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一种稳定、灵敏且适用于ELISA的四甲基联苯胺底物 被引量：3
1
作者 单晶辉 李宁 +5 位作者 关振宏 段铭 卢强 刘红全 孟锐奇 张茂林 《检验医学》 CAS 北大核心 2011年第4期260-262,共3页
目的评价一种适用于酶联免疫吸附试验(ELISA)的即用型自制四甲基联苯胺(TMB)底物的特性。方法比较1-Step Turbo TMB底物、A/B两组分混合物底物和自制底物与不同稀释度酶标抗体的反应性及其对包被抗体的检测敏感性,对1-Step Turbo TMB底... 目的评价一种适用于酶联免疫吸附试验(ELISA)的即用型自制四甲基联苯胺(TMB)底物的特性。方法比较1-Step Turbo TMB底物、A/B两组分混合物底物和自制底物与不同稀释度酶标抗体的反应性及其对包被抗体的检测敏感性,对1-Step Turbo TMB底物和自制底物进行稳定性比较。结果 3种底物的吸光度(A)值均随着酶标抗体稀释度的增大而显著下降;当酶标抗体稀释度相同时,自制底物的A值显著高于另外2种底物(P<0.05);在直接ELISA条件下,自制底物对包被抗体的检测敏感性可达15.63 ng/mL;自制底物37℃贮存60 d后的A值仍高于1-Step Turbo TMB底物37℃贮存5 d的A值。结论该即用型自制TMB底物在检测敏感性及稳定性上优于1-Step Turbo TMB底物。 展开更多
关键词 四甲基联苯胺底物 稳定 灵敏 酶联免疫吸附试验
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一种包被抗原稳定剂的研制及其特性鉴定 被引量：2
2
作者 张茂林 段铭 +5 位作者 关振宏 单晶辉 卢强 孟锐奇 刘红全 何秀苗 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第7期1667-1668,1673,共3页
以纯化的狂犬病病毒2μg/mL包被酶标板,将乳糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖分别以5%(W/V)的终浓度加到1%BSA+4%PEG的PBS中,所制备的溶液作为封闭剂,研究其对于37℃贮存板的稳定性,从中选取最佳的封闭剂组合,并研究其对于乙肝表面抗原、猪瘟病... 以纯化的狂犬病病毒2μg/mL包被酶标板,将乳糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖分别以5%(W/V)的终浓度加到1%BSA+4%PEG的PBS中,所制备的溶液作为封闭剂,研究其对于37℃贮存板的稳定性,从中选取最佳的封闭剂组合,并研究其对于乙肝表面抗原、猪瘟病毒E2抗原和猪繁殖与呼吸综合征nsp2基因原核表达产物在包被状态下的稳定性。结果显示,以1%BSA+4%PEG+5%蔗糖的PBS溶液的封闭效果最佳,该封闭剂对于乙肝表面抗原、猪瘟病毒E2抗原和猪繁殖与呼吸综合征nsp2基因原核表达产物也具有良好的稳定性。 展开更多
关键词 抗原 稳定剂 狂犬病病毒 乙肝表面抗原 猪瘟病毒E2蛋白 猪繁殖与呼吸障碍综合征nsp2蛋白
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狂犬病毒作为神经示踪剂的研究进展 被引量：1
3
作者 宋艳 李宁 +4 位作者 黄飞 单晶辉 张茂林 段铭 关振宏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期71-74,79,共5页
狂犬病毒是仅有的完全特异的示踪剂,因为它能逆向通过化学突触进行神经示踪且不改变神经细胞的代谢,可以逐级的,时间依赖的方式感染大量的突触联系的神经网络。根据狂犬病毒的特性解释该病毒作为神经示踪剂的优势,总结狂犬病毒跨神经进... 狂犬病毒是仅有的完全特异的示踪剂,因为它能逆向通过化学突触进行神经示踪且不改变神经细胞的代谢,可以逐级的,时间依赖的方式感染大量的突触联系的神经网络。根据狂犬病毒的特性解释该病毒作为神经示踪剂的优势,总结狂犬病毒跨神经进行示踪的方法,并对基因修饰的狂犬病毒的新兴技术进行讨论和展望。 展开更多
关键词 狂犬病毒 跨神经示踪 逆向运输
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猪瘟病毒E2抗原在不同酶标板上包被效果的比较
4
作者 宋艳 单晶辉 +5 位作者 张茂林 段铭 关振宏 李宁 卢强 涂长春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期73-75,共3页
为比较杆状病毒表达的猪瘟病毒(CSFV)E2抗原在不同酶标板上的包被效果,本研究应用2μg/mL的CSFV E2分别包被Nunc Maxisorp、Cosar StripWell和JET FEP-101-896 3种酶标板,以Flyer Liquid Plate Sealer(FLPS)进行封闭,通过比较猪瘟阳性... 为比较杆状病毒表达的猪瘟病毒(CSFV)E2抗原在不同酶标板上的包被效果,本研究应用2μg/mL的CSFV E2分别包被Nunc Maxisorp、Cosar StripWell和JET FEP-101-896 3种酶标板,以Flyer Liquid Plate Sealer(FLPS)进行封闭,通过比较猪瘟阳性血清的OD450nm值,筛选包被性能最佳的酶标板。对FLPS、含10%FCS的PBST和含1%BSA的PBST的封闭效果进行比较。并比较FLPS在相同抗原条件下重复使用2次和3次对于CSFV阳性血清检测结果的影响。结果显示,在CSFV E2抗原包被的3种酶标板上,CSFV阳性血清的OD450nm值均存在显著差异(p<0.05),其中以Cosar酶标板OD450nm值最高;在Costar板上,3种封闭液间及FLPS重复使用对于CSFV阳性血清的检测结果无显著差异(p>0.05)。 展开更多
