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布鲁氏菌环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法的建立 被引量：25
1
作者 许邹亮 南文龙 +6 位作者 周洁 陆明哲 郭玉广 谭鹏飞 毛开荣 彭大新 陈义平 《中国动物检疫》 CAS 2011年第8期37-40,共4页
应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了布鲁氏菌可视化快速检测方法。针对布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因保守区设计6条特异引物,反应前加入染料羟基萘芬蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,63℃恒温反应60min,根据HNB的颜色变化进行结果判定。分别... 应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了布鲁氏菌可视化快速检测方法。针对布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因保守区设计6条特异引物,反应前加入染料羟基萘芬蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,63℃恒温反应60min,根据HNB的颜色变化进行结果判定。分别评价所建立LAMP方法的特异性和灵敏性,并对60份牛布鲁氏菌病虎红平板凝集试验(RBT)阳性血清样本,经LAMP和B4/B5-PCR方法进行平行检测。结果显示,本方法最低检出限约为17fg布鲁氏菌基因组DNA。本方法特异性良好,布鲁氏菌反应管均出现特异性LAMP扩增反应,而猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48-1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等对照组均未出现扩增。针对60份RBT阳性血清的平行检测结果显示,LAMP和B4/B5-PCR这两种方法间的结果符合率为85.0%。B4/B5-PCR检测为阳性的43份样品,经本方法检测全部为阳性;B4/B5-PCR检测为阴性的17份样品,经本方法检测,9份为阳性,8份为阴性。LAMP的敏感性高于B4/B5-PCR方法。实验表明,本文所建立的基于颜色判定的布鲁氏菌LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于基层兽医部门进行布鲁氏菌的快速检测。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 环介导等温扩增(LAMP) 可视化检测
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牛结节性皮肤病诊断方法研究进展 被引量：19
2
作者 陆游 南文龙 +1 位作者 陈义平 彭大新 《中国动物检疫》 CAS 2020年第9期82-88,共7页
牛结节性皮肤病(lumpy skin disease,LSD)是由牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus,LSDV)引起的急性、亚急性传染病。我国于2019年8月在新疆伊犁地区首次确诊该病。快速准确检测是防控该病的关键。目前,应用常规PCR、实时荧光... 牛结节性皮肤病(lumpy skin disease,LSD)是由牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus,LSDV)引起的急性、亚急性传染病。我国于2019年8月在新疆伊犁地区首次确诊该病。快速准确检测是防控该病的关键。目前,应用常规PCR、实时荧光定量PCR、高分辨率熔解曲线分析、环介导等温扩增等分子检测方法,已实现了LSDV与其同属不同种病毒的通用检测和鉴别检测以及LSDV野毒株与疫苗株的区分;应用病毒中和试验、酶联免疫吸附(ELISA)和蛋白印迹试验(WB)等免疫学方法,可进行羊痘病毒属的特异性抗原与抗体检测,而对于LSDV特异性抗体检测方法尚有待研究。LSD作为一种新传入我国的外来动物疫病,有必要运用快速准确的分子或免疫学检测方法加强监测。本文概述了LSD诊断方法研究进展,为我国LSD诊断技术研发提供参考。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病 诊断 研究进展
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非洲猪瘟病原学检测方法研究进展 被引量：17
