖苷酶活性检测法有较低的试剂空白,重复性和准确性较好,且有较宽的线性范围。该法操作简单、快速,精浆样本无需稀释,适合临床上大批量样本的检测筛查,大大节省了人力和试剂成本。 展开更多

关键词 α葡糖苷酶 精浆 全自动分析 方法学评价

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精浆果糖速率检测法的初步评价 被引量：6

10

作者 陆金春 卢坤刚 +1 位作者 张红烨 冯瑞祥 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2015年第1期6-8,共3页

目的建立精浆果糖速率检测法并进行性能评价。方法利用速率法检测精浆果糖浓度,在全自动生化分析仪上建立检测参数,评估该方法的试剂空白吸光度、准确性、重复性和线性范围,与临床常用的精浆果糖吲哚显色法进行比较。结果试剂空白吸光... 目的建立精浆果糖速率检测法并进行性能评价。方法利用速率法检测精浆果糖浓度,在全自动生化分析仪上建立检测参数,评估该方法的试剂空白吸光度、准确性、重复性和线性范围,与临床常用的精浆果糖吲哚显色法进行比较。结果试剂空白吸光度平均为0.032,空白吸光度变化率(△A/min)平均为0.000 2。3份高、中、低果糖浓度的精浆样本重复测定10次的变异系数(CV)值分别为1.40%、1.57%和2.79%。回收率范围为95.77%~100.97%。精浆果糖浓度在5~35 mmol/L时,具有良好的线性关系(r2=0.997 8)。以精浆果糖吲哚显色法作为对照试剂,速率法作为实验试剂,两者对115例精浆样本的检测结果差异无统计学意义[(20.92±8.62)mmol/L vs(21.15±8.37)mmol/L,t=-1.157,P=0.250],且呈显著正相关(r2=0.939 5,P<0.01)。结论本研究建立的精浆果糖速率检测法有较低的试剂空白,重复性和准确性较好,与目前临床使用的吲哚显色法有很好的一致性。本法操作简单、快速,精浆样本无需稀释,适合临床大批量样本的检测筛查,可节省人力和试剂成本。 展开更多

关键词 果糖 精浆 全自动分析 速率法 方法学评价

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光照应激对雄性大鼠生殖相关参数的影响 被引量：3

11

作者 时姗姗 柳海燕 +4 位作者 陶晓倩 韩雪峰 卢坤刚 张艳梅 姚兵 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2009年第12期8-13,共6页

目的观察比较光照应激状态下不同应激时间段SD大鼠生殖相关参数的变化。方法建立SD大鼠的光照应激模型分为光照应激短期(2d、3d、4d、7d)和光照应激长期(14d、21d、28d),并分别取应激状态下SD大鼠睾丸、附睾称重,对附睾尾精子计数,HE染... 目的观察比较光照应激状态下不同应激时间段SD大鼠生殖相关参数的变化。方法建立SD大鼠的光照应激模型分为光照应激短期(2d、3d、4d、7d)和光照应激长期(14d、21d、28d),并分别取应激状态下SD大鼠睾丸、附睾称重,对附睾尾精子计数,HE染色观察睾丸结构,应用免疫组织化学和westernblot分析3β-HSD表达,比较各实验组和对照组间上述指标的变化。结果短期光照应激组(2d、3d、4d、7d)与对照组相比,大鼠体重、睾丸重量、附睾重量、精子数量没有明显变化(P>0.05),HE染色显示睾丸结构无明显变化,免疫组化和western blot显示3β-HSD表达无明显变化。长期光照应激组与对照组相比,大鼠重量、睾丸和附睾重量都有明显增加。与对照组相比,14 d实验组的附睾重量有显著性差异(P<0.05);21 d、28 d实验组的睾丸重量有显著差异(P<0.05),21 d、28 d实验组的体重、附睾重量和精子相对计数都有极显著差异(P<0.01)。HE染色显示睾丸内生精小管变粗,管腔内生精细胞增多,免疫组化和western blot显示长期应激组14 d的3β-HSD相对表达量增加20.3%,有显著性差异(P<0.05);21d和28d实验组3β-HSD的相对含量分别增加30.4%和43.3%,差异极显著(P<0.01)。结论短期光照应激不能破坏大鼠机体内稳态的调节机制,对生殖的影响并不明显;而长期处于光照应激状态下的雄性大鼠,超出机体内稳态的调节能力,对生殖的影响不仅表现在体重、睾丸、附睾和附睾尾的重量增加,而且精子相对计数及睾丸结构都发生相应变化,3β-HSD表达量也明显增加。提示光照是影响大鼠生殖功能的一个因素。 展开更多

