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菰黑粉菌遗传转化体系启动子的筛选 被引量：1
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作者 卞加慧 胡映莉 +3 位作者 汤近天 夏文强 叶子弘 张雅芬 《中国计量大学学报》 2022年第1期106-115,共10页
目的:构建菰黑粉菌(Ustilago esculenta P.Henn.)高效的遗传转化体系。方法:基于菰黑粉菌RNA-seq结果,筛选出10个高强度启动子,以pUMa932为基础载体,将异源启动子P_(otef)使用DNA无缝克隆技术替换成所筛选的启动子构建相关载体,以菰黑粉... 目的:构建菰黑粉菌(Ustilago esculenta P.Henn.)高效的遗传转化体系。方法:基于菰黑粉菌RNA-seq结果,筛选出10个高强度启动子,以pUMa932为基础载体,将异源启动子P_(otef)使用DNA无缝克隆技术替换成所筛选的启动子构建相关载体,以菰黑粉菌UeT55为实验材料,基于PEG介导原生质体转化构建表达菌株。通过qRT-PCR测定不同启动子下eGFP的表达量,并用Image J软件分析测定转化子的荧光强度。结果:启动子P_(mdh1)、P_(mix17)、P_(eno)、P_(qcr8)驱动的eGFP基因表达量和荧光强度与对照P_(otef)无显著差异,启动子P_(mia40)、P_(sti1)、P_(odc2)驱动的eGFP基因表达量和荧光强度均显著低于对照,而启动子P_(hsp)、P_(ef)、P_(cox12)驱动的eGFP基因表达量分别比P_(otef)驱动的高9倍、5倍、2倍以上,荧光强度分别高6倍、4倍、1.5倍以上,均显著高于对照。结论:P_(hsp)启动子表达能力最强,且表达稳定,适宜作为强启动子用于菰黑粉菌遗传转化体系构建。 展开更多
关键词 菰黑粉菌 启动子 遗传转化 启动子P 荧光强度
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UeRbf1调控菰黑粉菌丝状生长和致病力的作用研究 被引量：1
2
作者 胡映莉 卞加慧 +5 位作者 郭月美 彭辉 汤近天 夏文强 叶子弘 张雅芬 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期165-178,共14页
基于菰黑粉菌的全基因组序列,克隆得到了UeRbf1(GenBank登录号:MW375682),该基因的开放阅读框为1 281 bp,无内含子,编码426个氨基酸,经预测具有3个C_(2)H_(2)锌指结构域,提示其具有转录调控功能。进一步在菰黑粉菌中敲除UeRbf1后进行体... 基于菰黑粉菌的全基因组序列,克隆得到了UeRbf1(GenBank登录号:MW375682),该基因的开放阅读框为1 281 bp,无内含子,编码426个氨基酸,经预测具有3个C_(2)H_(2)锌指结构域,提示其具有转录调控功能。进一步在菰黑粉菌中敲除UeRbf1后进行体外生长及侵染试验,发现:在体外培养时,UeRbf1的缺失没有改变菌株的生长速率及单倍体形态,也未改变两个性亲和UeRbf1缺失突变体的融合及菌丝形成能力,但是融合菌丝的丝状生长能力显著减弱,而且在侵染时UeRbf1缺失突变体丧失了菌丝形成及丝状生长能力,人工接种野茭后也无法使其茎部膨大。以上结果表明,UeRbf1是调控菰黑粉菌丝状生长和侵染能力的一个重要因子。另外,UeRbf1缺失突变后,在体外融合及侵染时相关丝状生长和致病力的调控因子Biz1、Clp1、Hdp1和UeKpp6呈下调表达,其中Biz1的下调表达最为显著,在突变体中几乎不表达,说明UeRbf1对菰黑粉菌丝状生长和致病力的影响,可能是通过调控Biz1来实现的。 展开更多
关键词 菰黑粉菌 UeRbf1 丝状生长 致病力
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GB 2759—2015《食品安全国家标准冷冻饮品和制作料》问卷调查反馈意见分析
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作者 王晓芬 宋亚静 +2 位作者 王正亮 卞加慧 张雅芬 《中国食品卫生杂志》 CSCD 北大核心 2023年第4期593-599,共7页
目的调查了解全国相关单位人员对GB 2759—2015《食品安全国家标准冷冻饮品和制作料》的知晓及贯彻落实情况,为标准的修订提出建议和参考。方法采用问卷调查方式进行研究。主要调查对象是食品生产经营企业人员、卫生健康部门人员、市场... 目的调查了解全国相关单位人员对GB 2759—2015《食品安全国家标准冷冻饮品和制作料》的知晓及贯彻落实情况,为标准的修订提出建议和参考。方法采用问卷调查方式进行研究。主要调查对象是食品生产经营企业人员、卫生健康部门人员、市场监管部门人员、检测机构人员等。数据采用Microsoft Excel 2013和SPSS 20.0软件进行统计分析。结果本次调查共收回有效调查问卷440份。被调查对象对GB 2759—2015的知晓率为55.5%(244/440),一致认可标准在冷冻饮品质量、食品安全的重要作用,对实施效果的总体评价为“良好”(均值为4.42分)。得到有效反馈问题24条,有意见建议人员数36人,占比15%。结论全国相关单位人员对GB 2759—2015的知晓情况一般。不同调查对象之间对知晓率差异有统计学意义(P<0.05)。调查发现,仍有35.4%(51/144)的监管人员和检验人员不了解、不清楚其关注行业应遵守产品标准GB 2759—2015。今后应加大食品安全国家标准的宣传力度,在冷冻饮品定义和微生物限量方面也亟须结合现场调研和专家咨询等进行研究和修订。 展开更多
关键词 食品安全标准 冷冻饮品和制作料 跟踪评价 反馈
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