3
作者 南文龙 李林 +3 位作者 巩明霞 陆游 吴晓东 陈义平 《中国动物检疫》 CAS 2020年第1期46-51,共6页
目前,非洲猪瘟(ASF)尚无有效疫苗可以预防,快速、准确的病原学检测是防控该病的重要技术手段。本文综述了ASF病原学检测方法:免疫荧光、ELISA、免疫层析试纸条等抗原检测方法,其使用方便、快速,目前主要应用于急性发病或病死猪的快速诊... 目前,非洲猪瘟(ASF)尚无有效疫苗可以预防,快速、准确的病原学检测是防控该病的重要技术手段。本文综述了ASF病原学检测方法:免疫荧光、ELISA、免疫层析试纸条等抗原检测方法,其使用方便、快速,目前主要应用于急性发病或病死猪的快速诊断及群体筛查;PCR、荧光定量PCR、环介导等温扩增等分子生物学检测方法仍是ASF病原检测的主要手段,特别是荧光定量PCR方法以其敏感、特异、快速、稳定的优点在我国实践中广泛应用。随着微流控、化学发光、基因芯片等新技术不断应用,各种自动化、一体化、便携式设备不断研发,将会为ASF防控提供有效技术支持。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 病原学检测 研究进展
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重组酶聚合酶扩增技术及其在动物病毒病检测中的应用 被引量：16
4
作者 秦立得 南文龙 陈义平 《中国动物检疫》 CAS 2017年第5期81-85,共5页
重组酶聚合酶扩增技术是近年来建立起的一种常温DNA扩增技术,具有灵敏度高、特异性强、反应速度快、所需仪器简单等优点。本文介绍了该技术的检测原理、引物及探针设计和影响因素,分析了该技术在动物病毒病检测方面的应用,指出该技术具... 重组酶聚合酶扩增技术是近年来建立起的一种常温DNA扩增技术,具有灵敏度高、特异性强、反应速度快、所需仪器简单等优点。本文介绍了该技术的检测原理、引物及探针设计和影响因素,分析了该技术在动物病毒病检测方面的应用,指出该技术具有良好的现场快速检测与多重及大量样品检测的应用前景。 展开更多
关键词 重组酶聚合酶扩增技术 动物病毒病 研究进展 展望
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H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞表位预测及抗原性分析 被引量：16
5
作者 南文龙 金宁一 +5 位作者 鲁会军 赵翠青 田明尧 谭磊 张金双 白靓 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期630-633,637,共5页
目的:预测H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性。方法:依据近年H5N1亚型禽流感病毒流行趋势,下载得到相关HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特... 目的:预测H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性。方法:依据近年H5N1亚型禽流感病毒流行趋势,下载得到相关HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特异性。通过BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清,初步鉴定候选表位抗原性。结果:综合多项预测及空间构象模拟结果,我们获得了三条候选Th和B细胞表位,分别为HA141～155、HA206～223、HA302～316。候选表位处于H5N1亚型禽流感HA1蛋白序列上相对保守的区域内,且与目前流行的H5N1亚型禽流感病毒HA相应区域具有较好的一致性。而不同候选表位在BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清反应中显示了不同抗体结合能力,预示了其成为功能表位的可能。结论:所筛选的表位具有成为H5N1亚型禽流感病毒HATh和B细胞相关抗原表位的可能。本研究为深入揭示流感病毒感染与免疫机制,H5N1亚型禽流感功能表位认知及表位疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素 H5N1 抗原表位
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PCR假阳性的原因分析及控制措施 被引量：13
6
作者 南文龙 张悦勇 陈义平 《中国动物检疫》 CAS 2015年第8期56-58,共3页