关键词 光照 应激 生殖 大鼠

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全自动精浆锌检测方法的建立及评价 被引量：3

12

作者 陆金春 卢坤刚 +1 位作者 张红烨 冯瑞祥 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2015年第2期31-35,共5页

目的建立全自动精浆锌检测方法并对其准确性、重复性和线性范围等进行评价。方法利用终点法检测精浆锌浓度，并在全自动生化分析仪上建立检测参数，并评估该方法的试剂空白吸光度、准确性、重复性和线性范围，同时与目前临床上常用的化... 目的建立全自动精浆锌检测方法并对其准确性、重复性和线性范围等进行评价。方法利用终点法检测精浆锌浓度，并在全自动生化分析仪上建立检测参数，并评估该方法的试剂空白吸光度、准确性、重复性和线性范围，同时与目前临床上常用的化学比色法精浆锌检测试剂盒进行比较。结果试剂空白吸光度平均为0．028。3份高、中、低锌浓度的精浆样本重复测定10次，其CV值分别为0．67％、2．04％和4．18％。采用回收率分析来评价准确性，回收率范围为95．68％～103．81％。精浆锌浓度在0．2～7mmol／L范围时，具有良好的线性关系（r^2=O．9944）。以精浆锌检测试剂盒（化学比色法）作为对照试剂，全自动检测法作为试验试剂，两者对115例精浆样本的检测结果没有显著性差异[（2．51±1．26）mmol／Lvs（2．54±1．17）mmol／L，t=-1．589，P=-O．115]，且呈显著正相关（，=0．9686，P〈O．01）。结论本研究建立的全自动精浆锌检测法有较低的试剂空白，重复性和准确性较好，且与目前临床上使用的化学比色法有很好的一致性。该法操作简单、快速，精浆样本无需稀释，适合临床上大批量样本的检测筛查，大大节省了人力和试剂成本。 展开更多

关键词 锌/分析 精液

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促性腺激素释放激素激动剂对In-R1-G9细胞中胰升血糖素表达的影响 被引量：1

13

作者 张艳梅 陶晓倩 +7 位作者 时姗姗 柳海燕 卢坤刚 韩雪峰 崔英霞 戈一峰 李晓军 姚兵 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期225-227,共3页

目的研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRH agonist,GnRHa)对In-R1-G9细胞内胰升血糖素表达的调控作用。方法分别用终浓度为0.1 nmol/L、10 nmol/L、1000 nmol/L的GnRHa处理培养的In-R1-G9细胞2 h(对照组用生理盐水处理),通过Wester... 目的研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRH agonist,GnRHa)对In-R1-G9细胞内胰升血糖素表达的调控作用。方法分别用终浓度为0.1 nmol/L、10 nmol/L、1000 nmol/L的GnRHa处理培养的In-R1-G9细胞2 h(对照组用生理盐水处理),通过Western blot和荧光定量PCR技术观察胰升血糖素在蛋白水平及转录水平的变化。结果与对照组相比,低浓度的GnRHa(0.1nmol/L)使胰升血糖素在蛋白水平和转录水平的表达均有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05);而高浓度的GnRHa(10 nmol/L、1000 nmol/L)能明显增强胰升血糖素的表达(P<0.05或P<0.01)。结论一定浓度的GnRHa能增强In-R1-G9细胞内胰升血糖素的表达。 展开更多

关键词 GnRH受体激动剂 In—R1-G9细胞 胰升血糖素

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光照应激对SD大鼠小肠中annexin 5表达的影响 被引量：1

14

作者 时姗姗 卢坤刚 +3 位作者 柳海燕 陶晓倩 林钗英 姚兵 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期221-223,共3页