关键词 猪瘟病毒E2抗原 酶标板 包被效果
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血清稀释液的筛选及犬抗狂犬病病毒血清抗体正常值范围的确定
5
作者 刘红全 单晶辉 +9 位作者 李宁 孟锐奇 何秀苗 卢强 张西臣 张茂林 何静 李瑞友 伍少团 韦锋锐 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第33期18847-18848,18857,共3页
应用间接ELISA法进行抗体检测是评价狂犬疫苗免疫效果的一种快捷有效手段。首先筛选得到一种灵敏、特异的血清稀释液;然后应用其对采集自不同地区的812份未免疫犬血清稀释并进行间接ELISA检测;以OIE标准阴、阳性犬血清为对照,随机选取不... 应用间接ELISA法进行抗体检测是评价狂犬疫苗免疫效果的一种快捷有效手段。首先筛选得到一种灵敏、特异的血清稀释液;然后应用其对采集自不同地区的812份未免疫犬血清稀释并进行间接ELISA检测;以OIE标准阴、阳性犬血清为对照,随机选取不同A450范围的犬血清应用RFFIT进行检测;以RFFIT效价低于0.1 IU/ml的犬血清,计算阴性血清正常值范围和95%的可信区间,并建立标准品的回归方程。结果显示：所筛选到的血清稀释液灵敏、特异,有756份血清样品的效价低于0.1 IU/ml,犬抗狂犬病抗体阴性血清的正常值范围为0.127 3±0.059 8,95%的可信区间为0.078 1-0.172 3。应用OIE犬阳性血清标准品建立了A450和抗血清效价的回归方程：A=1.139 IU＋0.470。该试验结果为犬狂犬病防制以及犬狂犬病抗体ELISA检测试剂的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 血清稀释液 正常值范围 犬血清 狂犬病病毒 抗体
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狂犬病病毒致神经功能异常机制的研究进展 被引量：1
6
作者 单晶辉 关振宏 +1 位作者 段铭 张茂林 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第8期66-69,共4页
狂犬病是一种以神经系统感染为特征的高度致死性人兽共患病毒性传染病,危害大,但其致病机制尚不明确。狂犬病病毒(RV)G蛋白与神经细胞表面受体发生特异性结合决定其嗜神经特性,其他RV结构蛋白对RV感染具有保护和调节作用;机体感染RV后... 狂犬病是一种以神经系统感染为特征的高度致死性人兽共患病毒性传染病,危害大,但其致病机制尚不明确。狂犬病病毒(RV)G蛋白与神经细胞表面受体发生特异性结合决定其嗜神经特性,其他RV结构蛋白对RV感染具有保护和调节作用;机体感染RV后神经元结构和机体内与功能相关的部分蛋白及基因表达水平发生改变,而且RV在神经核的分布可能影响神经通路的正常功能,推断这些变化可能是出现神经症状和造成动物死亡的主要原因。论文综述了RV感染导致神经功能异常的研究近况,以期为阐明RV致神经功能异常机理奠定基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 神经功能异常 致病机制
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焦化废水循环利用研究
7
作者 高峰 单晶辉 李天喜 《燃料与化工》 2008年第6期37-39,44,共4页
对焦化废水的来源进行了分析,金马焦化公司通过对废水的净化和循环利用,实现了焦化废水零排放,提高了水资源利用率。
关键词 焦化废水 净化 循环利用 零排放
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小鼠原代神经元细胞狂犬病病毒滴度测定 被引量：1
8
作者 单晶辉 王心蕊 +3 位作者 关振宏 李宁 宋艳 张茂林 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期572-574,共3页
目的探索利用小鼠原代神经元细胞测定狂犬病病毒(rabies virus,RV)滴度的可行性。方法分离培养小鼠大脑皮质原代神经元细胞,接种100小鼠脑内接种半数致死量(MICLD50)的标准攻击强毒(CVS)毒株,通过免疫荧光和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)... 目的探索利用小鼠原代神经元细胞测定狂犬病病毒(rabies virus,RV)滴度的可行性。方法分离培养小鼠大脑皮质原代神经元细胞,接种100小鼠脑内接种半数致死量(MICLD50)的标准攻击强毒(CVS)毒株,通过免疫荧光和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其感染性,并在此基础上在原代神经元细胞上进行了该毒株的细胞半数感染量(CCID50)测定。结果成功制备了小鼠大脑皮质原代神经元细胞;原代神经细胞培养物接种CVS 96h后,用抗微管相关蛋白质(MAP2)抗体和抗RV阳性血清作为一抗并经荧光抗体染色后,在胞体和突起上均有神经元特异性和RV特异性着染;在共聚焦显微镜下,当相同的细胞部位上出现红色和绿色交迭时呈现粉色斑点,免疫荧光证实原代神经细胞可被CVS感染,同时RT-PCR得到1 770 bp左右的目的条带,说明其被CVS感染;该原代细胞上所测定的CVS病毒滴度为104.5CCID50/0.1 mL,而该病毒的原始滴度为104.5MICLD50/0.03 mL。结论小鼠脑原代神经元细胞上测定的CVS株的病毒滴度与通过脑内接种法测定的滴度相同。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 大脑皮质原代神经元 小鼠脑内接种半数致死量 细胞半数感染量
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