近二十年来,PCR作为一种重要的分子生物学技术,广泛应用于动物疫病的病原学、诊断方法、基因工程疫苗研究、检验检疫、疫病诊断、疫情监测及流行病学调查等动物疫病防控实际工作。如何控制好PCR检测的质量,减少假阳性,一直是研究者普遍... 近二十年来,PCR作为一种重要的分子生物学技术,广泛应用于动物疫病的病原学、诊断方法、基因工程疫苗研究、检验检疫、疫病诊断、疫情监测及流行病学调查等动物疫病防控实际工作。如何控制好PCR检测的质量,减少假阳性,一直是研究者普遍关注的问题。本文分析了PCR假阳性形成的原因,提出预防及控制措施,为促进实验室PCR实践工作提供参考。 展开更多
关键词 PCR 假阳性 原因分析 控制措施
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文化生态学视角下的南海诸岛地名文化 被引量：12
7
作者 赵静 张争胜 +1 位作者 陈冠琦 南文龙 《热带地理》 2016年第6期1045-1056,共12页
地名具有丰富的文化内涵,正日益受到学术界的高度关注。南海诸岛及其附近海域是中国政治敏感地带,多国为主权归属问题摩擦不断,研究其地名文化历史演变问题可为维护中国领土主权提供有力证据。基于南海诸岛地名命名、变更和演变等资料,... 地名具有丰富的文化内涵,正日益受到学术界的高度关注。南海诸岛及其附近海域是中国政治敏感地带,多国为主权归属问题摩擦不断,研究其地名文化历史演变问题可为维护中国领土主权提供有力证据。基于南海诸岛地名命名、变更和演变等资料,采用文本分析方法,分析《更路簿》和不同时期公布的南海诸岛命名资料,并利用GIS将地名的演变情况进行地理可视化表达,同时对南海诸岛及其附近海域的开发者——渔民和老船长等进行深入访谈。研究发现:南海诸岛的土地名主要依据岛礁的自然地理环境特征而命名,地名的更替、消亡与社会文化环境紧密相关;1935年公布的地名以音译英文地名为主,1947年更名以去外国化、美化、纪念地名为主,1983年对1947年所公布的标准地名更改很少,在这118个地名中,增加了前几次未公布地名39个,这些地名几乎都沿用渔民命名的土地名。 展开更多
关键词 文化生态学 地名文化 南海诸岛
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牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒的研制与评价 被引量：12
8
作者 李昕 徐正中 +7 位作者 单法 夏爱鸿 孟闯 沈也驰 陈义平 南文龙 陈祥 焦新安 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1060-1065,共6页
目的研制一种牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒,并在奶牛结核病检疫中进行初步应用和评价。方法建立牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测方法,基于此法试制3批试剂盒,并对试剂盒的灵敏度、可重复性和保存期进行评价,其后进行初步应用,对96... 目的研制一种牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒,并在奶牛结核病检疫中进行初步应用和评价。方法建立牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测方法,基于此法试制3批试剂盒,并对试剂盒的灵敏度、可重复性和保存期进行评价,其后进行初步应用,对961头奶牛采用单纯颈部皮试变态反应、商品化BOVIGAMTM试剂盒与试制的牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒进行同步检测。结果该试剂盒对质控样品的最低检出量达到8.21ng/mL,而且检测重复性良好,试剂盒保存期达12个月以上。在进行临床试验时,试制的试剂盒与单纯颈部皮试变态反应相比,阳性一致率为70.59%,阴性一致率为99.20%,总一致率为98.44%;与BOVIGAMTM试剂盒相比,阳性一致率为91.30%,阴性一致率为99.78%,总一致率为99.58%。其灵敏度为85.00%,特异性为100.00%。结论成功建立牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测方法,并研制出相应试剂盒,具有良好应用前景。 展开更多
关键词 牛结核病 Γ-干扰素 夹心ELISA 试剂盒 敏感性 特异性
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兔出血症病毒JL株分离鉴定及VP60基因主要抗原表位分析 被引量：11