目的观察光照应激状态下SD大鼠小肠黏膜组织中annexin 5的分布和表达变化。方法建立SD大鼠光照应激模型,24 h持续光照,分为短期光照应激(2、3、4、7 d)和长期光照应激(14、21、28 d),分别取应激组和相应对照组的大鼠小肠组织,采用免疫... 目的观察光照应激状态下SD大鼠小肠黏膜组织中annexin 5的分布和表达变化。方法建立SD大鼠光照应激模型,24 h持续光照,分为短期光照应激(2、3、4、7 d)和长期光照应激(14、21、28 d),分别取应激组和相应对照组的大鼠小肠组织,采用免疫组织化学和western blot技术分析annexin 5在各时间段大鼠小肠组织中的分布和表达。结果western blot结果显示,与对照组相比,持续光照2、3、4、7 d,实验组大鼠小肠中annexin 5表达无明显变化;持续光照14 d和21 d,实验组大鼠小肠中annexin 5的表达量显著高于对照大鼠,具有统计学意义(P<0.05);持续光照28 d,实验组大鼠小肠中annexin 5表达量虽仍高于对照鼠,但无显著性差异(P>0.05)。免疫组织化学显示,annexin 5在大鼠小肠中的分布未见明显改变,但光照应激后期实验组(14、21、28 d)annexin 5免疫组化显色较深。结论在光照应激后期(14、21 d)annexin 5的表达量明显增加。随着应激时间的延长(28 d),机体内代偿机制的建立,实验组annexin 5逐渐恢复至正常水平。说明大鼠小肠中annexin 5参与了应激过程。 展开更多

关键词 光照 应激 小肠 annexin5

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坐骨神经选择性损伤应激对大鼠颌下腺中annexin 5表达的影响 被引量：1

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作者 卢坤刚 韩雪峰 +7 位作者 张艳梅 柳海燕 陶晓倩 时姗姗 戈一峰 崔英霞 李晓军 姚兵 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期558-560,564,共4页

目的研究坐骨神经选择性损伤引起的慢性疼痛应激态下SD大鼠颌下腺中annexin 5表达的变化。方法72只SD大鼠随机均分为3组:手术组、假手术组和对照组(每组24只)。手术组:用氯胺酮(40mg/kg)腹腔注射麻醉后,切开左后肢侧面皮肤和股二头肌,... 目的研究坐骨神经选择性损伤引起的慢性疼痛应激态下SD大鼠颌下腺中annexin 5表达的变化。方法72只SD大鼠随机均分为3组:手术组、假手术组和对照组(每组24只)。手术组:用氯胺酮(40mg/kg)腹腔注射麻醉后,切开左后肢侧面皮肤和股二头肌,暴露大鼠坐骨神经干及其3个分支:胫神经、腓总神经和腓肠神经,结扎并切断胫神经和腓总神经,保留腓肠神经以建立坐骨神经分支选择性损伤(SNI)模型。假手术组:只暴露坐骨神经干及其分支而不损伤神经。对照组:不做任何处理。分别于手术后14、21、28d从各组中取8只大鼠,麻醉后处死,分离颌下腺组织置于液氮内保存备用。然后通过免疫组织化学和Western blotting检测坐骨神经选择性损伤后14、21、28d时各组大鼠颌下腺中annexin 5蛋白定位及表达的变化。结果免疫组化结果显示,annexin 5主要定位在颌下腺润管、分泌管及排泄导管上皮细胞中。术后14d,annexin 5在颌下腺的定位明显减少,Western blotting结果显示术后14d时与对照组比较,手术组大鼠颌下腺中annexin 5表达水平显著降低(P<0.01),与假手术组比较,手术组annexin 5表达水平也显著下降(P<0.05)。但术后21和48d手术组与对照组、假手术组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论坐骨神经选择性损伤引起的慢性疼痛应激能下调SD大鼠颌下腺中annexin 5的表达,annexin 5可能参与了颌下腺对应激的反应。 展开更多

关键词 神经损伤 应激 ANNEXIN 5 颌下腺 模型 动物

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促性腺激素释放激素类似物对In-R1-G9细胞中胰高血糖素分泌的影响 被引量：1

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作者 张艳梅 陶晓倩 +4 位作者 时姗姗 柳海燕 卢坤刚 韩雪峰 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2011年第1期11-14,共4页