9
作者 金明兰 侯继波 +4 位作者 郑其升 鲁会军 韩松 南文龙 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期833-838,共6页
采用血凝试验、电镜观察、RT-PCR方法分离鉴定了1株JL株兔出血症病毒(RHDV),扩增衣壳蛋白VP60基因,将扩增片段克隆到pMD18-T载体上,经酶切鉴定后测序。结果显示,VP60基因全长1 740bp,编码580个氨基酸;JL株与其他RHDV分离株比较,核苷酸... 采用血凝试验、电镜观察、RT-PCR方法分离鉴定了1株JL株兔出血症病毒(RHDV),扩增衣壳蛋白VP60基因,将扩增片段克隆到pMD18-T载体上,经酶切鉴定后测序。结果显示,VP60基因全长1 740bp,编码580个氨基酸;JL株与其他RHDV分离株比较,核苷酸同源性为93.7%～99.2%,氨基酸同源性在97.3%～99.5%,在VP60 6个区中,A、B、D、F是稳定区,氨基酸变异多发生在衣壳蛋白C、E区,表明毒株具有高度保守性;将JL株与国内外标准株蛋白氨基酸变异及其亲水性、柔性区、抗原区和表面结构进行比较分析,预测RHDV VP60细胞表位。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 分离鉴定 VP60基因 序列分析
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基于流产布鲁氏菌重组BvrS蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：6
10
作者 田雪 焉鑫 +5 位作者 范颖 孙明军 南文龙 刘建柱 孙淑芳 胡莉萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1135-1140,共6页
为建立检测流产布鲁氏菌(B.abortus)抗体的间接ELISA方法,本研究将表达该菌BvrS蛋白的重组质粒pET28a-BvrS转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经诱导后获得了可溶性表达的重组BvrS蛋白(rBvrS)。Western blot检测结果显示,BvrS能与布鲁氏... 为建立检测流产布鲁氏菌(B.abortus)抗体的间接ELISA方法,本研究将表达该菌BvrS蛋白的重组质粒pET28a-BvrS转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经诱导后获得了可溶性表达的重组BvrS蛋白(rBvrS)。Western blot检测结果显示,BvrS能与布鲁氏菌阳性血清结合,具有较强的反应原性,可作为建立间接ELISA(iELISA)检测方法的包被抗原。采用棋盘滴定法对以该蛋白为包被抗原的iELISA方法各条件优化,结果显示,最优的反应条件为:BvrS包被浓度为3.125μg/mL,4℃包被过夜;商品化封闭液37℃封闭2 h;待检血清稀释度为1∶100,37℃孵育1 h;辣根过氧化酶(HRP)标记的兔抗鼠SPG稀释度为1∶8000,37℃孵育40 min。特异性试验结果显示,除布鲁氏菌阳性血清外,该iELISA与大肠杆菌、沙门氏菌、霍乱孤菌、军团菌、结核杆菌的阳性血清均无明显交叉反应;将牛布鲁氏菌阳性血清2倍倍比稀释(1∶50~1∶6400)后,利用建立的iELISA检测,结果显示,该iELISA方法对阳性血清的检测限为1∶400,敏感性高于试管凝集试验(SAT)检测结果(1∶100),该方法敏感性较高;分别利用同一批次和不同批次rBvrS包被的酶标板,按照本研究建立的方法对已知血清进行重复性试验,结果显示,批内批间重复性试验的变异系数均小于10%,该方法重复性较好。利用本实验建立的iELISA方法与国外商品化试剂盒ID-VET同时检测220份临床牛血清样品,结果显示,二者检测结果符合率为99.5%。本研究建立的iELISA方法为牛布鲁氏菌病的血清学诊断提供了可行方法。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 间接酶联免疫吸附试验 BvrS
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牛结节性皮肤病疫苗研究进展 被引量：6
11
作者 李林 巩明霞 +6 位作者 迟田英 王英丽 于小静 杜秋明 南文龙 陈义平 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 2023年第1期102-108,共7页
牛结节性皮肤病(LSD)是2019年8月传入我国的新发传染病,对养牛业产生了重大经济影响。疫苗免疫是控制LSD传播的关键措施。目前只有商品化弱毒活疫苗(LAV)用于预防LSD,包括同源弱毒活疫苗和异源羊痘弱毒活疫苗,而灭活疫苗以及多种病毒的... 牛结节性皮肤病(LSD)是2019年8月传入我国的新发传染病,对养牛业产生了重大经济影响。疫苗免疫是控制LSD传播的关键措施。目前只有商品化弱毒活疫苗(LAV)用于预防LSD,包括同源弱毒活疫苗和异源羊痘弱毒活疫苗,而灭活疫苗以及多种病毒的重组亚单位疫苗正在研究中;不管是同源疫苗还是异源疫苗,大都具有良好的临床保护效果,但部分疫苗不能提供足够的免疫保护;进行良好的疫苗质量控制可有效避免疫苗生产过程中的外源病毒污染以及类疫苗重组毒株的产生。我国可进一步借鉴国际先进经验,积极开展疫苗研发,以及流行病学、监测诊断等相关防控技术研究,尽早消灭LSD。本文着重介绍了国内外常用疫苗的种类、副作用及其免疫效果和质量控制等,可为该病控制和消灭提供技术支持。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病 疫苗 山羊痘病毒 绵羊痘病毒
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PCR技术在布鲁氏菌检测与鉴别中的应用 被引量：9
12
作者 秦立得 南文龙 陈义平 《中国动物检疫》 CAS 2018年第10期63-67,共5页
布鲁氏菌是一种可感染多种哺乳动物的人兽共患病病原,能给公共卫生和畜牧业带来严重危害。常用的布鲁氏菌病原检测方法包括布鲁氏菌分离培养和分子生物学方法。其中的PCR技术具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,在布鲁氏菌检测、... 布鲁氏菌是一种可感染多种哺乳动物的人兽共患病病原,能给公共卫生和畜牧业带来严重危害。常用的布鲁氏菌病原检测方法包括布鲁氏菌分离培养和分子生物学方法。其中的PCR技术具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,在布鲁氏菌检测、菌种鉴别、疫苗株与野毒株区分等方面得到了广泛应用。本文综述了PCR技术在通用型布鲁氏菌、不同种型布鲁氏菌及布鲁氏菌疫苗菌株检测与鉴别中的应用研究,以期为检验检疫、流行病学调查、人与动物布鲁氏菌病诊断等提供技术参考。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 PCR 检测 鉴别
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多杀性巴氏杆菌荧光RAA快速检测方法的建立 被引量：5
13
作者 杜秋明 郑秀红 +5 位作者 樊晓旭 赵永刚 乔启波 南文龙 许龙春 吴晓东 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第2期120-125,共6页
为建立一种敏感特异、简便快速的多杀性巴氏杆菌检测方法,根据多杀性巴氏杆菌kmt1基因保守区序列设计特异性引物和探针,通过对反应条件优化筛选,建立了重组酶介导的等温扩增(RAA)荧光检测方法。结果显示,建立的多杀性巴氏杆菌RAA荧光检... 为建立一种敏感特异、简便快速的多杀性巴氏杆菌检测方法,根据多杀性巴氏杆菌kmt1基因保守区序列设计特异性引物和探针,通过对反应条件优化筛选,建立了重组酶介导的等温扩增(RAA)荧光检测方法。结果显示,建立的多杀性巴氏杆菌RAA荧光检测方法在39℃恒温条件下20 min内即可特异性的检出多杀性巴氏杆菌,与鸭疫里默氏杆菌、副猪嗜血杆菌、支原体、链球菌、大肠杆菌、附红细胞体、新孢子虫无交叉反应,方法的最低检出限为10 copies/μL,组内和组间重复性试验的变异系数均小于10%,用该方法对45份临床样本进行检测,结果阳性率为33.33%,与荧光定量PCR方法检测结果一致。本研究建立的多杀性巴氏杆菌荧光RAA检测方法操作简单、反应时间短、具有较高的特异性和敏感性,不依赖于复杂的仪器,适合临床上对多杀性巴氏杆菌的快速检测。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 重组酶介导等温扩增 快速检测
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七类消毒剂对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响 被引量：8
14
作者 南文龙 巩明霞 +4 位作者 陆游 李林 王清华 吴晓东 陈义平 《中国动物检疫》 CAS 2021年第3期87-91,123,共6页