目的研究表明促性腺激素释放激素(gonadotrop in-releasing hormone,GnRH)可能对胰高血糖素具有调节作用,文中观察GnRH类似物对仓鼠胰高血糖素瘤细胞(In-R1-G9)胰高血糖素分泌的影响。方法通过W estern blot和免疫细胞化学的方法检测GnR... 目的研究表明促性腺激素释放激素(gonadotrop in-releasing hormone,GnRH)可能对胰高血糖素具有调节作用,文中观察GnRH类似物对仓鼠胰高血糖素瘤细胞(In-R1-G9)胰高血糖素分泌的影响。方法通过W estern blot和免疫细胞化学的方法检测GnRH受体在In-R1-G9细胞中的表达和定位,然后分别用终浓度为0、0.1、10、1000 nmol/L的GnRH类似物处理培养的In-R1-G9细胞2 h,用放射免疫法分别检测对照组和实验组中胰高血糖素分泌量。结果 GnRH受体在In-R1-G9细胞中表达并定位在细胞膜上。低浓度的GnRH激动剂(GnRHa)(0.1 nmol/L)增强胰高血糖素分泌的作用不显著;而高浓度的GnRHa(10、1000 nmol/L)能显著增强胰高血糖素的分泌(P<0.05)。低浓度的GnRH拮抗剂(GnRHant)(0.1 nmol/L)降低胰高血糖素分泌的作用不显著;而高浓度的GnRHant(10、1000 nmol/L)能明显地抑制胰高血糖素的分泌(P<0.05)。结论促性腺激素释放激素类似物能以浓度依赖性的方式调节In-R1-G9细胞中胰高血糖素的分泌,这一过程可能通过GnRH受体作用。 展开更多

关键词 促性腺激素释放激素类似物 In-R1-G9细胞 胰高血糖素

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促性腺素释放素激动剂通过ERK MAPK途径调节In-R1-G9细胞胰高血糖素的分泌 被引量：1

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作者 陶晓倩 时姗姗 +4 位作者 张艳梅 柳海燕 卢坤刚 韩雪峰 姚兵 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期63-65,共3页

目的研究促性腺素释放素激动剂(GnRHa)醋酸阿拉瑞林对In-R1-G9细胞分泌胰高血糖素的影响是否与促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路有关。方法无血清培养细胞24 h后,选用100 nmol/L GnRHa处理培养的In-R1-G9细胞0、5、10、20、30、60、9... 目的研究促性腺素释放素激动剂(GnRHa)醋酸阿拉瑞林对In-R1-G9细胞分泌胰高血糖素的影响是否与促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路有关。方法无血清培养细胞24 h后,选用100 nmol/L GnRHa处理培养的In-R1-G9细胞0、5、10、20、30、60、90 min,用western blotting检测磷酸化胞外信号调节激酶(P-ERK)、总ERK(T-ERK)、磷酸化p38(P-p38)、β-ac-tin的表达。用ERK选择性抑制剂PD98059(50μmol/L)刺激细胞,用放射免疫法测定胰高血糖素的分泌水平。结果Gn-RHa刺激In-R1-G9细胞20 min后,p-ERK水平开始升高(P<0.05),在30 min时达到峰值,比对照组升高了169%(P<0.01),90 min恢复至正常水平;但P-p38与对照组比无显著性差异;PD98059组与本底对照(DMSO组)比较、GnRHa+PD98059组与GnRHa组比较均有统计学意义(P<0.05;P<0.01)。结论GnRHa可能通过ERK MAPK途径调控In-R1-G9细胞胰高血糖素的分泌,而不是通过p38 MAPK途径。 展开更多

关键词 促性腺素释放素激动剂 In—R1-G9细胞 细胞外信号调节激酶 P38 胰高血糖素

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光照应激对SD大鼠睾丸中Annexin 5表达的影响 被引量：1

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作者 时姗姗 王大勇 +7 位作者 柳海燕 陶晓倩 韩雪峰 卢坤刚 张艳梅 戈一峰 崔英霞 姚兵 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期189-191,共3页

目的观察光照应激状态下SD大鼠睾丸组织中annexin5的表达变化。方法建立SD大鼠光照应激模型,24h持续光照,分为光照应激短期(2、3、4、7d)和光照应激长期(14、21、28d),分别取应激状态和相应对照组的大鼠睾丸组织,采用免疫组织化学和West... 目的观察光照应激状态下SD大鼠睾丸组织中annexin5的表达变化。方法建立SD大鼠光照应激模型,24h持续光照,分为光照应激短期(2、3、4、7d)和光照应激长期(14、21、28d),分别取应激状态和相应对照组的大鼠睾丸组织,采用免疫组织化学和Western blotting技术分析annexin5免疫定位和蛋白相对表达。结果Western blotting结果显示:短期光照应激组(2、3、4、7d)的实验组大鼠睾丸annexin5表达与对照组相比无明显变化;在持续光照14d和21d后,实验组大鼠睾丸annexin5的相对表达量与对照组相比分别从3.09提高到4.16,从4.20提高到5.28(P<0.01,P<0.05);而持续光照28d后,实验组大鼠睾丸annexin5的相对表达量(4.87)与对照组(4.13)比较无明显差异(P>0.05)。免疫组织化学显示,annexin5在大鼠睾丸中的分布未见明显改变,但光照应激长期实验组(14、21、28d)annexin5免疫组化显色较深,说明annexin5表达升高,这与Westernblotting的结果基本一致。结论长期光照应激使大鼠睾丸annexin5的表达量明显增加。annexin5参与了应激过程,并可能参与了睾丸中某些重要生理功能的调节。 展开更多

关键词 光 应激 ANNEXIN 5 基因

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急性疼痛应激状态下SD大鼠睾丸内膜联蛋白A5的表达变化

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作者 韩雪峰 卢坤刚 +4 位作者 张艳梅 时姗姗 柳海燕 陶晓倩 姚兵 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2009年第11期14-18,26,共6页

目的观察急性疼痛应激状态下,睾丸中annexin 5表达变化。方法福尔马林注射建立急性疼痛模型,分别在注射后1 h,6h,24 h,72 h取睾丸,免疫组织化学和western blot分析annexin 5免疫定位和蛋白表达,荧光定量PCR方法检测annexin 5 mRNA水平... 目的观察急性疼痛应激状态下,睾丸中annexin 5表达变化。方法福尔马林注射建立急性疼痛模型,分别在注射后1 h,6h,24 h,72 h取睾丸,免疫组织化学和western blot分析annexin 5免疫定位和蛋白表达,荧光定量PCR方法检测annexin 5 mRNA水平变化。结果免疫组化显示,annexin 5在急性应激组和对照组中定位在间质细胞、支持细胞,应激组与对照组相比定位无明显的变化。Western blot分析发现疼痛应激1 h和6 h后,annexin 5的表达分别降低16.9%和12.8%,而在疼痛应激24 h和72 h后,annexin 5的表达分别升高33.7%和25%。组间比较发现,在1 h和24 h时annexin 5表达较对照组差异有统计学意义(P<0.05)。荧光定量方法检测annexin 5 mRNA水平变化,发现疼痛应激1 h和6 h annexin 5 mRNA相对含量降低,随后在24 h和72 h升高,但各组间差异均无统计学意义。结论急性疼痛应激主要影响annexin 5蛋白的表达,而不影响annexin 5的转录。Annexin 5作为睾丸应激因子之一可能介导了应激对生殖功能的抑制作用。 展开更多

关键词 应激 膜联蛋白A5

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慢性疼痛应激对雄性SD大鼠生殖相关参数的影响

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作者 卢坤刚 时姗姗 +4 位作者 韩雪峰 张艳梅 柳海燕 陶晓倩 姚兵 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期16-21,共6页

目的观察不同时间段慢性疼痛应激后,SD大鼠生殖相关参数的变化。方法建立坐骨神经分支选择性损伤模型。经不同时间疼痛应激后,于14 d、21 d和28 d处死大鼠,取睾丸、附睾称重,并对附睾尾精子计数,HE染色显示睾丸结构变化,western blot检... 目的观察不同时间段慢性疼痛应激后,SD大鼠生殖相关参数的变化。方法建立坐骨神经分支选择性损伤模型。经不同时间疼痛应激后,于14 d、21 d和28 d处死大鼠,取睾丸、附睾称重,并对附睾尾精子计数,HE染色显示睾丸结构变化,western blot检测3 β-HSD蛋白表达的改变。结果 14 d和21 d手术组大鼠体重均略低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。不同时间段各组大鼠睾丸和附睾系数均无明显变化。28 d后手术组附睾尾精子相对计数显著低于对照组(P<0.05)。HE染色显示,坐骨神经分支选择性损伤诱导疼痛应激28 d后睾丸生精上皮中生精细胞减少,生精小管腔内精子数量减少。Western blot结果显示28 d手术组3 β-HSD表达显著低于正常照组和假手术组(P<0.05)。结论慢性疼痛应激如其他方式应激一样,能引起大鼠附睾尾精子相对计数减少,睾丸生精上皮中生精细胞减少,睾丸内3 β-HSD含量降低,慢性疼痛应激降低了大鼠的生精功能。 展开更多

关键词 疼痛 应激 生殖

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