为评价戊二醛、酚、含碘类等常用消毒剂消毒后对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒及皮肤黏膜消毒目的,按消毒剂说明书推荐选择不同工作浓度,分别与不同滴度的非洲猪瘟病毒培养物于20℃条件下作... 为评价戊二醛、酚、含碘类等常用消毒剂消毒后对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,基于畜禽栏舍、运载工具、器具消毒及皮肤黏膜消毒目的,按消毒剂说明书推荐选择不同工作浓度,分别与不同滴度的非洲猪瘟病毒培养物于20℃条件下作用30 min后,采用荧光定量PCR方法检测作用后产物。结果显示,与对应的阳性对照组相比,含氯类(二氯异氰尿酸钠)、过硫酸氢钾类、二氧化氯类消毒剂,消毒后对荧光定量PCR检测结果影响最显著,检测Ct值显著上升或检测不到;戊二醛类、含碘类(主要成分聚维酮碘)消毒剂,核酸降解能力相对较弱,检测Ct值稍有上升;酚类、季铵盐类、含碘类(主要成分碘、磷酸、硫酸)类消毒剂,检测Ct值基本无变化。本研究评价了7类常用消毒剂消毒对非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测结果的影响,可为防控实践中科学、客观评价分析消毒效果提供技术参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 消毒剂 荧光定量PCR 消毒效果
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H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位核酸疫苗构建及表达研究 被引量：8
15
作者 陈义锋 金宁一 +8 位作者 贾雷立 鲁会军 田明尧 南文龙 马鸣潇 刘成宏 沈国顺 马海利 陈晓月 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1136-1138,共3页
目的构建表达A型流感病毒多种表位的核酸疫苗,并研究其在幼仓鼠肾细胞(BHK细胞)内表达产物的生物学活性。方法筛选流感病毒主要抗原(HA、NA、NP、M)表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构,合成流感通用的复合多表位基因(Epi),以H5、H... 目的构建表达A型流感病毒多种表位的核酸疫苗,并研究其在幼仓鼠肾细胞(BHK细胞)内表达产物的生物学活性。方法筛选流感病毒主要抗原(HA、NA、NP、M)表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构,合成流感通用的复合多表位基因(Epi),以H5、H7亚型流感病毒HA融合表达基因为骨架,将多表位基因Epi插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒,定向克隆至pVAX1,构建抗A型流感H3579亚型的pVAX1-H7HA-Epi-H5HA。最后将该重组质粒转染BHK细胞,提取细胞总RNA,以RT-PCR方法检测目的基因;以间接免疫荧光试验(IFA)初步测其表达产物抗原性。结果RT-PCR检测到目的基因;IFA检测到特异性荧光存在。结论本试验所构建的重组质粒pVAX1-H7HA-Epi- H5HA,在真核细胞内均获了有效地转录和表达;而且其表达产物均能与相应的抗体特异性结合,证明了其具有一定的生物学活性和抗原性,有望成为抗多种A型流感病毒的通用核酸疫苗。 展开更多
关键词 表位 流感病毒 核酸疫苗
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中国牛种布鲁氏菌疫苗株A19 SNP位点的研究 被引量：7
16
作者 谭鹏飞 南文龙 +2 位作者 彭大新 毛开荣 陈义平 《中国兽药杂志》 2014年第7期1-5,共5页
为鉴别我国牛种布鲁氏菌疫苗株A19与野生菌株,运用生物信息学方法结合基因测序,对疫苗株A19基因组单核苷酸多态性(SNP)位点分析筛选,选取其中部分SNP位点,通过与布鲁氏菌常见种、生物型标准参考菌株和疫苗株基因组SNP位置核苷酸测序比较... 为鉴别我国牛种布鲁氏菌疫苗株A19与野生菌株,运用生物信息学方法结合基因测序,对疫苗株A19基因组单核苷酸多态性(SNP)位点分析筛选,选取其中部分SNP位点,通过与布鲁氏菌常见种、生物型标准参考菌株和疫苗株基因组SNP位置核苷酸测序比较,验证SNP位点的A19特异性。结果表明,共筛选获得A19基因组29个SNP位点,验证ClpX G825-C825、LysR A605-C605、Omp2b G503-A503这3个SNP位点为A19(或S19)特异,揭示了A19基因组SNP位点分布情况,为疫苗株A19与野生菌株鉴别提供了分子依据。 展开更多
关键词 牛种布鲁氏菌 疫苗株A19 SNP 鉴别
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一株犬种布鲁氏菌的分离鉴定及其在巨噬细胞内存活能力的研究 被引量：3
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作者 焉鑫 陈霞 +7 位作者 孙世雄 田雪 邵卫星 孙翔翔 南文龙 樊晓旭 孙淑芳 孙明军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期889-894,共6页
为分离鉴定流产犬的致病病原及其生物学特性,本研究从重庆某宠物医院无菌采集流产犬全血2份,将其涂布于布鲁氏菌选择培养基,分别在不含CO_(2)和含7.5%CO_(2)条件下37℃培养72 h,观察菌落形态,并经结晶紫染色,观察细菌类型。按照国家标... 为分离鉴定流产犬的致病病原及其生物学特性,本研究从重庆某宠物医院无菌采集流产犬全血2份,将其涂布于布鲁氏菌选择培养基,分别在不含CO_(2)和含7.5%CO_(2)条件下37℃培养72 h,观察菌落形态,并经结晶紫染色,观察细菌类型。按照国家标准鉴定分离菌的生化特性。细菌分离结果显示,在不含CO_(2)和含7.5%CO_(2)的培养箱中2份流产犬全血样品在布鲁氏菌选择培养基上均长出边缘整齐、光滑的圆形菌落,透射光下,菌落呈浅黄色且有光泽;结晶紫染色结果显示分离菌为典型的粗糙型细菌;生化鉴定结果显示,分离株在TSA中的生长不依赖于CO_(2),且不产生H2S,氧化酶和脲酶试验均为强阳性。上述结果表明分离到一株犬种布鲁氏菌,命名为B. canis CQ3。对分离菌进行全基因组测序,利用MAUVE对分离株与GenBank中38株不同种的布鲁氏菌基因组进行比对,并构建分离菌全基因组的进化树。将不同种布鲁氏菌及分离株分别接种于TSB培养基中,通过测定不同时间的OD450nm值绘制各菌株的生长曲线。将各菌株及B. canis CQ3株分别以MOI 100感染小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7,在感染后的不同时间(1 h、24 h、48 h和72 h)收集细胞,经相应处理后涂布TSA平板培养72 h后,经菌落计数分析分离菌株在细胞中的存活能力。全基因组序列比对及进化树结果显示,比对到犬种布鲁氏菌的序列数量最多,且B. canis CQ3株与欧洲分离的犬种布鲁氏菌NR-finland株的亲缘关系最近。生长曲线测定结果显示,在6 h~16 h (对数生长期) B. canis CQ3株的生长速度稍快于羊种布鲁氏菌B. melitensis XJ流行株和牛种布鲁氏菌B. abortus DT流行株;整个生长过程中B. canis CQ3株的生长速度与疫苗株A19和S2基本一致。巨噬细胞感染试验结果显示,感染1 h时,B. canis CQ3株进入巨噬细胞数量多于疫苗株A19和S2、B. melitensis XJ和B. abortus DT株。相比B. melitensis XJ和B. abortu 展开更多
关键词 犬种布鲁氏菌 分离鉴定 胞内存活
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重组酶介导等温扩增技术(RAA)在病原微生物检测中的应用进展
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作者 毛迎雪 刘蒙达 +7 位作者 张皓博 曲瑶 南文龙 苏华彬 刘建柱 孙淑芳 胡莉萍 樊晓旭 《中国动物检疫》 CAS 2024年第1期60-66,共7页
重组酶介导等温扩增(RAA)是一种恒温快速核酸扩增技术,是重组酶等温扩增技术中具有代表性和前沿性的检测技术,其弥补了现有核酸体外扩增技术需要热循环的局限性,使得核酸体外扩增更加简便快捷,目前已被广泛应用于动物疫病检测。本文介绍... 重组酶介导等温扩增(RAA)是一种恒温快速核酸扩增技术,是重组酶等温扩增技术中具有代表性和前沿性的检测技术,其弥补了现有核酸体外扩增技术需要热循环的局限性,使得核酸体外扩增更加简便快捷,目前已被广泛应用于动物疫病检测。本文介绍了RAA技术的检测原理、引物探针设计及优缺点,综述了其在病毒、细菌、寄生虫及抗生素耐药基因检测等方面的应用进展,总结了国内现有RAA技术标准及检测产品开发情况,以期为拓展RAA技术的应用提供参考。 展开更多
关键词 重组酶介导扩增 等温扩增 病原检测 生物安全检测
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基于不同抗原的犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金抗体试纸条的制备和比较
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作者 郭晓涵 焉鑫 +11 位作者 邵卫星 殷德辉 闫昊 南文龙 樊晓旭 孙世雄 张培培 孙翔翔 刘蒙达 张皓博 孙淑芳 孙明军 《中国动物检疫》 CAS 2024年第5期90-95,共6页
为建立针对犬布鲁氏菌病的免疫层析胶体金快速检测方法,利用从犬种布鲁氏菌菌株提纯的膜蛋白和可溶性蛋白,原核表达纯化的外膜蛋白Omp31和BP26以及基于B细胞抗原肽的融合蛋白F14,分别制备了试纸条,然后采用犬布鲁氏菌病阳性和阴性血清,... 为建立针对犬布鲁氏菌病的免疫层析胶体金快速检测方法,利用从犬种布鲁氏菌菌株提纯的膜蛋白和可溶性蛋白,原核表达纯化的外膜蛋白Omp31和BP26以及基于B细胞抗原肽的融合蛋白F14,分别制备了试纸条,然后采用犬布鲁氏菌病阳性和阴性血清,分别对上述试纸条进行敏感性和特异性比较。结果显示:Omp31抗原的敏感性最高,其次是F14和BP26,而全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白的敏感性较差;特异性上,使用由5种抗原制备的胶体金试纸条检测30份犬布鲁氏菌病阴性血清,结果均为阴性;5种试纸条与沙门氏菌、大肠杆菌(O157)、大肠杆菌(H7)、霍乱弧菌、副溶血弧菌、军团菌阳性血清均不发生交叉反应。另外,由F14和BP26制备的试纸条可识别羊布鲁氏菌病阳性血清,而由Omp31、全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白制备的试纸条均不能识别牛、羊布鲁氏菌病阳性血清。综上所述,Omp31、F14和BP26可作为制备犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金检测卡的备选抗原。本研究为粗糙型布鲁氏菌引起的布鲁氏菌病的诊断提供了技术支撑。 展开更多
关键词 犬布鲁氏菌病 犬种布鲁氏菌 外膜蛋白 免疫层析胶体金检测卡
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羊种布鲁氏菌Tat系统底物蛋白ErfK的抗原性和免疫原性研究
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作者 吴瑶 焉鑫 +14 位作者 孙明军 屈海龙 郭晓涵 闫昊 张培培 孙世雄 李嘉琪 孙翔翔 刘蒙达 张皓博 南文龙 邵卫星 王方昆 樊晓旭 孙淑芳 《中国动物检疫》 CAS 2024年第5期96-103,共8页
为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设... 为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设计引物,构建表达载体pET-30a(+)-ErfK,经IPTG诱导表达、亲和层析和镍柱纯化获得目的蛋白;利用SDS-PAGE和Western blot对重组ErfK(rErfK)蛋白进行抗原性鉴定;将rErfK蛋白免疫小鼠,分别在免疫后15、30和45 d收集血清和脾脏,检测蛋白免疫后小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答情况。生物信息学预测结果显示,ErfK蛋白无跨膜结构,为亲水性蛋白,有多个T细胞和B细胞抗原表位;SDS-PAGE和Western blot均可获得25 kDa的蛋白条带,重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生反应,证明rErfK有良好的抗原性;小鼠免疫试验结果显示,rErfK组小鼠脾脏CD8^(+)T细胞含量相比PBS组显著上升(P<0.05),且脾脏Th1型细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4转录水平均显著上升(P<0.05),此外,rErfK免疫也能极显著诱导小鼠血清中总IgG和特异性IgG的产生(P<0.01)。上述结果表明,经大肠杆菌表达的布鲁氏菌rErfK蛋白可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。本研究为基于ErfK蛋白的布鲁氏菌病诊断试剂和亚单位疫苗研发提供了参考依据。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 Tat系统底物蛋白L D-转肽酶ErfK 抗原性 免疫原性
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